CC BY
127
№ 3 - 2013 г. 03.00.00 биологические науки
УДК 616.98:578.828.6-076
СУБТИП-СПЕЦИФИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СОВРЕМЕННЫХ ВАРИАНТОВ ВИЧ-1, ВЫЯВЛЕННЫЕ В СИСТЕМЕ IN VITRO
Н. В. Унагаева1, Ю. В. Никонорова1, Н. А. Бледных1,
2 2 1 Ф. О. Мирджамалова , Н. Я. Черноусова , Н. М. Гашникова
1ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» (Кольцово, Новосибирская область)
ГБУЗ НСО «Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями» (Кольцово, Новосибирская область)
Исследованы репродуктивные свойства и цитопатическое действие на клетки современных изолятов ВИЧ-1 субтипов А, В и новой циркулирующей рекомбинантной формы CRF02_AG^ на модели первичной культуры мононуклеарных клеток периферической крови. Изучение биологических свойств генетических вариантов ВИЧ-1 при экспериментальной моноинфекции показало, что изоляты CRF02_AGM. обладали более высокими репродуктивными свойствами по сравнению с ВИЧ-1 субтипов А и В. Культивирование ВИЧ-1 субтипа А сопровождалось выраженной цитодеструкцией клеток независимо от скорости репродукции, тогда как ВИЧ-1 CRF02_AGM. и при высокой вируспродукции оказывал слабое цитопатическое действие на клетки.
Ключевые слова: ВИЧ-1, субтипы ВИЧ, репродуктивные свойства ВИЧ, патогенез ВИЧ.
Унагаева Наталья Владимировна — младший научный сотрудник отдела ретровирусов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», рабочий телефон: 8 (383) 363-48-40, e-mail:
Никонорова Юлия Владимировна — младший научный сотрудник отдела ретровирусов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», рабочий телефон: 8 (383) 363-48-40, e-mail: [email protected]
Бледных Наталья Анатольевна — стажер-исследователь отдела ретровирусов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», рабочий телефон: 8 (383) 363-48-40
Черноусова Наиля Якубовна — главный врач ГБУЗ НСО «Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями», е-mail: [email protected]
Мирджамалова Феруза Одилжоновна — врач-инфекционист ГБУЗ НСО «Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями», e-mail: [email protected]
Гашникова Наталья Матвеевна — кандидат биологических наук, заведующая отделом ретровирусов ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор», рабочий телефон: 8 (383) 363-48-40, e-mail: [email protected]
Введение. Эпидемия вируса иммунодефицита человека (ВИЧ-инфекции) в мире продолжает развиваться. При этом в отдельных регионах циркулируют отличающиеся генетические варианты ВИЧ первого типа (ВИЧ-1) [9]. Поэтому актуальным является выделение и молекулярно-биологическое изучение российских изолятов ВИЧ. В ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» с 2009 года на постоянной основе осуществляются работы по созданию репрезентативной коллекции ВИЧ. Такая коллекция необходима для изучения патогенеза циркулирующих вирусов, оценки эффективности и разработки новых вакцинных и терапевтических препаратов против ВИЧ, диагностических тест-систем. Коллекция включает современные эпидемиологически значимые варианты, отражающие гетерогенность циркулирующей в стране популяции ВИЧ-1.
Целью работы являлось изучение репродуктивных и цитопатических особенностей современных российских генетических вариантов субтипов А, В и циркулирующей рекомбинантной формы (circulating recombinant forms) CRF02_AG/A ВИЧ-1 при культивировании вирусов на мононуклеарных периферических клетках крови (МПК).
