CC BY
84
ВОПРОСЫ ЛЕСНОЙ ФИТОПАТОЛОГИИ
ВЫБОР СОСТАВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ПРИГОДНЫХ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ПОРАЖЕНИЯ ХВОЙНЫХ ПОРОД грибом DIPLODIA PINEA
РА. УМАНОВ, асп. каф. экологии и защиты леса МГУЛ
Летом 2008 г. было обнаружено усыхание сосны обыкновенной в посадках частных владений ближнего Подмосковья. Было установлено, что причиной усыхания сосны является диплодиевый некроз, или диплодиоз, вызываемый грибом Diplodia pinea=Sphaeropsis sapinea. Этот гриб, конечно, был известен на территории бывшего СССР, но встречался преимущественно в южных республиках (Казахстане, Грузии, Украине), где был обнаружен в 1926 г.[3]. Сравнительно недавно, в 2002 г., этот гриб был обнаружен в Московской области Соколовой Э. С. в питомниках и городских посадках на кедровой, горной и черной сосне.
Из литературы известно, что Diplodia pinea является оппортунистической инфекцией, т. е. болезнь развивается на растениях, ослабленных различными неблагоприятными естественными и антропогенными факторами: повреждение насекомыми, солнечно-морозный ожог, дефицит влаги, засуха, чрезмерное затенение, уплотнение почвы и т. д. [4, 5, 6, 9]. Также известно, что болезнь в 70 % случаев протекает в скрытой форме. Это может способствовать распространению диплодио-за в России и осложняет диагностику этого заболевания.
Для облегчения диагностики заболевания диплодиозом разных видов сосны, автором был проведен ряд экспериментов с целью выявления оптимального состава синтетической стерильной среды для получения плодоношений этого гриба.
Ранее подобные работы проводились и в СССР [1] и за рубежом [8]. Так, О. Г. Ки-зикелашвили установил, что для прорастания спор и развития гриба необходима температура в интервале от +12° C до +36° C, оптимальной является температура +25° С. Также, экспериментируя с разнообразными стерильными агаровыми средами, он уста-
новил, что мицелий этого гриба лучше всего развивается на картофельно-глюкозном агаре (КГА), но плодоношений гриба отмечено не было. Однако О. Г. Кизикелашвили сообщил, что на среде Чапека с добавлением NH4NO3 или избытком NaNO3 возможно получение плодовых тел гриба.
Вместе с этим зарубежные исследователи отмечают, что мицелий Diplodia pinea успешно развивается на любой среде, содержащей крахмал и глюкозу [8], но плодовых тел не образуется. И зарубежные исследователи и О. Г. Кизикелашвили успешно получали плодоношения гриба на стерильной молодой хвое сосны и стеблях донника [1, 7]. Но такие среды не всегда доступны.
Для эксперимента использовались следующие среды: среда Чапека, среда Чапека с избытком NaNO3 (избыток 2 %), среда Чапека с добавлением NH4NO3 (2 %), среда Чапека с добавлением маточного раствора витаминов и органических веществ среды Мурасиге-Скуга, а также витамина А и С (далее среда ЧМС), агаризованное пивное сусло, карто-фельно-глюкозный агар и черносливовый агар [2].
Посевы проводились методом моноспоровых культур [2] в чашки Петри диаметром 9 см, в которые наливалось по 20 мл среды. Для каждой среды использовалось по 10 чашек Петри. Культивирование гриба происходило при температуре 24° С и постоянной относительной влажности воздуха 86 %.
Наблюдение за ходом роста гриба проводились на 3, 7, 15, 20, 27, 35-й день после посева. При этом измерялся диаметр колоний, отмечалось возрастное потемнение мицелия и наличие плодоношений. Результаты измерений указаны в таблице.
