CC BY
64
Л Журнал фундаментальной медицины и биологии УДК: 591.412-018-18-003.96:578.537.533.35
П.А. Хлопонин
оригинальные статьи
СРАВНИТЕЛЬНО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ГИСТОГЕНЕЗА И РЕАКТИВНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ СЕРДЦА ПОЗВОНОЧНЫХ
Ростовский государственный медицинский университет Кафедра гистологии, цитологии и эмбриологии
Методами световой и электронной микроскопии исследованы морфологические проявления: а) карди-ального миогенеза в развивающемся миокарде желудочков сердца миног, осетров, лягушек, ящериц, голубей, кур, кошек, человека; б) репаративных изменений в поврежденном миокарде вьюнов, карпов, ящериц, кур и кошек; в) реактивности малодифференцированных кардиомиоцитов в поврежденном сердце 3-х и 5-суточных куриных эмбрионов. Сравнительное изучение процессов гистогенеза миокарда у позвоночных позволяет утверждать о детерминированном существовании в популяции малодифференцированных сер-дечномышечных клеток целого комплекса закономерных структурных проявлений их ранней цитодиффе-ренциации. Также выявлен ряд особенностей раннего кардиомиогенеза, характерных для холоднокровных. В динамике репарации поврежденного миокарда у взрослых животных в пограничной с повреждением зоне возможна констатация нескольких типов кардиомиоцитов, различных по своему морфофункциональному состоянию. При этом пролиферативный ответ их у взрослых кур и тем более кошек был гораздо слабее, чем у других видов. Проведенный комплексный анализ исследуемых процессов способствовал объективной интерпретации различий в структуре «дедифференцированных» реактивно измененных кардиомиоцитов и миоцитов, дифференцирующихся по ходу эмбрионального кардиомиогенеза. Последние, в условиях эксперимента и в случае «переживания» травмы, демонстрируют способности к быстрой адаптивной перестройке с утратой основной массы имевшихся ультраструктур и даже — к пролиферации.
Ключевые слова: кардиомиогенез, кардиомиоцит, дифференцировка, адаптация, повреждение, регенерация.
P.A. Khloponin
COMPARATIVE MORPHOLOGICAL ASPECTS OF VERTEBRATES HEART MUSCULAR TISSUE HISTOGENESIS
AND REACTIVE CHANGES
Rostov State Medical University Department of Histology, Citology and Embryology
In the present study by means of light and electronic microscopy we investigated morphological manifestations of: a) cardiac myogenesis in developing ventricular myocardium of lampreys, sturgeons, frogs, lizards, pigeons, hens, cats, and men; b) reparative changes in the damaged myocardium of loaches, carps, lizards, hens, and cats; c) reactivity of slightly differentiated cardiomyocytes in the damaged hearts of 3 and 5-daily chicken embryos. Comparative studying of hystogenesis processes in vertebrates' myocardium allows to confirm the determined existence of the whole complex of appropriate structural manifestations of early cytodifferentiation in the population of slightly differentiated cardiomyocytes. A number of early cardiomyogenesis peculiarities, typical for cold-blooded animals was also revealed. In adult animals' damaged myocardium reparation dynamics it's possible to certify the existence of several cardiomyocytes types, distinguished by their morphofunctional state in a boundary with damage zone. Their proliferative response in adult hens and especially in cats was much more weaker, than in other species. The carried out complex analysis of explored processes promoted the objective interpretation of differences in «dedifferentiated» reactively changed cardiomyocytes structure, on the one hand, and structure of myocytes, which are differentiated in the process of emryonal catdiomyogenesis, on the other hand. In experimental conditions and in the case of trauma «experience» the last ones demonstrate an ability to rapid adaptive reorganization with the loss of basic bulk of available ultrastructures. But nevertheless they were capable even to proliferate.
Keywords: kardiomiogenez, cardiomyocyte, differentation, adaptation, damage, revivification.
