CC BY
95
сравнительное доклиническое
изучение безопасности препарата
«антигриппин-максимум»
(капсулы и порошок для приема
внутрь): новые данные
УДК 615.03
© Т. Н. Саватеева-Любимова1, Е. Е. Лесиовская1,
К. И. Стосман1, К. В. Сивак1, С. Г. Дагаев1, Л. Г. Кубарская1, О. А. Филько1, А. В. Саватеев1, Л. И. Руденко2
Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-
биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1;
2ЗАО «НПО «Антивирал», 197376, Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 15/17.
Ключевые слова:
«Антигриппин-Максимум»; капсулы; порошок для приготовления раствора; острая; хроническая токсичность; аллергенность; иммунотоксичность; эмбриотоксичность; репродуктивная функция; мутагенность.
Резюме:
Проведено сравнительное доклиническое изучение безопасности препарата «Антигриппин-Максимум» (капсулы и порошок для приготовления раствора для приема внутрь), применяемого для симптоматического лечения гриппа, ОРВИ, лихорадочных состояний вследствие вирусных поражений дыхательных путей. Введение препарата в виде обеих лекарственных форм в течение 14 дней не оказывает токсического воздействия на функциональное состояние и не вызывает патологических мор-фофункциональных изменений в изученных органах и системах экспериментальных животных (крысы и кролики). Препарат (обе лекарственные формы) не влияет на выраженность аллергических реакций, не обладает иммунотоксическими и мутагенными свойствами, не вызывает эмбриотоксического и тератогенного действия, не влияет на репродуктивную способность крыс.
Библиографическая ссылка:_
Саватеева-Любимова Т. Н, Лесиовская Е. Е., Стосман К. И., Сивак К. В., Дагаев С. Г., Кубарская Л. Г., Филько О. А., Саватеев А. В., Руденко Л. И. Сравнительное доклиническое изучение безопасности препарата «Антигриппин-Максимум» (капсулы и порошок
для приема внутрь): новые данные //Обзоры по клин. фармакол. и лек. терапии. — 2011. — Т. 9, № 4 — С. 18-22.
ВВЕДЕНИЕ
Лекарственный препарат «Антигриппин-Максимум», созданный в ЗАО «НПО «Антивирал», обладает противовирусным и интефероноген-ным,жаропонижающим,противовоспалительным, обезболивающим, антигистаминным, ангиопро-текторным действием. Используется для этио-тропного и симптоматического лечения гриппа, ОРВИ и хорошо известен на фармацевтическом рынке России. Однако, учитывая то, что препарат является многокомпонентным и в составе его двух лекарственных форм, помимо 6 действующих веществ, присутствуют различные вспомогательные вещества, было целесообразным проведение более глубокого изучения профиля безопасности.
Целью настоящей работы явилось сравнительное экспериментальное изучение общетоксического действия и специфической токсичности препарата «Антигриппин-максимум» в двух его лекарственных формах — капсулы и порошок для приготовления раствора для приема внутрь (саше).
методы исследования
Одна из лекарственных форм препарата «Антигриппин-Максимум» состоит из набора капсул П и Р. Капсула П имеет в своем составе
действующее вещество: парацетамол — 360 мг и вспомогательные вещества: крахмал жела-тинизированный, сахар молочный (лактоза), магния стеарат, кремния диоксид коллоидный. В качестве действующих веществ в капсуле Р используются: аскорбиновая кислота — 300 мг, кальция глюконат — 100 мг, ремантадин (ри-мантадин) — 50 мг, рутозид (рутин) — 20 мг, ло-ратадин — 3 мг и вспомогательные вещества: крахмал картофельный, магния стеарат. Общая масса двух капсул составляет 850 мг по готовой лекарственной форме или 833 мг по сумме действующих веществ. Максимальная суточная доза составляет 6 капсул или 2550 мг по готовой лекарственной форме или 2499 мг по сумме действующих веществ. У лекарственной формы саше исследуемого препарата (общей массой 5000 мг или 833 мг по сумме действующих веществ), в качестве вспомогательных веществ используются аспартам, гипромеллоза, кремния диоксид коллоидный, лактоза, ароматизатор пищевой. Максимальная суточная доза составляет 3 саше или 15000 мг по готовой лекарственной форме или 2499 мг по сумме действующих веществ. Максимальная суточная доза ремантадина, входящего в состав обеих лекарственных форм препарата и активного только в отношении вируса гриппа А, составляет 150 мг.
