CC BY
144
УДК 636.22.28:612.622.089.67
СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭФФЕКТИВНОСТИ СУПЕРОВУЛЯЦИИ У ЛАКТИРУЮЩИХ И ВЫБРАКОВАННЫХ КОРОВ, СОХРАННОСТЬ ТЕЛЯТ-ДВОЕН
Воробьев Дмитрий Николаевич соискатель
Мамукаев Матвей Николаевич д.с.-х.н., к.б.н., профессор
Мугниева Лариса Алексеевна к.с.-х.н, доцент
Горский государственный аграрный университет, г. Владикавказ, Россия.
Приводятся материалы по разработке технологии эмбриотрансплантации и получения одинцовых и двойневых телят, использования для вызывания суперовуляции у доноров фолликулогенеза гормональных препаратов ФСГ-супер и фоллотропина и приживаемости эмбрионов, трансплантированных в контрлатеральный и ипсилатеральный рог матки, а так же показатели роста одинцовых и двойневых телят-трансплантантов в онтогенезе
Ключевые слова: ТРАНСПЛАНТАЦИЯ, ЭМБРИОНЫ, ФСГ-СУПЕР, ПОЛОВОЙ ЦИКЛ, СУПЕРОВУЛЯЦИЯ, ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТЬ
UDC 636.22.28:612.622.089.67
Mamukaev Matvey Nickolaevich Dr.Sci.(Agrc., professor
The article deals with the development of embryotransplantation and obtaining single and twin calves use of hormonal preparations FSH-Super and follotropin to provoke donors to super ovulation of folliculogenesis and embryos survival which were transplanted intocontralateral and ipsilateral uterine horn. Parameters of single and twin calves-transplantators’ growing in ontogenesis are also considered
Keywords: TRANSPLANTATION, EMBRYOS, FSH-SUPER, SEXUAL CYCLE, SUPEROVULATION, INSEMINATION
COMPARATIVE ANALYSIS OF THE EFFECTIVENESS OF SUPER OVULATION IN BOTH LACTATING COWS AND REJECTED, SECURITY OF CALVES-TWINS
Vorobyev Dmitri Nickolaevich competitor
Mugnieva Larisa Alekseevna Cand.Agrc.Sci., associate professor Gorskiy State Agrarian University, Vladikavkaz, Russia.
Введение
Крупный рогатый скот относится к одноплодному виду животных. Многоплодная стельность у коров и телок может быть результатом одновременного созревания и овуляции нескольких овариальных фолликулов (полиовуляция) или одного. Одноплодная зигота на ранних стадиях развития разобщается на две части, которые обособляются и продолжают развиваться самостоятельно в отдельные плоды (полиэмбриония), в итоге которого появляются монозиготные близнецы. Они одного пола, генетически и фенотипически схожи. Рождение близнецов у крупного рогатого скота установлено в 10% случаев однополых двоен. Дизиготные близнецы могут быть как одного, так и разного пола [4, 6, 8].
Несмотря на низкую наследуемость, проводились исследования по выведению линий с 10 и 20% отелов двойнями, используя современные методы биотехники размножения. Многоплодие у крупного рогатого скота - выраженный породный признак, следовательно, то число двойневых отелов в определенной степени можно регулировать выбором породы. В ходе генеалогического анализа, многие исследователи выявили родственные группы коров с многочисленными проявлениями многоплодных отелов. Среди потомства коров с двойневыми отелами число дочерей, отелившихся двойнями, в 1,9-2,5 раза больше, чем в потомстве коров, не имевших двоен [1, 9, 10].
В настоящее время апробированы и предложены различные приемы гормонального вызывания многоплодных стельностей. Первоначально на яичники предлагалось воздействовать в фолликулярную фазу полового цикла.
Для снижения изменчивости интервала между введением гонадотропина и началом охоты вызывание многоплодия проводили в синхронизированный прогестероном или гестагенами половой цикл, а сочетания инъекций прогестерона с последующим введением СЖК вызывало многоплодие у 31% обработанных коров.
