CC BY
47
6. Kralova J., Ciz M., Nosal R., Drabikova K., Lojek A. Effect of H (l)-antihistamines on the oxidative burst of rat phagocytes. Inflamm Res, 2006. Vol. 55 (1). P. 15-16.
7. Oda T., Morikawa N., Saito Y., Masuho Y., Matsumoto S. Molecular cloning and characterization of a novel type of histamine receptor preferentially expressed in leukocytes. J BiolChem, 2000. Vol. 275. P. 36781-36786.
8. Schneider E., Leite-de-Moraes M., Dy M. Histamine, immune cells and autoimmunity. Adv Exp Med Biol, 2010. Vol. 709. P. 81-94.
9. Thurmond R.L., Desai P.J., Dunford P.J., Fung-Leung W.P., Hofstra C.L., Jiang W., Nguyen S., Riley J.P., Sun S., Williams K.N., Edwards J.P., Karlsson L. A potent and selective histamine H4 receptor antagonist with anti-inflammatory properties. J Pharmacol Exp Ther, 2004. Vol. 309. P. 404-413.
10. Takeshita K., Bacon K.B., Gantner F. Critical
role of L-selectin and histamine H4 receptor in zymosan-induced neutrophil recruitment from the bone marrow: comparison with carrageenan. J. Pharmacol. Exp.Ther, 2004. Vol. 310. P. 272-280.
11. Belous A.M., Grishhenko V.I. Kriobiologiya [Cryobiology]. Kiev: Naukova dumka. 1994. 432 p.
12. Vishnevskaya S.M. Vestnik Mogilevskogo gosudarstvennogo universiteta im. Ä.Ä. Kuleshova, 2009, № 4, pp. 185-191.
13. Glants S. Mediko-biologicheskaya statistika. [Biomedical statistics], Moscow: Praktika, 1998, 459 p.
14. Iskusnykh A.Yu., Basharina O.V., Artyukhov V.G., Alabovskij V.V. Vestnik VGU, Seriya: Khimiya. Biologiya. Farmatsiya., 2008, № 1, pp. 93-96.
15. Panasenko L.M., Krasnova E.I., Efremov A.V. Byulleten'SO RÄMN, 2005, № 3, pp. 44-47.
16. Spasov A.A., Chernikov M.V Khimiko-farmatsevticheskij zhurnal, 2002, № 8, pp. 3-15.
УДК 616-093.3
ВЕГЕТАЦИЯ РЕДКИХ ВИДОВ БАКТЕРИЙ РОДА ESCHERICHIA НА СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧКАХ ВЛАГАЛИЩА ЖЕНЩИН РЕПРОДУКТИВНОГО ВОЗРАСТА
Частоедова Е.В., Колеватых Е.П.
ФГБОУ ВО Кировский государственный медицинский университет Минздрава России, Киров, Россия (610027, г. Киров, ул. К. Маркса, 112), e-mail: [email protected]
VEGETATION RARE SPECIES OF BACTERIA OF THE GENUS ESCHERICHIA IN THE VAGINAL MUCOUS MEMBRANES OF REPRODUCTIVE AGE WOMEN
Chastoedova E.V, Kolevatykh E.P.
Kirov State Medical University, Kirov, Russia (610027, Kirov, K. Marx Street, 112), e-mail: [email protected]
В работе представлены результаты бактериологического исследования содержимого влагалища женщин репродуктивного возраста при неспецифическом вагините. Цель исследования заключалась в оценке частоты вегетации редких видов бактерий рода Escherichia на слизистых оболочках влагалища женщин при воспалительных процессах.
Проводили посев клинического материала на питательные среды Эндо, кровяной агар. Идентифицировали в биохимическом тесте фирмы API 20C (BioMerieux, Франция). Чувствительность к антибактериальным препаратам: цефалоспоринам, карбапенемам, монобактамам, пиперациллинам, азлоцилли-нам, аминогликозидам определяли диско-диффузным методом. Всего было изучено и проанализировано 149 образцов биологического материала.
