CC BY
12
«АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ ГЕМАТОЛОГИИ И ТРАНСФУЗИОЛОГИИ»
Санкт-Петербург 23-24 июня 2016 г.
логичного возраста. Оценку полученных результатов и комплексный системный анализ данных проводили с использованием специализированных пакетов прикладных программ для медико-биологических исследований
Результаты. Анализ результатов, полученных при исследовании системы гемостаза всей группы, выявил нормальные показатели скри-нинговых тестов. На этом фоне отмечалось значимое повышение маркера гиперкоагуля-ционного состояния — активности фактора VIII (189,8 % ± 96,5 % против 119,0 % ± 30,5 %, р < 0,001). При этом активность протеина С во всей группе была достоверно снижена: 68 % ± 23 %, против 85 % ± 30,2 (р < 0,001), колебания составили от 74 % до 62 %. При дальнейшем исследовании группа была разделена
на 2 подгруппы, в зависимости от тяжести заболевания: тяжелая и нетяжелая АА (15 и 10 человек соответственно). Как выяснилось, показатели активности фактора VIII при различной тяжести АА не имели существенных различий (188,0 % ± 93,5 % и 192,2 % ± 95,5 % соответственно, р > 0,05). Достоверные различия в этих группах обнаружились при сравнении активности протеина С (при тяжелой форме она составила 68 % против 109 % с нетяжелой, р < 0,001).
Выводы. У больных АА выявлено повышение активности фактора VIII и снижение уровня протеина С, что может свидетельствовать о гиперкоагуляции в системе гемостаза. Являются ли данные изменения проявлением компенсаторной функции организма, предстоит выявить в дальнейшем.
Коротаев Е. В., Степанов А. А., Косарев А. Н., Пономарев С. А.
Автономное учреждение Ханты-Мансийского автономного округа — Югры
«Югорский научно-исследовательский институт клеточных технологий с банком стволовых клеток», г. Ханты-Мансийск
ВЛИЯНИЕ КОЛИЧЕСТВА И КАЧЕСТВА ТРАНСПЛАНТИРОВАННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА ВОССТАНОВЛЕНИЕ КРОВЕТВОРЕНИЯ НЕЙТРОФИЛОВ
Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) позволяет сократить сроки восстановления кроветворения и снизить риск развития инфекционных осложнений после высо-кодозной химиотерапии. Различными авторами рекомендуется трансплантировать от 2 до 8 млн. ГСК/кг массы тела. Однако часто не указывается количество колониеобразующих единиц трансплантированных ГСК (КОЕ-ГСК), а также — как влияет данный показатель на сроки восстановление кроветворения. Подобный анализ позволит обоснованно рекомендовать трансплантацию оптимального количества и качества ГСК и гарантировать восстановление кроветворения в наиболее короткие сроки.
Цель: Установить критерии количества и качества ГСК с точки зрения их способности восстанавливать кроветворение.
Материалы и методы. Проанализированы результаты 50 аутотрансплантаций ГСК пациентам с множественной миеломой. Количество ГСК в размороженном трансплантате оценивали на проточном цитометре FC500, а КОЕ-ГСК — путем культивирования 14 суток на среде Ме&осик Н4435. Для оценки восстановления нейтрофилов ( > 500/мкл) выполнялся общий
анализ крови. Достоверность зависимости сроков восстановления нейтрофилов от количества трансплантированных ГСК и КОЕ-ГСК оценивалась с помощью коэффициента корреляции Пирсона.
Результаты. Выявлена зависимость продолжительности периода восстановления нейтрофилов от количества ГСК (г = -0,45; р < 0,001) и от количества КОЕ-ГСК (г = -0,51; р < 0,005). Установлено, что восстановление нейтрофилов в пределах 13 суток уменьшает риск инфекционных осложнений. Для обеспечения восстановления нейтрофилов в данные сроки необходимо трансплантировать минимум 4 млн. ГСК/кг массы тела пациента и/или при колониеобразующей активности 0,2 млн. КОЕ-ГСК/кг. Все пациенты были выписаны из стационара в удовлетворительном состоянии на 18-29 день после трансплантации. При планировании трансплантации необходимо оценивать как количество заготовленных ГСК, так и КОЕ-ГСК. Если не удается заготовить 4 млн. ГСК/кг, то необходимо обратить внимание на уровень КОЕ-ГСК. Если данный показатель > 0,2 млн. КОЕ-ГСК/кг, то полученный трансплантат можно считать достаточным для восстановления кроветворения не позднее
ВЕСТНИК ГЕМАТОЛОГИИ, том XII, № 2, 2016
13 суток. Однако, если уровень < 0,2 млн. КОЕ-ГСК/кг, то необходимо повторить мобилизацию и лейкоцитаферез. В противном случае трансплантация не гарантирует восстановление кроветворения нейтрофилов в пределах 13 суток, что сопряжено с высоким риском осложнений. Данные критерии количества и качества трансплантата можно рекомендовать для его заготов-
ки только с учетом риска снижения указанных параметров на этапах криоконсервации.
