CC BY
52
STRUCTURAL ORGANIZATION OF THE PARAVASALCONNECTIVE TISSUEIN-WALLBLOOD VESSELS OF THEILEUMIN OLD AGE
V.V.NICKEL, A.A. KASIMTSEV, V.P. EFREMOVA
Krasnoyarsk StateMedical Universitynamed after professorV.F.Voyno-Yasenetsky
The study of the structural organization of the paravasal connective tissue in-wall blood vessels of the ileum in men aged 61-74 years (old age). We investigated drugs ileum 30 corpses of men who died of causes unrelated to diseases of the digestive system. We describe the spatial orientation of the fibers of the paravasal. connective tissue Found that in this age in the fibrous stroma is largely dominated by collagen fibers and constitute 69.2%. The number of elastic fibers for this age group is also quite high 19.1%, indicating that a large blood vessel contractility.
Key words: paravasal connective tissue, blood vessels, in-wall of the ileum, advanced age.
УДК: 616.4-099-091.8
СТРУКТУРНО-КЛЕТОЧНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНОВ ПРИ ГИПЕРСЕЛЕНОЗЕ
О.В. НИКИТЕНКО, И.И. КОШЕЛЕВА*
При пероральном введении токсической дозы селенита натрия подопытным животным (крысы-самцы линии Вистар) лимфоидные органы реагируют структурно-функциональными преобразованиями, направленными на усиление защитных процессов в организме, но они оказываются неадекватными токсической нагрузке.
Ключевые слова: лимфатический регион подвздошной кишки, тимус, селезенка, подвздошный лимфатический узел, селенит натрия, пероральное введение.
Незаменимый биотик селен должен обязательно поступать в организм человека, поскольку он является необходимой частью селенсодержащих белков, участвующих в антиоксидантной защите организма [1]. Вместе с тем, селен может проявлять себя как прооксидант при избыточном поступлении в организм и оказывать негативное влияние [5,8,17].
Одними из первых на воздействие различных факторов внешней и внутренней среды [4,10], реагируют лимфоидные органы комплексом морфофункциональных изменений. При этом огромная роль отводится пограничным лимфоидным структурам, желудочно-кишечного тракта, которые находятся в месте всасывания данного микроэлемента, а именно лимфатическому региону подвздошной кишки [7].
Цель исследования — выявление особенностей структурно-клеточных перестроек лимфатического региона тонкой кишки и лимфоидных органов (тимуса, селезенки, подвздошного лимфатического узла) при пероральном способе введения селенита натрия в токсической дозе.
Материалы и методы исследования.В эксперименте использовали белых крыс-самцов линии Wistar, массой тела 180200г, 7-месячного возраста. Животных включали в эксперимент после двух недель адаптации к условиям вивария. Содержание, кормление, уход и выведение из эксперимента крыс осуществляли в соответствии с требованиями санитарных правил № 1045 -73 от 06.04.73., приказа №755 от 12.08.1977 МЗ СССР, правил проведения качественных клинических испытаний в РФ (утвержденными МЗ РФ 29.12.98), положений Хельсинкской декларации 2000г. Животные были разделены на две группы. Первая группа (контроля) состояла из интактных животных. Животным второй группы в течение 5 дней перорально вводили селенита натрия из расчета 5 мг/кг массы животного, что соответствует токсической дозе [16].
Объектом исследования служили тимус, брыжейка тонкой кишки, участок подвздошной кишки с пейеровой бляшкой и верхний брыжеечный лимфатический узел, селезенка, подвздошный лимфатический узел, кровь. Забой животных проводили на 6 сутки (пятикратное введение препарата).
Материал подвергали гистологической обработке по стандартной методике, на ротационном микротоме изготавливали срезы толщиной 10 и 5 мкм), срезы окрашивали гематоксилином и эозином, азур II - эозином, по Ван Гизону [11,13]. Анализ
структурных и клеточных элементов производили с помощью МБС-10,микроскопаЛОМО Микмед-2.