Материалы и методы. В работе использованы варианты ВИЧ-1, выделенные от инфицированных ВИЧ-1 пациентов, входящие в коллекцию ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». Культивирование изолятов ВИЧ проводили на МПК, согласно протоколу ВОЗ [13]. Для выделения МПК использовали по 10 мл крови серонегативных доноров с добавлением в качестве антикоагулянта 80 мкл 0,5 М раствор ЭДТА. Мононуклеарную фракцию клеток крови выделяли центрифугированием в градиенте фикола (р = 1,080 г/мл) при 1500 об/мин в течение 30 мин с последующей двукратной отмывкой культуральной средой RPMI-1640. Концентрацию и жизнеспособность клеток подсчитывали, используя 0,4 % раствор трипанового синего. Выделенные МПК разводили полной ростовой средой (среда RPMI-1640, 20 % сыворотки плода коровы, 2 mM L-глутамина, 20 мкг/мл гентамицина) до конечной концентрации 2 х-Ю6 кл/мл, добавляли фитогемагглютинин (ФГА) до конечной концентрации 5 мкг/мл. Клетки инкубировали в течение 3-х дней в атмосфере 5 % СО2 при 37 °С, 2 х 106 ФГА-стимулированных МПК, полученных от двух здоровых доноров, смешивали и заражали исследуемыми вариантами ВИЧ-1.
Для заражения клеток использовали криоконсервированную суспензию изолятов ВИЧ-1, охарактеризованную по концентрации вирусного белка р24, из рабочей коллекции ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор». Длительность культивирования ВИЧ-1 составляла 11 суток. На 4, 7, 11й дни проводили отбор культуральной жидкости для определения уровня репродукции ВИЧ, оценивали цитопатическое действие вируса: наличие синцитиев, цитодеструкция клеток (изменение формы клеток, присутствие грануляции цитоплазмы), гибель клеток (накопление клеточного дебриса). Репродукцию вируса определяли по накоплению вирусспецифического белка p24 в культуральной жидкости, концентрацию которого выявляли с использованием тест-системы «ВИЧ-1 р24-антиген-ИФА — БЕСТ» в соответствии с инструкцией фирмы-производителя. Статистическую обработку данных проводили методом вариационной статистики с помощью программы Mirosoft «Excel 7.0».
Результаты исследований. В музее ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» депонировано более 50-ти изолятов ВИЧ-1, выделенных нами от пациентов, проживающих в разных городах России.
Коллекция современных ВИЧ включает основные генетические варианты вируса, циркулирующие в стране. Для исследования биологических особенностей ВИЧ-1 нами были взяты наиболее распространенные в России ВИЧ-1 субтипов А, В и циркулирующей рекомбинантной формы CRF02_AG/A, активно распространяющейся в Сибирском регионе. Из ВИЧ-1, входящих в коллекцию, было отобрано 15 вирусных изолятов (по 5 представителей каждого генетического варианта), обладающих одинаковой тропностью (CCR5), не содержащих в геноме мутаций устойчивости к препаратам, выделенные от пациентов с прогрессирующей инфекцией, не принимавших антиретровирусной терапии. Изоляты ВИЧ были поделены на две группы в соответствии с их репродуктивными характеристиками (скорость и динамика накопления вирусного белка р24), определенными ранее при изоляции вирусов из МПК инфицированных пациентов. В первую группу были выделены варианты ВИЧ с более медленным темпом роста и умеренным накоплением р24 (slow/low, менее 100 000 пкг/мл) во вторую — с быстрым темпом роста и высоким уровнем р24 (rapid/high, более 100 000 пкг/мл).
С целью сравнительного анализа репродуктивных и биологических свойств вариантов ВИЧ смесь ФГА-стимулированных МПК, полученных от двух здоровых доноров, заражали аликвотами вируссодержащей суспензии ВИЧ, равными по содержанию вирусного белка р24 (30 нг/мл), как описано в материалах и методах. Культивирование инфицированных ВИЧ клеток осуществляли в течение 11 -ти дней. В процессе культивирования вирусов оценивали скорость и уровень накопления белка р24, производили визуальную оценку состояния клеточной культуры, рис. 1.
