CC BY
22
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 101
активных агентов — цитокина фактора некроза опухолей Е.Г. Славина, А.И. Черткова, Л.Г. Жукова, и гормона тимозина. М.А. Окружнова, Э.К. Шоуа, А.А. Борунова, З.Г. Кадагидзе Цель исследования - изучить влияние Рефнота в соче- ВЗАИМОСВЯЗЬ МЕЖДУ КОЛИЧЕСТВОМ тании с химиотерапией на основные показатели имму- РЕГУЛЯТОРНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ нитета у больных диссеминированной меланомой кожи И КЛИНИЧЕСКИМ ЭФФЕКТОМ ХИМИОТЕРАПИИ на разных этапах лечения. ПРИ ТРИЖДЫ НЕГАТИВНОМ РАКЕ МОЛОЧНОЙ Материалы и методы. В исследование были включены ЖЕЛЕЗЫ пациенты с диссеминированной меланомой кожи, исчер- ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва павшие возможности стандартного лекарственного лече- Введение. Эффективность противоопухолевой терапии ния (n = 21). Контролем служили доноры без признаков во многих случаях зависит от состояния иммунной систе-онкологических заболеваний (n = 25). Все пациенты полу- мы пациента, а определенные популяции иммунокомпе-чали лечение по следующей схеме: Рефнот вводили в дозе тентных клеток связывают с прогнозом заболевания. 100 тыс. МЕ в 1-5-й дни подкожно (п/к) с 2-дневными Цель исследования — изучение связи между исходным перерывами в течение 2 нед или по 400 тыс. МЕ п/к 3 раза количеством основных популяций лимфоцитов перифе-в неделю в течение 4 нед. Начиная с 3-й или 5-й недели рической крови и результатами химиотерапии (ХТ) боль-проводили химиотерапию (дакарбазин 250 мг/м2 внутри- ных местно-распространенным трижды негативным раком венно (в/в) струйно в 1—3-й дни, ломустин 80 мг/м2 внутрь молочной железы (ТН РМЖ). в 1-й день через 3 ч после дакарбазина, цисплатин 80 мг/м2 Материалы и методы. В исследование были включены в/в в 3-й день). Перерыв между курсами составлял 2 нед. 32 пациентки с ТН РМЖ. Контролем служили здоровые Состояние иммунитета определяли до начала лечения, по- женщины (n = 26). После ХТ (цисплатин + паклитаксел) сле 2—4 нед терапии Рефнотом (до химиотерапии, 1-й больные получали оперативное лечение. До начала ХТ курс) и перед 2-м курсом химиоиммунотерапии. Иммуно- проводилось иммунофенотипирование лимфоцитов пери-фенотипирование лимфоцитов периферической крови ферической крови методом проточной цитометрии. Опре-проводили с помощью многопараметрового цитометриче- деляли количество следующих популяций лимфоцитов: ского анализа с использованием панели моноклональных (CD3+, CD3+CD4+, CD3+CD8+, CD8+CD28+, CD8+CD28-, антител. CD3+HLA-DR+, CD3+CD38+, CD4+CD25+)^; В-; Результаты. До лечения у 47,6 % больных было сниже- (CD3+CD16+CD56+) NKT-; NK- и (CD4+CD25+FOXP3+) но количество CD3+ Т-лимфоцитов (55,9 ± 3,9 %) по срав- регуляторных Т-клеток (Т ег). В соответствии с эффектив-нению с контролем (72,96 ± 4,9 %; p = 0,0000). В то же ностью проведенного лечения пациентки были разделены время у этой группы пациентов отмечалось значительное на 2 группы: без прогрессирования (группа А, n = 25) повышение исходного количества CD3 — CD16+CD56+ ес- и с прогрессированием заболевания (группа Б, n = 7). тественных киллерных клеток (24,0 ± 5,1 против 16,9 ± 6,5 % Результаты. Проведенное исследование показало, что в контрольной группе; p = 0,004), а также снижение ко- различия между группами главным образом касались ре-личества CD8+ Т-лимфоцитов, экспрессирующих коакти- гуляторных популяций лимфоцитов. Так у больных в груп-вационный рецептор CD28, и величины соотношения пе А количество Трег было выше, чем в группе Б и в контроле CD8+CD28+/CD8+CD28- (0,36 ± 0,13; в контрольной груп- (1,27 ± 0,92; 0,9 ± 0,54 и 0,64 ± 65 соответственно; р = 0,005). пе 1,04; p = 0,009). Перед 2-м курсом лечения сниженное Величина соотношения CD8+CD28+/CD8+CD28- Т-клеток количество CD3+ Т-клеток было выявлено лишь у 9,1 % па- (CD8+CD28- Т-клетки во многих исследованиях рассма-циентов, а также повысилось количество CD3+CD4+ (с 36,7 триваются как супрессорная популяция) в группе А была ± 4,4 до 43,6 ± 3,4 %; p = 0,048) и сниженное до лечения статистически значимо ниже, чем в группе Б (0,6 ± 0,4 и 1,2 количество CD3+CD8+ Т-лимфоцитов. Повышенный ± 0,78 соответственно; р = 0,047), и ниже, чем в контроль-у этих пациентов до лечения процент CD3 — CD16+CD56+ ной группе (1,13 ± 0,92; р = 0,045). Уникальную роль в ре-естественных киллерных клеток (23,7 ± 5,1 %) по срав- гуляции иммунного ответа играют NKT-клетки. Они могут нению с контролем (10,7 ± 5,7 %, p = 0,0006; 16,9 ± 6,5 %, и стимулировать, и подавлять противоопухолевый иммун-p = 0,004) после 2—4 нед терапии Рефнотом снизился ный ответ. У больных в группе А исходное количество до уровня контроля. В то же время отмечалась тенденция NKT-клеток было более чем в 2 раза выше, чем в группе Б к росту их цитотоксической активности. У этих больных (13,3 ± 5,5 и 5,6 ± 3,0 соответственно; р = 0,002), и выше, повысилось также сниженное количество CD8+CD28+- чем в контрольной группе (9,9 ± 6,0; р = 0,046). Логисти-Т-лимфоцитов и в 2 раза возросло соотношение ческий регрессионный анализ выявил значимую отрица-CD8+CD28+/CD8+CD28-. Это может указывать на повы- тельную связь между эффектом лечения и величиной со-шение цитотоксического потенциала естественных кил- отношения CD8+CD28+/CD8+CD28- (b = —1,67; р = 0,039) леров под влиянием химиоиммунотерапии с включени- и значимую положительную связь с количеством NKT-кле-ем Рефнота. ток (b = 0,43; р = 0,016). Заключение. Полученные в настоящем исследовании Заключение. Полученные результаты позволяют пред-результаты подтвердили способность Рефнота оказывать положить существование взаимосвязи между исходным положительное влияние на основные показатели противо- количеством регуляторных популяций лимфоцитов пери-опухолевого иммунитета у онкологических больных с позд- ферической крови и эффективностью проведенной ХТ ними стадиями заболевания, исчерпавшими возможности при ТН РМЖ. Определение иммунологических маркеров, стандартного лекарственного лечения. коррелирующих с течением болезни и клинической эф-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
102 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
фективностью лечения, поможет разработать индивидуаль- Заключение. Полученные данные свидетельствуют в поль-ные подходы к терапии пациентов с различными формами зу рецептор-опосредованного действия препарата Аимпи-злокачественных новообразований и прогнозировать успех ла на солидные опухоли человека и дают основание для лечения. изучения специфичности связывания препарата с рецепторами АФП. Г.Б. Смирнова1, С.А. Цуркан2, Ю.А. Борисова1, Е.М. Трещалина1 ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРЕПАРАТА АИМПИЛА Л.И. Смирнова, Л.П. Сушинина, НА ПОДКОЖНЫХ КСЕНОГРАФТАХ С. В. Устинкина, В. Н. Осипов ОПУХОЛЕЙ ЧЕЛОВЕКА ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ АНАЛОГИ ЦИФЕТРЕЛИНА ФГБУ «РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва; ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва 2ООО «ФармАксесс», Москва Введение. Цифетрелин синтезирован в лаборатории Введение. Препарат Аимпила представляет собой запа- химического синтеза РОНЦ им. Н.Н. Блохина, успешно тентованный в России пероральный нековалентный комп- прошел доклинические исследования и разрешен к кли-лекс, состоящий из транспортного белка а-фетопротеина ническому изучению. В основу настоящей работы положе-(АФП) и известного индуктора апоптоза. Показано ранее, на идея об использовании Цифетрелина в качестве специ-что препарат неактивен in vitro и in vivo на опухолевых мо- фического носителя цитотоксических групп. Адресная делях, не экспрессирующих рецепторы АФП (receptor alfa feto- доставка цитотоксических агентов к опухолям с помощью protein, ReCAF). Действие препарата Аимпила на рост ReCAF- специфических носителей позволяет увеличить актив-экспрессирующих опухолей человека ранее не изучали. ность, снизить токсичность и тем самым улучшить резуль- Цель исследования — экспериментальное изучение пре- таты лечения. парата Аимпила на рост подкожных