CC BY
73
МИКРОНУТРИЕНТЫ В ПИТАНИИ
Для корреспонденции
Агеева Наталья Михайловна - доктор технических наук,
профессор, главный научный сотрудник Научного центра
«Виноделие» ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный
НИИ садоводства и виноградарства»
Адрес: 350901, г. Краснодар, ул. им. 40-летия Победы, д. 39
Телефон: (861) 252-58-77
E-mail: [email protected]
А.Я. Шурыгин 1, Л.В. Шурыгина1, Н.М. Агеева2, Ю.В. Гапоненко2, В.А. Маркосов2
Влияние концентрата полифенолов красного вина на глутаматную нейротоксичность
Influence of the concentrate of red wine polyphenols on glutamate neurotoxicity
A.Ya. Shurygin 1, L.V. Shurygina1,
N.M. Ageeva2, Yu.V. Gaponenko2, V.A. Markosov2
1 ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет», Краснодар
2 ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный НИИ садоводства и виноградарства», Краснодар
1 Kuban State University, Krasnodar
2 North-Caucasian Zone Scientific Research Institute of Horticulture and the Viticulture, Krasnodar
Цель работы - оценить влияние концентрата красного столового вина Саперави на культивируемые нервные клетки, подвергнутые воздействию глутамата. Выбор Саперави в качестве источника фенольных соединений не случаен: этот сорт винограда в Краснодарском крае обладает их наибольшим содержанием - до 4-5 г/дм3 и более. Концентрат полифенолов был получен путем предварительной отгонки этилового спирта с применением вакуума, выпаривания красного столового вина с помощью ротационного испарителя с последующей лиофильной сушкой. Методами вольтамперометрии и хемилюминесценции определена антиоксидантная активность, а также количество антиоксидантов в концентрате. Установлено методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, что в составе концентрата полифенолов присутствует большая группа фенольных соединений, обладающих высокой анти-оксидантной активностью. Это проантоцианидины (суммарная концентрация до 425 мг/дм3), кверцетин (21,8-32,6 мг/дм3), галловая кислота (124,2-164,7 мг/дм3), ресвератрол (6,26-13,22 мг/дм3), катехины (1026-1480 мг/дм3). Влияние концентрата красного вина Саперави на глутаматную цитотоксичность изучали в культуре нейронов мозжечка 7-9-дневных крысят. Показано, что наличие антиоксидан-тов способствует снижению интенсивности хемилюминесценции в модельных системах, генерирующих свободные радикалы. Установлено, что гашение хемилюминесценции в системе «цитрат-фосфат-люми-нол» составило 68,43%, а в системе липопротеинов желтка - 86,36%. Применение концентрата Саперави значительно повышало выживаемость нейронов: при дозах 5, 10 и 30 мкг/мл количество неповрежденных нейронов составляло соответственно 38,6; 41,5 и 37,1%. Доза 20 мкг/мл была наиболее эффективной - доля живых нейронов в данном случае составила 47,4%. Полученные результаты могут быть объяснены высокой антиоксидантной активностью флавоноидов концентрата, в том числе высоким содержанием биологически активных веществ - кате-хинов, кверцетина, рутина, ресвератрола. Таким образом, потребле-
ние красного вина в количествах, исключающих вредные последствия, может оказывать положительное влияние на здоровье человека в целом на мозг в частности.