Мазки периферической крови для подсчета лейкограммы готовили по общепринятым методам, окрашивали по Романовскому-Гимзе (азур II - эозином). Для определения процентного соотношения отдельных форм лейкоцитов под иммерсионной системой подсчитывали не менее 200 лейкоцитов. Для оценки степени выраженности эндогенной интоксикации рассчитывали лейкоцитарный индекс интоксикации по формуле Кальф-Калифа [9].
Регистрацию ВНиСММ плазмы крови осуществляли по методу М.Я. Малаховой [12] в ультрафиолетовой области спектра на спектрофотометре ЛОМО СФ - 26.
Количественные данные подвергали статистической обработке с использованием пакета прикладных программ 8ТЛТІ8ТІСЛ 6,0. На первом этапе статистического анализа проводили тест на нормальность распределения признаков (критерии Колмогорова-Смирнова, Шапиро-Уилка). Статистическую обработку проводили по методике, применяемой для нормального распределения признаков. Различия между независимыми выборками определяли с использованием ^теста. Критическая величина значимости различий принята на уровне р<0,05 [2; 15].
Результаты и их обсуждение. После пятикратного введения селенита натрия в органах, с которыми он контактирует при пероральном применении, выявлены следующие преобразования.
В стенке подвздошной кишки отметили уменьшение общей площади среза по сравнению с контрольной. В составе ее снизилось число эпителиоцитов. В структуре ворсинки под действием селенита натрия происходит уменьшение площади кровеносного капилляра. Межклеточные пространства так же уменьшаются, и это косвенно указывает на уменьшение образования тканевой жидкости. Доля лимфатического капилляра при этом возрастает, увеличивается численность митотически активных клеток.
Общая площадь пейеровой бляшки в стенке кишки увеличивается. В ее структуре нарастает число вторичных лимфоидных узелков, с увеличением в них площади герминативного центра (рис.1). Однако в самом герминативном центре и в межузел-ковой зоне происходит уменьшение числа клеток лимфоидного ряда. Вследствие чего можно предположить, что токсическая доза селенита натрия оказывает супрессивное влияние на деление и созревание клеток в лимфоидных образованиях стенки кишки.
Осталась неизменной площадь верхнего брыжеечного (регионарного) лимфатического узла, но изменилась его структура. Наиболее существенно увеличилась площадь коркового вещества, с возрастанием в его структуре числа и площади вторичных лимфоидных узелков (рис.2).
Площади коркового плато и паракортикальной зоны так же возрастают, что свидетельствует об увеличении площади Т -зависимой зоны. Несмотря на то, что общее количество клеток увеличивается, численность клеток лимфоидного ряда уменьшается, а число дегенерирующих форм максимально возрастает.При этом резко уменьшается площадь мозгового вещества, как за счет мозговых тяжей, так и мозговых синусов. К/М индекс на 6 сутки составляет 1,09±0,11, что по определению Ю.И. Бородина [3] соответствует промежуточному типу строения регионарного лимфатического узла.
В подвздошном (отдаленном) лимфатическом узле в этот период эксперимента значения общей площади среза, площади мозгового вещества и синусной системы меньше контрольных значений в 2 раза. В мозговых синусах возрастает количество малых и средних лимфоцитов (в среднем на 30%), что, вероятно, связано с затруднением процессов транспорта их из узла. Кроме того, в обеих зонах мозгового вещества увеличивается количество дегенерирующих клеток.
Вместе с тем, изменения в структуре подвздошного лимфатического узла можно оценить как компенсаторные, они направлены на усиление детоксикационной функции, с которой не справляются лимфоидные структуры региона тонкой кишки. Площадь коркового вещества увеличивается (в 1,5 раза), преобладает площадь Т-зависимой зоны, К/М индекс имеет максимальное значение - 3,08±1,0, морфотип узла становится компактным. В корковом веществе возрастают площади паракортикаль-ной зоны, вторичных лимфоидных узелков, за счет увеличения в их составе количества клеток лимфоидного ряда (рис. 3).
