CC BY
15
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ И ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ / PHYSICOCHEMICAL AND GENERAL BIOLOGY Оригинальная статья / Original article УДК 577.112.4
DOI: http://dx.doi.org/10.21285/2227-2925-2018-8-3-48-54
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ L-ТИРОЗИНА В НАНОКОНСТРУКЦИЯХ НА ОСНОВЕ СУБЪЕДИНИЦ ВИРУСА ГРИППА B/FLORIDA/04/2006 И БИОРАЗЛАГАЕМОГО ПОЛИМЕРА ДЕКСТРАНА
© Е.С. Зайцева*, И.Н. Полякова*, А.И. Гинак**
*Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов Федерального медико-биологического агентства, 198320, Российская Федерация, Санкт-Петербург, г. Красное Село, ул. Свободы, 52 "Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет), 190013, Российская Федерация, Санкт-Петербург, Московский проспект, 26
Цель работы заключалась в синтезе антиген-полисахаридных комплексов на основе поверхностных субъединиц вируса гриппа B/Florida/04/2006 в присутствии различных первичных аминов и изучении физико-химических свойств полученных комплексов. Синтез антиген-полисахаридных комплексов проводили конъюгацией с частично окисленным декстраном с последующим восстановлением боргидридом натрия. Исследованы биологические и физико-химические свойства синтезированных антиген-полисахаридных наноконструкций. В результате исследования физико-химических свойств полученных конъюгатов предложен спектрофотометрический метод определения тирозина в образцах антигена, модифицированного окисленным декстраном в присутствии тирозина. Определены соотношения основных компонентов, синтезированных антиген-полисахаридных наноконструкций «нагруженных» дополнительным количеством тирозина. Для синтезированных антиген-полисахаридных конструкций на 1 часть антигенов приходится от 16 до 30 частей декстрана и от 40 до 130 дополнительно взятых аминокислотных остатков. Ориентировочные молекулярные массы синтезированных конъюгатов колеблются в интервале от 1 до 2 млн Да. Наноконструкции с такими молекулярными массами сопоставимы с массами вирусных частиц и, по сути, представляют собой вирусоподобные частицы. Ключевые слова: поверхностные антигены, вирус гриппа, декстран, химическая модификация.
Формат цитирования: Зайцева Е.С., Полякова И.Н., Гинак А.И. Спектрофотометрическое определение L-тирозина в наноконструкциях на основе субъединиц вируса гриппа b/florida/04/2006 и биоразла-гаемого полимера декстрана // Известия вузов. Прикладная химия и биотехнология. 2018. Т. 8. N 3. С. 48-54. DOI: 10.21285/2227-2925-2018-8-3-48-54
SPECTROPHOTOMETRIC DETERMINATION OF L-TYROSINE IN NANOSCALE CONSTRUCTIONS BASED ON THE INFLUENZA VIRUS B/FLORIDA/04/2006 SUBUNITS AND A BIODEGRADABLE POLYMER DEXTRAN
© E.S. Zaitseva*, I.N. Polyakova*, A.I. Ginak**
*The Saint-Petersburg Scientific Research Institute of Vaccines and Serums
and the Enterprise for the Production of Bacterial Preparations» of Federal Medical and Biologic Agency, 52, Svobody St., Krasnoe Selo, St. Petersburg, 198320, Russian Federation **Saint-Petersburg State Institute of Technology, 26, Moscow Ave., St. Petersburg, 190013, Russian Federation
Our aim was to synthesize antigen polysaccharide complexes based on the surface subunits of the influenza virus B/Florida/04/2006 in the presence of various primary amines and to study their physicochemical properties. The antigen polysaccharide complexes were synthesized by conjugation with a partially oxidized dextran and subsequent reduction by natrium borane. The biological and physicochemical properties of the as-synthesized antigen polysaccharide nanoscale constructions are investigated. On the basis of the results, we have proposed a spectrophotometry method for determining tyrosine in antigen samples modified by oxidized dextran in the presence of tyrosine. Ratios between the main components of the synthesized antigen polysaccharide nanoscale constructions "loaded" with an additional amount of tyrosine have been determined. It is shown that the synthesized antigen polysaccharide complexes contain 16-30 parts of
dextran and 40-130 parts of additionally taken amino acid residues per 1 part of antigens. Approximate molecular weights of the synthesized conjugates are shown to range from 1 to 2 million Da. Nanoscale constructions with such molecular weights are comparable with those of viral particles and, in fact, can be considered as virus-like particles.