А
В
Рис. 1. Особенности цитопатического действия ВИЧ при инфекции МПК in vitro; А — неинфицированные МПК здорового донора, стимулированные фитогемагглютинином,
Б — выраженное цитопатическое действие ВИЧ при инфекции в культуре МПК (сочетание цитодеструкции, образования гигантских клеток — синцитиев, гибели клеток), В — МПК, инфицированные изолятом ВИЧ, не обладающим выраженным цитопатическим действием (образование синцитиев, изменение формы клеток); фотография изображений при увеличении в 300 раз
350000 300000 _= 250000
200000
%
К 150000
з_
= штаа
О
50000
0
Рис. 2. Динамика накопления вирусного белка р24 ВИЧ-1 при культивировании генетических вариантов ВИЧ-1 субтипов А, В и CRF02_AG/A в группах slow/low (менее 100 000 пкг/мл) и rapid/high (более 100 000 пкг/мл)
Выявленные биологические и генетические характеристики изолятов ВИЧ приведены в табл. 1 и 2. Данные по динамике накопления р24 ВИЧ-1 представлены на рис. 2 и 3.
Обсуждение результатов. Изучение биологических характеристик циркулирующих и появляющихся новых вариантов ВИЧ-1 представляется крайне актуальным в связи с тем, что генетические варианты ВИЧ могут различаться по своим биологическим свойствам — по скорости эволюции и прогрессирования заболевания, иметь отличия в механизмах развития лекарственной устойчивости и потенциале для возникновения резистентности, по проявлению ответа на применяемую антиретровирусную терапию, иметь преимущества при определенных путях трансмиссии вируса [3, 5].
Генетический вариант CRF02_AG/A ВИЧ-1 был впервые выявлен нами в Новосибирской области (НСО) в 2009 году [1], а в 2011 году было доказано, что CRF02_AG/A ВИЧ-1 появился в результате рекомбинации двух вирусных вариантов — российского ВИЧ субтипа А и среднеазиатского вируса CRF02_AG [4]. В течение последних четырех лет регистрируется неуклонный рост выявления описанной нами CRF02_AG/A среди новых ВИЧ-инфицированных НСО (в 2006 году — 2 %, в 2008 — 28 %, в 2009 более 50 %, в 2012 — 73 % среди исследованных за год 240 случаев), данный генетический вариант выявляется в 25 % случаев инфицирования в Новокузнецке (неопубликованные данные), регистрируется среди инфицированных ВИЧ-1 на других территориях России [2]. В связи с тем, что, по крайней мере, в Сибирском регионе России наблюдается активное замещение основного генетического варианта — ВИЧ-1 субтипа А, определявшего все предшествующие годы развитие эпидемии ВИЧ-инфекции в стране, новым ВИЧ-1 CRF02_AG/A, необходимо было провести сравнительные исследования биологических свойств данных вирусных вариантов. Кроме того, в исследование были включены варианты ВИЧ-1 субтипа В, циркулирующего на всем протяжении эпидемии на разных территориях РФ со стабильной распространенностью 4-6 % [12].
В связи со способностью ВИЧ-1 к рекомбинации (обмену участками генома между копиями РНК с образованием рекомбинантных форм вируса) для выявления отличий в репликативных свойствах отдельных вирусных штаммов проводят изучение
A CRIQ2 AG/A В А CFiHQAG/A В
экспериментальной моноинфекции ВИЧ invitro [11]. В данном исследовании отобранные для изучения изоляты ВИЧ-1 культивировались одновременно при одинаковых условиях (питательная среда, клетки, количество взятого для заражения ВИЧ, нормированное по содержанию вирусного белка р24). Для корректности учета данных изоляты ВИЧ-1 по схожести характеристик были поделены на две группы — с медленным и быстрым типом репродукции. В группе slow/low преимущество по скорости и количеству накопления белка р24 было выявлено у ВИЧ субтипа В. Цитопатическое действие и синцитеобразование более ярко проявлялось у изолятов ВИЧ субтипа A (табл. 1).
