CC BY
48
УДК 619:616-07/616-084:636.4
Дерев'янко С.В., канд. бюл. наук, ст. н. с., Бова Т.О., канд. бюл. наук, ®
Сорока В.1., канд. вет. наук, ст. н. с., [email protected] 1нститут сгльськогосподарськоïмшробюлогп НААН Украти, м. Чернше
ЗАСОБИ Д1АГНОСТИКИ I СПЕЦИФШНО! ПРОФ1ЛАКТИКИ ТЕШО-ТА ЕНТЕРОВ1РУСНИХ ХВОРОБ СВИНЕЙ
У статт1 розглянуто питання д1агностики, специф1чног профыактики тешо- й ентеров1русних хвороб свиней та представлено лтературш дат щодо цих проблем.
Ключовi слова: ентеров1руси свиней, тешов1руси свиней, д1агностика, профшактика, хвороба.
Тешо- та emepoBipyra ввдграють значну етюлопчну роль у захворюваннях свиней, що призводить до значних eкoнoмiчних збитюв у сшьському господарствг Одним i3 найнебезпечшших серед них е ензоотичний eнцeфалoмieлiт (хвороба Тешена) свиней. Пнeвмoнiя, гастроентерит та пневмоентерит належать до найбшьш поширених хвороб. Етioлoгiчними агентами пневмонш, кpiм eнтepoвipyсiв, е парво-, peoвipyси, гемаглютинуючий eнцeфалoмiелiтний вipyс, Bordatella bronchiseptica, Actinomyces pyogenes, Pasteurella multocida, Actinobacilus Pleuropneumonie, Mycoplasma, Proteus mirabilis, Ervinia stewartii, Klebsilla pneumoniae, Enterobacter cloacae, Escherichia coli, Staphylococcus saprophyticus [12, 25, 29, 35], а гастроентериив -корона-, poтавipyси, Escherichia œli [11, 21, 30] та 1х асощаци.
Клмчш ознаки eнтepoвipyснoï пневмони, гастроентериту та пневмоентериту пoдiбнi до переб^у шших peспipатopних та шлунково-кишкових iнфeкцiй. Виpiшальнe значення при встановленш дiагнoзy i пpoвeдeннi лкувально-профшактичних захoдiв мае лабораторна дiагнoстика.
Однак, дiагнoстика та спeцифiчна пpoфiлактика ускладнюеться великою кiлькiстю сepoтипiв тешо- та eнтepoвipyсiв свиней. Щopiчнo у piзних кpаïнах свiтy видiляються нoвi серотипи збудниюв цих хвороб. У 1971 р. за результатами вивчення антигенних властивостей 72 европейських, американських та японських штами eнтepoвipyсiв свиней (ЕВС), Dunne Н. et al. звели ï^ до 8 серотитв (ЕВС 1-8) [34]. У 1979 p. Knowles N. et al. встановили 3 (ЕВС 9-11) [39], а в 1994 р. Auerbach J. et al. - 2 нових серотипи (ЕВС 12 i 13) [36]. Згщно з ршенням 11 Мiжнаpoднoгo конгресу з вipyсoлoгiï, який вщбувся у 1999 рощ у Сщне].', ЕВС 1-7 та 11-13 серотитв вщнесено до виду Porcine Teschovirus i винесено в окремий рщ Teschovirus. Ентepoвipyси свиней 8 серотипу рекласифковано як Porcine Enterovirus A та 9, 10 - Porcine Enterovirus В - до роду Enterovirus [38, 41].
Zell R. et al. встановили новий 11 серотип тeшoвipyсiв свиней [40]. До того ж, у 1993 р. В.П. Романенко з ствавт. [27] встановили 14 нових серотитв
® Дерев'янко С.В., Бова Т.О., Сорока В.1., 2010
82
ЕВС, яю поки що не увшшли до мiжнародно! класифжаци. Слщ зазначити, що на територи Укра!ни досить часто видшяються вiд свиней патогеннi штами, яю мають антигенну спорiдненiсть з ЕВС 2-18 рiзних серотипiв (так зваш полiантигеннi штами) [8,23], а iнодi антигенно-вiдмiннi вiд ЕВС вiдомих серотитв [26].
