CC BY
22doi: 10.17116/terarkh201587640-44 © Коллектив авторов, 2015
Влияние полиморфизма генов интерлейкина-10 и интерлейкина-28 на развитие и течение волчаночного нефрита
Т.Н. КРАСНОВА1, Л.М. САМОХОДСКАЯ3, Л.В. ИВАНИЦКИЙ1, А.Д. КОРОГОДИНА2, Е.Н. БОРИСОВ1, Н.В. НИКИФОРОВА2, П.И. НОВИКОВ2, А.А. КАМАЛОВ4, Н.А. МУХИН1
'Кафедра внутренних болезней факультет фундаментальной медицины ФГОУ ВПО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва, Россия; 2Клиника нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России, Москва, Россия; 3лаборатория генных и клеточных технологий кафедры биохимии и молекулярной медицины факультета фундаментальной медицины ФГОУ ВПО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва, Россия; 4медицинский научно-образовательный центр ФГОУ ВПО «МГУ им. М.В. Ломоносова», Москва, Россия
Impact of interleukin-10 and interleukin-28 gene polymorphisms on the development and course of lupus nephritis
T.N. KRASNOVA1, L.M. SAMOKHODSKAYA3, L.V. IVANITSKY1, A.D. KOROGODINA1, E.N. BORISOV1, N.V. NIKIFOROVA2, P.I. NOVIKOV2, A.A. KAMALOV4, N.A. MUKHIN1
1Department of Internal Medicine, Faculty of Fundamental Medicine, M.V. Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia; 2E.M. Tareev Clinic of Nephrology, Internal and Occupational Diseases, I.M. Sechenov First Moscow State Medical University, Ministry of Health of Russia, Moscow, Russia; 3Laboratory of Gene and Cell Technologies, Department of Biochemistry and Molecular Medicine, Faculty of Fundamental Medicine, M.V. Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia; 4Medical Research and Education Center, M.V. Lomonosov Moscow State University, Moscow, Russia
Резюме
Цель исследования. Оценка взаимосвязи носительства полиморфных вариантов (-1080) G/A гена ИЛ-10 и C/T (rs12979860) и T/G (rs8099917) гена ИЛ-28 с течением волчаночного нефрита (ВН).
Материалы и методы. Обследовали 99 больных системной красной волчанкой (СКВ), из них 68 с ВН. Анализ полиморфизма генов проводили с помощью стандартных молекулярно-генетических методов. Анализировали частоту клинических проявлений ВН, «почечную» выживаемость (ПВ) оценивали методом Каплана—Майера.
Результаты. У пациентов с мутантным аллелем гена ИЛ-10 10-летняя ПВ составила 80%, а в группе без мутантного аллеля — 86% (р=0,78). У носителей мутантного аллеля ИЛ-28 (rs12979860) 10-летняя ПВ (75%), оказалась ниже, чем у пациентов без мутантного аллеля (83%; р=0,049), а у носителей мутантного аллеля ИЛ-28 (rs8099917) — меньше, чем у пациентов без указанного мутантного аллеля — 67 и 88% соответственно (р=0,047). У больных ВН — носителей мутантного аллеля (-1080) G/A гена ИЛ-10 отмечался больший уровень протеинурии в рамках нефротического синдрома (в среднем 6,1 г/л) по сравнению с аналогичным показателем у пациентов без мутантного аллеля данного гена (в среднем 2,9 г/л; р=0,034). Однако носители мутантного аллеля лучше отвечали на лечение (р=0,050). Мутантные аллели генов ИЛ-10 и ИЛ-28 не ассоциированы с развитием быстропрогрессирующего нефрита, активностью волчаночного процесса в почках, частотой дебюта СКВ с ВН.
Заключение. У больных ВН носительство мутантного аллеля А гена ИЛ-10 связано с лучшим ответом на лечение, а мутантного аллеля гена ИЛ-28 — с тяжелым течением болезни.
Ключевые слова: системная красная волчанка, волчаночный нефрит, интерлейкин-10, интерлейкин-28.