В результате дифференциации установлено, что достоверно чаще изолировали из клинического материала больных по сравнению с интактными лицами E. coli inactive (16,9 и 4,5%), E. blattae (25,3 и 10,1%), E. hermanii (34,9 и 10,1%), E. fergusonii (31,3 и 13,6%), E. vulneris (36,1 и 13,6%). На кровяном агаре зону гемолиза вызывали E. coli inactive, E. blattae, также обладали высокой адгезивностью к энтероцитам in vitro, резистентностью к эшерихиозному фагу, цефалоспоринам, аминогликозидам.
Ключевые слова: бактериальный вагинит, эшерихии, идентификация, нормоценоз.
The scientific article below presents the results of bacteriological examination of vaginal content of reproductive age women with nonspecific vaginitis. The purpose of the study was to assess the frequency of vegetation with rare species of Escherichia bacteria on the vaginal mucous membranes of women with inflammatory processes. Clinical material was plated on Endo, blood agar nutrient media and identified by biochemical testing with API 20C (API bioMerieux, France). Susceptibility to antibiotics, such as: cephalosporins, carbapenems, monobactams, piperacillin, azlocillin, aminoglycosides, was tested by disc diffusion method. 149 samples of biological material were studied and analyzed.
As a result, differentiation found out that significantly more the patients' clinical material contained E. coli inactive (16,9 and 4,5%), E. blattae (25,3 and 10,1%), E. hermanii (34,9 and 10,1%), E. fergusonii (31,3 and 13,6%), E. vulneris (36,1 and 13,6%), if compared with intact persons. E. coli inactive, E. blattae gave a clear
hemolysis zone on blood agar, they exhibited high adhesiveness to enterocytes in vitro, resistance to Escherichia phage, cephalosporins, aminoglycosides.
Key words: bacterial vaginosis, Escherichia, identification, normotsenoz.
Введение
В последние годы отмечается рост патологических процессов репродуктивной системы женщин разного возраста [1]. По данным ВОЗ, причиной неспецифических бактериальных вагинитов является грамотрицательная микрофлора в 57% случаев [2]. К грамотрицательным микроорганизмам относят Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella spp, Enterobacter spp. Однако редкие виды бактерий рода Escherichia, по данным литературы, не исследовались [3].
Цель исследования: оценка частоты вегетации редких видов бактерий рода Escherichia на слизистых оболочках влагалища женщин при неспецифических бактериальных вагинитах.
Задачи: определить частоту персистенции E. coli, E. coli inactive, E. blattae, E. hermanii, E. fergusonii, E. vulneris на слизистых оболочках влагалища; установить чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам.
Материал и методы
Под наблюдением находились 149 женщин в возрасте 21-35 лет. Все обследуемые были разделены на 2 группы: в первую группу вошли пациентки с диагнозом «Неспецифический бактериальный вагинит» (80 человек), группу сравнения (вторая группа) составили клинически здоровые женщины (69 человек). Постановку диагноза проводили на основании клинических симптомов, объективной оценки, лабораторной диагностики: микроскопический метод, бактериологический анализ, полимеразная цепная реакция. Взятие вагинального отделяемого осуществляли с помощью ложечки Фолькмана на приеме у врача-гинеколога, затем материал погружали в 1 мл буферного раствора. Готовили десятикратные разведения с последующим высевом на питательные среды: Эндо, кровяной агар. Инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов. Идентифицировали в биохимическом тесте производства Lachema, Чехия (таблица 1).