Збудником хвороби Тешена ратше були ентеровiруси свиней 1-го серотипу [15], а зараз, згщно з останньою мiжнародною класифiкацieю, -тешовiруси свиней 1 серотипу (ТВС -1).
Однак, шмецькими дослiдниками (Loss K., Witte K.et al., Auerbach J. et al.) встановлено, що симптоми полiоенцефаломieлiту у свиней можуть обумовлювати не тiльки ЕВС-1, а й 2, 4, 5, 6, 9 та 10 серотитв [36, 44].
Доведено етюлопчну роль ентеровiрусiв 2, 3, 4, 5, 6, 8, 10, 11, 12, 13, 14, 20, 23 серотитв у виникненш гастроентериив у свиней [17, 18, 21, 31] та ЕВС 2, 3, 4, 5, 6, 8, 15, 16, 17, 21, 22 серотитв - у виникненш пневмонш [12, 22, 29, 32, 78] (згщно з класифкащею В.П. Романенко з ствав. [27]) Ентеровiрусний гастроентерит свиней супроводжуеться пневмошею в 32 %, ураженням центрально! нервово! системи - у 20 % i мертвонародженням у свиноматок у 25 % випадюв [21], а пневмошя - iнодi гастроентеритами [22, 29].
Таким чином, з огляду на л^ературт дат, не встановлено ч^ко! кореляци мiж антигенними та патогенними властивостями тешо- та ентеровiрусiв свиней. Так, однаковi клмчт симптоми можуть обумовлювати вiруси рiзних cеротипiв i, навпаки, вiруси одного серотипу можуть обумовлювати як пневмони, так i гастроентерити та пневмоентерити або бути апатогенними.
Лабораторна дiагностика тешо- ентеровiрусних хвороб свиней передбачае щентифжацш вiрусу кожного серотипу окремо i проводиться рiзними методами. Найбiльш достовiрними е видшення вiрусу i його iдентифiкацiя в реакци нейтралiзацil (РН) [2, 9, 12, 14, 33]. Для тдтвердження дiагнозу, а у випадках коли не вдалося видiлити вiрус, то для його постановки проводять ретроспективний аналiз парних сироваток кров^ ввдбраних у перiоди гострого перебiгу хвороби та реконвалесценци [19].
Поряд з РН вiрусу для щентифжаци збудника та виявлення вiруснейтралiзуючих антитiл у сироватках кровi застосовують реакци зв'язування комплементу [1, 28], дифузно! прециштаци [16, 43], iмунофлюоресценцil (Р1Ф) [20] та iмуноферментний аналiз (1ФА) [24, 42], електронну мкроскопш [3], полiмеразну ланцюгову реакцiю [37].
В.П. Романенко з ствавт. [2] розробили та впровадили у практику ветеринарно! медицини набори дiагностикумiв ензоотичного енцефаломiелiту (хвороби Тешена) свиней, ентеровiрусно! пневмони й ентеровiрусного гастроентериту в реакци вiруснейтралiзацil i прямо! iмунофлюоресценцi!. Ними також розроблено метод прискорено! iдентифiкацi! вiрусу, в основу якого покладено принцип одночасного видшення, титрування та типування вiрусу в РН у культурi клiтин. Набори дiагностикумiв ентеровiрусно! пневмони та ентеровiрусного гастроентериту включають, вщповщно, антигени 9-ти i 13-ти
83
серотитв ЕВС, специфiчнi сироватки та флюоресцiюючi iмуноглобулiни до них. Поеднуючи чутливкть 1Ф методу i специфiчнiсть РН вiрусу, набори дозволяють встановити точний дiагноз за 2-7 дшв та iдентифiкувати збудника на рiвнi серотипу. Недолiком цих наборiв е велика кiлькiсть виробничих штамiв, необхiдних для виготовлення компонента набору, що робить !х громiздкими та трудомiсткими при використаннi.
Iншi набори мiстять меншу кiлькiсть компонента, але спрямованi на виявлення вiруснейтралiзуючих антитiл та iдентифiкацiю лише найбшьш поширених серотипiв [28].