* Омская государственная медицинская академия, 644099, г. Омск, ул. Партизанская, 20
Рис.1. Преобладание в структуре пейеровой бляшки узелков с герминативными центрами на 6 сутки после применения токсической дозы селенита натрия. Окраска гематоксилином и эозином. Об. 10, ок. 10.
Рис.2. Преобладание вторичных лимфоидных узелков в верхнем брыжеечном лимфатическом узле крысы на 6 сутки после перорального применения токсической дозы селенита натрия. Окраска гематоксилином и эозином. Об. 40, ок. 10.
Рис. 3. Увеличение числа лимфоидных клеток в паракортикальной зоне подвздошного лимфатического узла на 6 сутки после перорального введения селенита натрия. Окраска азур 11-эозином. Об.40, ок.10.
В селезенке изменения были обнаружены только в лимфоидной паренхиме. В структуре белой пульпы увеличилась площадь вторичных лимфоидных узелков (на 20%), в основном за счет маргинальной зоны, в клеточном составе ее возросло число малых лимфоцитов (почти в 2 раза). Эти преобразования в селезенке могут указывать на то, что она находится в состоянии повышенной иммунологической активности, а значит, усилена ее детоксикаци-онная и барьерная функции. Вероятно, компенсаторные возможности селезенки максимально напряжены, что обусловлено функциональной недостаточностью остальных органов защиты.
В тимусе структурные изменения соответствуют признакам акцидентальной инволюции [14]: существенно снижены (в 2 раза и более) по сравнению со значениями контроля показатели общей площади среза, площади коркового и мозгового веществ; уменьшены площади капсулы и корковых перегородок (более чем в 1,5 раза). Во всех структурно-функциональных зонах тимуса снижено число клеток лимфоидного ряда. Это может быть связано с процессом миграции зрелых лимфоцитов из коры во вторичные лимфоидные органы, что подтверждается увеличением площадей Т-зависимых зон и количества лимфоидных клеток в них в селезенке и подвздошном лимфатическом узле. В большей степени уменьшение численности клеток может быть обусловлено усиле-
нием процесса гибели тимоцитов, на что указывает наличие выраженной макрофагальной реакции и возрастание числа дегенерирующих клеток.
Выводы. При пероральном введении токсической дозы селенита натрия первой и в большей степени реагирует лимфоидная ткань, расположенная в пограничных структурах - стенка тонкой кишки, пейеровы бляшки, а затем регионарные брыжеечные лимфатические узлы, в которых обнаружены признаки повреждения. Параллельно в «отдаленных» вторичных лимфоидных органах (подвздошных лимфатических узлах, селезенке) выявленные структурно-функциональные преобразования свидетельствуют об адаптивных изменениях в них, направленных на усиление защитных детоксикационных процессов.
Однако эти изменения неадекватны потребностям организма, так как во всех исследуемых нами лимфоидных органах обнаружены деструктивные процессы. В тимусе выражены признаки инволюции с повреждением мозгового вещества и стромы, которые являются наиболее устойчивыми компонентами к воздействию неблагоприятных факторов. Эти данные, свидетельствуют о системном повреждающем действии селенита натрия в высокой дозе, причем как прямом, так и опосредованном, что приводит к развитию эндотоксикоза в организме.
Наличие эндотоксикоза в организме подтверждается также лабораторными данными: в лейкограмме максимально снижено число нейтрофильных гранулоцитов, значение лейкоцитарного индекса интоксикации; в плазме крови значения веществ низкой и средней молекулярной массы превышают контрольные, особенно в спектре длин волн 238-246 нм (в 2 раза), где регистрируются вещества катаболического происхождения. Полученные нами результаты согласуются с данными литературы, в которых имеются указания на то, что пероральное введение селенита натрия в токсической дозе приводит к гипоксии, с последующей интенсификацией свободнорадикальных процессов, истощением системы антиперекисной защиты и усиленной липопероксидаци-ей мембранных структур органов [6].