Aim. To assess the relationship of the carriage of IL-10 -1080 G/A and IL-28 rs8099917 C/T polymorphisms to the course of lupus nephritis (LN).
Subjects and methods. Ninety-nine patients with systemic lupus erythematosus (SLE), including 68 with LN, were examined. Gene polymorphisms were analyzed using standard molecular genetic techniques. The frequency of the clinical manifestations of LN was analyzed; renal survival (RS) was estimated by the Kaplan-Meier method.
Results. Ten-year RS rates were 80 and 86% of the patients with and without the mutant IL-10 allele, respectively (p=0.78). The 10-year RS was lower (75%) in carriers of the mutant IL-28 rs12979860 allele than in patients without this mutant allele (83%; p=0.049) and in those of the mutant IL28 rs8099917 allele than in patients without the above mutant allele (67 and 88%, respectively; p=0.047). LN patients, carriers of the mutant IL-10 -1028 G/A allele, were observed to have higher-grade proteinuria in the presence of nephritic syndrome (mean 6.1 g/l) than those without the mutant allele of this gene (mean 2.9 g/l; p=0.034). However, the mutant allele carriers responded to treatment better (p=0.050). The mutant IL-10 and IL-28 alleles were unassociated with the development of rapidly progressive nephritis, the activity of a renal lupus process, and the rate of onset of SLE and LN. Conclusion. In the LN patients, the carriage of the mutant IL-10 allele A is associated with a better response to treatment and that of the mutant IL-28 allele is linked to the severe course of the disease.
Key words: systemic lupus erythematosus, lupus nephritis, interleukin 10, interleukin 28.
ВН — волчаночный нефрит ДИ — доверительный интервал ИЛ-10 — интерлейкин-10 ИЛ-28 — интерлейкин-28
НС — нефротический синдром ПВ — «почечная» выживаемость СКВ — системная красная волчанка
Волчаночный нефрит (ВН) остается прогностически значимым висцеритом при системной красной волчанке (СКВ). Клинические признаки поражения почек наблюдаются у 50—70% больных, при этом морфологические изменения отмечаются почти у всех больных в активную стадию болезни [1].
В настоящее время большое внимание придается персонифицированному подходу к ведению больных. Наряду с клиническими прогностическими факторами развития ВН обсуждаются и генетические особенности пациентов. Наиболее важным механизмом развития ВН является им-мунокомплексное воспаление, которое инициируется и поддерживается цитокинами, в том числе интерлейки-ном-10 (ИЛ-10) и интерлейкином-28 (ИЛ-28).
В ряде исследований отмечена прямая зависимость между повышением уровня ИЛ-10 и показателями активности заболевания [2, 3]. S. Lin и соавт. [4] отмечали увеличение уровня ИЛ-28 в сыворотке крови и продукции мРНК данного гена в мононуклеарных клетках периферической крови у больных СКВ. Однако их роль в процессе развития ВН не определена. Нами ранее показано, что носительство полиморфных вариантов (—1080)G/A гена ИЛ-10 и C/T (rs12979860) и T/G (rs8099917) гена ИЛ-28 ассоциируется с развитием ВН, однако влияние исследуемых мутаций на тяжесть течения ВН остается неизвестным [5].
В связи с этим цель нашей работы состояла в изучении взаимосвязи носительства полиморфных вариантов (—1080)G/A гена ИЛ-10 и C/T (rs12979860) и T/G (rs8099917) гена ИЛ-28 и течения ВН.