оригинальные статьи
Журнал фундаментальной медицины и биологии
Введение
Обнаруженные морфологические черты сходства проявлений развития и регенерации сердечной мышечной ткани у различных позвоночных [1, 2], представляют проблемный интерес для многих специалистов медико-биологического профиля и требуют дальнейшего изучения и сравнительного анализа. Тем более, что оживившаяся дискуссия по проблеме регенерации миокарда и присутствия камбия в мышечной ткани сердца [3, 4] вывела сердечный миоцит в ряд первоочередных объектов морфологических исследований. Безусловно, что для решения теоретических и прикладных вопросов клеточной терапии заболеваний сердца у человека существенное значение имеет фенотип карди-альных миоцитов, характеристики существующих межклеточных и межтканевых взаимоотношений в миокарде. Несомненным и важным преимуществом малодифференцированных кардиальных миоцитов является способность их к делению в условиях in vitro [5]; весьма привлекательны и сведения о проявляющейся у клеточной культуры способности к модифицированию органа [6]. Поэтому целью настоящей работы был сравнительный анализ проявлений нормального и репаративного гистогенезов сердечной мышечной ткани, лишенной по убеждению многих кардиоморфологов камбиальных элементов. Выполнение поставленных перед исследованием задач было направлено на выяснение закономерностей становления структуры мы -шечной ткани сердца в нормальном кардиогенезе, а также в процессе адаптивной посттравматической перестройки (эпи)миокарда.
Материал и методы
Исследованы морфологические проявления: а) развития сердечной мышечной ткани в миокарде желудочков у 553-х представителей всех классов позвоночных (речных миног, осетров, лягушек, ящериц, диких голубей и домашних кур, кошек, человека); б) реактивности малодифференциро-ванных клеток сердечной стенки 12 трех-суточных куриных эмбрионов спустя 1,2,3 суток после очаговой термотравмы; в) реактивно-репаративных изменений в вентрикулярном миокарде у 278 особей взрослых вьюнов, карпов, лягушек, ящериц, кур, кошек через 1,3,5,7,10,15,30,90 суток после локального термокоагуляционного повреждения стенки желудочка (исследована, в основном, пограничная с очагом повреждения зона миокарда); Контролем во всех экспериментах были: удаленный от места повреждения миокард сердечной стенки и миокард неоперированных животных; миокард сердец после вскрытия грудной клетки, разреза сердечной сорочки и последующего ушивания раны (в принципиально важные для сравнительного изучения сроки — 3-7-е сутки — у гомойотермных и 7-15-е сутки — у пойкилотермных). Материал фиксировался в жидкости Карнуа и в 2,5% растворе глу-таральдегида с дофиксацией в 1% растворе четы-рехокиси осмия на фосфатном буфере при рН=7,2 и соответствующим образом обрабатывался для
световой и электронной микроскопии. Просмотр и фотосъемка окрашенных и контрастированных срезов осуществлялись в микроскопах МБИ-15, ЭМВ-100Б, и JEM-100S. Из блоков залитого в эпоксидные смолы материала также изготавливали полутонкие срезы толщиной до 1 мкм, которые окрашивали 1% растворами толуидинового синего и азура II. В динамике эмбрионального и ре-паративного гистогенезов определялись показатели пролиферативной активности кардиомиоцитов (индекс митозов), объемы их ядер, ядрышек, количество ядрышек. Достоверность различий между средними величинами устанавливалась методом вариационной статистики. Утверждения о различиях объемов ядрышек, а также числа ядрышек в ядрах дифференцирующихся и реактивно измененных кардиомиоцитов, высказывались и констатировались на основании несомненной разницы размеров сравниваемых объектов в поле зрения микроскопа на одном и том же увеличении.
Результаты и обсуждение
Идентифицируемые на ранних стадиях кардио-генеза (в раннем онтогенезе изученных видов) примитивные миокард и эндокард трубчатого сердца образуют соответственно две «чистые» популяции малодифференцированных кардиомиоцитов и эн-дотелиоцитов (Рис. 1).
