Внешняя Оценка качества молекулярнобиологических исследований в России по данным Федеральной программы внешней оценки качества лабораторных исследований Текст научной статьи по специальности «Прочие медицинские науки»

ПРЕПАРАТЫ

КОНТРОЛЬНЫЕ ОБРАЗЦЫ ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ВНУТРИЛАБОРАТОРНОГО КОНТРОЛЯКАЧЕСТВА НЕКОЛИЧЕСТВЕННЫХМЕТОДОВ ИФА ОПРЕДЕЛЕНИЯМ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ СОЦИАЛЬНО ЗНАЧИМЫХИНФЕКЦИЙ

1Нетесова И.Г., 2Бобкова М.Р.

1 ЗАО «Вектор-Бест», Кольцове, Новосибирская область, Россия;

2 НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН, Москва, Россия

Для проведения внутрилабораторного контроля качества (ВКК) неколичественных методов предлагается ввести оценку чувствительности и специфичности анализа в лаборатории с помощью двух новых контрольных образцов КО2 и КО3. Для оценки чувствительности анализа в лаборатории применяется контрольный образец КО2 (МИНИпол, ЗАО «Вектор-Бест») с истинно положительным результатом, значение которого превышает ОП крит, но при этом является достаточно низким (выше ОП крит и ниже 2х ОП крит). Для оценки специфичности анализа в лаборатории применяется контрольный образец КО3 (ОДС, ЗАО «Вектор-Бест») с истинно отрицательным результатом, значение ОП которого должно быть ниже ОП крит.

Для повышения надежности контроля качества на основании измерений в 20-ти аналитических сериях предлагается установить контрольные пределы разброса значений ОП крит (ОП крит ср ± 3S), от которых за-

висит принятие решения о результатах анализов. Все последующие значения ОП крит должны укладываться в установленные пределы ОП крит.

Для оценки сходимости результатов, построения контрольной карты и текущего оперативного контроля используется положительный контрольный образец КО1 (например, ВЛК-HBsAg, ЗАО «Вектор-Бест»), при этом значение его ОП находится в области линейной зависимости ОП от концентрации маркера (примерно от 0,5 о. е. до 1,5 о. е.).

ВКК неколичественных методов предлагается проводить в виде трех последовательных стадий с оценкой внутрисерийной сходимости результатов измерений; оценкой чувствительности и специфичности анализа в лаборатории, ОП крит, межсерийной сходимости результатов измерений; проведением оперативного контроля качества в каждой аналитической серии с помощью контрольных образцов КО1, КО2 и КО3.

ВНЕШНЯЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА МОЛЕКУЛЯРНО-БИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ В РОССИИ ПО ДАННЫМ ФЕДЕРАЛЬНОЙ ПРОГРАММЫ ВНЕШНЕЙ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ЛАБОРАТОРНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

12Творогова М.Г., 3Гущин А.Е., 3Куевда Д.А, 4Волкова Р.А., 4Воробьева М.С., 'Судариков А.Б., 'Михайлов М.И.,12Малахов В.Н.

1НП «Центр внешнего контроля качества клинических лабораторных исследований»;

2ФГУ ГНИЦ профилактической медицины Росмедтехнологий;

3ФГУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора;

4ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России;

5ГУ Гематологический центр РАМН;

6ФГУП «Институт полиомиэлита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова» РАМН, Москва, Россия

Оценка качества выполнения молекулярно-биологичес- В настоящее время в рамках ФСВОК функционируют

ких методов лабораторной диагностики в Федеральной 9 разделов, позволяющих оценить качество исследова-

системе внешней оценки качества клинических лабора- ний выявления и количественной оценки нуклеиновых

торных исследований (ФСВОК) начата в 2000 г. кислот различных патогенов, число участников каждого

€

2010 г.

из разделов в 2010 г. указано в скобках: «ПЦР-выявле-ние ВГС» (125), «ПЦР-выявление ВГВ» (115), «ПЦР-вы-явление ВИЧ» (90), «ПЦР-выявление Chlamidia trachomatis, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum (260)», «ПЦР-выявление Neisseria gonorrhoeae» (90), «ПЦР-выявление микобактерий туберкулеза» (25), «ПЦР-выявление ВПЧ» (90), «Количественное определение РНК ВГС методом ПЦР» (90), «Количественное определение ДНК ВГВ методом ПЦР» (65).