Таблица 1
Биологические и генетические свойства изолятов ВИЧ-1 (группа slow/low)
Код изолята ВИЧ Субтип ВИЧ-1 Синцитеобразование на МПК Цитопатический эффект на МПК Накопление р24 (нг/мл) на 11-е сутки
6949 A SI ++ ++ 14,6
2065 A SI + ++ 56,5
6937 A SI + +++ 14,1
6939 CRF02_AG/A NSI ++ 56,0
6443 CRF02_AG/A SI ++ ++ 19,7
4011 В SI+ ++ 78,0
4457 В SI + + 59,2
6542 B SI ++ ++ 63,8
4867 B NSI ++ 37,5
В группе изолятов с высоким темпом накопления белка р24 наиболее высокие показатели концентрации вирусного белка были выявлены у изолятов CRF02_AG/А ВИЧ-1 (рис. 2). Цитопатическое действие на клетки и образование синцитиев в большей степени было выражено при культивировании изолятов ВИЧ-1 субтипа А (табл. 2).
Таблица 2
Биологические и генетические свойства изолятов ВИЧ-1 (группа rapid/high)
Код изолята ВИЧ Субтип ВИЧ-1 Синцитеобразование на МПК Цитопатический эффект на МПК Накопление р24 (нг/мл) на 11 сутки
2225 A SI +++ ++ 120,5
2273 A SI ++ +++ 283,7
2240 CRF02_AG/A SI + ++ 329,5
3124 CRF02_AG/A SI + + 122,5
6909 CRF02_AG/A SI + ++ 348,0
6999 B NSI + 209,4
Анализ данных по всем исследованным изолятам вируса с учетом принадлежности изолятов к генетическому варианту ВИЧ выявил, что для вариантов новой
рекомбинантной формы CRF02_AG/A ВИЧ-1 характерны более высокие темпы репродукции и больший уровень накопления белка р24 (рис. 3). Аналогичные исследования, проведенные для ВИЧ-1 субтипов A, G и классической CRF02_AG, циркулирующих в ряде стран Африки, показали, что изоляты циркулирующей рекомбинантной формы CRF02_AG в системе in vitro обладают более высокими репликативными характеристиками по сравнению с «родительскими» субтипами A и G
[71-
Наблюдения за группами пациентов, инфицированных отличающимися генетическими вариантами ВИЧ-1, выявили, что в крови у пациентов, инфицированных CRF02_AG ВИЧ-
1, не имеющих клинически выраженных признаков прогрессирования заболевания, регистрируется более высокий уровень концентрации вирусной РНК по сравнению с лицами, инфицированными не CRF02_AG вариантами ВИЧ-1. Исследование репликативных свойств CRF02_AG ВИЧ-1 in vitro также выявило у данной рекомбинантной формы ВИЧ преимущества при сравнении с «чистыми» субтипами ВИЧ-1 [6]. Связь между репродуктивными свойствами in vitro, уровнем концентрации РНК ВИЧ в сыворотке асимптоматических больных и степенью распространенности ВИЧ была продемонстрирована и в работах других авторов [8].
Изоляты ВИЧ субтипов А и В имели близкие репродуктивные свойства. Необходимо отметить, что аналогичное исследование репродуктивных свойств российских изолятов ВИЧ субтипа А проводилось в начале 2000-х годов [10]. Данные, полученные для изолятов субтипа А ВИЧ-1 в настоящем исследовании, позволяют заключить, что современные вирусы, относящиеся к тому же генетическому варианту, превосходят по репликативным характеристикам циркулирующие ранее в РФ ВИЧ-1 субтипа А в 101000 раз.
Культивирование изолятов ВИЧ-1 субтипа А сопровождалось более выраженной цитодеструкцией МПК независимо от скорости их репродукции, тогда как даже при высокой вируспродукции изоляты CRF02_AGM. оказывали слабое цитопатическое действие на чувствительные клетки, варианты ВИЧ-1 субтипа В по этому признаку занимали промежуточное положение.
Рис. 3. Усредненные данные по динамике накопления вирусного белка р24 при культивировании генетических вариантов ВИЧ субтипов А, В и CRF02_AG/А
Выводы. Изучение биологических свойств изолятов ВИЧ-1 показало, что в процессе развития эпидемии ВИЧ в России происходит отбор и распространение вариантов ВИЧ-1 субтипа А, имеющих более высокие репродуктивные показатели.