Вывод: Трансплантация ГСК в количестве 4 млн. ГСК/кг и при колониеобразующей активности данных клеток 0,2 млн. КОЕ-ГСК/кг позволяет восстановить кроветворение нейтрофи-лов не позднее 13 суток, что уменьшает риски инфекционных осложнений.
Костюнина В. С., Войтехович А. С., Васина Е. В., Фурман О. Г., Северин И. Н., Петевка Н. В.
Республиканский научно-практический центр трансфузиологии и медицинских биотехнологий, г. Минск, Республика Беларусь
УСЛОВИЯ ЭРИТРОИДНОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
ПУПОВИННОЙ КРОВИ IN VITRO
В последнее десятилетие в мире активно разрабатываются подходы к эффективной эритро-идной дифференцировке in vitro. Показано, что гемопоэтические стволовые клетки (ГСК) периферической крови, костного мозга, фетальной печени и пуповинной крови можно дифференцировать in vitro до стадии утраты клеточного ядра (ретикулоциты, эритроциты). В 2011 году в работе M. Giarratana описано первое переливание пациенту полученных in vitro из гемопоэтических предшественников периферической крови, ауто-логичных эритроцитов и показана их циркуляция в кровотоке в течение 26 дней. Пуповинная кровь является наиболее перспективным источником получения зрелых эритроцитов не только благодаря пролиферативному потенциалу ГСК, но и из-за меньшего риска передачи инфекций при трансфузии, а также благодаря доступности и безопасности получения исходного биоматериала, который в нашей республике, в основном, подвергается утилизации.
Цель. Сравнить эффективность эритроидной дифференцировки ГСК пуповинной крови человека в условиях суспензионной культуры (по методу M. Giarratana) и дополнительного сокульти-вирования со стромальными клетками in vitro.
Материалы и методы. Образцы пуповинной крови, пуповины и плаценты были предоставлены ГУ РНПЦ «Мать и дитя» Минздрава Республики Беларусь после информирования рожениц и получения их письменного согласия. Образцы костного мозга здоровых доноров получали из центра трансплантации органов и тканей на базе УЗ «9-я ГКБ» г. Минска. Фракцию CD34-положительных (CD34+) кроветворных клеток получали с помощью набора EasySep для поло-
жительной иммуномагнитной сепарации согласно протоколу производителя. Первый этап диф-ференцировки проводили в течение 7 суток в суспензионной культуре в присутствии ростовых факторов SCF, 1Ь-3, Еро. На втором этапе диффе-ренцировки часть клеток переносили на подложку мезенхимных стромальных клеток костного мозга (МСК КМ) и параллельно культивировали еще в течение 4 суток в присутствии SCF и Еро. На 11 сутки неприкреплённую к строме (суспензионную) часть гемопоэтических клеток переносили в новый флакон и продолжали дифференцировать клетки параллельно в трёх вариантах культивирования в присутствии Еро в течение еще 6 суток. Оценка фенотипа гемопоэтических клеток пуповинной крови производилась методом проточной цитофлуориметрии на проточном цитофлуориметре FACScan. Проводили цитологический анализ дифференцируемых клеток.
Результаты. Чистота фракции CD34+-клеток пуповинной крови после сепарации в среднем составляла 73 ± 18 %. Культивирование CD34+ клеток в течение первых 7 суток в отсутствие стромального окружения коммитирует их в направлении эритроидной дифференцировки. Клетки практически полностью теряют поверхностные маркеры CD34 и CD45, 77 ± 5 % клеток несут маркеры эритроидных предшественников CD36 и CD235a. Прирост ядросодержащих клеток на первом этапе дифференцировки составлял до 200 раз. На 17-е сутки дифференцировки доля безъядерных клеток, которые могут быть представлены как ретикулоцитами, так и эритроцитами, в варианте без использования стро-мальной подложки была наибольшей и составляла 43 % от всех клеток. В других двух вариан-