Оценка качества ПЦР-исследований проводится ФСВОК на основании полученных от лабораторий-участников результатов исследования наборов контрольных образцов (КО), содержащих закодированные положительные и отрицательные пробы. Состав наборов ежегодно утверждается экспертной группой ФСВОК.

В ходе внешней оценки качества (ВОК) качественных (неколичественных) исследований правильными считают положительные результаты, полученные при исследовании образцов, содержащих РНК или ДНК соответствующих патогенов и отрицательные результаты, полученные при исследовании образцов, их не содержащих. В тезисах изложены данные по двум из перечисленных выше разделов ФСВОК.

Доля правильных ответов в разделе «ПЦР-выявление ВГС» в 200 -2010 гг. (1-й цикл) составила соответственно для концентрации 104 МЕ/мл 98%-97%; 103 МЕ/мл 95%-92%; 9х102 МЕ/мл 75% - 88%; отрицательных КО 96% - 98%. Доля правильных ответов при выявлении ДНК C. trachomatis соответственно: 104 копий/мл 94%-92%; 103 копий/мл 82-73%; отрицательных КО 97% - 99%.

Полученные результаты позволяют отметить, что доля правильных результатов снижается при уменьшении концентрации ДНК или РНК в образце.

В 2010 г. в ФСВОК впервые в стране организованы разделы для количественного определения РНК ВГС и ДНК ВГВ с использованием ПЦР. ВОК определения вирусной нагрузки с 2007 г. проводится и в организованном разделе «ПЦР-выявление ВИЧ», участники которого могут представлять результаты исследования в количественном и/или качественном вариантах. При ВОК результатов количественных разделов рассчитывают диапазон удовлетворительных результатов - интервал, включающий в себя 90% результатов всех участников ^±1,64s, где ЦЗ - среднее геометрическое значение результатов участников, использовавших определенный набор реагентов, s - стандартное отклонение величины ЦЗ в логарифмической шкале.

Анализ сведений об использованных в ходе работы методах, реактивах и оборудовании показал:

1. лаборатории-участники ФСВОК используют для ПЦР-исследований преимущественно реактивы отечественного производства;

2. среди методов детекции продуктов амплификации, применяемых участниками ФСВОК в 2010 г., наименее используемым следует считать метод электрофореза. Так, только 11% участников раздела «ПЦР-выяв-ление ВГС» использовали названный метод, остальные - преимущественно методы амплификации в присутствии флуоресцентно меченых зондов с детекцией сигнала в режиме реального времени (RT-PCR) - 62% или по конечной точке (end point) - 25%. При использовании ПЦР для выявления ДНК Chlamidia trachomatis метод электрофореза применяли для детекции продуктов амплификации 22% участников ФСВОК, методы RT-PCR и end point - 42 и 36%, соответственно. Во всех разделах, за исключением «ПЦР-выявление ВИЧ», более 90% участников использовали реагенты отечественных производителей.

МЕТОДИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ НАБОРОВ РЕАГЕНТОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНКВИ-РУСОВ МЕТОДОМ ОБРАТНОЙ ТРАНСКРИПЦИИ-ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИЕЙ

Сизикова Т.Е., Мельникова Е.В., Меркулова О.В., Мельников Д.Г., Петров А.А., Меркулов В.А.

Филиал ФГУ «48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации - Вирусологический центр» г. Сергиев Посад Московской обл., Россия

Целью работы является анализ методических аспектов определения чувствительности амплификационных наборов реагентов, предназначенных для выявления РНК вирусов методом обратной транскрипции - полиме-разной цепной реакцией (ОТ ПЦР). Проведенный анализ основывается на результатах, полученных при испытании ОТ - ПЦР набора реагентов для выявления РНК возбудителя Аргентинской геморрагической лихо-

радки - вирус Хунин. За чувствительность того или иного метода обычно принимают минимальное количество концентрацию возбудителя, которое можно выявить с помощью данного метода.

На практике для определения чувствительности метода используют формулу: S = АхР,

где: S - чувствительность метода выраженная в УЕ мл-1, А - концентрация возбудителя в препарате,