Keywords: surfaces antigens, influenza virus, dextran, chemical modification
For citation: Zaitseva E.S., Polyakova I.N., Ginak A.I. Spectrophotometry determination of L-tyrosine in nanoscale constructions based on the influenza virus b/florida/04/2006 subunits and a biodegradable polymer dextran. Izvestia Vuzov. Prikladnaya Khimiya I Biotekhnologiya [Proceedings of Universities. Applied Chemistry and Biotechnology]. 2018, vol. 8, no. 3, pp.48-54. (in Russian). DOI: 10.21285/2227-2925-2018-8-3-48-54
ВВЕДЕНИЕ
Известна широкая группа иммуностимулирующих препаратов полипептидной природы [1]. Некоторые сахара и аминокислоты (АК) содействуют увеличению иммуногенности молекул, проявляя свойства адъювантов [2]. На современном фармацевтическом рынке предлагается широкий выбор противовирусных препаратов, однако наиболее эффективным и доступным средством для профилактики респираторно вирусных заболеваний остается применение вакцин [3, 4]. Нами было проведено исследование процесса модификации антигенов различных штаммов вируса гриппа с помощью окисленного декстрана. Было показано, что в определенных условиях модификации полученное полимерное производное антигенов обладает повышенной иммуногенностью [5-7]. В связи с этим представляет интерес изучить полезное свойство модифицированного антигена (МАг) путем дополнительного введения в структуру МАг аминокислотных остатков как потенциальных адъювантов. С этой целью нами были синтезированы образцы модифицированного окисленным декстраном антигена (Аг) вируса гриппа B/Florida/04/2006 в присутствии некоторых аминокислот (МАгАК), которые показали высокие значения титров специфических антител в сыворотке крови животных, иммунизированных полученными образцами [8].
Основной задачей представленного исследования являлось определить количество аминокислотных остатков, ковалентно связанных в единую структуру с антигенполисаха-ридным комплексом.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Основываясь на результатах работ своих соотечественников [9-11], для химической модификации антигенов вируса гриппа использовали декстран в форме 6% раствора полиглю-кина для инфузий, окисленный периодатом натрия до степени окисления 20 ± 4%. МАгАК получали воздействием на субъединицы вируса гриппа B/Florida/04/2006 и добавленные аминокислоты предварительно окисленным декстраном со степенью окисления 20 + 3%. В качестве аминокислот использовали аминока-
проновую кислоту (АКк), аргинин (Arg) и L-тирозин (Туг) причем молярное соотношения реагентов Аг-Д-АК составляло 1:46:745; 1:46:1551; 1:46:2059; для Туг; Arg; и АКк соответственно. На заключительной стадии получения МАгАК проводили восстановление образовавшихся азометиновых связей C=N до простых C—N связей и не прореагировавших альдегидных групп до спиртовых при помощи боргидрида натрия. Образцы синтезированных МАгАК очищали от избытка восстановителя и низкомолекулярных продуктов реакции водой очищенной на ультрафильтрационной установке Vivaflov-200 с помощью мембраны с диаметром пор 5 кД.
Количественное определение сахаров проводили цветной реакцией продуктов гидролиза углеводов, обработанных антроновым реактивом [12], на спектрофотометре HITACHI модель U-2900 при длине волны равной 620 нм.
Определение азота проводили по ГФ ХII и в соответствии с ОФС «Определение азота в органических соединениях» [13]. Последующее определение ионов аммония проводили в реакции с реактивом Неслера спектро-фотометрическим методом в соответствии с ОФС 42-0042-07 [13]. Полученные результаты были представлены в ранее опубликованной работе [8].
Спектрофотометрическое определение L-тирозина основано на характерной способности раствора L-тирозина в 0,1 М соляной кислоте поглощать свет в ультрафиотетовой области при 223 нм.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Ранее на примере модификации антигенов вируса гриппа B/Florida/04/2006 было показано, как изменяется соотношение основных компонентов синтезированной молекулярной структуры в зависимости от начального соотношения реагентов реакционной смеси [5, 6]. В результате такой модификации получены новые молекулярные конструкции с содержанием от 16 до 30 молекул декстрана на одну молекулу антигена вируса гриппа. Образование высокомолекулярных наноструктур подтверждено методом гелевой хроматографии образцов и визуализацией образцов в полиакриламидном геле [7], все образцы субъединиц вируса гриппа, модифицированные декстраном, показали на-
растание титров специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных [14].
