CC BY
33
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 117
на таких моделях открывает возможность их использова- плекс, состоящий из транспортного белка а-фетопротеина ния при доклиническом изучении новых таргетных препа- (АФП) и известного индуктора апоптоза. Ранее показано, ратов, в частности направленных на рецепторы к а-фетопро- что препарат активен in vivo на подкожных (п/к) ксено-теину (АФП) (receptors for alfa fetoprotein, ReCAF). графтах некоторых опухолей человека, экспрессирующих Цель исследования — определение экспрессии ReCAF рецепторы АФП. Уровень ингибирования роста п/к опу-на опухолевых моделях, предлагаемых для доклиническо- холей сопряжен с уровнем экспрессии рецепторов в гомо-го изучения АФП-содержащих препаратов. генатах или суспензии опухолей. Наиболее чувствительным Задачи исследования. 1) Адаптация метода компетент- оказался рак молочной железы человека Т47В/АФП+++. ного хемилюминесцентного анализа на специфических Специфичность связывания препарата Аимпила с АФП-моноклональных антителах (МКА) для гомогенатов и куль- рецептором в опухоли ранее не изучали. туры клеток опухолей человека; 2) количественное опре- Цель исследования — определение специфичности деление экспрессии ReCAF в опухолевых моделях. связывания препарата Аимпила с рецепторами АФП Материалы и методы. Использовали гомогенаты в гомогенатах наиболее чувствительной модели опухоли п/к ксенографтов опухолей человека (рак молочной желе- человека. зы T47D, рак толстой кишки SW620) у Balb/c nude мышей Задачи исследования. 1) Разработка твердофазного и культуру клеток рака печени HepG2. Опухоли сонифи- иммунохемилюминесцентного анализа (ИХА) по типу цировали 30 с на льду ультразвуковым гомогенизатором «сэндвич» на специфических моноклональных антителах (BIL0N-150Y, КНР) при 60 Вт (40 %) с последующим цен- (МКА) для гомогенатов и культуры клеток опухолей че-трифугированием 10 мин при 13000 об/мин до получения ловека; 2) количественное определение связывания пре-однородных гомогенатов-супернатантов для иммунохеми- парата Аимпила с АФП-рецептором в п/к ксенографтах люминесцентного анализа (ИХА). Для количественного Т47D/АФП+++. определения ReCAF в гомогенатах использовали ранее Материалы и методы. Для тестирования использовали разработанный ИХА «РЕКАФ», основанный на компетент- конъюгат препарата Аимпила с акридином и гомогенат п/к ном одностадийном анализе присутствующих в образце ксенографтов рака молочной железы человека Т47D/АФП+++ молекул АФП-рецептора с фиксированным количеством у Balb/c nude мышей. Опухоль сонифицировали 30 с на льду меченого конъюгата (АФП-рецептор — акридин) за связы- ультразвуковым гомогенизатором (BIL0N-150Y, КНР) вание со специфическими МКА. Гомогенат нормальной при 60 Вт (40 %) с последующим центрифугированием 10 ткани мыши служил отрицательным контролем, клеточная мин при 13000 об/мин до получения однородных гомоге-суспензия К-562 — положительным контролем. Наличие натов-супернатантов для проведения разработанного нами рецепторов АФП в гомогенатах опухолей подтверждали ИХА. Твердофазный ИХА с высокоспецифичными МКА по стандартной методике Лэммли на полиакриламидном типа IgM к рецептору АФП проводили в 2 стадии: 1) свя-гель-электрофорезе и вестерн-блоттингом с использовани- зывание молекул рецептора АФП в гомогенате T47D ем специфических МКА. с МКА, иммобилизованными на твердой фазе, где серию Результаты. Результаты ИХА показали, что в гомоге- разбавлений гомогената наносили вертикально на планшет нате T47D содержится 9152 Ед/мл, в гомогенате SW620— с МКА и выдерживали 2 ч; 2) на иммобилизованном план-2839 Ед/мл, а в культуре клеток HepG2—4865 Ед/мл ReCAF. шете горизонтально проводили двукратные разбавления Видно, что количество ReCAF убывает в ряду T47D > HepG2 люминесцентного конъюгата и измеряли результаты свя-> SW620. В контрольных и тестируемых образцах по этой зывания на 96-микропланшетном флэш-люминометре Glomax методике выявлено большое количество рецепторов с мо- (Promega, США) после часовой инкубации при комнатной лекулярной массой 67 кДа, которые подтверждены на по- температуре и тщательного промывания микропланшета. лиакриламидном гель-электрофорезе и иммунологически Результаты. Конъюгат Аимпила — акридин в концен-при помощи МКА. трации 800 нг/мл демонстрирует высокую специфичность Заключение. Таким образом, из протестированных мо- связывания с АФП-рецепторами высокочувствительной делей наиболее адекватной для доклинического изучения к нему Т47D/АФП+++ независимо от разбавления гомоге-АФП-содержащих таргетных препаратов можно считать ната. При этом максимальный эффект наблюдался при рак молочной железы человека T47D с аутокринным типом 10-кратном разбавлении гомогената Т47D/АФП+++ без гормональной зависимости, дающий п/к ксенографты «насыщения» центров связывания. Чувствительность сиу иммунодефицитных мышей. стемы ограничена степенью разбавления гомогената. Заключение. Препарат Аимпила проявляет высокую Ж. Р. Черкасова1, С.А. Цуркан1, Г. Б. Смирнова2, специфичность связывания с рецепторами АФП в относи-Ю.А. Борисова2, Е.М. Трещалина2 тельно низкой концентрации 800 нг/мл в чувствительной СПЕЦИФИЧНОСТЬ СВЯЗЫВАНИЯ ПРЕПАРАТА к нему опухоли - раке молочной железы Т47D/АФП+++. АИМПИЛА С РЕЦЕПТОРАМИ а-ФЕТОПРОТЕИНА Увеличение специфичности связывания с рецептором НА ПОВЕХНОСТИ ОПУХОЛИ ЧЕЛОВЕКА T47D до максимального «насыщения» системы возможно при ИЗ КОЛЛЕКЦИИ РОНЦ ИМ. Н.Н. БЛОХИНА увеличении концентрации Аимпила и плотности гомоге-ООО «ФНЦ«ФармАксесс», Москва; ната. Полученные данные позволяют предположить, что 2ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва связанные с рецептор-опосредованным действием эффек-Введение. Препарат Аимпила представляет собой за- ты Аимпила будут проявляться в невысоких разовых дозах патентованный в РФ пероральный нековалентный ком- и дозозависимо.
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
