ВЛИЯНИЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРА ЦИТОКИНА IL-6 НА МЕТАБОЛИЗМ КЛЕТОК КУЛЬТУРЫ MDBK ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

67

Ветеринарный врач. 2025. № 1. С. 67 - 72

The Veterinarian. 2025; (1): 67 - 72

Научная статья

УДК 619:611.018:615.014.41:576. 809.33

DOI: 10.33632/1998-698X 2025 1 67

ВЛИЯНИЕ ИММУНОМОДУЛЯТОРА ЦИТОКИНА IL-6 НА МЕТАБОЛИЗМ КЛЕТОК КУЛЬТУРЫ MDBK ДЛЯ РЕПРОДУКЦИИ ВИРУСОВ

Плотникова Эдие Миначетдиновна доктор ветеринарных наук, [email protected]

Нестерова Ирина Александровна [email protected]

Матвеева Елена Лаврентьевна доктор биологических наук, [email protected]

Фазлиахметов Равиль Галиахметович[email protected]

Красовская Юлия Викторовна кандидат ветеринарных наук, [email protected]

1

Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности, Казань,

Российская Федерация

2 Казанский инновационный университет имени В.Г. Тимирясова, Казань, Российская Федерация Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана

Автор, ответственный за переписку: Эдие Миначетдиновна Плотникова.

Аннотация. Исследовали влияние рекомбинантного препарата цитокина интерлейкина-6 (IL-6) на функциональную активность клеток MDBK in vitro. Основное содержание исследования составляет изучение метаболизмстимулирующего действия цитокина интерлейкина-6 на клеточную линию MDBK, наиболее часто используемую для репродукции вирусов. В рамках исследования была изучена чувствительность перевиваемой клеточной линии MDBK к двум вирусам: вирусу герпеса I типа (ИРТ) и вирусу парагриппа-3. Для достижения этой цели интерлейкин-6 вводили в культуру клеток в различных концентрациях, варьирующих от 30 до 300 пг/мл. Затем клетки инкубировали в течение 72 часов при температуре 37°С. Полученные данные показали, что интерлейкин-6 способствует росту клеток MDBK в диапазоне концентраций от 30 до 60 пикограмм на миллилитр. Кроме того, было замечено, что добавление цитокина в питательную среду способствует более активной репродукции вирусов и увеличению их урожайности в 1,21 раза. Исследования показали, что препараты интерлейкина, вводимые в концентрациях от 30 до 60 пг/мл, не изменяют морфологию клеток, а скорее стимулируют их метаболическую активность. Таким образом, добавление интерлейкина-6 в ростовую среду не только увеличивает активность клеток MDBK, но и повышает урожайность вирусной биомассы, что делает возможным производство диагностических и профилактических вирусных препаратов с более высокой инфекционной активностью.

Ключевые слова: культура клеток, культуральные питательные среды, цитокины, интерлей-кин-6, индекс пролиферации

Для цитирования: Плотникова Э.М., Нестерова И.А., Матвеева Е.Л., Фазлиахметов Р.Г., Красовская Ю.В. Влияние иммуномодулятора цитокина IE-6 на метаболизм клеток культуры MDBK для репродукции вирусов // Ветеринарный врач. 2025. № 1. С. 67 - 72. DOI: 10.33632/1998-698Х 2025 1 67

EFFECT OF THE IMMUNOMODULATOR IL-6 CYTOKINE ON THE METABOLISM OF MDBK CULTURE CELLS FOR VIRUS REPRODUCTION

Edie М. Plotnikova doctor of veterinary sciences, [email protected]

Irina A. Nesterova', [email protected]

Elena E. Matveeva doctor of biological sciences, [email protected]

Ravil G. Fazliakhmctov'. [email protected]

Julia V. Krasovskaya candidate of veterinary sciences, [email protected]

1

2

Federal Center for Toxicological, Radiation and Biological Security, Kazan, Russian Federation Kazan Innovative University named after V.G. Timiryasov, Kazan, Russian Federation

68

3

Kazan State Academy of Veterinary Medicine named after N.E. Bauman, Kazan, Russian Federation

Corresponding author: Edie Minachetdinovna Plotnikova.