Ключевые слова: красное вино, флавоноиды, антиоксиданты, антиокси-дантная активность, свободные радикалы, глутамат-ная нейротоксичность, окисление, хемилюминесценция
The purpose of the work was to assess the influence of the concentrate of red table wine Saperavi on the cultivated nerve cells exposed to glutamate. The selection of Saperavi as the source of phenolic compounds was not accidental this type of grapes in the Krasnodar region has the highest content of them - up to 4-5 g/dm3 and more. Polyphenol concentrate was prepared by pre-distillation of ethanol using vacuum, evaporation of red table wine with a rotary vaporizer, with the subsequent lyophilic drying. By the methods of voltammetry and chemiluminescence an antioxidant activity, and a quantity of antioxidants in the concentrate have been determined. By HPLC it was established that a large group of phenolic compounds with high antioxidant activity was present in the concentrate of polyphenols: procyanidins (total concentration up to 425 mg/dm3), quercetin (21.8-32.6 mg/dm3), gallic acid (124.2-164.7 mg/dm3), resveratrol (6.26-13.22 mg/dm3), catechins (10261480 mg/dm3). Effect of red wine Saperavi concentrate on glutamate cytotoxicity was studied in the neuron culture of the cerebellum of 7-9-day-old rats. It was shown that the presence of antioxidants reduced the intensity of chemiluminescence in model systems that generate free radicals. It was established that quenching of chemiluminescence in the system «citrate-phosphate-luminol» composed 68.43%, and in the system of the yolk lipoproteins - 86.36%. The application of concentrate Saperavi significantly increased the survivability of neurons: at the doses 5, 10 and 30 mcg/ml the number of intact neurons was respectively 38.6; 41.5 and 37.1%. The dose 20 mcg/ml was the most effective - the proportion of live neurons comprised 47.4%. The obtained results can be explained by the high antioxidant activity of concentrate flavonoids, including high content of biologically active compounds - catechins, quercetin, rutin, resveratrol. Thus, the consumption of red wine in quantities that exclude harmful effects, can have a positive impact on human health and the brain in particular.
Keywords: red fault, flavonoids, antioxidants, antioxidant activity, free radicals, glutamate neurotoxicity, oxidation, the chemiluminescence
Известно, что употребление красного вина в строго нормируемых количествах оказывает положительное влияние на здоровье человека [1, 2]. Виноградные вина рекомендуются при упадке сил, малокровии, ослабленным и истощенным больным в стадии выздоровления после тяжелых болезней, ранений или операций, а также для снятия стрессовых ситуаций. Многогранное действие вина на человеческий организм определяется его сложным химическим составом, в том числе наличием комплекса биологически активных веществ -флавоноидов (ресвератрол, фенолкарбоновые кислоты, проантоцианидины), природных антиок-сидантов, микроэлементов, витаминов.
По-видимому, многие полезные свойства красного вина обусловлены содержащимися в нем полифенолами с антиоксидантным действием, например флавоноидами [3, 4]. Поскольку развитие
многих патологических процессов в организме связано с гиперпродукцией свободных радикалов, именно способность нейтрализовать эти активные кислородные метаболиты играет крайне важную роль в процессе лечения. Для фенольных соединений установлена способность нейтрализовать радикалы кислорода [5, 6].
Концентрация и качественный состав флавоноидов, а также специфика их действия обусловливаются технологией производства вина. Как показали исследования, высокая концентрация сахаров в вине, по-видимому, может свести на нет многие его положительные свойства. Так, красный портвейн (с массовой концентрацией сахаров 70 г/дм3), содержащий флавоноиды в количестве, сходном с красным столовым вином, в отличие от последнего не способен защитить нейроны гиппокам-па от повреждения, вызванного этанолом. Как
, Л.В. Шурыгина, Н.М. Агеева и др.
А.Я. Шурыгин
считают исследователи, эти отличия могут быть связаны не только с видом содержащихся в портвейне флавоноидов, но и с большим содержанием в нем сахаров, которые обладают мощным про-окислительным эффектом [7]. В исследованиях, проведенных на крысах, показано, что применение флавоноидов, входящих в состав красного столового вина, предотвращает накопление липофусцина в нейронах животных, получавших алкоголь [8], что свидетельствует об антиоксидантном действии флавоноидов красного вина.
Известно, что гибель нейронов при таких патологических состояниях, как ишемия или гипоксия, связана с накоплением в синаптическом пространстве избытка глутамата. В условиях продолжительной активации глутаматом ЫМРА-рецепторов и энергетического дефицита внутриклеточное депо неспособно аккумулировать поступающий в клетку кальций, что приводит к резкому повышению его концентрации в цитоплазме [9]. В этих условиях возрастает активность кальций-зависимых ферментов (протеазы, фосфолипазы), которые начинают разрушать клетку. Ситуация усугубляется и возрастающим количеством свободных радикалов, которые могут непосредственно повреждать липидный слой мембраны и повышать доступность содержащихся в ней ненасыщенных жирных кислот для липолитических ферментов. Все эти процессы приводят к отсроченной гибели нейронов. Необходимо отметить, что, например, при инсульте именно нейроны, находящиеся в зоне так называемой полутени и гибнущие в течение первых часов после инсульта, можно спасти, значительно снизив последствия данной патологии. Возрастание свободнорадикального окисления наблюдается при различных видах стресса, что также повреждает нейроны и может приводить к гибели.