В соответствии с регламентирующими доклиническое исследование безопасности комбинированных лекарственных препаратов документами [9], изучалась токсичность фиксированных комбинаций в целом, так как каждый ингредиент в отдельности был ранее разрешен для применения в медицинской практике.
Для определения показателей острой токсичности препарат (обе лекарственные формы) вводили внутрижелудочно с помощью атравматич-ного металлического зонда крысам линии Wistar (п=108) и беспородным белым мышам (п=120) обоего пола в возрастающих дозах по Литчфилду-Уилкоксону. Контрольным животным вводили крахмальную взвесь.
Хроническую токсичность препарата в каждой лекарственной форме исследовали на 90 крысах (45 самцах и 45 самках) и 18 кроликах (9 самцах и 9 самках). Препарат вводили внутрижелудочно в течение 14 дней. Расчет доз для животных производили в соответствии с регламентирующими документами [9]. В случае капсул — учитывали рекомендуемую максимальную суточную дозу для человека, составляющую 35,7 мг/кг по сумме действующих веществ, отсутствие летальности крыс в остром эксперименте и коэффициенты пе-
реноса доз с человека на крыс и кроликов, что составило 211 и 2110 мг/кг и 36 и 360 мг/кг по сумме действующих веществ, соответственно. В случае саше — исследования на крысах были проведены с учетом максимально возможного для однократного введения данному виду животных объема по готовой лекарственной форме (2,5 мл/100 г массы тела раствора порошка, содержащего 833 мг по сумме действующих веществ). Таким образом, в этом случае, препарат вводили крысам и кроликам в дозах 211 и 833 мг/кг и 36 и 360 мг/кг по сумме действующих веществ, соответственно. Животные контрольных групп получали крахмальную взвесь. После окончания введения препарата и через 2 недели после его отмены проводили исследование общего состояния, динамики изменения массы тела, оценку функционального состояния сердечно-сосудистой системы, показателей, характеризующих основной обмен, морфологического состава периферической крови и костного мозга. Исследовали массу и морфологию внутренних органов [2, 5, 7, 9]. Для биохимических исследований использовали коммерческие наборы фирмы «Ольвекс Диагностикум» (Россия). Кровь для исследований брали у животных после мгновенной декапитации (крысы, мыши) или из ушной вены (кролики).
Иммунотоксические и аллергенные свойства препарата были изучены на 144 морских свинках самцах и 204 мышах самцах линии СВА. Содержимое капсул препарата вводили в дозах, равных 464 и 2450 мг/кг (по сумме действующих веществ) — для мышей, 211 и 2110 мг/кг — для морских свинок. Порошок для приготовления раствора вводили в дозах 116,4 и 415,7 мг/кг — для мышей, 211 и 833 мг/кг — для морских свинок. Расчет доз осуществляли так же, как и при изучении общетоксического действия, учитывая данные острого эксперимента (наличие летальности у мышей) и коэффициенты переноса доз с человека на мышей и морских свинок. Для оценки иммунотоксических свойств исследовали показатели неспецифического и специфического иммунитета мышей [9]. Для изучения аллергенных свойств препарата использовали реакции анафилактического шока, иммунных комплексов, непрямую реакцию дегрануляции тучных клеток, конъюнктивальную пробу [9].
Эмбриотоксическое и тератогенное действие изучено на 200 крысах самках [9]. Содержимое капсул вводили внутрижелудочно с 1-го по 6-й, с 6-го по 16-й и с 16-го по 19-й день беременности в дозе 2110 мг/кг (по сумме действующих веществ) и с 6-го по 16-й день — в дозе
211 мг/кг. Порошок для приготовления раствора вводили внутрижелудочно с 1-го по 6-й, с 6-го по 16-й и с 16-го по 19-й день беременности в дозе 833 мг/кг и с 6-го по 16-й день — в дозе 211 мг/кг. Для исследования влияния препарата на репродуктивную функцию нелинейных белых крыс содержимое капсул вводили в дозе 2110 мг/кг (по сумме действующих веществ) самцам в течение 60 дней и самкам — в течение 15 дней до спаривания, порошок для приготовления раствора — в дозе 833 мг/кг. Расчет доз осуществляли вышеописанным способом. Эксперименты выполнены на 160 самцах и 320 самках крыс [9].