Abstract. The effect of the recombinant cytokine preparation interleukin-6 (IE-6) on the functional activity of MDBK cells in vitro was studied. The main content of the study is the study of the metabolismstimulating effect of the cytokine interleukin-6 on the MDBK cell line, which is most often used for virus reproduction. Virological methods were used to determine the sensitivity of the transplanted MDBK cell line to herpesvirus type I (IRT) (vaccine strain «ТК-А (VIEV) - В2») and parainfluenza virus-3 (strain «SF-4»). IE-6 was introduced into the cell culture in concentrations from 30 to 300 pg/ml. The cells were incubated for 72 hours at 37°C. It was found that the tested cytokine IE-6 has a stimulating effect on the proliferation of MDBK cell culture in the concentration range from 30 to 60 pg/ml. It was noted that nutrient media with the addition of cytokine provided higher reproduction of viruses, increasing their yield by 1.21 times. As a result of the conducted studies, it was found that cytokine preparations in concentrations of 30-60 pg/ml do not cause changes in cell morphology and in these doses have a stimulating effect on cell metabolism. Thus, the introduction of cytokine IE-6 into the growth medium provides an increase in the proliferative activity of the MDBK cell line and increases the yield of viral biomass with higher infectious activity in the manufacture of diagnostic and preventive viral preparations.

Keywords: cell culture, culture media, cytokines, interleukin-6, proliferation index

Введение. В современном мире растет спрос на инновационные биотехнологические решения на основе трансплантируемых клеточных линий. Это увеличение спроса, в свою очередь, стимулирует рост производства и использования питательных сред. Одной из областей, которая привлекает значительное внимание, является исследование новых усилителей метаболизма клеток, известных как цитокины. Эти вегцества обладают необходимыми свойствами: в процессе функционирования естественного и специфического иммунитета в организме синтезируются особые вегцества, соединения проявляют свою активность даже в ничтожно малых концентрациях - на уровне 10-11 моль/л. Цитокины являются важными медиаторами иммунных и воспалительных реакций и способны влиять на организм различными путями: через аутокринный, паракринный или эндокринный механизмы, играют решаю-гцую роль в стимулировании роста и развития клеток. В первую очередь они запускают замедленные процессы внутри клеток, требуюгцие синтеза новых белков. Сложная сеть, образованная этими молекулами, позволяет отдельным компонентам взаимодействовать друг с другом либо совместно, либо конкурентно. Обладая плейотропной активностью, они могут выполнять несколько функций одновременно:

- стимулируют пролиферацию и дифференцировку функционально активных иммунокомпетентных клеток;

- вызывают хемотаксис - перемегцение клеток к источнику сигнала;

- изменяют экспрессию антигенов и различных маркеров на поверхности клеток;

- переключают синтез иммуноглобулинов, что способствует формированию специфических иммунных реакций;

- индуцируют цитотоксичность у макрофагов, обеспечивая более эффективную борьбу с патогенами;

- способствуют формированию очага воспаления, что является важным этапом в процессе за-1ЦИТЫ организма [6].

В современном обгцестве существует большое разнообразие веществ, которые способствуют росту и активации метаболизма клеток. Среди них рекомбинантные цитокины, такие как интерлейкины, эритропоэтин и колониестимулирующие факторы, выделяются благодаря своей наибольшей эффективности. Кроме того, производные гликозаминогликана, в частности D-глюкуроновой кислоты, проявляют значительную активность. N-ацетилнейраминовая кислота и глицин также вносят изменения в клеточный метаболизм [1,4].Кроме того, эпидермальный фактор роста и гепаринсвязывающие факторы роста являются известными стимулирующими рост средствами. Цитокины оказывают значительное влияние практически на все клеточные процессы и играют решающую роль в регуляции процесса старения [2,5]. Известно, что интерлейкин-6 способен активировать пролиферацию клеток MDBK [8]. Однако при высоких концентрациях цитокина он может оказывать губительное воздействие на вирусы инфекционного ринотрахеита (ИРТ) и парагриппа-3 (ПГ-3). Поэтому крайне важно определить оптимальные дозы интерлейкина-6, которые одновременно способствовали бы как увеличению числа клеток MDBK, так и репродукции вирусов ИРТ и ПГ-3 на них. На основе этих знаний мы провели исследования, направленные на изучение стимуляции метаболизма под воздействием интерлейкина-6

69

на культуру клеток линии MDBK. Эта линия клеток используется для репродукции вирусов инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 в процессе производства противовирусных вакцинных препаратов.