Литература
1. Барабой, В.А. Успехи современной биологии / В.А. Бара-бой.- 2004.- Т.124.- №2.- С.157-168.
2. Боровиков, В. 8ТЛТ18Т1СЛ. Искусство анализа данных на компьютере / В. Боровиков.- Спб.: Питер, 2003.- 688 с.
3. Бородин, Ю. И. Индивидуальные особенности организации подколенных лимфатических узлов собаки и транспортная функция последних / Ю. И. Бородин // Вопросы экспериментальной морфологии лимфатической системы и соединительнотканного каркаса.- Новосибирск, 1968.- Т. 50.- С. 34-43.
4. Бородин, Ю.И. Фундаментальные проблемы лимфоло-гии и клеточной биологии / Ю.И. Бородин.- Новосибирск, 2008.-С.54-56.
5. Бун, ММ. Токсиколого-гигиеническая оценка биологического действия гексафторида селена: Автореф. дис. ... кан. биол. наук / М.М. Бун.- Иркутск, 2005.- 30 с.
6. Влияние токсических доз селена на процессы перекисно-го окисления липидов в крови и брыжеечных лимфатических узлах крыс / О.А. Зайко [и др.] // Медицинская наука и образование Урала.- 2009.- Т.10.- №2.- С.57-59.
7. Жаворонков, А.А. Микроэлементы и естественная кил-лерная активность / А. А. Жаворонков, А. В. Кудрин // Арх. пат-1996.- 58.- № 6.- С. 65-70.
8. Ильин, В.Б. Микроэлементы и тяжелые металлы в почвах и растениях Новосибирской области / В.Б. Ильин, А.И. Сысо.-Новосибирск: СО РАМН, 2001.- 229 с.
9. Карпищенко, А.И. Медицинские и лабораторные технологии / А.И. Карпищенко.- СПб.: Интермедина, 1999.- Т.2.- 653 с.
10. Коненков, В. И. Проблемы саногенного и патогенного эффектов эндо- и экзоэкологического воздействия на внутреннюю среду организма / В.И. Коненков.- Чолпон-Ата, 2009.-С.210-212.
11. Лилли, Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия / Р. Лилли.- М.: Мир, 1969.- 645 с.
12. Малахова, М.Я. Эфферентная терапия / М.Я. Малахова.- 1995.- Т.1.- №1.- С. 61-64.
13. Меркулов, Г.А. Курс патогистологической техники / Г. А. Меркулов.- Л.: Медицина, 1969.- 424 с.
14. Обухова, Л.А. Взаимоотношение эндокринной и лим-
фоидной систем в процессах адаптации / Л.А. Обухова, В.Г. Се-лятицкая // Проблемы лимфологии и интерстициального массо-переноса.- Новосибирск, 2004.- ч.1.- С.291-294.
15. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва.- М., Медиа Сфера, 2006.- 312 с.
16. Селен: совместное издание Программы ООН по окружающей среде, МОТ и ВОЗ (Гигиенические критерии состояния окружающей среды ВОЗ №58).- М.: Медицина, 1989.- 270 с.
17. Тутельян, В.А. Селен в организме человека: метаболизм, антиоксидантные свойства, роль в канцерогенезе / В.А. Тутельян и др.- М.: РАМН, 2002.- 220 с.
STRUCTURAL AND CELLULAR CHANGES IN LYMPHOID ORGANS GIPERSELENOZE
O.V.NIKITENKO, I.I. KOSHELEVA
Omsk State Medical Academy
After oral administration of toxic doses of sodium selenite experimental animals (rats, male Wistar) lymphoid organs reacting structural and functional reforms aimed at strengthening protective processes in the body, but they are inadequate toxic load.
Key words:lymphatic region of the ileum, thymus, spleen, iliac-lymph node, sodium selenite, intraperitoneal injection.