Российские изоляты CRF02_AG/A обладают более высокими репродуктивными свойствами при слабо выраженном цитопатическом действии на клетки по сравнению с вариантами ВИЧ-1 субтипов А и В, способностью в короткие сроки поражать большое количество клеток.
Наличие описанных в работе особенностей нового рекомбинантного ВИЧ CRF02_AGM_, а именно — быстрое размножение вируса без существенного разрушения чувствительных к вирусу клеток, позволяет предположить, что данный генетический вариант ВИЧ, возможно, способен поддерживать более высокую виремию в крови инфицированных, тем самым усиливая вероятность заражения ВИЧ при контактах со здоровыми людьми. Суммируя данные впервые проведенного сравнительного исследования биологических свойств современных циркулирующих в России ВИЧ-1, можно заключить, что биологические особенности активно распространяющегося в стране CRF02_AGM. могут позволить отнести этот вирус к более патогенным вариантам ВИЧ-1.
В связи с активным распространением CRF02_AGM. ВИЧ-1 на территории России необходимо проведение более детальных исследований структурно-функциональных особенностей нового вирусного варианта и особенностей патогенеза ВИЧ-инфекции, вызванной CRF02_AGM. ВИЧ-1.
Работа проводилась с использованием УСУ при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации, Государственный контракт № 14.518.11.7062; при финансовой поддержке по гранту НШ-2996.2012.4 по государственной поддержке ведущих научных школ Российской Федерации.
Список литературы
1. Гашникова Н. М. Изучение свойств изолятов CRF02_AG ВИЧ-1, циркулирующих на территории Новосибирской области / Н. М. Гашникова, П. Ф. Сафронов, Ю. В. Никонорова [и др.] // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. — 2011. — № 3. — С. 38-43.
2. Саухат С. Р. Выявление случаев инфицирования рекомбинантными формами 02_AG ВИЧ-1 на территории ЮФО и СКФО РФ / С. Р. Саухат, А. Б. Шемшура, Д. С. Колпаков [и др.] // Материалы X съезда Всероссийского научнопрактического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов «Итоги и перспективы обеспечения эпидемиологического благополучия населения Российской Федерации». — М., 2012. — С. 423.
3. Abecasis A. B. Quantifying differences in the tempo of human immunodeficiency virus type 1 subtype evolution. / А. В. Abecasis, А. М. Vandamme, Р. Lemey // Journal Virology. — 2009. — Vol. 83. — Р. 12917-24.
4. Baryshev P. B. Genetic characterization of HIV-1 strains recombinant form AG circulating in Siberia, Russia / P. B. Baryshev, V. V. Bogachev, N. M. Gashnikova // Archives of Virology. — 2012. — Vol. 157. — P. 2335-2341.
5. Impact of HIV-1 viral subtype on disease progression and response to antiretroviral therapy / P. J. Easterbrook [et al.] // J. Int. AIDS Soc. — 2010. — Vol. — 13. — Published online 2010 February 3. Doi : 10.1186/1758-2652-13-4
6. Higher viral load may explain the dominance of CRF02_AG in the molecular epidemiology of HIV in Ghana. / L. Fischetti, O. Opare-Sem, D. Candotti [et al.] //
AIDS. — 2004. — Vol. 18. — P. 1208-1210. — doi : 10.1097/00002030-20040521000017.
7. Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) circulating recombinant form 02_AG (CRF02_AG) has a higher in vitro replicative capacity than its parental subtypes A and G / F. A. J. Konings, Sh. T. Burda, M. M. Urbanski [et al.] // Journal of Medical Virology. — 2006. — Vol. 78 (5). — P. 523-534.
