CC BY
48
of nephrotoxicity and mercury vapour exposure //Toxicology Letters. — 1996. — V. 88. — P.-60.
14. Zalups R. K., Aslamkhan A.G., Ahmad S. Human organic
anion transporter 1 mediates cellular uptake of cysteine-s coniugates of inorganic mercury // Toxicology Letters. — 2004. — V. 66. — P. 251-261.
Информация об авторах: 670013, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, e-mail: [email protected], тел. (3012) 433463.
Мондодоев Александр Гаврилович — д.м.н., ведущий научный сотрудник, Николаев Сергей Матвеевич — д.м.н., профессор, заведующий отделом,
Лемза Сергей Васильевич — к.б.н., старший научный сотрудник,
Хитрихеев Владимир Евгеньевич — д.м.н., профессор, декан.
Николаев Михаил Петрович — аспирант.
© ХОБРАКОВА В.Б., НИКОЛАЕВ С.М. — 2011 УДК 615.322
ВЛИЯНИЕ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА НА ПРОЛИФЕРАТИВНУЮ АКТИВНОСТЬ Т- И В-ЛИМФОЦИТОВ
Валентина Бимбаевна Хобракова *, Сергей Матвеевич Николаев1,2 ('Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ, директор — д.б.н., проф. Л. Л. Убугунов; 2Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, г. Иркутск,
ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах)
Резюме. Установлена иммуномодулирующая активность комплексного растительного средства — сухого экстракта «Иммунополифит» в реакции пролиферации Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей в экспериментах in vitro. Показано, что испытуемое средство в концентрации 0,4 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность В-лимфоцитов и не оказывает влияния на пролиферацию Т-лимфоцитов. Использование исследуемого средства в максимальной концентрации 40 мкг/мл приводит к снижению пролиферации Т-лимфоцитов.
Ключевые слова: сухой экстракт «Иммунополифит», иммуномодулятор, пролиферация, Т-лимфоцит, В-лимфоцит, митоген.
THE INFLUENCE OF THE COMPLEX PLANT REMEDY ON THE T- AND B-LYMPHOCYTE PROLIFERATIVE ACTIVITY
V.B. Khobrakova1, S.M. Nikolaev1,2,
(1Institute of General and Experimental Biology of SD RAS, Ulan-Ude;
2 Irkutsk State Institute of Postgraduate Medical Education, Irkutsk)
Summary. The immunomodulating activity of the complex plant remedy —the dry extract “Immunopolyphyt” in the reaction of proliferation of T- and В-lymphocytes obtained from mouse spleen has been established in experiments in
vitro. It has been shown that the dry extract “Immunopolyphyt” in the concentration of 0,4 mkg/ml stimulates proliferative
activity of В-lymphocytes and has no effect on the proliferation of T-lymphocytes. The use of the given remedy in maximal concentration of 40 mkg/ml reduces proliferation of T-lymphocytes.
Key words: the dry extract “Immunopolyphyt”, immunomodulator, proliferation, Т- lymphocyte, В-lymphocyte, mitogen.
Среди современных методов повышения иммунологического статуса организма важное значение имеет фармакологическая коррекция на основе применения иммуномодуляторов — веществ, способных направленно действовать на иммунную систему. Изыскание путей стимуляции и депрессии иммунной системы в целом и отдельных ее клеточных звеньев рассматривается в качестве основной задачи иммунокоррекции [8]. Иммунокорригирующими могут быть как вещества белковой природы, так и средства синтетического и природного происхождения. Преимущество лекарственных растений заключается в том, что они действуют на организм всем комплексом содержащихся в них веществ [1,2,6].
В связи с этим, проблема поиска и создания новых, эффективных, иммунокорригирующих лекарственных средств по современной технологии, позволяющей извлечь максимальное количество биологически активных веществ из растений, является актуальной. Максимальный выход биологически активных веществ из растений обеспечивается при получении из них сухих экстрактов, к преимуществу которых можно отнести стойкость при хранении, удобство при приеме больными. Сухой экстракт представляет собой легкорастворимый в воде или водно-спиртовых смесях комплекс биологически активных веществ и удобен при стандартизации. Объектом настоящего исследования
явилcя cуxoй экстракт «Иммунoпoлифит», в шстав га-TOpora вxoдят гарни coлoдки гoлoй и вздутoплoдникa cибиpcкoгo, ceмeнa льна oбыкнoвeннoгo, плoды лимoн-ника кита^^го и шиговника ra^CToro, трава герца птичьего и пустырника cepдeчнoгo, гоцветия нoгoткoв лекарственный.