Значительный объем их цитоплазмы у анамний представлен желточными зернами и включениями свободных липидов; у рептилий и птиц — в основном свободными липидами; у млекопитающих содержание таких включений незначительно. Результаты сравнительного изучения процессов кар-диального миогенеза в желудочках сердца позвоночных, в сочетании с данными литературы [1, 7 — 13] позволяют утверждать о следующих основных проявлениях специфической дифференцировки кардиомиоцитов: а) изменении формы ядер с некоторой маргинацией хроматина под ядерной оболочкой, уменьшении в них числа и объемов ядрышек, б) усложнении организации миофибрилл, митохондрий и саркоплазматической сети, в) уменьшении содержания свободных рибосом, г) уменьшении объема неструктурированной саркоплазмы, д) формировании комплексов сердечных миоци-тов, отграниченных гликолеммой и прослойками соединительной ткани; при этом наиболее вероятной областью электротонической передачи возбуждения в раннем эмбриональном (зародышевом) миокарде являются зоны адгезивных контактов. Быстрая редукция их по мере дифференцировки кардиомиоцитов сопровождалась постепенным нарастанием количества и протяженности десмосом и «зон входа миофиламентов». В период трабекуля-ции миокарда желудочков и наиболее интенсивной пролиферации сердечных миоцитов заметно увеличивалось (особенно в миокарде гомойотермных) количество «щелевых контактов». По нашим наблюдениям в дифференцирующихся кардиомиоци-тах также закономерны: е) сходство этапов формирования сократительного аппарата и первичное
Журнал фундаментальной медицины и биологии
оригинальные статьи
МФ - ••
к ,49k. <*■ v.." • f
* МФ
> ; ^ ri; j
Кб - .-A /l
' * - n ' £
~v ■ f.- Л
Л.-..с •
■■ ., г---"-'1
vr ' . . J—
..iSr'
ЛК
5 ' «ЖМ
> „ - - • к
и v ^ ЩШйш
Рис. 1 (а, б, в, г, д, е). Микро- и субмикроскопическое строение малодифференцированных кардиомиоцитов трубчатого сердца зародышей лягушки 4,5-5 мм длины (а, б, в) и зародышей кошки 16 суток ВУР (г, д, е). ГЭС - гранулярная эндоплазматическая сеть; Д - десмосомы; ЖЗ - желточные зерна; g.j.-gap junctions; Л - лизосомы; ЛК - липидные капли; М - митохондрии; МС - миокардиальный слой; Мф - миофибриллы; Мфл - миофиламенты; ПК - пластинчатый комплекс; СР - свободные рибосомы; Ц - центриоль; ЭС - эндокардиальный слой; Я - ядро; ЯО - ядерная оболочка; Яш - ядрышко; Z - материал телофрагм. а, г, д - окраска железным гематоксилином по Гейденгайну. Ув. а) об.40, ок. 7; г) об. 40, ок. 7; д) об. 40, ок 10. б, в, е - электронные микрофотографии. Ув. б) 15 000 ; в) 13 000; е) 20 000.
обнаружение локусов саркомерогенеза под сарколеммой, ж) быстрая смена «везикулярного» типа организации пластинчатого комплекса «ва-куолярным» в раннем кардиомиогенезе, з) относительная гиперплазия элементов пластинчатого комплекса, гранулярной эндоплазматической сети в малодифференцированных кардиомиоцитах и их последующая значительная редукция, более выраженная у гомойотермных, и) снижение содержания липидов и накопление гликогена к концу эмбри-
огенеза у гомойотермных и к концу личиночного периода развития у водных позвоночных.
Пролиферация дифференцирующихся кардио-миоцитов — один из основных факторов кардио-миогенеза. Выявленная нами низкая митотическая активность презумптивных и низкодифференциро-ванных сердечных миоцитов в раннем кардиогене-зе зародышей всех исследованных видов сменялась закономерным резким ее повышением в период тра-бекуляции миокарда. В конце личиночного периода
оригинальные статьи
Журнал фундаментальной медицины и биологии
развития у рыб и амфибий и в позднем эмбриогенезе зрелорождающихся особей птиц (в раннем постэмбриональном периоде — у незрелорождающих-ся видов) закономерно последующее ее снижение. Однако, максимальные показатели индексов митозов клеток миокардиального слоя у позвоночных различных классов неодинаковы, наиболее высоки они у птиц и млекопитающих (МИ=3, 65+0,18 % и 3,34+0,14%, соответственно), и самые низкие — у рыб (МИ=1,4+0,09 %).
Обнаруживаемые особенности ранней диф-ференцировки кардиомиоцитов у исследованных позвоночных обусловлены, прежде всего, спецификой эмбриогенеза и условий, в которых он протекает. В кардиальном миогенезе низших позвоночных были очевидны: а) явная гетероморфность клеток миокардиального слоя трубчатого сердца, б) демонстративный субсарколеммальный миофи-бриллогенез и слабое развитие саркоплазматиче-ской сети, в) длительно сохраняющаяся гиперплазия элементов пластинчатого комплекса и обилие мультивезикулярных телец в его зоне, г) наличие осмиофильных специфических гранул в атриаль-ных и в вентрикулярных (в меньшем количестве) кардиомиоцитах, д) отсутствие поперечной тубу-лярной системы, е) быстрое снижение содержания и полная утилизация желточных зерен, ж) формирование коротких десмосом и слабоизвитых «зон входа миофиламентов» по ходу вставочных дисков, з) ранняя дивергентная дифференцировка кардио-миоцитов на «темные» и «светлые» (они обнаружены уже у поздних личинок осетров и ранних личинок лягушек) и др.