Таблица 1
Межвидовая диф( »еренциация бактерий рода Escherichia
Тест или субстрат E. coli E. hermanii E. vulneris E. fergusonii E. blattae
Индолообразование +/- + - + -
Орнитин +/- + - + +
Сахароза +/- -/+ - - -
Дульцит +/- + - + -
Адонит -/+ - - + -
Сорбит +/- - - - -
Малонат натрия - - +/-1 -/+ +
Целлобиоза - + + + -
Желтый пигмент - + +/- - -
С целью установления микробного статуса культивировали микроорганизмы на питательных средах: желточно-солевой агар (ЖСА, ООО «НПО «Биокомпас-С», Россия) для стафилококков, Columbia agar (BioMerieux, Франция) - для стрептококков, Enterococcus agar (HiMedia, Индия) - для энтерококков, среда Сабуро (HiMedia, Индия) -для дрожжевых грибов, Gardnerella vaginalis agar (BioMerieux, Франция) - для гарднерелл, MRS (HiMedia, Индия) - для лактобактерий, среда Бла-урокка (HiMedia, Индия) - для бифидобактерий, Columbia agar Base с добавлением бараньей крови, колистина и налидиксовой кислоты (HiMedia, Индия) - для бактерий рода Mobiluncus, AnaeroAgar (HiMedia, Индия) - для анаэробных бактерий. Дифференциальную диагностику осуществляли в биохимических тестах API 20C (BioMerieux, Франция). Чувствительность к антибиотикам (цефалоспори-
ны, карбапенемы, монобактамы, пиперациллины, азлоциллины, аминогликозиды) определяли диско-диффузным методом.
Анализ результатов исследования проводился с помощью статистического пакета Excel. Результаты описательной статистики для количественных данных, подчиняющихся закону нормального распределения, представлялись в виде средней арифметической (М) и стандартной ошибки средней (±m). Для выявления достоверности отличия применяли критерий t-Стьюдента для несвязанных выборок. Результаты описательной статистики для качественных данных представлялись в виде доли (d) и стандартной ошибки доли (±sd). С целью установления достоверности отличия в данном случае применяли непараметрический критерий Манна-Уитни. В качестве критерия статистической значимости была выбрана вероятность случайной ошибки 0,1% (p<0,001).
Таблица 2
Частота персистенции бактерий рода Escherichia
Группы обследованных E. coli E. coli inactive E. blattae E. hermanii E. fergusonii E. vulneris
I группа (больные) 38 (47,5%) 13 (16,25%) 21 (26,25%) 29 (36,25%) 26 (32,5%) 30 (37,5%)
II группа (здоровые) 26 (37,68%) 4 (5,8%) 15 (21,74%) 15 (21,74%) 15 (21,74%) 9 (13%)
Результаты исследования
В результате исследования установлено, что выявляли бактерии E. coli (42,9%), E. coli inactive (11,4%), E. blattae (24,2%), E. hermanii (29,5%), E. fergusonii (27,5%), E. vulneris (26,2) (таблица 2). Достоверно чаще изолировали из клинического
материала представителен первой группы по сравнению с интактными лицами E. coli inactive (16,9 и 4,5%), E. blattae (25,3 и 10,1%), E. hermanii (34,9 и 10,1%), E. fergusonii (31,3 и 13,6%), E. vulneris (36,1 и 13,6%). Интенсивность микробной обсемененности представлена на рисунке 1.
Рис. 1. Обсемененность слизистых оболочек влагалища бактериями рода Escherichia (в %)
Высокая величина микробной контаминации также преобладала среди представителей I группы. Микробный очаг 104-105 КОЕ/мл E. coli составил 39,7 и 7,7%, E. blattae - 4,8 и 0%, E. fergusonii - 27 и 0%.
На кровяном агаре зону гемолиза вызывали E. coli inactive, E. blattae, выделенные от пациентов с воспалительными процессами в биотопе. Данные микроорганизмы были не чувствительны
к эшерихиозному бактериофагу, обладали высокой адгезивностью к энтероцитам in vitro. Бактерии рода Escherichia первой группы обследованных обладали резистентностью к антибиотикам группы цефалоспоринов четвертого поколения (цефепи-му), карбапенемам (имипенему), азтреонам, ами-ногликозидам (гентамицину, сизомицину) (рис. 2, 3, 4, 5, 6).