Проявление многоплодия у коров подвержено возрастной изменчивости: сравнительно низкая частота у первотелящихся в
последующем повышается до 5-6 отелов, а затем сохраняется примерно на одном уровне или снижается [2, 7].
Из средовых факторов, влияющих на проявление у коров предрасположенности к многоплодию, определены только сезон года и условия кормления. Круглогодовое полноценное кормление способствует более полной реализации наследственных задатков многоплодия у коров, что обработка мясных коров ГСЖК (600-750 МЕ) после гестагенной
синхронизации повышала оплодотворяемость на 10%, частоту многоплодия - на 10% и выход телят - на 20%.
Материал и методы исследования Для получения эмбрионов у коров-доноров методом суперовуляции проведен анализ использования гипофизарных препаратов с различным соотношением ФСГ и ЛГ: фоллтропина и ФСГ-супер. В качестве доноров использовались клинически здоровые лактирующие (не менее 60 дней после отела) и выбракованные коровы в возрасте 5-8 лет, живой массой 550-650 кг, с удоем по наивысшей стандартной лактации 7-9,5 тыс. кг молока, жирностью более 3,8%. Гормональные обработки доноров (табл.
1).
Таблица 1 - Схема гормональной обработки и подготовки коров-доноров
День полового цикла фоллтропин (400 мг) ФСГ-супер (1000 ИЕ)
о00 8 ч. 2 о с с . о00 8 ч. 2 о с с .
0-й Половая охота у донора Половая охота у донора
10-11-й 70 мг 70 мг 160 ИЕ 160 ИЕ
11-12-й 60 мг 60 мг 140 ИЕ 140 ИЕ
12-13-й 40 мг эстрофан 500 мкг 40 мг эстрофан 250 мкг 120 ИЕ эстрофан 500 мкг 120 ИЕ эстрофан 250 мкг
13-14-й 30 мг 30 мг 80 ИЕ 80 ИЕ
14-15-й или 0-й день цикла (охота) - Осеменение - Осеменение
1-й день цикла Осеменение - Осеменение -
7-й день цикла Извлечение эмбрионов
Для извлечения эмбрионов из рогов матки использовали среду Дюльбекко или раствор Хенкса с добавлением фетальной сыворотки (10
мл/л) или бычьего сывороточного альбумина (0,05г/л) и антибиотиков (ампициллин, 100 ИЕ/мл и гентамицин, 12 мкг/мл).
На извлечение эмбрионов из рогов матки донора затрачивали 800900мл среды. После проведения процедуры извлечения эмбрионов в полость матки коров-доноров вводили смесь антибиотиков (ампициллин, 500 тыс. ЕД + гентамицин, 20 мг) в 30-50 мл среды Дюльбекко или раствора Хенкса, а внутримышечно - 500 мкг простагландина F2a.
Флаконы с промывной жидкостью отстаивали (20-30 минут) и по принципу сифона удаляли верхний слой жидкости, оставляя 70-90 мл с осевшими на дно эмбрионами, разливали в две предварительно расчерченные чашки Петри (0 120 мм), затем проводились исследования качества эмбрионов под микроскопом .
В каждой группе изучили эффективность вызывания суперовуляции в зависимости от характеристик коров-доноров - лактирующие (разовые) и выбракованные. У выбракованных коров-доноров (n=17) проведены исследования по изучению результативности вызывания суперовуляции стандартным ФСГ-супер в комплексе с натуральным ЛГ - овогон-тио (ВНИИПиФ, Россия) в соотношении по активности 1000:200 ИЕ.
Результаты исследований
Исследования эффективности суперовуляции у выбракованных и лактирующих коров-доноров показали, что выбракованные коровы в качестве доноров эмбрионов частично снижают показатели метода суперовуляции, и существует зависимость эмбриопродуктивности от применяемого гонадотропного препарата. Выбракованные коровы после обработок фоллтропином и ФСГ-супер реагировали суперовуляцией в 88 и 82% случаев, а лактирующие - 95 и 100%. Реакция суперовуляции в среднем составила 10,7 и 9,3, 11,2 и 13,1 желтых тел соответственно (табл.