8. The predominance of Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) circulating recombinant form 02 (CRF02_AG) in West Central Africa may be related to its replicative fitness / F. N. Harr, Y. Gali, G. Vanham [et al.] // Retrovirology. — 2006. — Vol. 3. — P. 40. — Published online 2006 July 3. Doi : 10.1186/1742-4690-3-40.
9. WHO-UNAIDS Network for HIV Isolation and Characterisation. Global trends in molecular epidemiology of HIV-1 during 2000-2007 / J. Hemelaar, E. Gouws, P. D. Ghys, S. Osmanov // AIDS. — 2011. — Vol. 25 (5). — P. 679-89.
10. Papuashvili M. N. Characteristics of HIV-1 env V3 loop sequences for subtype A1 variant spread in Eastern Europe / M. N. Papuashvili, A. S. Novokhatsky, T. I. Shcherbakova // Infection, Genetics and Evolution. — 2005. — Vol. 5. — P. 45-53.
11. R5 human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) replicates more efficiently in primary CD4^ T-cell cultures than X4 HIV-1 / B. Schweighardt, A. M. Roy, D. A. Meiklejohn [et al.] // J. Virol. — 2004. — Vol. 78. — P. 9164-9173.
12. New insights into the origin of the HIV type 1 subtype A epidemic in former Soviet Union’s countries derived from sequence analyses of preepidemically transmitted viruses / M. M. Thomson, E. V. de Parga, A. Vinogradova [et al.] // AIDS Res. Hum. Retroviruses. — 2007. — Vol. 23 (12). — P. 1599-1604.
13. WHO-UNAIDS Guidelines for Standard HIV Isolation and Characterization Procedures // Second Edition, Produced by WHO-UNAIDS HIV Vaccine Initiative. — 2002.
SUBTYPE-SPECIFIC FEATURES OF MODERN HIV-1 OPTIONS, REVEALED IN SYSTEM IN VITRO
111 2 N. V. Unagayeva , Y. V. Nikonorova , N. A. Blednykh , F. O. Mirdzhamalova ,
N. Y. Chernousova2, N. M. Gashnikova1
1FBSE SRC VB « Vector» (Koltsovo, Novosibirsk region)
2SBHE NR «Center for AIDS and virulent disease Control and prevention» (Koltsovo,
Novosibirsk region)
Genesial properties and cytopathic action on cells of modern HIV-1 isolates of subtypes A, B and the new circulating recombinant form CRF02_AG/A on model of primary culture of mononuclear cells of peripheric blood are investigated. Studying of biological properties of genetic HIV-1 options at experimental monoinfection showed that CRF02_AG/A isolates possessed higher genesial properties in comparison with HIV-1 of subtypes A and B. Cultivation of HIV-1 of subtype A was accompanied by the expressed cytodestruction of cells regardless of reproduction rate whereas CRF02_AG/A HIV-1 and at high virusproduction had weak cytopathic effect on cells.
Keywords: HIV-1, HIV subtypes, HIV genesial properties, HIV pathogenesis.
About authors:
Unagayeva Natalia Vladimirovna — junior research associate of retroviruses department at FBSE SRC VB «Vector», office phone: 8 (383) 363-48-40, e-mail: [email protected]
Nikonorova Julia Vladimirovna — junior research associate of retroviruses department FBSE SRC VB «Vector», office phone: 8 (383) 363-48-40, e-mail: [email protected]
Blednykh Natalia Anatolyevna — trainee-researcher of retroviruses department at FBSE SRC VB «Vector», office phone: 8 (383) 363-48-40
Chernousova Nailya Yakubovna — chief physician at SBHE NR «Center for AIDS and virulent disease Control and prevention», e-mail: [email protected]
Mirdzhamalova Feruza Odilzhonovna — infectiologist at SBHE NR «Center for AIDS and virulent disease Control and prevention», e-mail: [email protected]
Gashnikova Natalia Matveevna — candidate of biological sciences, head of retroviruses department at FBSE SRC VB «Vector», office phone: 8 (383) 363-48-40, e-mail: [email protected]
List of the Literature:
1. Gashnikova N. M. Studying of properties of CRF02_AG HIV-1 isolates circulating in the territory of the Novosibirsk region / N. M. Gashnikova, P. F. Safronov, Y. V. Nikonorova [etc.] // Magaz. of microbiology, epidemiology and immunobiology. — 2011. — № 3. — P. 38-43.