Целью нacтoящeгo иccлeдoвaния явилocь oпpeдe-ление влияния cуxoгo экстракта «Иммунoпoлифит» на пpoлифepaтивную aктивнocть Т- и B-лимфoцитoв ceлe-зенки мышей in vitro.
Материалы и методы
Bлияниe иccлeдуeмoгo cpeдcтвa на пpoлифepaтивную активгость Т- и B-лимфoцитoв ceлeзeнки мышей линии OBA oцeнивaли in vitro в реакции блacтнoй тpaнcфopмa-ции в пpиcутcтвии митогегов: юэнканавалина A (KoнA) и липoпoлиcaxapидa (ЛПС) го включению 3Н-тимидина c иcпoльзoвaниeм cцинтилляциoннoгo cчeтчикa [5]. Клетки ceлeзeнки мышей в ганцентрации 1x106 клеток/ мл вгошли го 100 мкл в лунки плocкoдoнныx культуральный микpoплaншeт. Митогены KoнA и ЛПС вгоот-ли в лунки в юэнцентрации 10 мкг/мл. Дoпoлнитeльнo внocили иccлeдуeмoe cpeдcтвo в кoнцeнтpaцияx 0,4; 4,0 и 40,0 мкг/мл. Клетки инкубиpoвaли в cpeдe RPMI-1640 в течение 4В ч. при 370С в aтмocфepe вoздуxa c 5% СО2. Синтез ДНК в культуре клеток oцeнивaли го включе-
Таблица l
Bлияние сухого экстракта «Иммунополифит»
на пролиферацию Т-лимф оцитов селезенки мышей in vitro
№ п/п Группы Доза, мкг/мл Кол-во имп. в мин.
1 Контрольная(Кон А) 15 17003±123,2
0,4 18592±542,5
2 («Иммунополифит» 4,0 14801±960,3
+Кон А) 40,0 9597±103,8*
Примечание: здесь и далее * — различия статистически значимы между контрольной и опытной группами при р<0,05.
нию 3Н-тимидина, вносимого на последующие 18 ч. инкубации из расчета 37 Кбк на лунку. Клетки переносили на бумажные фильтры и отмывали. Счет радиоактивности проводили в бета-счетчике. Уровень синтеза ДНК оценивали в импульсах в минуту.
Полученные результаты обработаны статистическим методом с помощью критерия Стьюдента. Различия считали статистически значимыми при р<0,05 [3].
Результаты и обсуждение
Ранее нами сообщалось об иммуномодулирующем действии сухого экстракта «Иммунополифит» при экспериментальной азатиоприновой иммуносупрессии [9]. В данной работе показано, что исследуемый экстракт способен ослаблять супрессивное действие цитостатика азатиоприна на клеточноопосредованную иммунную реакцию (гиперчувствительность замедленного типа), антителогенез и фагоцитоз перитонеальных макрофагов, что выражается в восстановлении иммунологических показателей до уровня таковых у интактных животных.
В настоящей работе представляло интерес исследовать влияние сухого экстракта «Иммунополифит» на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro в реакции бластной трансформации в присутствии митогенов Кон А и ЛПС по включению 3Н-тимидина.
При оценке влияния «Иммунополифит» на пролиферативную активность Т- и В-лимфоцитов селезенки мышей in vitro использовали его в концентрациях 0,4; 4,0 и 40,0 мкг/мл. Результаты исследований представлены в таблицах 1 и 2.
Как видно из табл.1, испытуемое средство в концентрациях 0,4 и 4 мкг/мл не оказывает влияния на проли-
ферацию Т-лимфоцитов. Внесение фитоэкстракта в модельную систему в максимальной концентрации 40 мкг/ мл приводило к снижению пролиферативной активности Т-лимфоцитов на 44% по сравнению с данными в контрольной группе.