В этой связи представляет интерес исследование влияния веществ, содержащихся в красном вине, на гибель нервных клеток. Ранее нами было установлено защитное действие различных препаратов, обладающих антиоксидантными свойствами, при глутаматной нейротоксичности [9, 10].
Цель работы - оценить влияние концентрата красного столового вина Саперави на культивируемые нервные клетки, подвергнутые воздействию глутамата. Выбор Саперави в качестве источника фенольных соединений не случаен: этот сорт винограда в Краснодарском крае обладает наибольшим технологическим запасом фенольных соединений - до 4-5 г/дм3 и более [11].
Материал и методы
Концентрат красного столового вина Саперави был получен путем предварительной отгонки
этилового спирта с применением вакуума, препятствующего разрушению фенольных соединений. Кроме того, была обеспечена герметичность, в связи с чем кислород не поступал к компонентам вина, сохраняя их в неокисленном виде. Упаривание до половины первоначального объема проводили также под вакуумом на ротационном испарителе с последующей лиофильной сушкой. В дальнейших экспериментах использовали водные растворы полученного концентрата.
Качественный и количественный состав полифенолов в концентрате определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием хроматографической системы «Agilent 1100» («Agilent Technologies», США) с диод-но-матричным детектором.
Антиоксидантную активность концентрата определяли вольтамперометрически с применением прибора «Цвет-Яуза» (НПО «Химавтоматика», РФ) [12]. Антиоксидантные свойства концентрата изучали с использованием модельных систем, генерирующих свободные радикалы: система «цитрат-фосфат-люминол» (ЦФЛ) и система ли-попротеидов желтка яиц (ЖЛП). Система ЦФЛ состояла из цитрата натрия (4 мМ), фосфатного буфера (105 мМ КС1, 20 мМ КН2Р04, рН 7,45), люминола (10 мМ). В данной модели окисление ионов железа в присутствии ортофосфата и цитрата сопровождается образованием радикалов, при этом возникает хемилюминесценция (ХЛ), избирательно усиливающаяся люминолом, которая подавляется в присутствии антиоксидантов [13]. Система ЖЛП представляла собой желток куриного яйца, разведенный фосфатным буфером. Суспензия ЖЛП как модельная система отличается от других липид-содержащих систем доступностью получения, высокой стабильностью и относительно хорошей окисляемостью [14]. Образование радикалов инициировали введением при постоянном перемешивании 1 мл 35 мМ раствора сернокислого железа (FeS04x7H20) в 19 мл среды. Концентрация экстракта Саперави NR (номерной резерв) в пробе составляла 0,01% (0,1 мг/мл).
ХЛ регистрировали с помощью экспресс-анализатора ХЛ-003 (ФГБОУ ВПО «Уфимский авиационный технический университет», РФ) в течение 5 мин для ЦФЛ и 10 мин для ЖЛП. Определяли светосумму ХЛ. Результаты экспериментов оценивали по интенсивности ХЛ (в усл. ед.) и рассчитывали снижение ХЛ в процентах от контроля (ХЛ модельной системы без препарата), принятого за 100%.
Влияние концентрата красного вина Саперави на глутаматную цитотоксичность изучали в культуре нейронов мозжечка. Культуры получали из мозга 7-9-дневных крысят методом ферментно-механической диссоциации [15]. После 8 дней
100
m 80
о
:е
# 60 X
ж
| 40
£
^ 20 0
Глутамат Глутамат; Глутамат; Глутамат; Глутамат;
Саперави Саперави Саперави Саперави
5 мкг/мл 10 мкг/мл 20 мкг/мл 30 мкг/мл
Влияние концентрата красного вина Саперави урожая 2010 г.