В ранее проведенных работах был использован метод определения количества аминокислот, дополнительно введенных в наноконструк-цию, основанный на разнице количества общего азота в образцах антигена вируса гриппа, модифицированных в присутствии дополнительного количества аминокислот, и образцов антигена вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном без дополнительного количества аминокислот. Было определено, что нанокон-струкция, полученная на основе антигенов вируса гриппа на 1 моль субъединиц вируса гриппа содержит от 16 до 30 молекул декстрана и от 40 до 130 молекул аминокислот, взятых в реакцию модификации [7].
Минимальный предел обнаружения общего азота методом сжигания по Къельдалю с последующим проведением реакции с реактивом Неслера составляет 0,05 мг, соответственно, минимальный предел обнаружения L-тирозина этим же методом 0,6 мг. При содержании L-тирозина в пробе меньше, чем 0,6 мг увеличивается погрешность определения. Поэтому нами предложен спектрофото-метрический метод определения L-тирозина в антигенах вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тиро-зина.
Оптическая плотность раствора субъединиц вируса гриппа зависит от аминокислотного состава белка. По данным электронной базы Inflluenza Research Database [15], 1 моль субъединиц вируса гриппа, в частности ге-магглютинина вируса гриппа B/Florida/04/2006 содержит 16 молей остатков тирозина, которые определяют величину оптической плот -
е О
1
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
ности раствора субъединиц вируса гриппа B/Florida/04/2006 в 0,1 М соляной кислоте при длине волны 223 нм.
В основе спектрофотометрического метода определения содержания L-тирозина в образцах антигенов вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тирозина, лежит закон аддитивности оптических плотностей:
D
где D223 - оптическая плотность раствора субъединиц вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тирозина; еАг, еТуг - молярные коэффициенты поглощения субъединиц вируса гриппа и L-тирозина, соответственно, лхмоль-1 х см-1; L - длина оптического пути, см; САг, СТуг - молярные концентрации субъединиц вируса гриппа и L-тирозина, соответственно, моль/л.
Количественное определение содержания L-тирозина в образцах антигена вируса гриппа, модифицированного окисленным декстраном в присутствии дополнительного количества L-тирозина, проводили спектрофотометрическим методом в соответствии с ОФС 42-0042-07 [13]. Спектры поглощения образцов субъединиц вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тирозина и L-тирозина в 0,1 М соляной кислоте, представлены на рис.1.
Анализ представленных спектров показывает, что раствор субъединиц вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тирозина, имеет максимум поглощения при 223 нм характерный для L-тирозина (рис. 1).
223 _
eAg X L X Саг + ETyr X L X СтуГ , (1)
190 220 250 280 310 340 370 • раствор тирозина в 0,1 М HCl — ■- раствор АГ Мод с Туг
-■ >
400
X, нм
Рис. 1. Спектры поглощения исследуемых образцов в 0,1 М соляной кислоте Fig. 1. Absorption spectra of the studied samples in 0,1 M hydrochloric acid
<и О
1
0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0
f
К
\
ч
ш
\ !
,
• •
ЩШ
190
220 250 280 310 340 • Раствор полиглюкина С=2,4 мг/мл — В- Раствор субъединиц B/Florida/04/2006 исх.
370
Х,нм.
Рис. 2. Спектры поглощения растворов полиглюкина и исходного образца субъединиц вируса гриппа B/Florida/04/2006 в 0,1 М соляной кислоте
Fig. 2. Absorption spectra of polyglucin solutions and the initial sample of subunits influenza virus b/Florida / 04 / 2006 in 0,1 M hydrochloric acid
CTyr [мкг/мл]
Рис. 3. Калибровочный график зависимости оптической плотности раствора L-тирозина от концентрации L-тирозина в растворе [мкг/мл]
Fig. 3. Calibration graph of the dependence of the optical density of L-tyrosine solution on the L-tyrosine concentration in the solution [pg / ml]
На рис. 2 приведены спектры поглощения исходных образцов окисленного декстрана и субъединиц вируса гриппа B/Florida/04/2006, причем спектр субъединиц вируса гриппа B/Florida/04/2006 без модификации имеет незначительный изгиб области 216-230 нм, что обусловлено присутствием остатков L-ти-розина в составе субъединиц гемагглютини-на (= 8% от молярной массы гемагглютинина, входящего в состав антигена). Спектр раствора окисленного декстрана, используемого в качестве модифицирующего агента, не имеет максимумов поглощения в исследуемой области (рис. 2).
Можно предположить, что приращение оп-
тической плотности при 223 нм раствора субъединиц вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тирозина, относительно раствора субъединиц вируса гриппа, модифицированного окисленным декстраном без дополнительного количества L-тирозина, пропорционально количеству дополнительно введенного в синтезированную наноструктуру L-тирозина.
