Способ определения возбудителей нематодозов в почве Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

УДК 619:576.8:631.427.2.048.32

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ НЕМАТОДОЗОВ В ПОЧВЕ

Долбин ДА.*, Лутфуллин М.Х., Лутфуллина Н.А., Гиззатуллин Р.Р.**

*Казанский НИИ Эпидемиологии и микробиологии Роспотребнадзора **Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана

Наиболее актуальна оценка загрязненности почвы яйцами нематод часто встречающихся в песке, в частности на детских площадках и в песочницах -Toxocara canis, Toxocara cati и Ascaris lumbricoides.

Самым распространенным методом исследования почвы, с целью выявления яиц гельминтов, является комбинированный метод Романенко, где в качестве флотационной жидкости используется насыщенный раствор нитрата натрия [1].

На основании ранее примененного нами подхода для диагностики паразитозов [2], в данной работе была поставлена задача, разработать новый метод выявления яиц гельминтов и простейших в пробах почвы.

При использовании разработанной методики был проведён сравнительный анализ методов исследования почвы: метода Романенко и разработанного нами метода выявления яиц гельминтов. В пробу песка искусственно вносили яйца Ascaris suum, Toxocara canis и Ascaris lumbricoides в количестве 100 экз. на г песка. Яйца были получены из матки самок аскарид.

Выявление яиц гельминтов в пробах почвы авторским способом проводили по следующей схеме: вначале готовили комбинированную флотационную смесь из трех ингредиентов: 1. насыщенный раствор цинка хлорида (2 кг ZnCl2 на 1 л воды); 2. насыщенный раствор натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л воды); 3. глицерин (Ч). Далее эти три компонента смешивали в соотношении 1:1:1. Всплывшие крупные частицы сразу же удаляли. После центрифугирования (для этой цели пригодна центрифуга марки ЦЛС-3) в течение 3 мин при 800 - 1000 об./мин воду сливали, а в пробирки добавляли 150 мл трехкомпонентной флотационной системы. Перемешивали палочкой и вновь центрифугировали 3 мин.

Пробирки устанавливали в штатив, доливали тот же раствор до образования выпуклого мениска, накрывали обезжиренным стеклом (размер 6 х 12 см) так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 20-30 мин стекло снимали и микроскопировали. С целью повышения эффективности выявления яиц снятие препарата повторяли 2 - 3 раза.

При искусственном внесении в пробу почвы 100 яиц на грамм песка, не содержавшего яиц гельминтов или насекомых, метод Романенко в нашем опыте позволил выявить от 1 до 5 яиц аскарид. Авторский метод от 7 до 12 яиц.

Недостатком данного метода является низкая удельная плотность флотационного раствора. Кроме того, насыщенный раствор нитрата натрия, а так же альтернативные растворы, предлагаемые в литературе (тиосульфата натрия и натриевой селитры) очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает выявление яиц гельминтов.

Эффективность выявления яиц в почве статистически достоверно отличается при оценке по критерию Стьюдента (уровне значимости 0,95) [3].

Разработанный нами метод позволил дополнительно выявить большее количество яиц аскарид, по сравнению с методом Романенко Н.А., что обусловлено использованием многокомпонентной флотационной смеси. Компоненты предлагаемой флотационной системы не нарушали морфологию яиц паразитов и не создавали затруднений с морфологической идентификацией возбудителя. Каждый из них выполнял определенную функцию: хлористый цинк повышал плотность раствора, глицерин снижал время кристаллизации, увеличивая качество исследования, хлорид натрия снижал себестоимость анализа. Как правило, применение такого рода смесей позволяет повысить выявление яиц, ооцист и цист простейших, но требует проведение оптимизации состава смеси к каждому конкретному случаю [4].

Кроме того предлагаемый нами способ позволяет вдвое сократить время проведения анализа. Это делает оправданным использование предлагаемого метода на практике и для проведения научных исследований.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет значительно повысить эффективность выявления яиц в пробах почвы по сравнению с методом Романенко Н. А. и может использоваться на практике и при проведении научных исследований.

Литература: 1. МУК 4.2.796-99. «Методы санитарно-паразитологических исследований». 2. Долбин Д.А., Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г.//Тр. ВИГИС.- М. - 2005. - Т. 41. - С. 2005. - С. 154 - 160. 3. Савилов Е.Д., Мамонова Л.М., Астафьев В. А., Жданова С.Н.// М.: «МЕДпресс-информ», 2004. - С. 21- 26. 4. Лутфуллин М.Х., Латыпов Д.Г., Корнишина М.Д. // Казань, 2002, - 24 с.

Method for determination of eggs of nematodose causative agents. Dolbin D.A., Lutfullin M. H., Lutfullina N.A., Gizzatullin R.R.. Kazan Scientific Research Institute of Epidemiology and Microbiology of Rospotrebnadzor; N.A. Bauman Kazan State Academy of Veterinary Medicine.

Summary. The proposed method allows significantly increase the efficiency of egg detection in soil samples compared with the method of Romanenko N.A.; it can be used in practice and at performance of scientific researches.