Е. Е. Е.
hermanii fergusonii vulneris
ä I группа ы II группа
Рис. 2. Чувствительность бактерий к цефалоспорину
и I группа 0II группа
Рис. 3. Чувствительность бактерий рода Escherichia к рифампицину
ш| группа ни группа
Рис. 4. Чувствительность бактерий рода Escherichia к гентамицину
иI группа ни группа
Рис. 5. Чувствительность бактерий рода Escherichia к тетрациклину
и I группа я II группа
Рис. 6. Чувствительность бактерий рода Escherichia к ампициллину
Обсуждение результатов исследования
Анализ результатов исследования показал, что представители бактерий рода Escherichia персистиру-ют на слизистых влагалища женщин репродуктивного возраста. Однако среди пациенток с неспецифическими воспалительными процессами урогенитального тракта чаще регистрировали виды E. coli inactive (16,9 и 4,5%), E. blattae (25,3 и 10,1%), E. hermanii (34,9 и 10,1%), E. fergusonii (31,3 и 13,6%), E. vulneris (36,1 и 13,6%). Известно, что естественной средой обитания их является кишечник [4, 5]. Попадание эшерихий на слизистые оболочки других биотопов макроорганизма приводит к активизации факторов защиты и агрессии микробов: гемолизинов, адгезинов, агрессинов. При массовой гибели бактерий освобождается универсальный фактор патогенности эндотоксин (липополисаха-рид клеточной стенки грамотрицательных прокариот).
Уровень микробной колонизации также определяет степень поражения органов. Установлено, что высокая микробная обсемененность 104-105 КОЕ/мл была выражена у E. coli 39,7 и 7,7%, E. blattae 4,8 и 0%, E. fergusonii 27 и 0%, вегетирующих среди женщин с выявленной патологией. Известно, что для развития патологического процесса необходима инфицирующая доза, поэтому у женщин первой группы риск участия бактерий рода Escherichia выше по сравнению с контрольной группой. Патогенные и непатогенные эше-рихии не различаются по ферментативным свойствам и на средах первичного посева образуют практически одинаковые колонии. Установлено [6], что E. vulneris чаще участвует в гнойно-воспалительных процессах раневых поверхностей, гемолитические формы обнаружены при эрозиях шейки матки. Вероятно, дальнейшие исследования позволят разработать алгоритм прогнозирования развития патологических процессов с деструкцией слизистых оболочек половых путей. E. fergusonii проявила устойчивость к ампициллину в 90% случаев, по данным литературы [7], ампицил-линрезистентные штаммы эшерихий могут обладать множественной устойчивостью к антибиотикам, вызывая у женщин циститы. Показательным было обнаружение E. blattae, штаммы которой чаще изолировали [2] с поверхностей объектов окружающей среды, в частности в фекалиях тараканов. G.A. Popescu (2004) считает E. hermanii крайне редким возбудителем инва-зивных инфекций. В наших исследованиях указанный вид эшерихий персистировал на слизистых оболочках влагалища у женщин с заболеваниями щитовидной железы и нарушениями менструального цикла [8].
Таким образом, при неспецифическом бактериальном вагините необходимо идентифицировать род Escherichia до вида, так как редкие представители эшерихий являются маркерами неспецифических факторов резистентности макроорганизма.
Выводы
Редкие виды бактерий рода Escherichia принимают участие в развитии неспецифических вагинитов.
Активную роль в формировании патологического процесса играют представители видов E. coli, E. blattae, E. fergusonii.
Среди микроорганизмов рода Escherichia преобладали антибиотикорезистентные штаммы в биотопах пациентов с воспалительными процессами репродуктивной системы.
В практическом здравоохранении при лабораторной диагностике необходимо учитывать участие в воспалительном процессе редких видов грамотрицательных бактерий, резистентных к антимикробным препаратам.