на глутаматную нейротоксичность в культуре нейронов мозжечка крыс
* - статистическая значимость отличий (р<0,001) от показателя после применения глутамата.
культивирования культуры клеток подвергали действию глутамата и/или экстракта Сапера-
ви NR. Воздействие глутаматом осуществляли в сбалансированном солевом растворе (ССР) следующего состава (мМ): Na2HPO4 - 0,35; CaCl2 -2,3; NaCl - 136,7; KCl - 5,6; NaHCO3 - 12; глюкоза -
11 (рН 7,5). Длительность воздействия составляла 20 мин, контрольные культуры помещали на 10 мин в ССР без глутамата. Концентрат вносили в культуры нейронов после возвращения их в исходную питательную среду из ССР в концентрациях от 5 до 60 мкг/мл. Затем культуры помещали в СО2-инкубатор на 4 ч и фиксировали. Морфологический анализ культур проводили в фазовом контрасте на инвертированном микроскопе «Invertoscopes ID 03» («Zeiss», Германия) для оценки количества живых и погибших нейронов. Количество живых нейронов выражали в процентах от общего количества нейронов.
Статистическую обработку данных проводили с использованием f-критерия Стьюдента.
Результаты и обсуждение
Роль свободных радикалов в патогенезе стрессовых расстройств, ишемических, травматических и дегенеративных поражений нервной системы установлена давно. Головной мозг особенно чувствителен к активации свободнорадикального окисления, поскольку обладает более высоким уровнем потребления кислорода и содержит большее количество липидов в сравнении с другими органами [16]. Введение в организм лекарственных препаратов может привести к серьезным изменениям свободнорадикального окисления и антиоксидантного статуса в центральной нервной системе, что делает необходимым детальное изучение антиоксидантных свойств применяющихся препаратов.
В таблице представлен химический состав флаво-ноидов концентрата красного столового вина, свидетельствующий о наличии биологически активных соединений, проявляющих антиоксидантное действие.
Как показали исследования, концентрат полифенолов обладает антиоксидантной активностью, что проявляется в снижении интенсивности ХЛ в модельных системах, генерирующих свободные радикалы.
Гашение ХЛ в системе ЦФЛ составило 68,43%, в системе ЖЛП - 86,36%. Эти данные свидетельствуют о том, что содержащиеся в концентрате полифенолы обладают высокой антиоксидантной активностью и способны перехватывать активные формы кислорода (система ЦФЛ), а также ингиби-ровать образование липопероксильных радикалов, о чем свидетельствует снижение интенсивности ХЛ в модельной системе ЖЛП.
Исследование влияния концентрата на нейротоксичность глутамата показали следующее. Воздействие глутамата на нейроны мозжечка привело к сокращению доли живых клеток в среднем до 22%. Применение экстракта Саперави значительно повышало выживаемость нейронов. Так, при дозах 5, 10, и 30 мкг/мл количество неповрежденных нейронов составляло
Состав природных антиоксидантов в концентрате Саперави
А
Показатель Содержание
Массовая концентрация суммы фенольных соединений, мг/дм3 8300-10600
В том числе:
катехины 1026-1480
(-)эпикатехин 274-412
кверцетин 21,8-32,6
галловая кислота 124,2-164,7
рутин 16,8-22,4
транс-ресвератрол 6,26-13,22
процианидин В1 116,7-210,8
процианидин В2 136,4-216,7
Суммарная антиоксидантная активность в пересчете на Тролокс 4680-5310
, Л.В. Шурыгина, Н.М. Агеева и др.
А.Я. Шурыгин
соответственно 38,6; 41,5 и 37,1% (см. рисунок). Доза 20 мкг/мл была наиболее эффективной -доля живых нейронов составила 47,4%. Применение более высокой дозы (60 мкг/мл) не повышало выживаемость нейронов после применения глутамата. В отсутствие глутамата концентрат Саперави не влиял на количество живых клеток в культурах нейронов мозжечка крыс. Доля живых нейронов в контрольных культурах и культурах с экстрактом Саперави превышала 95% (данные не показаны).
