CC BY
15ddPCR с зондами TaqMan. Линии гепатом человека HepG2 и Huh7, нокаутные по NBN (КО) получали с использованием системы CRISPR-Cas9. КО клетки трансдуцировали лентивирусными векторами, кодирующими WT-NBN, NBN-I171V или контрольным вектором (СУ). Двунитевые разрывы ДНК индуцировали 25 мкг/мл блеомицина.
Результаты
ге61754966 в гетерозиготном состоянии выявлен в 4 случаях ГК. Среди исследованных здоровых доноров в искомый аллель обнаружен не был. Частота ге61754966 среди пациентов с ГК составила 0,98% по сравнению с 0,19% у здоровых индивидов (ЕхАС). Функциональную значимость варианта 1171У оценивали в линиях клеток, полученных на основе культур HepG2 и Huh7. Доля клеток, меченных 5'-ВЮи, не различалась в культурах, полученных из HepG2, а в Huh7-KO и Huh7-CV была ниже, чем в Huh7, экс-прессирующих МВК По результатам иммуноблоттин-га ни в одной из культур не было выявлено наличия гистона уША.Х, маркера повреждения ДНК. Доля жизнеспособных клеток и уровень активации каспаз 3/7 достоверно не различались. После 24 часов инкубации с блеомицином значимых различий между культурами в доле живых клеток и уровне активации
Список литературы
каспаз 3/7 не выявлено. В HepG2 и HepG2-NBN-WT снижение ДНК-синтетической активности было в 2 раза менее выраженным, чем в HepG2-KO, HepG2-C^ HepG2-NBN-I17iy где снижение составило 1922%. Уровень yH2A.X в HepG2-KO, HepG2-CV был в 1,8-2,5 раза выше, чем в HepG2 и HepG2-NBN-I171V. В линиях на основе Huh7, содержащей мутацию p53, снижения синтеза ДНК не наблюдалось. В клетках Huh7-WT-NBN доля клеток в S-фазе увеличилась на 12%, в Huh7-NBN-I171V — на 18%, в Huh7-KO и Huh7-CV — на 29 и 26% соответственно. Уровень yH2A.X в Huh7-KO составил треть от контроля, в Huh7-WT-NBN — 70%, в Huh7-NBN-I171V — 50%.
Выводы
Среди пациентов с ГК частота rs61754966 выше, чем в популяции. HepG2 и Huh7, экспрессирующие NBN-I171V, демонстрируют фенотип, промежуточный между наблюдаемыми в КО клетках и клетках с NBN дикого типа. Экспрессии NBN-I171V недостаточно для преодоления остановки клеточного цикла при повреждении ДНК in vitro, однако при наличии дополнительных мутаций rs61754966 способен проявлять себя как патогенный вариант.
Работа поддержана стипендией Президента РФ для аспирантов и молодых ученых.
Вирус Эпштейна-Барр у представителей различных народов России: типы вируса и злокачественные новообразования
Авторы
Лубенская Александра Кирилловна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Смирнова Ксения Валерьевна, ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
РНГ, вирус Эпштейна-Барр
Актуальность
Обнаружение двух молекулярных типов вирус Эпштейна-Барр (ВЭБ-1 и ВЭБ-2), обладающих разной трансформирующей способностью, стимулировали изучение их распространенности в различных популяциях и проведение анализа связи со злокачественными опухолями.
Цель
Цель работы состояла в изучении распространенности и структурных особенностей ВЭБ-1 и ВЭБ-2 у представителей различных народностей России и сравнении в регионах их обитания уровней заболеваемости опухолями, включающими ВЭБ-ассоциированные случаи.
Материалы и методы
В качестве образцов для исследования были использованы смывы ротоглотки пациентов из разных регионов России. Эти образцы использовали для выделения и амплификации ДНК ВЭБ, определения концентрации копий вирусной ДНК на 1 клетку смыва.
Результаты
При обнаруженном незначительном числе копий ДНК ВЭБ на 1 клетку смыва у представителей различных народностей России, типы ВЭБ распределились примерно поровну. Обнаруженная доминирующая инфицированность у изученных представителей одной из изученных этнических групп
трансформирующим типом ВЭБ-1 коррелировала с повышенными показателями заболеваемости у населения МО опухолями желудка, полости рта, глотки и лимфом, среди которых могут встречаться ВЭБ-ассоциированные случаи. Однако различия при сравнении соответствующих показателей заболеваемости у населения различных регионов России оказались статистически незначимыми, и обнаруженная тенденция, учитывая редкую встречаемость ВЭБ-ассоциированных случаев в опухолях этих органов,
Список литературы
возможно, объясняется некоторой генетической предрасположенностью определенных этнических групп к упомянутым опухолям.
Выводы
Для выяснения влияния типов ВЭБ на заболеваемость злокачественными новообразованиями необходимы дополнительные исследования с привлечением представителей разных этносов из различных географических регионов.
Молекулярно-генетические предиктивные маркеры ответа на периоперационную химиотерапию в режиме FLOT при раке желудка
Авторы
Оганян Карина Амбарцумовна, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург Мусаелян Арам Ашотович, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург, ФГБНУ «Научно-исследовательский институт медицинской приматологии», Сочи
Лапин Сергей Владимирович, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Купенская Татьяна Владимировна, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург Свечкова Анна Алексеевна, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Беляев Михаил Алексеевич, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Захаренко Александр Анатольевич, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург Орлов Сергей Владимирович, [email protected], ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова» Минздрава России, Санкт-Петербург
Ключевые слова:
рак желудка, FLOT, предиктивные маркеры, HER2, KRAS
Актуальность
Рак желудка (РЖ) является агрессивным по течению заболеванием. Несмотря на то что периопе-рационная химиотерапия в режиме FLOT улучшила прогноз у пациентов с резектабельным местнора-спространенным РЖ, около 80% случаев не отвечают на проводимую терапию, соответственно, такие пациенты подвергаются ненужной токсичности и отсроченному хирургическому вмешательству. Выявление предиктивных маркеров ответа позволит определить, какие пациенты ответят на периоперационное лечение.
Цель
Определение молекулярно-генетических предикторов ответа на периоперационную химиотерапию в режиме FLOT у больных местнораспространенным РЖ.
Материалы и методы
Исследование включало 41 пациента c резектабель-ным местнораспространенным T2-4N1-2M0 РЖ, которым выполнена гастрэктомия либо субтотальная резекция желудка с лимфодиссекцией D2 и проводилась периоперационная химиотерапия по схеме FLOT. Во всех собранных образцах исследована микросател-литная нестабильность (МСН) и амплификация гена HER2. Определение наличия МСН осуществлялось с использованием мононуклеотидных маркеров (NR21, NR24, NR27, BAT25, BAT26) в соответствии с рекомендациями ESMO. Определение HER2 проводилось с помощью флюоресцентной гибридизации in situ согласно рекомендациям ASCO/CAP 2018. Также 15 пациентам проводилось определение изменения копийности генов FGFR1, FGFR2, KRAS, MET, EGFR, CCND1 и MYC с помощью технологии мультиплексной лигазо-зависи-
