CC BY
22
8
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
кими операционно-анестезиологическим риском и послеоперационной летальностью. Наличие экстрапульмо-нальных метастазов, если имеется полная уверенность в возможности их радикального удаления, не является противопоказанием к операции.
Заключение. С учетом устойчивости метастазов КРР ко всем видам консервативной терапии хирургическое лечение, включая и повторные операции, на сегодняшний день является полностью оправданным и единственно реальным эффективным методом лечения.
С. Б. Ахметова
ИЗУЧЕНИЕ ТОКСИЧНОСТИ СЕСКВИТЕРПЕНОВЫХ ЛАКТОНОВ И ИХ ПРОИЗВОДНЫХ НА КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК PARAMECIUM CAUDATUM
КГМУ, Караганда, Республика Казахстан
Введение. В настоящее время такие биологические модели, как инфузории, широко используются в экспериментальной фармакологии в токсикологических исследованиях. Скорее это связано с тем, что парамеции обладают высокой чувствительностью к изменениям внешней среды, как индикаторы дополнительного биоскрининга. Известно, что многие биологически активные вещества способны вызывать развитие реакции в живых клетках, однако исследования диэтилфосфита арглабина, диэтиламиноаргла-бина, диметиламиноарглабина, бромпроизводного аргла-бина, бромкарбен-производного арглабина на подобного рода биологических моделях не проводили.
Цель исследования — оценка фармакологических эффектов сесквитерпеновых лактонов и их производных при совместной инкубации с клетками инфузорий Paramecium caudatum на их жизнеспособность.
Материалы и методы. Для скрининга на одноклеточной модели использовали диэтилфосфит арглабина, ди-этиламиноарглабин, диметиламиноарглабин, бромпроиз-водное арглабина, бромкарбен-производное арглабина. Культуру клеток Paramecium caudatum (дикий штамм) выращивали на среде с добавлением дрожжей Saccharomyces cerevisiae в качестве источника питания. Клетки, взятые в стационарной фазе роста, инкубировали 30 мин с исследуемым веществом в концентрации 10 мкл. Для оценки эффектов действия исследуемых веществ использовали выживаемость клеток, линейную скорость их движения. Концентрацию живых клеток парамеций определяли подсчетом клеток с использованием камеры Горяева, микроскопа и фотонасадки на микроскоп на USB-камеру 14 Мпикс, которая позволяет подсчитывать число инфузорий, попадающих в поле зрения микроскопа, а также линейную скорость их движения. При оценке выживаемости за единицу принимали число клеток в интактной культуре (без индукции арглабина и его производных).
Результаты. При выращивании инфузорий в интакт-ных условиях инкубации с арглабином и его производными препараты в исследуемой концентрации не проявили токсического действия, не влияли на рост и жизнеспособность инфузорий, а также не изменяли скорость их движения, кроме образца бромкарбен-производного арглабина. Инфузории, подвергнутые инкубации с бромкарбен-про-изводным арглабина, обладали существенно более высокой
чувствительностью к действию вещества, изменяли траектории движения по сравнению с интактными парамециями. В то же время бромкарбен-производное арглабина снижало выживаемость инфузорий. Степень выживаемости парамеций при действии бромкарбен-производного арглабина была в 2 раза ниже, чем в контроле.
Заключение. Экспериментальные исследования показали, что инфузории Paramecium caudatum достаточно чувствительны для проведения данного теста, что выражается в гибели части клеток уже после 30-минутной инкубации с бромкарбен-производным арглабина.