Вирiшити цю проблему дозволяють штами ентеро- та тешовiрусiв з полiантигенними властивостями. За результатами численних дослщжень нами було зроблено висновок, що мiжтиповi антигенш зв'язки цих штамiв обумовленi спшьними родовими антигенними детермiнантами [8, 23].Так, на !х основi розроблено новий набiр дiагностикумiв ентеровiрусних пневмоентеритiв свиней, який включае лише 2 штами вiрусiв та сироватки кровi до них [13]. Набiр дозволяе виявляти в РН антитша та щентифжувати збудникiв ентеровiрусних пневмоентеритiв свиней уЫх вiдомих серотипiв. Однак, практика потребуе експресних методiв дiагностики.
Цим вимогам вщповщають iмуноферментнi тест-системи [10, 24]. Вони характеризуются високою чутливiстю, дозволяють виявляти антитша на раншх стадiях розвитку хвороби та своечасно ставити дiагноз. Потребують вдосконалення та широкого впровадження iмуноферментнi тест-системи з виявлення та щентифжаци антигену [5]. При цьому роботу доцшьно зосередити в двох напрямках: для прискореного виявлення тешо- i ентеровiрусiв варто застосовувати гiперiмуннi полiклональнi сироватки кровi, одержат до полiантигенних штамiв, а для щентифжаци вiрусу на рiвнi серотипу (щютипу) -моноклональнi антитiла.
С потреба в штенсифкаци розробки засобiв прискорено! дiагностики на основi молекулярно-генетичних методiв iз застосуванням праймерiв до консервативних дшянок геному для щентифжаци вiрусiв на рiвнi виду та праймерiв до варiабельних дiлянок - на рiвнi серотипу. Розробленi тест-системи будуть використат як для дiагностики хвороб, так i в наукових цшях для класифжаци вiрусiв вщповщно до мiжнародних вимог [37].
Потребують удосконалення i вакцини. Так, вiрусвакцина проти хвороби Тешена свиней на основi виробничого штаму «Перечинський-642» розроблена В.П. Романенко ще в 1979 р. Застосовуеться й шактивована вакцина на основi штаму «Закарпатський», розроблена О.В. Сергеевим в 1979 р. Для виготовлення цих вакцин використовують штами, видшет у 70 роках минулого сторiччя, яю здатнi захищати тварин вiд iнфiкування збудниками хвороби лише першого серотипу. Крiм того, зважаючи на еволюцшш змiни, варто звернути увагу на вщповщтсть антигенних властивостей вакцинних та етзоотичних штамiв тешовiрусiв свиней.
Так, за даними А.1. Бузуна, iснуе два пщтипи збудника хвороби Тешена свиней в межах першого серотипу . Виробничi (вакцинш та дiагностичнi)
84
штами BipyciB, видшеш в 60-70 роках ХХ стол^тя, утворювали першу пщгрупу, а етзоотичт штами, видiленi в 90-х рр. - другу. У перехреснш реакци нейтралiзацil вiрусу встановлено антигенну рiзницю мiж пiдгрупами, яка склала 10-15 %, а за коефщентом нейтралiзацil пiдгрупи вiдрiзнялись бiльш як на 52 % [4]. Така антигенна вщмшшсть виробничих та етзоотичних штамiв вiрусiв може призвести до прориву iмунiтету щеплених тварин. У зв'язку з цим, автором запропоновано вакцини i3 використанням нових штамiв «Навля-96» та «ХДЗВА-Б» [6, 7]. Проте, недолгом таких вакцин е те, що вони не забезпечують захист тварин вщ зараження тешовiрусами шших серотипiв.
Щодо вакцин проти шших тешо-, ентеровiрусних хвороб, то вони широкого впровадження не набули, оскшьки здатш захищати тварин лише вщ деяких серотипiв збудникiв.