Материалы и методы
В исследование включили 99 больных СКВ в возрасте от 16 до 76 лет (средний возраст 36,8+14,0 года), из них 78 (78,8%) женщин и 21 (21,2%) мужчина славянской этнической группы. Длительность наблюдения составляла у 73 больных 5 лет и более, у 18 больных — от 1 года до 5 лет и у 9 больных 1 год и менее. Диагноз СКВ устанавливали согласно критериям Американской коллегии ревматологов. Всем больным проводили стандартное клини-ко-лабораторное обследование. Больные ВН получали сочетан-ную иммуносупрессивную терапию преднизолоном и циклофос-
Сведения об авторах:
Краснова Татьяна Николаевна — доц. каф. внутренних болезней ФФМ МГУ
Самоходская Лариса Михайловна — в.н.с., доц. НИЛ генных и клеточных технологий каф. биохимии и молекулярной медицины ФФМ МГУ
Иваницкий Людвиг Валерьевич — аспирант каф. внутренних болезней ФФМ МГУ
Корогодина Анна Дмитриевна — врач-интерн Клиники нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева Никифорова Наталья Владимировна — зав. терапевтическим отд-нием Клиники нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева
Новиков Павел Игоревич — зав. ревматологическим отд-нием Клиники нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М.Тареева
Камалов Армаис Альбертович — д.м.н., проф., дир. Медицинского научно-образовательного центра МГУ им. М.В. Ломоносова, чл.-корр. РАН
Мухин Николай Алексеевич — д.м.н., проф., зав. каф. внутренних болезней ФФМ МГУ им. М.В. Ломоносова, дир. Клиники нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева, акад. РАН и РАМН
фаном, в том числе в сверхвысоких дозах. Благоприятным ответом на лечение считали достижение полной или частичной ремиссии нефрита в сроке до 6 мес. Генотипирование проводили молекулярно-генетическими методами (методом полимеразной цепной реакции в реальном времени).
Статистическую обработку данных проводили с использованием пакета статистических программ Statistica 10 при помощи критерия t Стьюдента, критерия х2. Оценку «почечной» выживаемости* (ПВ) проводили методом Каплана—Майера. Почечную недостаточность констатировали при повышении уровня креати-нина в крови выше 2 мг/дл. Группы сравнивали с помощью ло-грангового теста с поправкой Йетса.
Результаты
Среди пациентов с ВН активные формы поражения почек встречались у 62 (91,2%), при этом у 36 (52%) из них поражение почек наблюдалось в дебюте заболевания. У 20 (29,4%) пациентов отмечено быстропрогрессирующее течение заболевания. Среди пациентов с медленнопрогрес-сирующим течением у 48 (63,2%) ведущим в клинической картине заболевания был нефротический синдром (НС), у 25 (36,8%) — активный мочевой синдром. В первые 6 мес активной терапии положительный эффект достигнут у 29 (42,6%) больных.
При оценке ПВ у пациентов с СКВ в зависимости от полиморфизма гена ИЛ-10 показано, что статистически значимой ассоциации с развитием поражения почек нет, хотя и прослеживается тенденция к увеличению 10-летней ПВ в группе пациентов с мутантным аллелем ИЛ-10 (86% при 95% доверительным интервалом — ДИ от 82 до 90%) по сравнению с аналогичным показателем у пациентов без мутации в данном гене (80% при 95% ДИ от 76 до 84%;р=0,78) (см. рисунок, а).
У больных СКВ с мутантным аллелем гена ИЛ-28 (rs12979860) 10-летняя ПВ была меньше (75% при 95% ДИ от 72 до 78%), чем у пациентов без полиморфного варианта гена (83% при 95% ДИ от 80 до 86%; р=0,049) (см. рисунок, б), а у носителей мутантного аллеля гена ИЛ-28 (rs8099917) — статистически значимо меньше (67% при 95% ДИ от 62 до 72%), чем у пациентов без данной мутации (88% при 95% ДИ от 84 до 92%; р=0,047) (см. рисунок, в).
У больных ВН — носителей мутантного аллеля (—1080) G/A гена ИЛ-10 отмечался больший уровень протеинурии в рамках НС (в среднем 6,1 г/л) по сравнению с таковым у пациентов без мутантного аллеля данного гена (средняя протеинурия 2,9 г/л; _р=0,034). Однако при этом носители мутантного аллеля лучше отвечали на лечение (р=0,050). Аллель (-1080) G/A гена ИЛ-10 не связана с распространенностью быстропрогрессирующих форм ВН, общей активностью заболевания, частотой поражения почек в дебюте СКВ. В ходе исследования не удалось выявить статистически значимую ассоциацию с развитием быстропро-грессирующего нефрита, активностью волчаночного процесса в почках, частотой дебюта СКВ с поражениями почек и полиморфизмом гена ИЛ-28 (rs12979860 и rs8099917).