2. Saukhat S. R. Identification of contagion cases by recombinant HIV-1 02_AG forms in the territory of the Southern Federal District and North Caucasus federal district Russian Federation / S. R. Saukhat, A B. Shemshura, D. S. Kolpakov [etc.] // Materials of X congress of the All-Russian scientific and practical society of epidemiologists, microbiologists and parasitologists «Results and prospects of ensuring epidemiological wellbeing of the population of the Russian Federation». — M, 2012. — P. 423.
3. Abecasis A. B. Quantifying differences in the tempo of human immunodeficiency virus type 1 subtype evolution. / A. B. Abecasis, A. M. Vandamme, P. Lemey // Journal Virology. — 2009. — Vol. 83. — P. 12917-24.
4. Baryshev P. B. Genetic characterization of HIV-1 strains recombinant form AG circulating in Siberia, Russia / P. B. Baryshev, V. V. Bogachev, N. M. Gashnikova // Archives of Virology. — 2012. — Vol. 157. — P. 2335-2341.
5. Impact of HIV-1 viral subtype on disease progression and response to antiretroviral therapy / P. J. Easterbrook [et al.] // J. Int. AIDS Soc. — 2010. — Vol. — 13. — Published online 2010 February 3. Doi : 10.1186/1758-2652-13-4
6. Higher viral load may explain the dominance of CRF02_AG in the molecular epidemiology of HIV in Ghana. / L. Fischetti, O. Opare-Sem, D. Candotti [et al.] // AIDS. — 2004. — Vol. 18. — P. 1208-1210. — doi : 10.1097/00002030-20040521000017.
7. Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) circulating recombinant form 02_AG (CRF02_AG) has a higher in vitro replicative capacity than its parental subtypes A and G / F. A. J. Konings, Sh. T. Burda, M. M. Urbanski [et al.] // Journal of Medical Virology. — 2006. — Vol. 78 (5). — P. 523-534.
8. The predominance of Human Immunodeficiency Virus type 1 (HIV-1) circulating recombinant form 02 (CRF02_AG) in West Central Africa may be related to its
replicative fitness / F. N. Harr, Y. Gali, G. Vanham [et al.] // Retrovirology. — 2006. — Vol. 3. — P. 40. — Published online 2006 July 3. Doi : 10.1186/1742-4690-3-40.
9. WHO-UNAIDS Network for HIV Isolation and Characterisation. Global trends in molecular epidemiology of HIV-1 during 2000-2007 / J. Hemelaar, E. Gouws, P. D. Ghys, S. Osmanov // AIDS. — 2011. — Vol. 25 (5). — P. 679-89.
10. Papuashvili M. N. Characteristics of HIV-1 env V3 loop sequences for subtype A1 variant spread in Eastern Europe / M. N. Papuashvili, A. S. Novokhatsky, T. I. Shcherbakova // Infection, Genetics and Evolution. — 2005. — Vol. 5. — P. 45-53.
11. R5 human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) replicates more efficiently in primary CD4^ T-cell cultures than X4 HIV-1 / B. Schweighardt, A. M. Roy, D. A. Meiklejohn [et al.] // J. Virol. — 2004. — Vol. 78. — P. 9164-9173.
12. New insights into the origin of the HIV type 1 subtype A epidemic in former Soviet Union’s countries derived from sequence analyses of preepidemically transmitted viruses / M. M. Thomson, E. V. de Parga, A. Vinogradova [et al.] // AIDS Res. Hum. Retroviruses. — 2007. — Vol. 23 (12). — P. 1599-1604.
13. WHO-UNAIDS Guidelines for Standard HIV Isolation and Characterization Procedures // Second Edition, Produced by WHO-UNAIDS HIV Vaccine Initiative. — 2002.