Висновки. Iснуючi засоби специфiчноl профiлактики дозволяють контролювати епiзоотичну ситуацiю щодо окремих збудниюв тешо- й ентеровiрусних хвороб свиней. Однак, новi умови господарювання, антигенна вщмшшсть етзоотичних штамiв, еволюцiйна мшливкть вiрусiв вимагають удосконалення пiдходiв до конструювання засобiв дiагностики та специфiчноl профiлактики тешо- й ентеровiрусних хвороб свиней. Аналiзуючи лiтературнi данi та результати наших дослщжень, виникае необхщшсть розробки засобiв дiагностики специфiчноl профилактики на основi природних полiантигенних та штучно створених рекомбшантних штамiв вiрусiв з мiжтиповими та мiжвидовими антигенними властивостями, що дозволить захистити тварин вщ шфжування збудниками ентеро- та тешовiрусiв свиней рiзних серотипiв та удосконалити дiагностику iнфекцiйних хвороб свиней.
Л1тература
1. АС. 1086809 СССР, С 12 N 7/00 Способ диагностики энтеровирусного гастроентерита свиней путем постановки реакции длительного связывания комплемента / Собко А.И., Старчеус А.П., Прискока В.А. и др. № 3483612/3015; Заявлено 17.08.82.
2. А С. СССР N 1007226, МКИ А 61 в 10/00, С 12 N 1/04. Способ диагностики энтеровирусных болезней свиней // В.Ф. Романенко, О.Г. Прусс, Н.В.Бабич и др. (СССР) - № 2873644/30-15; заявл. 25.01.80; опубл. 23.11.82. - 4 с.
3.Беланко Л.В., Ястребов А.С., Мирская Т.А. Электронная микроскопия вирусных инфекций поросят // Ветеринарная наука производству.- 1988.- № 26.-С.12-16.
4. Бузун А.И., Бабкин М.В. Подтиповые различия среди штамов и изолятов возбудителя болезни Тешена // Ветеринарна медицина.- 2000. - Т.78 (I).- С.23-28.
5.Виявлення тешовiрусного антигену з використанням сендвiч варiанту iмуноферментного аналiзу / Бова Т.О., Сорока B.I., Дерев'янко С.В. Бокун А.О. // Тези доповщей Х з'1зду Товариства мжробюлопв Украши. - 15-17 вересня, 2004. - С. 351.
85
6. Пат. Украши 65803, 7 А61К39/00. Асоцшована вакцина штрадермального застосування проти Тешенсько! хвороби та псевдо сказу свиней // Бузун А.1., Головко В.О., Романенко В.П. та шшг № 2003054835; заявл. 27.05.2003, опубл. 15.04.2004. - № 4.- 2004.
7. Декларацшний патент Украши 67064, 7 А61К39/29, A61K39/04,.C12N1/20, C12N7/00, Вакцинний штам «Буча-ХДЗВА» Teschovirus suis збудник ензоотичного енцефаломieлiту свиней (тешенсько! хвороби) // Бузун А.1., Головко В.О., Вербицький П.1., Бузун Л.В. № 2003065773; заявл. 23.06.2003, опубл. 15.04.2004. - № 4.- 2004.
8.Дерев'янко С.В. Полiантигеннi властивост штамiв ентеровiрусiв свиней // Ветеринарна медицина Украши. - 1998. - №4. - С. 21.
9.Диагностики болезни Тешена свиней / Романенко В.Ф., Прусс О.Г., Полевик Е.И. и др. // Ветеринария.- 1988.- № 11.- С. 65.
10. Методичш тдходи до створення тест-системми для визначення антитш до вiрусу хвороби Тешена свиней на основi Т1ФА / Бова Т.О., Дерев'янко С.В., Сорока В.1., Бокун А.О. // Науковий вкник Львiвськоï нащонально1 академи ветеринарноï медицини iменi С.З. Гжицького. - 2004. -Т.6, № 2.- Ч.1.- С.3-8.
11. Прискока В.А. Смешанные ентеро-, корона- и ротавирусные инфекции и их особенности. "Ветеринария", 1990, № 1. - C.35-36.
12. Проблема диагностики пневмонии свиней энтеровирусной этиологии / В.Ф. Романенко, А.А. Бокун, Н.В. Бабич, И.Н. Пинчук // Ветеринария. - 1992.-№ 4.- С.25-27.