*Число больных (в %), у которых произошло снижение функции почек (повышение уровня креатинина в крови более 2 мг/дл).
Контактная информация:
Борисов Евгений Николаевич — аспирант каф. внутренних болезней ФФМ МГУ; e-mail: [email protected]
100
90
80
m с
70
60
50
' 1 ï-è^H- _
с -.т-Н - -+■ - 1 1 1
1 1 1 1 ---1-
- -- —1-
0
100
200 300 400
Длительность болезни, мес
- Пациенты без мутантного аллеля
----Пациенты с мутантным аллелем
а
500
600
200 300 400 Длительность болезни, мес Пациенты без мутантного аллеля ----Пациенты с мутантным аллелем
б
Рисунок а, б. ПВ у больных СКВ в зависимости от наличия мутантного аллеля гена ИЛ-10 (а), мутантного аллеля гена ИЛ-28 (rs12979860) (б) и мутантного аллеля гена ИЛ-28 (rs8099917) (в).
Однако имелась тенденция к увеличению частоты возникновения быстропрогрессирующих форм нефрита и более высокой степени активности поражения почек в целом у пациентов с мутантным аллелем гена ИЛ-28 (К8099917).
Обсуждение
Проведенное исследование позволяет констатировать, что больные — носители мутантного аллеля гена ИЛ-10, несмотря на высокий уровень протеинурии, успешнее
100
90
80
ш с
70
60
50
Хн
¿- -Г-ТХ. 1 1
1 1 & II II А
1 0- >—1— :
-+-|- -1-
100
200 300 400
Длительность болезни, мес
-Пациенты без мутантного аллеля
----Пациенты с мутантным аллелем
500 600
в
Рисунок в. ПВ у больных СКВ в зависимости от наличия мутантного аллеля гена ИЛ-10 (а), мутантного аллеля гена ИЛ-28 М2979860) (б) и мутантного аллеля гена ИЛ-28 (^8099917) (в).
отвечали на терапию. Замена основания О основанием А в положении (—1082) гена ИЛ-10 приводит к снижению его продукции [6]. Белок, который кодируется геном ИЛ-10, представляет собой цитокин, продуцируемый в первую очередь моноцитами и в меньшей степени лимфоцитами. Этот белок оказывает плейотропное влияние на процессы стимуляции иммунного ответа организма. Он подавляет экспрессию цитокинов, продуцируемых лимфоцитами ТЫ, МНС класса II и молекул костимуля-торов макрофагов. В то же время белок, кодируемый геном ИЛ-10, стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов и продукцию ими антител. Результаты метаанализа [7] показали, что именно носительство (—1082) аллеля О, связанного с более высокой продукцией ИЛ-10, ассоциировано с развитием СКВ. В нашем исследовании выявлена тенденция к увеличению ПВ у больных с мутантным аллелем гена и хорошему ответу на сочетанную терапию глюкокортикостероидами и циклофосфамидом, что косвенно подтверждает ингибирующее влияние продукта гена ИЛ-10 на Т-клеточное звено иммунитета. Полученные нами данные свидетельствуют о более легком течении СКВ у больных с аллелем А гена ИЛ-10.
ИЛ-28 является представителем интерферонов-Х. Сведения об их ассоциации с СКВ очень малочисленны. В ходе проведенного нами исследования продемонстрирована статистически значимая роль полиморфизма данного цитокина в динамике снижения функции почек.