В экспериментальном разделе работы по изучению посттравматических изменений в стенке сердца взрослых позвоночных различных классов установлено, что в первые сутки после однотипной локальной термотравмы в ее очаге наблюдается ко-агуляционный некроз тканей. Поэтому в миокарде, непосредственно прилежащем к нему и обильно ин-
фильтрированном форменными элементами крови, обнаружены преимущественно необратимые деструктивные изменения миоцитов, характерные для некротизированных или «агонирующих» [14] клеток. Уже к концу вторых суток наблюдений у взрослых гомойотермных (и к концу первой недели — у пойкилотермных) в некоторых «переживших» травму миоцитах перинекротического миокарда и во многих миоцитах, не граничащих непосредственно с зоной некроза, но расположенных вблизи нее, отмечена достоверная гипертрофия ядер и ядрышек. В просветленном цитоплазматическом матриксе встречались небольшие скопления свободных рибосом, выявлялись очаговые контрактуры миофибрилл и проявления миоцитолизиса, обнаруживались лизосомы и аутофагосомы; развиты элементы аппарата Гольджи и многочисленны ос-миофильные гранулы в его зоне, расширены тубулы саркоплазматической сети, специфичны изменения конфигурации клеточных мембран с активированием образования везикул, вакуолей, складок и ми-елиноподобных фигур. Множество обнаруживаемых мелких митохондрий с прозрачным матриксом и редкими короткими кристами следует также считать адаптивным в связи с процессами частичной редукции и перестройки сократительного аппарата в условиях нарушенной трофики и гипоксии.
К 3-м и 5-м суткам у гомойотермных, к 7-м — у рептилий и к 10-м — у рыб и амфибий в «переживших» травму фрагментах сердечной мышцы с упрощенной структурой миоцитов характерны проявления выраженной интенсификации синтетических процессов, свидетельствующие о реальности попыток вторичной цитодифференциации с рекапитулированием организации митохондрий, миофибрилл, ядер и ядрышек, межклеточных контактов и других ультраструктур подобно тому, как это происходит в эмбриональном кардиомиогенезе (Рис. 2).
Рис. 2. Ультраструктурные проявления посттравматической реорганизации кардиомиоцитов. Перинекротическая зона миокарда желудочка сердца вьюна (а) через 15 суток и вентрикулярного миокарда домашней курицы (б) спустя 3 суток после локальной термотравмы. Электронные микрофотографии. Ув. а) 12 000; б) 19 000.
Журнал фундаментальной медицины и биологии
оригинальные статьи
По данным морфометрии в миоцитах пограничного с областью повреждения миокарда птиц и млекопитающих почти в два раза увеличиваются объемы ядер и ядрышек. Они оставались увеличенными и к 7-м суткам наблюдений, достоверно снижаясь лишь на 10-е сутки. У пойкилотермных гипертрофия ядер и ядрышек была очевидной к концу первой недели, обьемы их уменьшались к 30-м суткам. Экспериментами по изучению репа-
ративного миогенеза в миокардиальном слое развивающегося сердца 3-суточных куриных зародышей установлено, что большинство пограничных с местом травмы и «переживших» ее дифференцирующихся сердечномышечных клеток претерпевали быструю адаптивную перестройку (Рис. 3), сопровождавшуюся утратой основной массы имевшихся ультраструктур.
Рис. 3. Очаг повреждения стенки желудочка сердца 3-х суточного куриного зародыша (а) и ультраструктура пограничного с повреждением его миокарда (б) через 24 часа после локальной термотравмы. а) окраска гематоксилином-эозином. Ув. об. 10, ок. 7. б) Электронная микрофотография. Ув. 3 000.