Полученные результаты могут быть объяснены высокой антиоксидантной активностью фла-воноидов, содержащихся концентрате, а также значительным (в сравнении с исходным винома-териалом, свежими ягодами и фруктами) содержанием биологически активных веществ - ка-техинов, кверцетина, рутина, ресвератрола и др. В литературе имеются данные о протекторном действии различных антиоксидантов при воздействии глутамата на нервные клетки. Поэтому вполне логично предположить, что наблюдаемое нами защитное действие концентрата красного столового вина обусловлено антиоксидантными свойствами его компонентов.
Проведенные нами исследования свидетельствуют, что потребление красного вина (в количествах, исключающих вредные последствия) может оказывать положительное влияние на здоровье человека и на мозг в частности. Кроме того, необходимо учитывать тот факт, что по-
Сведения об авторах
ложительное действие на организм оказывают только столовые вина. Проведение исследований влияния соединений, присутствующих в вине и винограде, представляет большой интерес с точки зрения их возможного применения в комплексной терапии при патологиях мозга, поскольку полученные на данный момент времени результаты свидетельствуют о немалой перспективности этого направления. Учитывая общеизвестное положительное действие вина на сердечно-сосудистую систему (так называемый французский парадокс) и тесную взаимосвязь ряда патологических процессов мозга с нарушениями функционального состояния сосудов, можно рассматривать концентраты флавоноидов красных столовых вин как эффективные средства комплексного терапевтического воздействия на мозг.
Таким образом, установлено защитное действие концентрата красного столового вина Саперави на нейроны мозжечка при токсическом воздействии глутамата. Наше исследование наряду с результатами, полученными другими авторами [16-18], свидетельствует о наличии у экстракта красного вина, кроме положительного действия на сосуды, нейропротекторных свойств.
Статья выполнена при финансовой поддержке Минобрнауки России. Уникальный идентификатор ПНИ RFMEFI60414X0077 при подписании Соглашения № 14.604.21.0077.
Шурыгин Алексей Яковлевич - доктор биологических наук, профессор, директор ООО «Бализ», ФГБОУ
ВПО «Кубанский государственный университет» (Краснодар)
Шурыгина Людмила Васильевна - кандидат биологических наук, доцент, заместитель директора ООО «Бализ», ФГБОУ ВПО «Кубанский государственный университет» (Краснодар) E-mail: [email protected]
Агеева Наталья Михайловна - доктор технических наук, профессор, главный научный сотрудник Научного центра «Виноделие» ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный НИИ садоводства и виноградарства» (Краснодар)
E-mail: [email protected]
Гапоненко Юрий Васильевич - кандидат технических наук, старший научный сотрудник Научного центра «Виноделие» ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный НИИ садоводства и виноградарства» (Краснодар) E-mail: uygapon@mail,ru
Маркосов Владимир Арамович - доктор технических наук, ведущий научный сотрудник Научного центра «Виноделие» ФГБНУ «Северо-Кавказский зональный НИИ садоводства и виноградарства» (Краснодар)
E-mail: [email protected]
Литература
1. Холмгрин Е., Литвак В. Компоненты вина и здоровье // Виноделие 2. Vinson J.A., Momdaranao M.A., Shuta D.L., Baqohi M., Baqohi D. Ben-и виноградарство. 2002. № 2. С. 8-10. eficial effects of a novel 1H 636 grape seed proanthocyanidin extract
and a niacin-bound ehromium in a hamster aterosclerosis model // 10. Mol. Cell. Biochem. 2002. Vol. 240. Р. 99-103.
3. Огай Ю.А., Валуйко Г.Г., Загоруйко В.А., Костогрыз А.М. Пищевой концентрат полифенолов винограда «Эноант», достижения и перспективы производства и применения в питании // Биологически активные природные соединения винограда: перспективы 11. производства и применения в медицине и питании : материалы международной научно-практической конференции. Симферо- 12. поль : Сонат, 2001. С. 60-62.
4. Kaur Ch., Kapoor H.C. Antioxidant activity and total phenolic content
of some Asian vegetables // Int. J. Food. Sci. Technol. 2002. Vol. 37, 13. N 2. P. 153-161.