УДК [ 616-005.1-08:331.1]: 615.22
ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ВОЗНИКНОВЕНИЯ НАРУШЕНИЙ МИКРОРЕОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЭРИТРОЦИТОВ У НОВОРОЖДЕННЫХ ПОРОСЯТ
А.В. ПАРАХНЕВИЧ, И.Н. МЕДВЕДЕВ*
В работе оценена выраженность отдельных патофизиологических механизмов ухудшения микрореологических свойств эритроцитов у поросят с железодефицитной анемией, диспепсией и острой гипоксией. Установлено, что в плазме крови и эритроцитах новорожденных поросят с этой патологией отмечается нарастание интенсивности перекисного окисления липидов при развитии липидного дисбаланса в красных кровяных тельцах только при анемии. У новорожденных поросят со всей учитываемой патологией регистрируется сходное повышение количества измененных форм эритроцитов и их способности к агрегации.
Ключевые слова: новорожденные поросята, железодефицитная анемия, диспепсия, острая гипоксия, эритроциты, агрегация, цитоархитектоника.
Одним из важнейших компонентов микроциркуляции являются эритроциты, агрегация и цитоархитектоника которых во многом определяет гемодинамику в капиллярах и процессы тканевого обмена [6]. Известно, что микрореологические свойства эритроцитов могут меняться при изменении состояния организма. Становится ясно, что возникновение в организме поросенка различных патологий может сопровождаться изменениями мик-роциркуляторных свойств эритроцитов. Наиболее уязвима у них в этом плане фаза новорожденности. При этом, на ее протяжении достаточно часто могут регистрироваться железодефицитная анемия, диспепсия и острая гипоксия, способные приводить к серьезным дисфункциям в организме животных и нередко к их гибели. При этом, до сих пор остается не выяснены основные механизмы изменения цитоархитектоники и агрегации эритроцитов, определяющих состояние микроциркуляции в тканях новорожденных поросят с этими состояниями.
Цель исследования — оценить выраженность отдельных патофизиологических механизмов ухудшения микрореологических свойств эритроцитов у поросят с железодефицитной анемией, диспепсией и острой гипоксией.
Материалы и методы исследования. Под наблюдением находились новорожденные поросята, составившие три опытные группы: 32 с железодефицитной анемией, 25 с диспепсией и 28, перенесших при рождении острую гипоксию. Контроль состоял из 36 здоровых новорожденных поросят. Работа выполнена в соответствии с Хельсинкской декларацией 1975 г. и ее пересмотром 1983 г.
У всех поросят оценивали перекисное окисление липидов (ПОЛ) в плазме по содержанию в ней тиобарбитуровой кислоты (ТБК) - активных продуктов набором «Агат-Мед» и по содержа-
* Курский институт социального образования (филиал) РГСУ, 305029, г.Курск, ул.К.Маркса, 53
нию ацилгидроперекисей (АГП)[2] с регистрацией ее антиокис-лительной активности (АОА) [1].
В отмытых и ресуспендированных эритроцитах определяли уровень МДА в реакции восстановления тиобарбитуровой кислоты [5], количество АГП [2], содержание холестерина (ХС) энзиматическим колориметрическим методом с помощью набора «Витал Диагностикум» и количество общих фосфолипидов (ОФЛ) по уровню в их мембранах фосфора [4] с вычислением соотношения ОХС/ОФЛ. Функциональная активность внутри-эритроцитарных ферментов антиокисления определялась для каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) [7].
Определение цитоархитектоники эритроцитов велось с применением фазовоконтрастной микроскопии с их типировани-ем на дискоциты обратимо деформированные и необратимо деформированные [3].
Агрегационную активность эритроцитов регистрировали с помощью светового микроскопа путем подсчета в камере Горяева количества агрегатов эритроцитов, агрегированных и неагрегиро-ванных эритроцитов во взвеси отмытых эритроцитов [6].
Математическую обработку результатов вели критерием (t) Стьюдента. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез в настоящем исследовании принимали равным 0,05. Данные представлены в виде M±m, где M - среднее арифметическое, а m - ошибка среднего арифметического.