ксенографтов ReCAF- Цель исследования — синтез 2 цитотоксических анало-экспрессирующих опухолей человека. гов Цифетрелина. Задачи исследования: 1) оценка эффективности препа- Материалы и методы. Синтез пептидов осуществляли рата Аимпила при многократном пероральном введении классическими методами пептидной химии. При синтезе на подкожных ксенографтах с различной экспрессией фрагментов пептидов использовали метод смешанных анги-ReCAF; 2) определение терапевтического диапазона доз дридов. Для защиты а-аминогрупп на всех стадиях синтеза на наиболее чувствительном штамме опухоли. применяли трет-бутилоксикарбонильную группу. Карбок-Материалы и методы. Препарат Аимпила в виде вод- сильную группу С-концевого аминокислотного остатка ного раствора гранулята (50 мг/мл) для капсулирования треонина защищали этерификацией (метиловый эфир). получали от разработчика ООО «ФармАксесс» (Россия). Для защиты реакционноспособных групп боковых цепей Исследования проведены на 3 штаммах подкожных ксено- лизина и цистеина использовали бензилоксикарбониль-графтов опухолей человека с определенными нами рецеп- ную и тетрагидропиранильную группы. Очистку и количе-торами (см. тезисы в данном журнале): раке ободочной ственное определение основных веществ проводили мето-кишки SW620/ReCAF+, раке печени HepG2/ ReCAF++ дом высокоэффективной жидкостной хроматографии. и раке молочной железы T47D/ReCAF+++. Препарат Аим- Результаты. Синтез аналогов Цифетрелина: Boc-Cys-пила вводили в желудок металлическим зондом 5—10 раз (Thp)-Phe-D-Trp-Lys(ClPhe)-Thr-OMe — метилового эфира ежедневно в диапазоне суммарных доз от 1,0 до 4,0 мг/кг. №-трет-бутил-оксикарбонил^-тетрагидропиранил-Контроль роста опухоли в динамике выполнен в адекват- цистеинил-фенилаланил^-триптофил-№-п-ди(2-хлорэтил)-ной схеме. Эффективность оценена по стандартному по- аминофенилацетил-лизилтреонина (соединение 1) и ClPhe-казателю в сравнении с контролем (Т/Стах < 42 %). Досто- Cys(Thp)-Phe-D-Trp-Lys(Z)-Thr-OMe — метилового эфира верность полученных данных рассчитана с помощью №-п-ди(2-хлорэтил)аминофенилацетил^-тетрагидро-компьютерной программы Exel для Windows 2010 (p < 0,05). пиранил-цистеинилфенилаланил^-триптофил-№-карбо-Результаты. Показано, что препарат Аимпила при мно- бензокси-лизилтреонина (соединение 2) до получения гократном пероральном введении ингибирует рост всех тетрапептида Вос-Phe-D-Trp-Lys (Z)-Thr-OMe — метило-изученных подкожных ксенографтов в зависимости от экс- вого эфира №-трет-бутилоксикарбонил-фенилаланил^-прессии ReCAF. Чувствительность опухолей возрастает триптофил-№-карбобензокси-лизилтреонина осуществляв ряду T/C = 70 % < 51 % < 22 %, что сопряжено с увели- ли постепенным наращиванием пептидной цепи, начиная чением уровня экспрессии рецептора SW620/ReCAF+ < с С-концевой аминокислоты треонина. №-карбобензокси-HepG2/ReCAF++ < T47D/ReCAF+++. На наиболее чувстви- группу лизина удаляли гидрированием. Тетрапептид со сво-тельной T47D/ReCAF+++ показано, что оптимальным те- бодной №-группой лизина конденсировали с п-ди(2-хлор-рапевтическим режимом является 5-кратное ежедневное этил)аминофенилуксусной кислотой, присоединяли цистеин, введение препарата Аимпила в разовой дозе 0,2 мг/кг (сум- предварительно защищенный по функциональным группам, марная доза 1,0 мг/кг). В этом режиме на T47D/ReCAF+++ в результате чего получили соединение 1. Соединение 2 син-достигается значимый достоверный воспроизводимый тезировано посредством конденсации Цифетрелина после в серии опытов ингибирующий эффект на уровне Т/С = снятия защитной группы с Na-цистеина с п-ди(2-хлорэтил)-22—37 % (p < 0,05) с морфологической верификацией ги- аминофенилуксусной кислотой. бели большинства опухолевых клеток через механизм Заключение. Разработаны методы синтеза 2 цитоток-апоптоза. Переносимость лечения при всех исследуемых сических аналогов Цифетрелина. Соединения 1 и 2 иссле-режимах была удовлетворительной. дуются на наличие противоопухолевой активности.
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