Мутагенные свойства препарата оценены при анализе хромосомных аберраций клеток костного мозга и учете доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках у мышей линии СВА [9]. Влияние препарата на количество хромосомных аберраций изучали в дозах 464 и 2450 мг/кг (капсулы) (по сумме действующих веществ) и в дозах 116,4 и 415,7 мг/кг (саше). Расчет доз осуществляли, учитывая данные острого эксперимента (наличие летальности у мышей) и коэффициенты переноса доз с человека на мышей. Данное исследование выполнено на 170 мышах самцах линии СВА.
Полученные результаты обработаны с помощью пакетов программ «BIOSTAT 4.03» для био-
медицинских исследовании с использованием критерия t Стъюдента, критерия U Уилкоксона-Манна-Уитни, критерия х2, модифицированного для относительных частот, критерия ф- Фишера [1].
результаты и их обсуждение
Введение препарата в максимально возможных для внутрижелудочного введения объемах в остром эксперименте крысам не обусловило летальности животных. Установлены параметры токсичности препарата для мышеи. В случае применения препарата в виде содержимого капсул ЛД50 для мышей самцов составила 5160,0 ± 887,7 мг/кг, в случае применения саше — 7500,0 ± 834,3 мг/кг Полученные различия в значениях ЛД50 сравниваемых лекарственных форм не являются достоверными; отношения их ЛД50 близки к 1 и попадают в 10 % интервал.
Введение обеих лекарственных форм препарата «Антигриппин-максимум» в течение 14 дней не оказало токсического воздействия на поведение, общее состояние животных, массовые коэффициенты органов, не вызвало изменения интегральных показателей жизнедеятельности и нарушения системы терморегуляции. Изучаемые параметры соответствовали по своему ко-
■ Таблица 1. Влияние препарата (капсулы) на уровень доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей
Доза, мг/кг Стадия сперматогенеза Число беременных Фертильность, % Постимплантационная смертность,%
Контроль Зрелые сперматозоиды 10 66,7 1,6
464 12 80,0 4,4
2450 10 66,7 6,1
Контроль Поздние сперматиды 13 86,7 3,1
464 10 66,7 2,5
2450 12 80,0 4,3
Контроль Ранние сперматиды 11 73,3 3,5
464 13 86,7 4,7
2450 10 66,7 2,5
Примечание: во всех случаях величина 2 не превышала значения 2,0.
■ Таблица 2. Влияние препарата (капсулы) на эмбриональное развитие крыс (с 6-го по 16-й день беременности)
Показатели Контроль 211 мг/кг 2110 мг/кг
Предимплантационная смертность, % 5,0±3,2 2,5±0,9 3,1±1,0
Постимплантационная смертность, % 1,4±0,1 2,2±0,1 2,2±0,1
Число обследованных плодов, из них с аномалиями развития, абс/% 205 3/1,46 212 4/1,89 204 3/1,47
Число обследованных плодов, из них с аномалиями внутренних органов, абс/% 80 3/3,77 80 3/3,75 80 4/5,00
Число обследованных плодов, из них с аномалиями костного скелета, абс/% 125 0 132 0 124 0
личественному и качественному составу видовой физиологической норме [4].
При изучении специфических видов токсичности установлено, что препарат не влияет на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов, продукцию антител к эритроцитам барана (общий титр антител, титр IgG и 1дМ), формирование реакции гиперчувствительности замедленного типа у мышей. Изучение аллергенного действия препарата показало, что препарат (обе лекарственные формы) не обладает аллергенными свойствами, выявляемыми в реакциях общей анафилаксии, иммунных комплексов, дегрануля-ции тучных клеток, конъюнктивальной пробе.
Изучение мутагенных свойств показало, что однократное введение препарата не вызывало увеличения частоты клеток с аберрациями хромосом и числа доминантных летальных мутаций на различных стадиях сперматогенеза (табл. 1).
Изучение антенатального развития показало, что введение препарата в доимплантаци-онный период, а также периоды плацентации и органогенеза не вызвало эмбриотоксического и тератогенного действия. Не наблюдалось достоверного увеличения, по сравнению с контролем, уровня пред- и постимплантационной смертности (табл. 2). При внешнем осмотре, изучении состояния внутренних органов и скелета не выявлено каких-либо значимых аномалий, а также отставания в росте и развитии плодов. Введение препарата в различные периоды беременности не оказало токсического действия на ее течение, а также на репродуктивную функцию крыс. У родившихся крысят не наблюдалось отклонений физического развития, скорости развития сенсорно-двигательных функций и эмоционально-двигательной активности потомства, не отмечалось снижения темпов прироста массы тела, изменений в поведении, не было летальности. Индекс беременности не различался у опытных особей по сравнению с контрольными. При вскрытии самок не было выявлено повышения уровней пред- и постимплантационной смертности.