Как видно из таблицы, самая высокая скорость роста мицелия гриба была на
118
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 4/2011
ВОПРОСЫ лесной фитопатологии
Рис. 1. Пикнида Diplodiapinea, полученная на среде ЧМС. Микросъемка с 135-кратным увеличением
Рис. 2. Конидии Diplodia pinea, полученные на среде ЧМС. Микросъемка с 600-кратным увеличением
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 4/2011
119
ВОПРОСЫ лесной фитопатологии
Таблица
Скорость развития мицелия гриба Diplodia pinea на различных стерильных средах
Среда, используемая для выращивания Диаметр колоний на 3-й день после посева, см Диаметр колоний на 7-й день после посева, см Диаметр колоний на 15-й день после посева, см Диаметр колоний на 20-й день после посева, см Диаметр колоний на 27-й день после посева, см Диаметр колоний на 35-й день после посева, см
Картофельно-глюкоз-ный агар 3,4 9 9 9 9 9
Черносливовый агар 5,5 9 9 9 9 9
Среда Чапека 2,8 7 9 9 9 9
Среда Чапека с избытком NaNO3 3,4 6,5 9 9 9 9
Среда Чапека с добавлением NH4NO3 2,5 5,3 8 9 9 9
Среда ЧМС 2,5 6,2 7,8 9 9 9
Агаризованное пивное сусло 3 9 9 9 9 9
черносливовом агаре, на КГА скорость роста чуть ниже. Самой низкой скорость роста была на среде Чапека с добавлением NaNO3 Возрастное потемнение мицелия раньше всех было отмечено на КГА (5-й день), на агаризованном пивном сусле потемнение мицелия было отмечено на 7-й день, на среде Чапека потемнение было отмечено на 10-й день, на среде Чапека с избытком NaNO3 потемнение было отмечено на 7-й день, на среде ЧМС и среде Чапека с добавлением NH4NO3 возрастного потемнения мицелия отмечено не было, на черносливовом агаре оно было отмечено на 15-й день.
Плодоношений гриба ни на одной из сред, кроме ЧМС, не было отмечено. Первые плодоношения на ЧМС были обнаружены на 32-ой день после посева (рис. 1, 2.). Плодоношения были найдены в 9 из 10 чашек. Пик-ниды имеют размер около 200*230 р в ширину, конидии коричневые и имеют размер 32*12 р. Однако количество плодоношений сильно варьирует.
из всего сказанного можно сделать вывод, что среда Чапека с добавлением маточного раствора витаминов и органических веществ среды Мурасиге-Скуга, а также витамина А и С дает лучшие результаты по сравнению с другими средами использованными в этом опыте.
Библиографический список
1. Кизикелашвили, О.Г. Результаты изучения дипло-диоза пицундской сосны в Грузии: автореф. дис. ... канд. биол. наук / О.Г. Кизикелашвили. - Тбилиси: Мецниереба 1971. - 25 с.
2. Самуцевич, М.М. Техника фитопатологических исследований / М.М. Самуцевич. - М.: Государственное издательство сельскохозяйственной и колхознокооперативной литературы, 1931. - 99 с.
3. Чернецкая, З.С. Материалы к изучению флоры грибов Северной Осетии / З.С. Чернецкая. - Владикавказ, 1929. - C. 93.
4. J. T. Blodgett, E. L. Kruger and G. R. Stanosz. Effects of Moderate Water Stress on Disease Development by Sphaeropsis sapinea on Red pine. - Phytopathology. 1997. Volume 87. №4. С. 428-433.
5. J. Flowers, E. Nuckles, J. Hartman, and L. Vaillancourt. Latent Infection of Austrian and Scots Pine tissues by Sphaeropsis sapinea. - Plant disease. 2001. Volume 85, №10. С. 1107-1112.
6. J. Hartman, G. Mussey and W. Fountain. Evolution of landscape Austrian pines for tip blight disease. -1994.Untiv. Ky. Nursery Landsc. Program Res. Rep. SR-94-1:31.
7. T H. Nicholls and M. E. Ostry. Sphaeropsis sapinea Cancers on Stressed Red and Jack Pines in Minnesota and Wisconsin. - Plant disease. 1990. Vol. 74, № 1. С. 54-56.
8. M. A. Palmer, T. H. Nicholls. How to identify and control Diplodia shot blight, collar rot, and canker of conifers. - North Central Research Station 1983. 9 с.
9. Wayne A. Sinclair and Howard H. Lyon. Diseases of trees and shrubs / Cornell University: New York 2005. 2-nd. ed. С. 130.
120
ЛЕСНОЙ ВЕСТНИК 4/2011