Материалы и методы. В качестве потенциального активатора клеточного метаболизма использовали цитокин интерлейкин - 6 (IL-6) производства ООО «Цитокин» (Санкт-Петербург). В качестве биологической модели клеток животного происхождения использовали линию клеток MDBK, традиционно используемую в биотехнологии для репродукции вирусов. В ходе исследований, проводимых в области вирусологии, была изучена восприимчивость перевиваемой клеточной линии MDBK к двум вирусам: вирусу герпеса первого типа (ИРТ) и вирусу парагриппа-3. Для культивирования клеток использовали питательную среду Игла МЕМ (minimal essential medium'). В среду добавляли глюкозу и глютамин в концентрации 4-5 г/л. В качестве питательной среды использовали Игла МЕМ, содержащую 20% бычьей сыворотки. Клетки MDBK (почки эмбриона крупного рогатого скота) вводили в среду с плотностью посева Зх Ю® клеток на миллилитр. Дополнительно в питательную среду добавляли антибиотики в следующих дозировках: сульфат стрептомицина - 100 мг/мл, сульфат канамицина - 50 мг/мл. бензилпенициллина натриевая соль - 100 Ед/мл. Раствор трипсина-версена в соотношении 1:3 использовали для отделения клеток от поверхности стекла во время рекультивирования. Клетки культивировали в культуральных матрах при 37°С в атмосфере, содержащей 5% углекислого газа. Ин-терлейкин-6 (IE-6) добавляли в культуру клеток в концентрациях от 30 до 300 пг/мл. Инкубация длилась 72 часа в инкубаторе с контролируемым уровнем углекислого газа при 37°С.

Результаты исследований и их обсуждение. Прежде чем приступить к основным экспериментам, направленным на изучение стимулирующего воздействия интерлейкина-6 на метаболизм клеток линии MDBK, мы провели ряд предварительных исследований, строго следуя требованиям фармакопеи Российской Федерации [7]. В ходе этих исследований мы определили цитотоксичность препарата для клеток MDBK. Для выполнения этой задачи были взяты ампулы, содержащие интерлейкин-6, каждая объемом 1 мл и концентрацией 1000 пг/мл. Содержимое этих флаконов затем разводили в стерильной деионизированной воде для получения серии растворов с различной концентрацией в диапазоне от 10 до 1500 пикограмм на миллилитр с шагом 10. Полученные концентрации цитокина были добавлены в питательные среды, которые затем были засеяны клетками MDBK в количестве 4/ 10^ клеток на мл. Клеточные культуры инкубировали в течение 24 часов. Для того чтобы оценить степень токсичности исследуемого препарата IE-6 для культуры клеток MDBK, был применён метод МТТ. Этот метод базируется на способности митохондриальных дегидрогеназ в метаболически активных клетках восстанавливать тетразолий до растворимого формазана. Это вещество поглощает свет с длиной волны 490 нанометров. Метод МТТ позволяет анализировать активность NAD(P)H-3aBHCHMbix оксидоредук-тазных ферментов, которые являются индикаторами жизнеспособности клеток [9]. После этого клетки распределяли по 96-луночным планшетам с плотностью 100 тыс. клеток на миллилитр. Затем планшеты инкубировали при 37°С в течение 72 часов. Впоследствии в каждую лунку добавляли по 20 мкл раствора МТТ (метилтиазолилтетразола). Планшеты выдерживали в термостате при той же температуре еще 4 часа. Для оценки токсичности и жизнеспособности клеток мы измерили изменение оптической плотности клеток MDBK, обработанных исследуемым препаратом. Результаты выражались в виде цитотоксического индекса (ПИ) (таблица 1).

Таблица 1 - Влияние IL-6 на жизнеспособность клеток MDBK

Концентрация IE-6 в питательной среде, засеянной культурой MDBK, пг/мл 10 30 50 100 150 200 ____________250____________ 500 1000

Цитотоксический индекс

% от контроля

Контроль (пит, среда без IL-6)

0,59±0,03

0,60±0,02

0,59±0,03

0,46±0,11

0,41±0,15

0,31±0,09 *

0,29±0,07 **

0,21±0,09 **

0,09±0,005 *** 0,44±0,07

134

136

134

106

93

70

66

48

20

100

70

Из представленной таблицы становится очевидным, что добавление интерлейкина-6(1Е-6) в культуральную среду, с клетками MDBK, в концентрации 150 пг/мл приводит к незначительному снижению активности митохондрий, примерно на 7%. Однако по мере увеличения концентрации цитокинов подавление активности становится более значительным: активность снижается примерно на 30% при 200 пг/мл, снижение составляет примерно 35% при концентрации 250 пг/мл, а при 500 пг/мл наблюдается снижение примерно на 53%. Значительное снижение активности примерно на 80% наблюдается при концентрации 1000 пг/мл.