выводы
1. Введение препарата в течение 14 дней не вызывает патологических изменений со стороны основных органов и систем организма.
2. Препарат не обладает аллергенными свойствами и не оказывает влияния на систему иммунитета.
3. Препарат не обладает эмбриотоксическим и тератогенным действием.
4. Препарат не обладает мутагенным потенциалом.
Литература
1. Бейли Н. Статистические методы в биологии. М.: Мир, 1963.
2. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж. П. Материалы и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М.: Высшая школа, 1991.
3. Биохимические методы исследования в клинике/Под ред. А. А. Покровского. М., 1969.
4. Кигель Г. Б., Харабад Жах-Ян Я. Показатели биологической нормы для лабораторных животных. Ростов-на-Дону, 1978.
5. Лабораторные методы исследования в клинике/Под ред. В. В. Меньшикова. М., 1987.
6. Оценка воздействия вредных химических соединений на кожные покровы и обоснование предельно допустимых уровней загрязнения кожи: метод. указания. № 2162-79. М., 1980.
7. Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP), РД 64-126-91. М., 1992.
8. Проблемы нормы в токсикологии/Под ред. И. М. Трахтенберга. М., 1991.
9. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. М., 2005.
10. Саноцкий И. В., Уланова И. П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке опасности химических соединений. М.: Медицина, 1975.
coMpARATivE pRE-cUNicAL AssEssMENT of the safety for two dosage forms OF
"ANTiGRiPPiN-MAXiMUM" (CAPsULEs AND PoWDER For oRAL ADMiNisTRATioN): NEW DATA
T. N. Savateeva-Lyubimova, E. E. Lesiovskaya, K. I. Stosman, K. V. Sivak, S. G. Dagaev, L. G. Kubarskay, O.A. Filko, A. V. Savateev, L. I. Rudenko
♦ Summary: We studied pre-clinical safety of two dosage forms (capsules and powder for preparation of solution for oral administration) of "Antigrippin-maximum", which is used in patients with the flu, acute respiratory viral infections, fevers due to viral infection of respiratory pathways to treat the signs and symptoms of these disease. Both dosage forms did not have toxic effects on the functional state and did not cause pathological alterations in morphology and functional properties of the studied organs and systems, when administered in rates and rabbits for 14 days. Both dosage forms did not modify allergic reactions and do not have immunotoxic
and mutagenic, as well as embryotoxic and teratogenic effects. Both dosage forms did not affect reproduction capabilities of rats.
♦ Key words: "Antigrippin-maximum", capsules, powder for preparation of solution, acute, chronic toxicity, aller-genicity, immunotoxicity, embryotoxicity, reproductive function, mutagenicity.
♦ Информация об авторах
Саватеева-Любимова Татьяна Николаевна — д. м. н., профессор, заведующая лабораторией лекарственной токсикологии. Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического аген-ства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Лесиовская Елена Евгеньевна — д. м. н., профессор, ведущий научный сотрудник. Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Стосман Кира Иосифовна — Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Сивак Константин Владимирович — Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Дагаев Сергей Глебович — Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Кубарская Лариса Георгиевна — Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Филько Ольга Александровна — Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
Саватеев Андрей Владимирович — Федеральное государственное учреждение науки «Институт токсикологии» Федерального медико-биологического агенства, 192019, Санкт-Петербург, ул. Бехтерева, 1. E-mail: [email protected]
РуденкоЛюдмила Ивановна — ЗАО «НПО «Антивирал», 197376, Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 15/17. E-mail: [email protected].
Savateeva-Lyubimova Tatyana Nikolaevna — PhD. Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: institute@ toxicology.ru
Lesiovskaya Elena Evgenevna — PhD. Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Stosman Kira Iosifovna — Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Sivak Konstantin Vladimirovich — Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Dagaev Sergey Glebovich — Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Kubarskay Larisa Georgievna — Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Filko Olga Aleksandrovna — Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Savateev Andrey Vladimirovich — Federal State Institution «Institute of Toxicology», Federal Medical-Biological Agency, 192019, Saint-Petersburg, Bechtereva str., 1. E-mail: [email protected]
Rudenko Lyudmila Ivanovna — Research & Development company "Antiviral", 197376, Saint-Petersburg, Professora Popova str., 15/17. E-mail: [email protected].