2).
Таблица 2 - Эффективность вызывания суперовуляции у выбракованных
и лактирующих коров фоллтропином и ФСГ-супер
Показатели Выбракованные коровы Лактирующие коровы
ФСГ- супер фоллтропин ФСГ- упер фоллтропин
Обработано коров, гол. 29 17 21 20
Реагировало суперовуляцией, гол./ % 24/82,1 15/88,2 21/100 19/95
Реакция суперовуляции, желтых тел, М±m 9,3±0,8 10,7±1,4 13,1±1,1 11,2±1,5
неовулировавших фолликулов, М±т 0,0 0,9±0,4 0,0 1,1±0,3
Вариабельность числа овуляций, % 40 49 37 57
Положительных по извлечению доноров, гол./ % 24/100 15/100 21/100 18/94,7
В среднем на донора извлечено всего эмбрионов, М±т 7,4±0,8 8,7±1,4 10,3±1,4 9,3±1,6
в т. ч. пригодных к использованию, М±m 4,9±0,6 6,4±0,8 8,1±1,1 6,7±1,3
непригодных к использованию, М±т 2,5±0,5 2,3±0,6 2,2±0,6 2,6±0,9
из них дегенерированных и отставших в развитии, М±т 0,9±0,2 1,1±0,5 1,3±0,4 0,8±0,6
неоплодотворенных яйцеклеток, М±т 1,6±0,4 1,2±0,4 0,9±0,3 1,8±0,5
Оплодотворяемость, % 78,4 86,2 91,3 80,7
Выход пригодных эмбрионов, % 66,2 73,6 78,6 72,0
Период от извлечения до проявления половой охоты, дней - - 19,2 27,8
Период от извлечения до плодотворного осеменения, дней - - 32,7* **48,9
Сервис-период, дней - - 138 167
В группе выбракованных коров по выходу пригодных эмбрионов лучшие результаты отмечены после инъекции фоллтропина -(73,6%) чем при введении ФСГ-супер (66,2%). При обработке фоллтропином, по сравнению с ФСГ-супер, получено на 33% меньше неоплодотворенных яйцеклеток на 33% ввиду более высокого уровня оплодотворяемости (86,2
против 78,4%). В группе лактирующих доноров более высокий выход пригодных эмбрионов, получен после введения ФСГ-супер - 78,6% (8,1 из 10,3), а количество яйцеклеток увеличилось в 2 раза (1,8 против 0,9) на фоне снижения оплодотворяемости (80,7 против 91,3%), наблюдалось разрастание интерстициальной ткани яичников, образование кист и увеличение периода восстановления половой цикличности (на 8,6 дней), сервис-периода на 29 дней (табл.3).
После морфологической оценки эмбриопродукции выбракованных и лактирующих коров-доноров установлено, что независимо от применяемых гонадотропинов признанные пригодными эмбрионы в основном были представлены поздними морулами и ранними бластоцистами. На их долю от общего эмбриосбора в группах приходилось от 60 (фоллтропин) до 92% (ФСГ-супер), что свойственно периоду их извлечения (7-ые сутки после осеменения доноров).
По числу доноров с отсутствием качественных эмбрионов между группами существенных различий не наблюдалось (4,8-8,4%). В целом в группе лактирующих коров 5 и более эмбрионов получено от 55,6-66,6% доноров, а в группе выбракованных - от 45,8-53,3%, что указывает на большую чувствительность к введению гонадотропинов и интенсивность отбора среди лактирующих доноров.
Таблица 3 - Стадии развития и качественная характеристика
эмбрионов.