13. Розробка набору дiагностикумiв ентеровiрусних пневмоентериив свиней на основi штамiв вiрусiв з полiантигенними властивостями / Сорока
B.1., Полевiк O.I., Бабiч Н.В., Дерев'янко С.В., Романенко В.П. // Науковий вкник Львiвськоï державноï академiï ветеринарноï медицини iменi
C.З. Гжицького. - 2000. - Т.2. - Ч.1. - С.166-168.
14. Романенко В.П. Ентеровiруси i 1'х значення в патологи свиней // Вкник аграрноï науки. - 1996. - № 7. - С. 48-52.
15. Романенко В.П. Хвороба Тешена / К.:Урожай, 1974. - 80 с.
16. Романенко В.П., Касьян Г.Г. Дiагностична цшшсть реакци дифузiйноï прециштаци в агаровому гелi при ензоотичному енцефаломieлiтi (хвороба Тешена) свиней // Труды 4 съезда Украинского микробиологического общества. - К.- 1975. - С. 642.
17. Романенко В.Ф. Инфекционные желудочно-кишечные болезни свиней. - М., 1984. - 158 с.
18. Романенко В.Ф. Энтеровирусный гастроэнтерит // Справочник по болезням свиней. - К.: "Урожай", 1981. - С. 46-49.
19. Романенко В.Ф., Прусс О.Г. Ретроспективный анализ сывороток, как метод диагностики энтеровирусных заболеваний свиней // Мкробюлопчний журнал. - К., 1973. - № 3. - С. 401-402.
86
20. Романенко В.Ф., Прусс О.Г., Купневская Л.В. и др. Иммунофлуоресцентный метод диагностики энзоотического энцефаломиелита свиней // Ветеринария. - M, 1982. - № 4. - С. 69-70.
21. Романенко В.Ф., Полевик Е.И. Этиология энтеровирусного гастроэнтерита свиней // Ветеринария. - 1992. - № 3. - С. 29-30.
22. Романенко В.П., Пшчук 1.М. Вiрусологiчнi дослщження та критерп визначення етюлогп ентеровiрусноl пневмонп свиней // Вкник аграрно! науки. - 1993. - № 4. - С. 25-27.
23. Романенко В.П., Дерев'янко С.В. Деяю бюлопчш особливост полiантигенних штамiв ентеровiрусiв свиней // Науковий вкник нащонального аграрного ушверситету. - 2001. - № 36. - С. 80-83.
24. Синицин В.А. Технолопя виготовлення дiагностикумiв для iмуноферментного аналiзу та застосування !х в лабораторних дослщженнях: Автореф. дис... д-ра вет. наук: 16.00.03 / Ки!в. Нащональний аграрний ушверситет. - К., 1999. - 38 с.
25. Слободенюк В.К. с соавт. Диагностика смешаных инфекций при пневмонии свиней / "Ветеринария".- 1984.- № 2.- С. 75-76.
26. Сорока В.1., Полевк О.1., Дерев'янко С.В. Характеристика ентеровiрусiв, видiлених вщ свинец // Ветеринарна медицини. - 2003. - № 82. -С. 531-534.
27. Таксономия энтеровирусов свиней / Романенко В.Ф., Полевик Е.И., Прусс О.Г. и др.// Ветеринария. - 1993. - № 5. - С. 26-29.
28. Тацька В.Н., Старчеус А.П., Мельниченко О.М. Отримання специфiчних сироваток до ентеровiрусiв свиней - збудниюв ентеровiрусних шфекцш// Вкник львiвськоl державно! академп ветеринарно! медицини iм. С.Ж.Гжицького - 2000 р. Т.2 (№2), част.1. - С. 182-184.
29. Этиология энзоотической пневмонии свиней / Романенко В.Ф., Бокун А.А., Бабич Н.В. и др. // Ветеринария. - 1988. - № 2. - С. 35-37.
30. Animal Coronavirus and enterovirus yield increases due to retinoic acid supplement // Sobko A., Tatskaya V., Kvatchoff V. et al. // Proceedings: The 13 th International Pig Veterinary Society Congress. - Bangkok (Thailand). - 1994. - P. 524.