Таким образом, можно сделать вывод, что минимально переносимая доза IE-6 для клеток MDBK составляет 150-200 пг/мл, а минимально цитотоксическая доза - 1000 пг/мл и более. После определения минимально переносимой и минимально цитотоксической доз IE-6 для клеток MDBK мы провели эксперименты, направленные на определение оптимальной концентрации цитокина, обеспечивающей наилучший рост культуры. Чтобы исследовать биологические эффекты тестируемого соединения, мы использовали линию клеток почек крупного рогатого скота (MDBK). Питательную среду готовили с использованием Игла МЕМ, специализированной среды, содержащей необходимые питательные вещества. Мы добавили в эту среду 20% бычьей сыворотки, которая имеет решающее значение для роста клеток. Клетки MDBK высевали в среду с плотностью 3 х 10^ клеток/мл. Впоследствии в культуру добавляли IE-6 в различных концентрациях, варьирующих от 30 до 300 пг/мл. Для проведения сравнительного исследования мы использовали конкретный пептид, Eys-Glu-Glu-Eeu-Asn-Glu. Этот пептид был введен в культуру в концентрации 0.05 мкг/мл, поскольку было показано, что он не оказывает существенного биологического действия на клетки. Этот пептид служил отрицательным контролем. В течение 72 часов клетки находились в инкубаторе при температуре 37° С. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Изменение количества клеток MDBK под действием IL-6

Исследуемое средство

IE-6 (предлагаемое средство (п=25)

Пептид Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu (известное средство (п=25)

Концентрация испытуемых _______средств__________ 10 пг/мл _______30 пг/мл_________ _______60 пг/мл_________ 100 пг/мл 150 пг/мл _______5000 пг/мл_______ _______10000 пг/мл______ _______50000 пг/мл______ 500000 пг/мл

Количество клеток MDBK (х ________]ДД_______________ ________451,3 ± 15,5______ ________611,1 ± 19,7______ ________668,7 ± 11,4______ ________498,3 ±21,7_______ ________499,5 ± 12,9______ ________379,7 ± 18,3______ ________495,9 ± 17,9______ ________615,3 ±39,7_______ 579,5 ±21,5

В ходе исследования было установлено, что предлагаемый препарат оказывал положительное влияние на пролиферацию клеток MDBK в культуре. Микроскопический анализ показал, что количество клеток значительно увеличивалось при воздействии IL-6. Как показано в таблице 2, цитокин стимулировал размножение клеток MDBK в зависимости от дозы. Его концентрация варьировалась от 30 до 60 пикограмм на миллилитр. Аналогичный эффект наблюдался и при использовании пептидной последовательности Lys-Glu-Glu-Leu-Asn-Glu, хотя его эффективность была очевидна при более высоких концентрациях - в диапазоне от 1 000 000 до 5 000 000 пг/мл. Это означает, что минимальная концентрация, необходимая тестируемому препарату для стимуляции пролиферации клеток MDBK, на шесть порядков ниже по сравнению с той, которая требуется для пептида. Это говорит о том, что цитокин IL-6 обладает большей специфической активностью, чем пептид. Для определения оптимальной концентрации IL-6, которая стимулирует метаболизм в среде для роста клеток MDBK, была проведена серия экспериментов. В следующей серии опытов исследовалась ростстимулирующая активность линий клеток LEK, MDBK, РК-15 и VERO, которые часто используются в биотехнологии для производства вирусных вакцин.

Для того чтобы справиться с этой задачей, клеточные культуры выдерживали в среде Игла МЕМ, которая содержит IE-6 в оптимальном количестве - 60 пикограмм на миллилитр в течение 72 часов. По истечении этого срока клетки отделяли от стекла с использованием раствора трипсина-вер-сина (1:3) и подсчитывали с использованием камеры Горяева. Результаты оценивали с использованием индекса пролиферации (ИП) в соответствии со стандартными процедурами.

71

Результаты ростстимулирующей активности испытуемого цитокина на вышеуказанные перевиваемые линии культур клеток приведены в таблице 3.