Не подвергаясь, однако, полной раздифферен-цировке, эти клетки были способны к структурной реорганизации, последующей редифференци-ровке и прохождению полного жизненного цикла. Сравнительный анализ показателей митотической активности миоцитов развивающегося миокарда 5-ти суточных зародышей курицы в контроле (МИ=2,33+0,1) и 3-х суточных зародшей — через 48 часов после экспериментального повреждения стенки сердца (МИ=2,12+0,1 — в пограничном с повреждением миокарде и МИ=1,21+0,12 — в удаленном миокарде) свидетельствует о некотором ингибирущем влиянии локальной термотравмы на пролиферацию дифференцирующихся кардиомиоцитов. Несмотря на это, исходом опытов на 3-х суточных куриных зародышах к концу 3-х суток эксперимента было полное восстановление структуры сердечной стенки, Локальный ожог вентрикулярного отдела сердца взрослых кур вызвал лишь слабый пролиферативный ответ по-
граничных с повреждением миоцитов. Но, если у пойкилотермных обнаруживались и заключительные фазы митоза, то у птиц, в основном, про- и метафазы, а у млекопитающих — даже про- и мета-фазы были исключительно редкой находкой. При этом в миокарде гомойотермных фигуры митоза кардиомиоцитов обнаруживались преимущественно в субэпикардиальной зоне.
Можно утверждать, что в течение первых двух недель после локальной термотравмы стенки желудочка сердца гомойотермных и 4-8 недель — пой-килотермных происходит некоторое увеличение очага повреждения. Апоптотическая гибель кардиомиоцитов (Рис. 4), резорбция некротизированных тканей макрофагами и врастание в очаг повреждения соединительной ткани, способствовали полной или частичной секвестрации из пограничного миокарда «переживающих» травму фрагментов сердечной мышцы или единичных кардиальных мио-цитов.
Рис. 4. Образование и обособление апоптотических телец в реактивно измененном кардиомиоците с участием маргинатов хроматина и ядерной оболочки (а); апоптотическое тельце в цитоплазме кардиомиоцита (б). 10 суток после повреждения стенки сердца озерной лягушки. Электронные микрофотографии. Ув. а) 22 000; б) 35 000.
В связи с неизбежным падением функциональных нагрузок на изолированные миоциты и возникновением функциональных дискорреляций, в них происходила различная по объему адаптивная перестройка, сопровождавшаяся редукцией сократительного аппарата, материала «зон входа мио-филаментов» и десмосом, упрощением структуры вставочных дисков, появлением «щелевых» соединений. Стабилизация границ дефекта сердечной стенки к концу указанных сроков экспериментов наблюдалась в пределах зоны преимущественно обратимых клеточных изменений, прилежащей к перинекротической зоне. При этом, наряду с заметным ослаблением процессов секвестрации новых групп сердечно-мышечных клеток, интенсивно развивающаяся соединительная ткань, внедряясь в пограничный миокард, частично разъединяла комплексы кардиомиоцитов, в которых происходила частичная утрата внутриклеточных структур. К 30-м суткам наблюдений у гомойотермных и к 90-м суткам — у пойкилотермньх по периферии формирующегося рубца изредка встречались единичные, окруженные соединительной тканью атрофирующиеся миоциты. К этим же срокам завершается восстановление и нормализация ультраструктуры кардиомиоцитов, непосредственно не граничащих с рубцом и полностью сохранивших межклеточные связи.
Столь явная неоднозначность посттравматических клеточных реакций в области локальной травмы миокарда желудочка и в пограничной с его повреждением сердечной мышце, позволяет вполне обоснованно выделить несколько типов кардиальных миоцитов, различных по своему мор-фофункциональному состоянию:
• кардиомиоциты, подвергшиеся коагуляцион-ному некрозу и мгновенной гибели;
• кардиомиоциты в состоянии некробиоза; апоптоза.
• кардиомиоциты с относительно длительным сроком «переживания» травмы (до 3-х суток у рептилий, птиц и млекопитающих и до 57 суток — у рыб и амфибий);
• кардиомиоциты изолированных от основной массы миокарда фрагментов сердечной мышцы с проявлениями нарастающей атрофии;
• кардиомиоциты с частичной утратой внутриклеточных структур;
• кардиомиоциты с проявлениями внутриклеточной регенерации и адаптивной перестройки с последующей гиперплазией орга-нелл и следствием ее — гипертрофией.