Показатели Выбракованные Лактирующие
ФСГ-супер Фоллтропин ФСГ- супер Фоллтро- пин
Стадия развития пригодных эмбрионов
Морула ранняя, п/% - 2 / 2,0 - 6 / 5,0
Морула поздняя, п/% 60 / 50,9 56 / 55,4 92 /53,8 41 / 34,5
Бластоциста ранняя, п/% 49 / 41,5 25 / 24,6 37 / 21,6 40 / 33,6
Бластоциста поздняя, п/% 9 / 7,6 11 / 11,0 42 / 24,6 20 / 16,8
Бластоциста экспондированная, п/% - 7 / 7,0 - 12 / 10,1
Всего 118 / 100 101 / 100 171 / 100 119 / 100
Качественная характеристика эмбрионов
Отличные, п/% 70 / 59,3 56 / 55,5 123 / 71,9 66 / 55,5
Хорошие, п/% 30 / 25,4 28 / 27,7 41 / 23,9 31 / 26,0
Удовлетворительные, п/% 18 / 15,3 17 / 16,8 7 / 4,2 22 / 18,5
Всего, п/% 118 / 100 101 / 100 171 / 100 119 / 100
У доноров обеих групп наблюдалась высокая вариабельность выхода качественных эмбрионов, которая обусловлена индивидуальными особенностями животных к индуцированию суперовуляции.
Таким образом, существует зависимость эмбриопродуктивности от применяемого гонадотропного препарата: для лактирующих коров-доноров предпочтительнее использовать ФСГ-супер (13,1 желтых тел и 8,1 пригодных эмбрионов на донора), а для выбракованных - фоллтропин (10,7 и 6,4 соответственно). При вызывании суперовуляции фоллтропином наблюдалось разрастание интерстициальной ткани яичников, не редко
образование кист и увеличение периода восстановления половой цикличности (в среднем на 8,6 дней) и сервис-периода (на 29 дней). У лактирующих доноров, использование филлтропина, менее эффективен. Для ФСГ-супер свойственно получение эмбрионов с большей стадийной синхронностью развития, особенно при индивидуальном учете эмбриопродукции доноров, что свидетельствует о синхронности вызванных множественных овуляций.
С точки зрения жизнеспособности будущего потомства, некоторые исследователи сообщают, что телята-двойни, развивавшиеся в одном маточном рогу, могут приводить к осложнениям отелов и высокой смертности близнецов после рождения. В случае развития двух зародышей в одном рогу матки ограничивается использование полости матки и, если плоды благополучно вынашиваются, они обычно имеют более низкую живую массу. Напротив, если зародыши пересаживаются в каждый рог матки, то по мере развития плодов каждому из них достаточно пространства и поступления питательных веществ через плаценту, поскольку в обоих рогах образуется гораздо большее количество плацентомов. Это способствует получению близнецов с относительно большей живой массой, тем не менее, утверждают, что различные способы трансплантации зародышей не препятствуют нормальному протеканию стельности, вынашиванию двоен и не снижают жизнеспособность получаемого приплода [3, 5].
При исследований натальных и постнатальных потерь телят-двоен в зависимости от различных способов индуцирования двойневости у коров-реципиентов установлено, что в случае унилатерального размещения двух плодов в полости матки, 16,7-20% телят рождаются мертвыми ввиду возникающих осложнений во время отела. При билатеральном размещении плодов случаев мертворождения среди близнецов не отмечено (табл. 4).
Таблица 4 - Сохранность телят-двоен в зависимости от способов их
получения
Показатели Пересадка эмбрионов
не осемененным коровам осемененным коровам
по одному в каждый рог матки двух в контрлате ральный рог матки двух в ипсилтер альный рог матки одного в контрлатера льный рог матки одного в ипсилатера льный рог матки
Размещение плодов в полости матки Билатеральное У нилатеральное Билатерал ьное Унилатерал ьное
Число отелов двойней 8 5 7 11 6
Получено мертворожденных телят-двоен, п / % - 2/20,0 - - 2/16,7
Родилось живых телят 16 8 14 22 10
Сохранность (возраст, месяц): 1 гол./% 15/93,7 7/87,5 12/85,7 21/95,5 8/80,0
3 гол. /% 15/93,7 6/75,0 11/78,6 2195,5 7/70,0
6 гол. /% 15/93,7 6/75,0 10/71,4 21/95,5 6/60,0
9 гол. % 15/93,7 6/75,0 10/71,4 21/95,5 6/60,0
12 гол.% 15/93,7 6/75,0 10/71,4 21/95,5 6/60,0
На протяжении первого месяца жизни сохранность двоен, развивавшихся в одном маточном рогу, составила 80,0- 87,5%, а развивавшихся билатерально - 95,5-93,7%, то есть уровень падежа был в 2-
3 раза ниже. Вероятно, это связано с последствиями трудных отелов или меньшей живой массой при рождении близнецов, развивавшихся внутриутробно в одном рогу матки.