Таблица 3 - Рост перевиваемых культур клеток разных линий на среде Игла МЕМ, содержащей оптимальные концентрации цитокина IE-6

Ростовая среда

Индекс пролиферации через 72 ч после посева культур клеток линий

Игла МЕМ, содержащая 60 пг/мл IE-6 Игла МЕМ без цитокина

LEK 5,65±0,17* 5,39±0,11

MDBK 7,18±0,11** 5,41±0,25*

РК-15

5,81±0,15

5,53±0,21

Уего 5,93±0,19 5,29±0,11

Из представленной таблицы видно, что среди четырех типов клеток, используемых в биотехнологических процессах, клетки MDBK демонстрируют наиболее высокую способность к пролиферации и ускорению метаболизма. Скорость пролиферации клеток MDBK в 1,33 раза выше по сравнению с другими типами клеток, со статистически значимой разницей (р <0.01).

В заключительных экспериментах мы исследовали репродукцию вирусов инфекционного ри-нотрахеита (ИРТ) и парагриппа-3 (ПГ-3) в культурах клеток MDBK, предварительно обработанных интерлейкином-6 (IE-6). Клетки культивировали в среде, содержащей 60 пг/мл IE-6, до образования монослоя. В исследовании использовались вирусы ПГ-3 шт. «SF-4», ИРТ штамм «ТК-А (ВИЭВ)-В2». Было проведено три последовательных пассажа каждого вируса. Накопление вируса в культуре измеряли с использованием стандартных методик [3]. В таблице 4 представлены результаты исследования репродукции вирусов ПГ-3 и ИРТ в клетках MDBK с использованием сред, содержащих цитокины и сывороточных сред (контрольная группа).

Таблица 4 - Репродукция вирусов ПГ-3 и ИРТ на перевиваемой культуре клеток MDBK, стимулированной IL-6

Культура клеток __________MDBK____________ Культура клеток MDBK, стимулированная IE-6 Культура клеток MDBK без цитокина

Титры вирусов, IgT^ 50/мл

ИРТ

7,15 ±0,2

5,9 ±0,3

ПГ-3

6,9 ± 0,3

5,7 ±0,1

Из таблицы 4 становится очевидным, что культура клеток MDBK, подвергнутая стимуляции цитокинами, демонстрирует повышенную активность в процессе производства вирусов по сравнению с клетками, не подвергавшимися такому воздействию. В частности, было обнаружено, что наше исследование продемонстрировало, что цитокин IL-6 оказывает благоприятное влияние на пролиферацию клеток MDBK с концентрацией от 30 до 60 пг/мл. Это приводит к увеличению скорости деления клеток на 10.1%. Кроме того, использование сред, содержащих цитокин, способствует более эффективному размножению вирусов в клеточной линии, что, в свою очередь, приводит к увеличению урожайности

вирусной биомассы в 1,21 раза (Р

0,05). Таким образом, добавление цитокинов IL-6 в среду для вы

ращивания клеток в количестве от 30 до 60 пг/мл позволяет повысить пролиферативную активность клеток MDBK и увеличить урожайность вирусной биомассы с более высокой инфекционной активностью. Это делает данную культуру более подходящей для производства диагностических и профилактических вирусных препаратов.

Заключение. В ходе наших исследований мы достигли следующих значимых результатов:

1. Были определены минимальные переносимые дозы и минимальные цитотоксические дозы цитокина IE-6 для клеток линии MDBK.

2. Установлен индекс пролиферации клеток MDBK при использовании IE-6 в качестве стимулятора метаболизма. Оптимальная концентрация цитокина, способствующая активному метаболизму, составила от 30 до 60 пг/мл в ростовой среде.

3. Проведено сравнительное исследование метаболизма клеток различных линий: ЕЕК, MDBK, РК-15 и Vero при воздействии IE-6.

4. Выявлено, что клетки линии MDBK обладают самой высокой цитокин-индуцированной пролиферативной активностью. Индекс пролиферации превышал контрольные значения в 1,33 раза (р <

72

0,01). Культура клеток линии MDBK, выращенная с использованием цитокина, показала более высокую вирус-продуцирующую активность по сравнению с культурой, не стимулированной цитокином.

Список источников

1.

Авдеева Ж.И. и др. Цитокины и вакцины. С.22-27.

Тихоокеанский медицинский журнал. - 2009. - №3. -

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

Архарова, И.А. Использование ДНК-анализа для оценки генетического постоянства цитокин-сти-мулированных клеток животных / И.А. Архарова, Э.М. Плотникова, Е.Л. Матвеева. // Ветеринарный врач. - 2019. - № 6. - С. 9-14.