Таким образом, обнаруживаемые с трудом при светооптическом исследовании и поэтому весьма спорные различия реактивно измененных карди-омиоцитов и миоцитов, дифференцирующихся в ходе эмбрионального кардиомиогенеза, были более отчетливы и объективно распознаваемы на ультраструктурном уровне. Они не позволяют считать наблюдавшееся адаптивное «упрощение» структуры пограничных с очагом повреждения кардиальных миоцитов их «эмбрионализацией». Тем не менее, сравнительная динамика и характер проявлений реактивности сердечных миоцитов позвоночных, оказавшихся в полной или частичной изоляции от интактного миокарда, свидетельствуют о наличии у них потенций к реорганизации структуры в первые 3—5 суток после травмы миокарда гомойотермных (в первые две недели — пойкилотермых), что в известной мере, подтверждает тезис П.Г. Светлова [15] о возможности «омоложения» живых биологических систем. Основным препятствием этому являются, прежде всего, нарушения внутри- и межтканевых корреляций. Поэтому необходимо вполне критично относиться к употребляемому в научной литературе термину «дедифференцировка», понятие о которой может быть правомочным лишь в фактологичном сочетании процессов структурной
Журнал фундаментальной медицины и биологии оригинальные статьи
реорганизации с другими компонентами гистоге- экспериментальных исследований репаративной неза — детерминацией, пролиферацией, интеграци- регенерации стенки сердца в раннем эмбриогенезе. ей. К подобному заключению нас приводят данные
ЛИТЕРАТУРА
1. Румянцев П.П. Кардиомиоциты в процессах репродукции, дифференцировки и регенерации. - Наука, 1982.
2. Сидорова В.Ф. Постнатальный рост и восстановление внутренних органов у позвоночных. М., Медицина, 1969.
3. Полежаев Л.В. Факторы регенерации не регенерирующих органов и тканей. - Вестн. РАН. - 2000. - т. 10. - С. 597 -603.
4. Rota M., Padin-Iruegas M.E., Misao Yu. et al. Local Activation or Implantation of Cardiac Progenitor Cells Rescues Scarred Infarcted Myocardium Improving Cardiac Function. - Circ. Res. - Jul. 2008. - 103. - P. 107 - 116.
5. Ерохина И.Л., Семенова Е.Г., Емельянова О.И. Вентрику-лярные кардиомиоциты плодов человека in vitro: пролиферация и дифференцировка. Цитология. - 2005. - т. 47 (3). - С. 200 - 206.
6. Gojo S., Kitamura S. Ex vivo gene transfer into myocardium using replication-defective retrovirus. - 1996. - Vol. 5. -P. 81 - 84.
7. Хлопонин П.А. Светооптический и электронномикро-скопический анализ дифференцировки миоцитов желудочков и предсердий сердца в онтогенезе птиц. Арх. анат. -1976. - т. 71, вып.12. - с. 49 - 57.
8. Хлопонин П.А. Морфологические аспекты дифференциации сердечных миоцитов черноморско-азовского осетра. Арх. анат. - 1979. - т. 77, вып. 9. - с. 44 - 51.
9. Challice C.E., Viragh S.Z. The embryologic development of the mammalian heart. In: Ultrastructure in Biological Systems. Vol.6. Ultrastructure of the Mammalian Heart. / Eds. C.E.Challice, Sz.Viragh /New York, London Acad. Press, 1973. - P. 91 - 126.
10. Lemanski L.F. Heart development in the Mexican salamander, Ambystoma mexicanum. II. Ultrastructure. Am. J. Anat., 1973. - Vol. 136. - P. 487 - 525.
11. Manasek F.J. Embryonic development of the heart. I. A light and electron microscopic study of myocardical development in the early chick embryo. // J. Morphol., 1968. - Vol. 125, № 3. - P. 329 - 365.
12. McNutt N.S. Ultrastructure of intercellular junctions in adult and developing cardiac muscle. // Amer. J. Cardiol., 1970. -Vol. 25, № 2. - P. 169 - 183.
13. Sako Y. Ultrastructure of the cardiac muscle of early human embryo. // Jap. Circul. J., 1975. - Vol. 39, № 10. - P. 1123 -1133.
14. Авцын А.П., Шахламов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки. М., Медицина, 1979.
15. Светлов П.Г. Физиология (механика) развития. Том I. Процессы морфогенеза на клеточном и организменном уровнях. Л., Наука, 1978.