31. Betts A.O. Porsine enteroviruses // Desiases of swine.-Jowa State University. -1970.-V.14, P.356-362.
32. Betts O.A. Maladies respiratore du pore // Am. med. vet.- 1972. - V.116, №4.- P.289-302.
33. Buczek J., Koziol T. Serotypes of enteroviruses isolated from pigs in Poland // Folia-Veterinaria. - 1991. - V.35, № 1-2. - P.89-97.
34. Dunne H.W., Wang T.J., Ammermann E.H. Classification of North American porcine Enteroviruses: a comparison with Europian and Japanese strains // Infect.Immunol. - 1971. - V.4, № 5. - P. 619-631.
35. Epidemiological survey of diseases in fattening pigs on farms breeding their own pigs / Hirahara T., Yasuhara H., Izumida A. et al. // Journal of the Japan Veterinary Medical Association. - 1990.- V.43, № 9.- P.639-645.
87
HayKoeuü eicnuK ÏÏHYBMET iMeni C.3. f^uцbкого
Tom 12 № 2(44) Hacmuna 1, 2010
36. Grouping of porcine enteroviruses by indirect immunofluorescence and description of two new serotypes / Auerbach J, Prager D., Neuhaus S. et al. // Journal of Veterinary Medicine. Series B. - 1994. - V.41, № 4. - P.277-282.
37. Kaku Y., Sarai A. and Murakami Y. Genetic reclassification of porcine enteroviruses // J. Gen. Virol.- 2001. - V.82. - P. 417-424.
38. King, A.M.Q., Brown, F., Christian, et al. Picornaviridae. In "Virus Taxonomy. Seventh Report of the International Committee for the Taxonomy of Viruses". / Eds Van Regenmortel, M.H.V., Fauquet, C.M., Bishop, D.H.L., et al. -Academic Press, New-York, San Diego.- 2000.- P. 657-673.
39. Knowless N.J., Buckley L.S., Pereira H.G. Classification of porcine enteroviruses by antigenic analysis and cytopathic effects in tissue culture: desciption of 3 new serotypes // Arch. Virol. - 1979.- V. 62, № 3.- P. 201-208.
40. Porcine teschovirus comprise at least eleven distinct serotypes: molecular and evolutionary aspects / Zell R., Dauber M., Krumbolz A. et al. // J. Virol. - 2001. - V.75, № 4. - P. 1620-1631.
41. Pringle C R. Virus Taxonomy // Arch. Virol.- 1999.- V. 144. - P. 421-429.
42. Relation of serological- and CPE-classification of porcine enteroviruses to the classification by immunoperoxidase (IP) staining, and observation of CPE of IP staining method / E.Honda, I.Watanabe, K.Okazaki, T.Kumagai // Japanese Journal of Veterinary Science.- 1990.- V.52, № 4.- P.795-800.
43. Sulochana S., Derbyshire J.B. Immunodiffusion reactions ammong porcine enteroviruses and othe picornaviruses // Vet. Microbiol. - 1978. - № 2. -P.205-212.
44. Typisierung von 17 porzinen Enterovirusisolaten aus Polioenzephalomyelitisfallen der Jahre 1983-1991 / Witte K.H., Auerbach J., Loss K U. , et al. // Deutsche-Tierarztliche-Wochenschrift. - 1994. - V.101, №12. - P.482-484.
Summary
Derevjanko S.V., Bova T.O., Soroka V.I., [email protected] Institute of agricultural microbiology of NAAS of Ukraine, Chernihiv, Ukraine DIAGNOSTIC AIDS AND SPECIFIC PREVENTIVE MAINTENANCE TESCHOVIRUS AND ETEROVIRUS ILLNESSES OF PIGS
In article it is considered questions of diagnostics, specific preventive maintenance tescho - and Enterovirus illnesses of pigs and it is presented literary data on these problems.
Key words: Porcine Teschovirus, Porcine Enterovirus, diagnostics, preventive maintenance, illness.
Cmammx nadiümna do peda^ii 15.03.2010
88