Каримуллина, И.Г. Исследование репродуктивных свойств вирусов инфекционного ринотрахеита и парагриппа-3 крупного рогатого скота на различных линиях культур клеток / И.Г. Каримуллина, В.Г. Гумеров, А.И. Яруллин, Р.С. Мухаммадиев, З.Б. Галимзянова, Х.З. Гаффаров. // В книге: Инновационные решения актуальных вопросов биобезопасности. Сборник материалов Международной научно-практической конференции. - 2022. - С. 187-191.

Орлов, А.И. Вопросы стандартизации клеток-продуцентов для биотехнологии / А.И. Орлов [и др.] // Биотехнология. - 2017. - Т. 33, № 3. - С. 81-87.

Патент РФ №2715336 Класс МПК: C12N 5/00 Способ стимуляции метаболизма культур клеток MDBK для репродукции вирусов / Архарова И.А. - №2019112375; заявлено 23.04.2019; опубл. 26.02.2020 Бюл. №6

Симбирцев, А.С. Цитокины-новая система защитных реакций организма/А. С. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2002. -№ 3. - С. 9-17.

Требования к клеточным культурам, используемым для производства и контроля качества иммунобиологических лекарственных препаратов / И.В. Шатунова, В.А. Меркулов, А.В. Комратов [и др.] // Ведомости НЦЭСМП. - 2013. - №1. - С.28-32.

Brand А.М. et.al. «Human IE-6 stimulates bovine satellite cell proliferation mechanism, Domestik Animal Endocrinology 2018; 62:32-38; DOY: 10.1016/ domaniend.2017/08/004 P. 33-36.

Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival application to proliferation and cytotoxicity assays // J. Immunol. Mediods. - 1983. - V. 65. - N 1-2. - P. 55-63.

References

1.

2.

3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

Avdeeva Zh.I. et al. Cytokines and vaccines. - Pacific Medical Journal. - 2009. - No.3. - pp.22-27.

Arkharova, I.A. The use of DNA analysis to assess thegenetic constancy of cytokine-stimulated animal cells / I.A. Arkharova, E.M. Plotnikova, E.E. Matveeva. // Veterinarian. - 2019. - No. 6. - pp. 9-14.

Karimullina, I.G. Investigation of the reproductive properties of infectious rhinotracheitis and parainflu-enza-3 viruses in cattle on various cell culture lines / I.G. Karimullina, V.G. Gumerov, A.I. Yarullin, R.S. Mukhammadiev, Z.B. Galimzyanova, H.Z. Gaffarov. // In the book: Innovative solutions to topical biosafety issues. Collection of materials of the International Scientific and Practical Conference. - 2022. -pp.187-191.

Orlov, A. P. Issues of standardization of producer cells for biotechnology. Orlov [et al.] // Biotechnologiya. -2017. -T. 33, No. 3. -P. 81-87.

Patent of the Republic of Belarus No.2715336, IPC class: C12N 5/00, assistance in software development for MDBC software development for the Republic of Belarus / Arkharova I.A. - No.2019112375; announced 04/23/2019; publ. 02/26/2020 Bel. No.6

Simbirtsev, A.S. Cytokines-a new system of protective reactions of the body /А. S. Simbirtsev // Cytokines and inflammation. - 2002. - No. 3. - pp. 9-17.

Requirements for cell cultures used for the production and quality control of immunobiological drugs /N.V. Shalunova, V.A. Merkulov, A.V. Komratov [et al.] // Vedomosti NCESMP.- 2013.- No. I.- pp.28-32.

Brand A.M. et.al. Human IE-6 stimulates the proliferation mechanism of bovine satellite cells. Endocrinology of domestic animals, 2018; 62:32-38; DOY:10.1016/domaniend.2017/08/004, pp. 33-36.

Mosmann T. Express colorimetric analysis of cell growth and survival in tests for proliferation and cyto-

toxicity // J. Immunol. Methods. - 1983. - Vol. 65. - N 1-2. - pp. 55-63.

Bee авторы сделали эквивалентный вклад в подготовку публикации.

Авторы подтверждают отсутствие конфликта финансовых/нефинансовых интересов, связанных с написанием статьи.

АП authors have made an equivalent contribution to the preparation of the publication. The authors declare that there is no conflict of interest.

Принята к публикации / accepted for publication 18.12.2024;

© Плотникова Э. М., Нестерова И. А., Матвеева Е. Л., Фазлиахметов Р. Г., Красовская Ю. В. 2025