В группах пациентов, которые являлись носителями му-тантных аллелей (Т или О) гена ИЛ-28, 10-летняя ПВ оказалась ниже, чем у больных с диким генотипом (СС или ТТ соответственно). Последние работы [8—10] показали, что важное место в патогенезе СКВ занимает регуля-торный каскад, в котором участвует ИЛ-28. Органная патология реализуется через механизм гиперактивации Т-лимфоцитов СБ4+, которые увеличивают уровень продукции провоспалительных агентов [11, 12]. Отношение секреции цитокинов ТЫДЪ2 повышено у пациентов с СКВ и ВН [7—9]. Наши результаты позволяют сделать вывод, что наличие мутантного аллеля гена ИЛ-28 (к8099917 Т/О) или (к12979860 С/Т) является неблагоприятным прогностическим признаком для снижения функции почек у пациентов ВН.
Заключение
Носительство мутантной аллеля А гена ИЛ-10 может свидетельствовать о более благоприятном течении поражения почек при СКВ и быстром ответе на терапию. Носи-тельство мутантных аллелей гена ИЛ-28 является неблагоприятным прогностическим признаком и может служить прогностическим фактором тяжелого течения ВН.
Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда (проект №14-50-00029).
ЛИТЕРАТУРА
1. Краснова Т.Н. Поражение почек при системной красной волчанке: современные представления о патогенезе, клинике, подходы к лечению. Современная ревматология. 2008;3: 18-21.
2. Houssiau FA, Lefebvre C, Vanden BM, Lambert M, Devogelaer J-P, Renauld J-C. Serum interleukin 10 titers in systemic lupus erythematosus reflect disease activity. Lupus. 1995;5:393-395.
3. Lacki JK, Samborski W, Mackiewicz SH. Interleukin-10 and in-terleukin-6 in lupus erythematosus and rheumatoid arthritis, correlations with acute phase proteins. Clin Rheumatol. 1997;3:275-278.
4. Lin SC, Kuo CC, Tsao JT, Lin LJ. Profiling the expression of interleukin (IL)-28 and IL-28 receptor a in systemic lupus erythematosus patients. Eur J Clin Invest. 2012;1:61-69.
5. Иваницкий Л.В., Краснова Т.Н., Самоходская Л.М., Совер-шаева Е.П., Борисов Е.Н., Никифорова Н.В., Мухин Н.А. Влияние полиморфизма генов воспалительных цитокинов на активность и особенности клинической картины системной красной волчанки. Клиническая фармакология и терапия. 2013;5:24-29.
6. Reuss E, Fimmers R, Kruger A, Becker C, Rittner C, Hohler T. Differential regulation of interleukin-10 production by genetic and environmental factors — a twin study. Genes Immun. 2002;3:407-413.
7. Zhou M, Ding L, Peng H, Wang B, Huang F, Xu WD, Li JH, Ye XR, Pan HF, Ye DQ. Association of the interleukin-10 gene polymorphism (-1082A/G) with systemic lupus erythematosus: a meta-analysis. Lupus. 2012;2:128-135.
8. Munroe ME, Vista ES, Guthridge JM, Thompson LF, Merrill JT, James JA. Pro-inflammatory adaptive cytokines and shed tumor necrosis factor receptors are elevated preceding systemic lupus erythematosus disease flare. Arthritis Rheumatol. 2014;7: 1888-1899.
9. Lin SC, Kuo CC, Tsao JT, Lin LJ. Profiling the expression of interleukin (IL)-28 and IL-28 receptor a in systemic lupus erythematosus patients. Eur J Clin Invest. 2012;1:61-69.
10. Reininger L, Santiago ML, Takahashi S, Fossati L, Izui S T helper cell subsets in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus. Ann Med Interne (Paris). 1996;7:467-471.
11. Siebler J, Wirtz S, Weigmann B, Atreya I, Schmitt E, Kreft A, Galle PR, Neurath MF. IL-28A is a key regulator of T-cell-medi-ated liver injury via the T-box transcription factor T-bet. Gastroenterology. 2007;1:358-371.
12. Nakashima H, Akahoshi M, Masutani K. Th1/Th2 balance of SLE patients with lupus nephritis. Rinsho Byori. 2006;7:706-713.
Поступила 10.02.2015