5. Carneiro A., Assuncao M., De Freitas V., Paula-Barbosa M.M. et al.
Red wine, but not port wine, protects rat hippocampal dentate gyrus 14. against ethanol-induced neuronal damage - relevance of the sugar content // Alcohol Alcohol. 2008. Vol. 43, N. 4. P. 408-415.
6. Rice-Evans C.A., Miller N.J. Antioxidant Activities of Flavonoids as Bioactive. 2008. 370 p.
7. De Freitas V., da Silva Porto P., Assuncao M., Cadete-Leite A. et al. 15. Flavonoids from grape seeds prevent increased alcohol-induced neuronal lipofuscin formation // Alcohol Alcohol. 2004. Vol. 39, N 4.
Р. 303-311. 16.
8. Большаков А.П. Глутаматная нейротоксичность: нарушение ионного гомеостаза, дисфункция митохондрий, изменение активности клеточных систем // Нейрохимия. 2008. Т. 25, № 3. 17. С. 157-169.
9. Шурыгин А.Я., Скороход Н.С., Злищева Э.И., Андросова Т.В. и др. Влияние полипептидной фракции СК, выделенной из кумыса, 18. на нейритный рост и глутаматную цитотоксичность в культуре нервной ткани // Наука Кубани. 2010. № 3. С. 32-35.
References
Шурыгин A^., Кравцов A.A., Батсурен Д., Тунсаг Ж. и др. Сравнительное изучение защитного действия экстракта корней Astragalus mongolicus Bunge и Astragalus membranceus (Fischer) Bunge на зернистые нейроны мозжечка крыс в условиях глута-матной токсичности // Наука Кубани. 2009. № 3. С. 46-49. Aгеева H.M., Mаркосов ВА, Гублия Р.В. Биологическая ценность виноградных вин // Виноделие и виноградарство. 2008. № 3. С. 24-25. Яшин A^., Яшин Я.И., Черноусова Н.И. Aнтиоксиданты в красном вине и их определение амперометрическим методом // Виноделие и виноградарство. 200Z. № 6. С. 22-23. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О. Оценка антиокислительных свойств плазмы крови с применением желточных липопротеидов // Лаб. дело. 1988. № 3. С. 59-62. Кравцов A.A., Шурыгин A^., Aбрамова Н.О., Скороход Н.С. и др. Влияние хронической свинцовой интоксикации на радикалооб-разование в мозге и глутаматную нейротоксичность в культуре нейронов мозжечка // Изв. высш. учеб. заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. 2009. № б. С. 9Z-99. Зозуля ЮА, Барабой ВА, Сутковой ДА Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга. M. : Знание-M. 2000. 344 с.
Soleas G.J., Diamandis E.P., Goldberg D.M. Wine as a biological fluid: history, production, and role in disease prevention // J. Clin. Lab. Anal. 199Z. Vol. 11. P. 28Z-313.
Aгеева H.M., Mаркосов ВА., Бессонов В.В., Ханферьян P.A. Aнтиоксидантные и антирадикальные свойства красных виноградных вин // Вопр. питания. 201б. № 2. С. 63-6Z. Фархутдинов P.P., Лиховских ВА. Хемилюминесцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине. Уфа, 199б. 90 с.
1. Kholmgrin E., Litvak V. Components of wine and the health. Vinodelie 10. i vinogradarstvo [Wine-Making and Viticulture]. 2002; Vol. 2: 8-10.
(in Russian)
2. Vinson J.A., Momdaranao M.A., Shuta D.L., Baqohi M., et al. Beneficial effects of a novel 1H 636 grape seed proanthocyanidin extract and a niacin-bound ehromium in a hamster aterosclerosis model.
Mol Cell Biochem. 2002; Vol. 240: 99-103. 11.
3. Ogay Yu.A., Valuyko G.G., Zagoruyko V.A., Kostogryz A.M. Food concentrate of polyphenols of grapes «Of enoant», achievement
and the prospect for production and application in the nourishment. 12. Biologicheski aktivnye prirodnye soedinenija vinograda: perspektivy proizvodstva i primenenija v medicine i pitanii: materialy mezhdunar-odnoj nauchno-prakticheskoj konferencii. Simferopol: Sonat, 2001: 60-2. (in Russian) 13.