Е.М. Бакурова, Б. Г. Борзенко, И. В. Василенко,
Р. Б. Кондратюк, Б. П. Кондратюк
ТИМИДИНФОСФОРИЛАЗА
И ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ТЕРАПИИ
ФТОРПИРИМИДИНАМИ
ДонНМУ им. М. Горького, ДОПЦ, Донецк, Украина
Введение. Препараты группы 5-фторурацила (5-ФУ) широко используются при лечении больных первично и вторично диссеминированными формами аденокарци-ном (АК) различной локализации. Как препараты 1-й линии терапии распространенного рака желудка, кишечника, молочной железы, они могут быть применены и в составе схем, и в виде монотерапии. Выбор препарата и режима его дозирования для пациентов с неблагоприятным прогнозом, имеющих метастатическое поражение печени и/или легких, крайне важен, во многом предопределяет результат лечения и качество жизни больного. Тимидинфосфорила -за (ТФ, ЕС 2.4.2.4, также известная как PD-ECGF (platelet-derived endothelial cell growth factor)) — ангиогенный фермент, реализующий опухолевый катаболизм фторафура, 5-дезокси-5-фторуридина (метаболит капецитабина), фур-тулона в 5-ФУ. Цитотоксическое действие самого 5-ФУ возможно через его трансформацию в 5-фтордезоксиури-динмонофосфат (ингибитор тимидилатсинтазы) при соче-танной трансферазной активности ТФ и тимидинкиназы. Также известно, что индивидуальная эффективность препаратов зависит от ТФ.
Цель исследования — одновременно изучить фосфори-лазную и трансферазную активности фермента в АК.
Материалы и методы. Выполнено спектрофотометри-ческое исследование видов активности ТФ в тканях опухолей (48 АК желудка, кишечника, 40 АК легких) и в контроле (край резекции). Иммуногистохимически определялись специфический маркер эндотелия сосудов (CD34), а также маркер пролиферации Ki-67.
Результаты. Во всех опухолях преобладал лишь один из видов активности ТФ. Например, если ее трансферазная (анаболическая) активность в опухолях превышала контроль (187,48 ± 22,03 и 106,71 ± 15,21 нмоль/мин-мг; р < 0,05), фосфорилазная (катаболическая) активность была низкой. Соответственно, катаболическая активность ТФ в АК желудка составила 21,92 ± 4,60 нмоль/мин-мг (контроль — 57,82 ± 7,99 нмоль/мин-мг; р < 0,01), в АК колоректальном раке — 25,50 ± 5,48 нмоль/мин-мг (контроль — 47,22 ± 6,76 нмоль/мин-мг; р < 0,01), при раке легкого — 33,84 ± 13,87 нмоль/мин-мг (контроль — 62,04 ± 6,40 нмоль/мин-мг; р < 0,01). Это ведет к повышению уровней тимидина — суб-
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
9
страта для тимидинкиназы — маркера пролиферации. Действительно, установлена прямая связь анаболической активности ТФ с уровнями экспрессии Ki-67 в АК (показатель корреляции Спирмена р = 0,415; p < 0,05). В ряде опухолей (преимущественно при раке легкого), где, наоборот, преобладала катаболическая активность ТФ, создавались индивидуальные условия для накопления продуктов реакции — тимина и 2-дезокси-Б-рибозы (стимуляторов ангиогенеза). Между индивидуальными значениями катаболической активности ТФ в этой выборке и уровнями экспрессии CD34 установлена прямая корреляционная связь (р = 0,668; p < 0,05).
Заключение. Одновременное исследование видов активности ТФ индивидуально в АК различной локализации может служить биохимическим критерием выбора фтор-пиримидина. Так, АК с высокой анаболической активностью ТФ способны активно метаболизировать 5-ФУ. В то же время преобладание фосфорилазной активности обеспечит трансформацию, эффекты предшественников, например капецитабина. Также может быть показана и ан-тиангиогенная терапия, так как катаболическая активность ТФ коррелирует с активацией ангиогенеза.
А.А. Балакина, В.А. Мумятова, В.Д. Сень, А.А. Терентьев ВЛИЯНИЕ АМИНОНИТРОКСИЛЬНЫХ КОМПЛЕКСОВ ПЛАТИНЫ (IV) НА ОКСИДАТИВНЫЙ СТАТУС КЛЕТОК ЛИНИИ MCF-7 ПРИ ИНГИБИРОВАНИИ ФУНКЦИЙ БЕЛКА Р53
ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область
Введение. В настоящее время побочные эффекты и высокую токсичность противоопухолевых препаратов платиновой группы связывают с нарушениями про- и антиокси-дантного баланса и накоплением активных форм кислорода (АФК). Нитроксильные радикалы являются антиоксидан-тами и проявляют разнообразную биологическую активность: способны реагировать с активными радикалами, выступать в качестве катализаторов редокс-реакций и ми-метиков ферментативных систем. В связи с этим актуальным является изучение роли нитроксильных радикалов в составе платина (IV) — нитроксильных комплексов в механизмах противоопухолевого действия.