Аналогичная динамика жизнеспособности телят-трансплантантов сохраняется последующие возрастные периоды. В группах телят, размещенных билатерально по одному эмбриону в контрольный рог матки до 12 месячного возраста отхода не наблюдалось и сохранность составила в конце опыта соответственно 93,7% и 95,5%.
В группах телят-трансплантантов, полученных при пересадке эмбрионов унилатерально двух в контрольный и двух в ипсилатеральный рог матки, а также одного в ипсилатеральный рог матки сохранность к 12 месячному возрасту был ниже по сравнению с группой молодняка, полученного при билатеральной пересадке одного эмбриона в контрольный рог матки, в группе телят, полученных при унилатеральной пересадке двух эмбрионов в коллатеральный рог матки, двух в ипсилатеральный рог матки и одного в ипсилатеральный рог матки соответственно на 25,0%; 28,6% и 40,0%.
При использовании метода трансплантации эмбрионов для получения телят-двоен существует возможность не только выбора реципиентов, но и способа пересадки. Для снижения натальной и постнатальной смертности близнецов индуцирование двойневой стельности у реципиентов необходимо проводить способами, обеспечивающими билатеральное размещение эмбрионов.
Таким образом, на протяжении первого месяца жизни сохранность двоен, развивавшихся в одном маточном рогу, составила 80,0-87,5%, а развивавшихся билатерально - 93,7-95,5%, то есть уровень падежа был в 2-
4 раза ниже. Для высокой сохранности близнецов после рождения следует делать выбор в пользу способов трансплантации, позволяющих размещать зародыши, а, следовательно, и плоды, в обоих рогах матки реципиентов.
Список использованной литературы:
1. Зоранян В.А. О некоторых биохозяйственных особенностях многоплодия крупного рогатого скота //С.-х. биология. 1983. №5. - С. 93-96.
2. Инструкция по искусственному осеменению коров и телок. Мн. 1999. 54 с.
3. Методические рекомендации по отбору и использованию высокопродуктивных коров - доноров эмбрионов/ В. Л. Мадисон, В.И. Лебедев, А.П. Дронин и др. Дубровицы: ВИЖ, 1993. 27 с.
4. Методические рекомендации по трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота /БелНИИЖ; Сост. И.И. Будевич, B.C. Антонюк, Н.Ф Жук и др. - Мн. 2004. 33 с.
5. Нежданов А.Г., Скрипицын Ю.А., Терновых СВ. Эффективность гормональной индукции полиовуляции у коров// Ветеринария. 2002. №10. С. 35-38.
6. Прокофьев М.И Регуляция размножения сельскохозяйственных животных. Л.: Наука. 1983. 264 с.
7. Решетникова Н,М. Фолликулогенез крупного рогатого скота при гормональной регуляции и различных формах нарушения воспроизводительной функции// Биология воспроизведения и биотехнологические методы разведения сельскохозяйственных животных/ Научн. труды ВНИИплем - М, 1989.С.73-83.
8. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. - Мн.: Высшая школа, 1967. 328с.
9. Рябых В.П. Основные направления повышения эффективности суперовуляции у коров-доноров//Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных, Всесоюзное совещание, Алма-Ата, 17-20 октября 1989г., тезисы докладов/ Алма-Ата: Наука, 1989. 36. с
10.Эрнст Л.К., Сергеев Н.И. Трансплантация эмбрионов сельскохозяйственных животных. М.: Агропромиздат, 1989. 301 с.