4. Kaur Ch., Kapoor H.C. Antioxidant activity and total phenolic content of some Asian vegetables. Int J Food Sci Technol. 2002; Vol. 37 (2): 153-61.
5. Carneiro A., Assuncao M., De Freitas V., Paula-Barbosa M.M., et al. 14. Red wine, but not port wine, protects rat hippocampal dentate gyrus against ethanol-induced neuronal damage - relevance of the sugar content. Alcohol Alcohol. 2008; Vol. 43 (4): 408-15.
6. Rice-Evans C.A., Miller N.J. Antioxidant Activities of Flavonoids as Bioactive. 2008: 370 p.
7. De Freitas V., da Silva Porto P., Assuncao M., Cadete-Leite A.,
et al. Flavonoids from grape seeds prevent increased alcohol- 15. induced neuronal lipofuscin formation. Alcohol Alcohol. 2004; Vol. 39 (4): 303-11.
8. Bol'shakov A.P. Glutamate neurotoxicity: the disturbance of ionic 16. homeostasis, the disfunction of mitochondria, a change in the activity cellular syst. Nejrohimija [Neurochemical]. 2008; Vol. 25 (3): 157-69. (in Russian) 17.
9. Shurygin A.Ya., Skorokhod N.S., Zlishcheva E.I., Androsova T.V., et al. Influence of the polypeptide fraction SK, isolated from the koumiss,
on the neurotoxicity increase and the glutamate cytotoxicity in the 18. culture of the nerve tissue. Nauka Kubani [Science of Kuban]. 2010; N 3: 32-5. (in Russian)
Shurygin A.Ya., Kravtsov A.A., Batsuren D., Tunsag Zh., et al. Comparative study of the protective action of the extract of roots Astragalus mongolicus Bunge and Astragalus membranceus (Fischer) Bunge on the grainy neurons of the cerebellum of rats under the conditions of the glutamate toxicity. Nauka Kubani [Science of Kuban]. 2009; Vol. 3: 46-9. (in Russian)
Ageeva N.M., Markosov V.A., Gubliya R.V. Biological value of the wines. Vinodelie i vinogradarstvo [Wine-Making and Viticulture]. 2008; Vol. 3: 24-5. (in Russian)
Yashin A.Ya., Yashin Ya.I., Chernousova N.I. Antioxidants in the red wine and their determination by the amperometric method. Vinodelie i vinogradarstvo [Wine-Making and Viticulture]. 2007; Vol. 6: 22-3. (in Russian)
Klebanov G.I., Babenkova I.V., Teselkin Yu.O. Estimation of the anti-oxidant properties of the plasma of the blood with the application of the yolk lipoproteins. Laboratornoe delo [Laboratory Case]. 1988; Vol. 3: 59-62. (in Russian)
Kravtsov A.A., Shurygin A.Ya., Abramova N.O., Skorokhod N.S., et al. Influence of chronic lead intoxication on radical formation in the brain and glutamate neurotoxicity in the culture of the neurons of the cerebellum. Izvestija vysshih uchebnyh zavedenij. Severo-Kavkazskij region. Estestvennye nauki [Scientific-Educational and Applied Journal, University News North-Caucasian Region. Natural Sciences]. 2009; Vol. 5: 97-9. (in Russian) Zozulya Yu.A., Baraboy V.A., Sutkovoy D.A. Free-radical oxidation and antioxidant protection with the pathology of the brain. Moscow: Znanie-M.; 2000: 344 p. (in Russian)
Soleas G.J., Diamandis E.P., Goldberg D.M. Wine as a biological fluid: history, production, and role in disease prevention. J Clin Lab Anal. 1997; Vol. 11: 287-313.
Ageeva N.M., Markosov V.A., Bessonov V.V., Khanferyan R.A. Anti-oxidant and antiradical properties of the red wines. Voprosy pitaniia [Problems of Nutrition]. 2015; Vol. 2: 63-7. (in Russian) Farkhutdinov R.R., Lihovskikh V.A. Chemiluminescent methods of the study of free-radical oxidation in biology and medicine. Ufa, 1995: 90 p. (in Russian)