При оценке влияния экстракта «Иммунополифит» на пролиферацию В-лимфоцитов установлено, что исследуемое средство в концентрациях 4,0 и 40 мкг/мл не оказывает влияния на пролиферацию В-лимфоцитов, а в концентрации 0,4 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность В-лимфоцитов в 1,3 раза по сравнению с данными в контрольной группе.
Таблица 2
Влияние сухого экстракта «Иммунополифит»
на пролиферацию B-лимс оцитов селезенки мышей in vitro
№ п/п Группы Доза, мкг/мл Кол-во имп. в мин.
1 Контрольная (ЛПС) 15 1549±105,6
0,4 1955±112,7*
2 («Иммунополифит» 4,0 1500±121,9
+ЛПС) 40,0 1715±123,8
Таким образом, сухой экстракт «Иммунополифит» в концентрации 0,4 мкг/мл стимулирует пролиферативную активность В-лимфоцитов и не оказывает влияния на пролиферацию Т-лимфоцитов селезенки мышей. Использование исследуемого средства в максимальной концентрации 40 мкг/мл приводит к снижению пролиферации Т-лимфоцитов.
За эффект 8-компонентного сухого экстракта ответственны флавоноиды, содержащиеся в траве горца и пустырника, соцветиях календулы, корнях солодки; полисахариды, содержащиеся в плодах лимонника; три-терпеновые сапонины, содержащиеся в корнях солодки и траве пустырника; эфирные масла, содержащиеся в корнях вздутоплодника; каротиноиды, содержащиеся в соцветиях календулы, семенах льна обыкновенного; витамины, содержащиеся в плодах шиповника. Все перечисленные биологически активные вещества обладают иммуномодулирующими свойствами [1, 2, 4, 6, 7, 10, 11].
Таким образом, полученные данные позволяют заключить, что сухой экстракт «Иммунополифит» является эффективным иммуномодулирующим средством, что позволяет рекомендовать его для дальнейшего изучения с целью создания новых растительных иммуномодулирующих препаратов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Бакуридзе А.Д., Курцикидзе М.Ш., Писарев В.М. и др. Иммуномодуляторы растительного происхождения // Хим.-фармац. журн. — 1993. — № 8. — С. 43- 47.
2. Лазарева Д.Н., Плечев В.В., Моругова Т.В., Самигуллина Л.И. Растения, стимулирующие иммунитет. — Уфа, 2005. — 96 с.
3. Лакин Г.Ф. Биометрия. — М., 1990. — 352 с.
4. Мельникова Т.И., Николаев В.О. Сравнительная иммуно-фармакологическая оценка растительных экстрактов с поли-фенольными и полисахаридными комплексами // «Фармация в 21 в.: инновации и традиции»: Тез. докл. междунар. науч. конф. — СПб., 1999. — С. 179.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2000. — 398 с.
6. Токешова Л.Е. Лекарственные растения и их препараты, используемые в качестве иммуномодуляторов // Materials of the II International Conference “Natural Products: Chemistry,
Technology and Medicinal Perspectives”. — Алматы, 2007. — С. 161.
7. Толкачев О.Н., ШипулинаЛ.Д., Шейченко О.П. Новые растительные полифенолы — активные противовирусные агенты и иммуномодуляторы // Int. J. Immunorehabil. — 1999. — № 14. — С. 9.
8. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В. Современные иммуномодуляторы. Классификация, механизм действия // Российский аллергологический журнал. — 2005. — № 4. — С. 30-43.
9. Хобракова В.Б., Нагаслаева О.В. Иммуномодулирующие свойства сухого экстракта «Иммунополифит» // Сибирский медицинский журнал. — 2006. — № 5. — Т. 63. — С 72-74.
10. Berg P. A., Daniel P.T. Effects of flavonoid compounds on the immune response // Piod. Clin. Biol. Res. — 1988. — Vol. 280. — P. 157-171.
11. Kraus J., Franz G. Immunomodulating effects of polysaccharides from medicinal plants // Chem. Pharm. Bull. — 1992. — Vol. 40, № 2. — P. 314 — 317.
Информация об авторах: 670013, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6, ИОЭБ СО РАН, ОБАВ, e-mail: [email protected]:[email protected], тел. (3012) 434743.
Хобракова Валентина Бимбаевна — к.б.н., старший научный сотрудник, Николаев Сергей Матвеевич — д.м.н., профессор, заведующий отделом.