Цель исследования — изучение активности антиокси-дантной системы в ответ на действие аминонитроксильных комплексов платины различной структуры в условиях подавления функций супрессора опухолей р53.
Материалы и методы. Методология работы включает использование культуры клеток аденокарциномы молочной железы человека MCF-7. Клетки обрабатывали исследуемыми комплексами в присутствии пифитрина-а — ингибитора р53, а затем исследовали экспрессию генов SOD2, GPX1, P21 и определяли содержание маркеров окислительного стресса. Экспрессию генов изучали методом полимеразной цепной реакции в реальном времени, восстановленный глу-татион определяли по реакции с 5,5'-дитиобис(2-нитробен-зойной кислотой), малоновый диальдегид (МДА) — по реакции с тиобарбитуровой кислотой.
Результаты. Показано, что все изученные комплексы вызывали накопление МДА в опухолевых клетках после 12 ч действия. Обнаруженное увеличение показателя в 3—4 раза по сравнению с контролем говорит об индукции обра-
зования АФК и развитии окислительного стресса. Выявлено, что комплексы платины (IV) не оказывают существенного влияния на содержание восстановленного глутатиона в опухолевых клетках. Однако ингибирование белка р53 вызывало значительное снижение концентрации глутати-она как в контроле, так и в экспериментальных образцах. Обнаружено, что изученные комплексы индуцировали существенное увеличение экспрессии генов GPX1, SOD2 и P21. Подавление функций р53 приводило к значительному снижению экспрессии изученных генов.
Заключение. Выявленная взаимосвязь между подавлением функций р53 и изменениями в функционировании антиоксидантной системы говорит о важной роли белка р53 в механизмах клеточного ответа на уровне окислительно-восстановительного баланса при действии аминони-троксильных комплексов платины.
Н.П. Бгатова, И. С. Куликова, Ю.С. Гаврилова, Ю.И. Бородин, В. И. Коненков
ПРОГНОСТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ МАРКЕРОВ ПРОЛИФЕРАЦИИ, АНГИО- И ЛИМФАНГИОГЕНЕЗА ПРИ ГИПЕРКЕРАТОЗЕ И ПЛОСКОКЛЕТОЧНОМ РАКЕ НИЖНЕЙ ГУБЫ
НИИКЭЛ, Новосибирск
Введение. В последнее время возросла заболеваемость плоскоклеточным раком нижней губы (РНГ). По данным статистики, рак губы диагностируется чаще всего на III— IV стадиях. Неблагоприятный прогноз плоскоклеточного РНГ связан с метастазированием в регионарные лимфатические узлы. Для данной онкопатологии актуальной является ранняя диагностика злокачественного роста, которая позволит избежать травмирующих оперативных вмешательств и возможного метастазирования.
Цель исследования — выявление лимфангиогенеза, ан-гиогенеза и пролиферативной активности клеток при гиперкератозе, плоскоклеточном ороговевающем и неорого-вевающем РНГ.
Материалы и методы. В исследование были включены 3 группы больных: 1-я группа была представлена 22 пациентами с гиперкератозом нижней губы; 2-я состояла из 15 больных с плоскоклеточным неороговевающим РНГ I стадии (T1N0M0); 3-я группа была образована 34 лицами с плоскоклеточным ороговевающим РНГ I стадии (T1N0M0). Биоптаты нижней губы из очага поражения обрабатывали по стандартной методике для получения парафиновых срезов для иммуногистохимического окрашивания. Для выявления маркеров пролиферации, кровеносных и лимфатических сосудов использовали моноклональные антитела к К1-67 (Novocastra), CD34, Podoplanin (Monosan), LYVE-1 (Abcam). Оценивали объемную плотность кровеносных и лимфатических сосудов, численную плотность пролифе-рирующих клеток.
Результаты. Наименьшие значения объемной плотности CD34+-кровеносных, LYVE-1+- и Podoplanin+-лимфа-тических сосудов и численной плотности пролиферирующих клеток (Кь67+-клеток) были выявлены при гиперкератозе (предраке) нижней губы. Было показано, что при неорого-вевающей форме плоскоклеточного РНГ в опухолевом узле на 88 % больше объемная плотность CD34+-кровенос-