Список литературы
1. Staphylococcus aureus и Escherichia hermanii при сахарном диабете у пациентов. [Электронный ресурс], 2004 г. URL: http://www.biomedsearch.com/ article/Staphylococcus-aureus-Escherichia-hermanii-in/120468336.html (Дата обращения 09.08.2016)
2. Escherichia blattae. [Электронный ресурс], 2009 г. URL: http:// lifeinthefastlane.com/fascinella-001/ (Дата обращения 09.08.2016)
3. Escherichia fergusonii. [Электронный ресурс], 2012 г. URL: http://www.intuitiveinc.com/vumiehelp/ index.htm#VUMICRO/Escherichia_fergusonii.htm (Дата обращения 09.08.2016)
4. Escherichia vulneris. [Электронный ресурс], 2006 г. URL: http://zipcodezoo.com/index.php/ Escherichia_vulneris (Дата обращения 09.08.2016)
5. Руководство по медицинской микробиологии. Частная медицинская микробиология и этиологическая диагностика инфекций. Книга 2 / Колл. авторов // Под редакцией Лабинской А.С., Костюковой Н.Н., Ивановой С.М. М.: Издательство БИНОМ, 2010. - С. 446-460.
6. Brenner, Don J., Alma C., McWhorter, Jean K., Lette Knutson and Arnold G., Steigerwalt. Escherichia vulneris: a New Species of Enterobacteriaceae Associated with Human Wounds // J. Clin. Microbiol. 15 (6): 11331140. Retrieved 24 October 2012.
7. Savini V., Catavitello C. et al. Multidrug-resistans Escherichia fergusonii: a case of acute cystitis // J. Clin. Microbiol, 2008. 46 (4): 1551-2. Doi:10.1128.
8. Popescu G.A. et al. Staphylococcus aureus and Escherichia hermanii in diabetes patient // J.of Infectious, 2004. P. 1080-6040.
References
1. Staphylococcus aureus i Escherichia hermaniipri sakharnom diabete u patsientov 2004 g. [Staphylococcus aureus and Escherichia hermanii in diabetes patients] 2004 g. Available at URL: http://www.biomedsearch. com/article/Staphylococcus-aureus-Escherichia-hermanii-in/120468336.html (accessed 09.08.2016).
2. Escherichia blattae, 2009 g. Available at URL: http://lifeinthefastlane.com/fascinella-001/ (accessed 09.08.2016).
3. Escherichia fergusonii, 2012 g. Available at URL: http://www.intuitiveinc.com/vumiehelp/index. htm#VUMICRO/Escherichia_fergusonii.htm (accessed 09.08.2016).
4. Escherichia vulneris, 2006 g. Available at URL: http://zipcodezoo.com/index.php/Escherichia_vulneris (accessed 09.08.2016).
5. Labinskaya A.S., Kostyukova N.N., Ivanova S.M. (eds). Rukovodstvo po meditsinskoy mikrobiologii. Chastnaya meditsinskaya mikrobiologiya i etiologicheskaya diagnostika infektsiy. Kniga 2. Koll. avtorov. [Manual of medical Microbiology. Private medical Microbiology and etiological diagnosis of infections. Book 2. The team of authors]. Moscow: BINOM, 2010, pp. 446-460.
6. Brenner, Don J., Alma C., McWhorter, Jean K., Lette Knutson and Arnold G., Steigerwalt. Escherichia vulneris: a New Species of Enterobacteriaceae Associated with Human Wounds. J. Clin. Microbiol, 15 (6): 11331140. Retrieved 24 October 2012.
7. Savini V., Catavitello C. et al. Multidrug-resistans Escherichia fergusonii: a case of acute cystitis. J. Clin. Microbiol, 2008. 46 (4):1551-2. Doi:10.1128.
8. Popescu G.A. et al. Staphylococcus aureus and Escherichia hermanii in diabetes patient. J.of Infectious, 2004. P. 1080-6040.