Результаты и их обсуждение. У обследуемых животных со всеми видами учитываемой патологии обнаружена достоверная активация ПОЛ плазмы. Уровень ТБК-активных продуктов в жидкой части крови у них был более чем в 1,5 раза выше, чем в группе контроля. Содержание АГП в плазме во всех группах наблюдаемых поросят также превышало уровень контроля более чем в 2 раза. Усиление пероксидации стало возможным в результате ослабления в сходной степени антиоксидантной защиты организма - антиокислительный потенциал плазмы у новорожденных поросят с анемией снижался на 32,7%, с диспепсией на 33,7%, у перенесших острую гипоксию на 29,1%.
Таблица
Биохимико-микрореологические показатели новорожденных поросят с патологией
Параметры Новорожденные поросята с патологией, M±m Контроль, n=36, M±m
Железодефицитная анемия, n=32 Перенесенная острая гипоксия, n=28 Диспепсия, n=25
АГП плазмы, Д233/1 мл. 3,02±0,06 р<0,01 2,99±0,09 р<0,01 3,14±0,04 р<0,01 1,32±0,11
ТБК плазмы, мкмоль/л. 4,92±0,04 р<0,01 4,86±0,06 р<0,01 4,99±0,08 р<0,01 3,06±0,12
Антиокислительный потенциал плазмы,% 28,1±0,03 р<0,01 27,9±0,08 р<0,01 28,9±0,06 р<0,01 37,3±0,13
ХС эритроцитов, мкмоль/1012эр. 1,18±0,005 р<0,01 0,88±0,006 0,92±0,006 0,89±0,004
ОФЛ эритроцитов, мкмоль/1012эр. 0,50±0,003 р<0,01 0,67±0,005 0,69±0,004 0,68±0,004
ХС/ОФЛ эритроцитов 2,36±0,007 р<0,01 1,31±0,004 1,33±0,003 1,30±0,005
АГП эритроцитов, Д2„/1012эр. 4,87±0,17 р<0,01 4,72±0,12 р<0,01 4,79±0,15 р<0,01 2,92±0,05
МДА эритроцитов, нмоль/1012эр. 1,50±0,07 р<0,01 1,54±0,09 р<0,01 1,52±0,09 р<0,01 0,99±0,06
Каталаза эритроцитов, МЕ/10эр. 8100,0±25,6 р<0,01 8240,5±19,9 р<0,01 8180,6±31,4 р<0,01 10968,0±16,6
СОД эритроцитов, МЕ/ 1012эр. 1520,0±7,18 р<0,01 1493,1±9,26 р<0,01 1502,1±9,62 р<0,01 1718,0±5,72
Дискоциты,% 74,6±0,19 р<0,01 72,8±0,12 р<0,01 72,1±0,16 р<0,01 85,3±0,17
Обратимо изм. эрит-роциты,% 13,7±0,15 р<0,01 14,6±0,16 р<0,01 13,9±0,17 р<0,01 9,3±0,06
Необратимо изм. эритроциты,% 11,7±0,07 р<0,01 12,6±0,05 р<0,01 14,0±0,06 р<0,01 5,3±0,06
Сумма всех эритроцитов в агрегате 46,5±0,22 р<0,01 48,8±0,17 р<0,01 47,2±0,26 р<0,01 32,3±0,08
Количество агрегатов 9,5±0,07 р<0,01 12,6±0,09 р<0,01 р 1, 9 , i 0, 0 со 7,2±0,04
Количество свободных эритроцитов 244,7±0,22 р<0,01 232,6±0,39 р<0,01 240,2±0,25 р<0,01 282,3±0,19
Примечанте: р - достоверность различий показателей групп наблюдения и контроля
При этом, в составе мембран эритроцитов новорожденных поросят только с анемией содержание холестерина достоверно превышало контроль в 1,32 раза при снижении ОФЛ в 1,36 раза, обусловив увеличение в них соотношения ХС/ОФЛ (2,36±0,007). При этом, при диспепсии и острой гипоксии липидного дисбаланса в мембранах эритроцитов обнаружено не было.
Во всех наблюдаемых группах животных концентрация