Для построения калибровочного графика был выбран максимум поглощения при 223 нм. Раствор Туг в 0,1 М соляной кислоте подчиняется закону светопоглощения Бугера-Ламберта-Бера в интервале концентраций 2,5-20,0 мкг/мл рис. 3.
Средние арифметические значения содержания L-тирозина в МАгТуг, полученные
различными методами
The average concentrations of D-tyrosine received by different methods
Методом сжигания по Къельдалю Спектрофотометрическим методом
мг/мг Аг моль/моль Аг мг/мг Аг ммоль/моль Аг
0,206 ± 0,023 78,8 ± 8,2 0,264 ± 0,004 100,9 ± 1,5
Содержание L-тирозина (CTyr.) в исследуемом образце рассчитывали по формуле.
_ LTyr
СТуг
Cfyr* Р
VnnX1000
, [мг]
(2)
следует, что в пределах допустимой погрешности опытов (20%), содержание L-тирозина в полимерных производных антигена с L-тирозином, определенное различными методами, дает одинаковые значения.
где СТугкэл- значение содержания L-тирозина, определенное по калибровочному графику (рис. 3) мкг/мл; Р - разведение пробы; Vпр - объем пробы взятый для проведения анализа, мл.
Определение содержания L-тирозина в образцах субъединиц вируса гриппа, модифицированных окисленным декстраном в присутствии L-тирозина, проводили в трех повторностях, в качестве контрольного опыта брали Маг, синтезированный в тех же условиях (t=20 + 2 °C, т=1 час, рН=8,7 + 0,2).
Среднее арифметическое значение содержания L-тирозина в МАгТуг, определенное спектрофотометрическим методом, составляло 0,264 мг на 1мг Ад (100,9 моль/моль Аг). Сравнение результатов определения содержания L-тирозина в образцах, полученных в результате химической модификации, определенные различными методами приведены в таблице.
Из представленных в таблице результатов
Благодарность: Авторы статьи выражают искреннюю благодарность ФГУП СПб-НИИВС ФМБА России за предоставление образцов поверхностных антигенов вируса гриппа для проведения настоящего исследования.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате проведенной научно-исследовательской работы были синтезированы новые наноконструкции, образованные посредством образования ковалентной «сшивки» субъединиц вируса гриппа и высокомолекулярного полисахарида микробного происхождения - декстрана в присутствии дополнительного количества L-тирозина. Предложен спектрофо-тометрический метод определения количества L-тирозина, введенного в структуру синтезированного антиген-полисахаридного комплекса. Можно считать, что полученная в результате химической модификации наноконструкция на основе антигенов вируса гриппа на одну молекулу антигена содержит 80-100 аминокислотных остатка L-тирозина и одна макромолекула декстрана, связанная с антигеном, несет на себе в среднем от 3 до 6 аминокислотных остатка.
Acknowledgement: Contributors accord a thank SPbSRIVS FMBA for giving sample the surfaces antigens of influenza virus for recovery present research.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИИ СПИСОК
1. Машковский Д.М., Дидов С.Б. Лекарственные средства. М: Изд-во «Новая волна», 2002. 540 с.
2. Носсел Г. Антитела и иммунитет. М.: Медицина, 1973. 174 с.
3. Никоноров И.Ю. Актуальные аспекты лечения и профилактики гриппа // Российский медицинский журнал. 2015. Т. 23, N 2. С. 66-69.
4. Гендон Ю.З. Высокая эффективность и безопасность вирусных вакцин и бездоказательная критика // Вопросы вирусологии. 2013. Т. 58, N 6. С. 5-13.
5. Зайцева Е.С., Титова Т.Г., Петровский С.В., Москвичев Б.В. Полимерные нанокон-струкции антигенов вируса гриппа: Сб. 7 Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». М., 2013. T. 1. С. 128-129. URL: http://www.biomos. ru/
conference/articles.htm?god=2013 (16.04.2017)
6. Zaytseva E.S. Molecular structures suitable for the development of antiviral new generation vaccines // Applied and Fundamental Studies Proceedings of the 6th International Academic Conference. St. Louis, Missouri, USA, 2014. P. 162-165.
7. Зайцева Е.С. Повышение иммуногенно-сти субъединичной гриппозной вакцины с помощью конъюгирования поверхностных антигенов вируса гриппа с окисленным декстраном: сб. статей научно-практической конференции -биеннале «Грипп: вирусология, эпидемиология, профилактика и лечение». С-Пб., 2016. С. 4043. URL: http://www.influen-za.spb.ru/files/publica-tions/conf-2016-sbornik-materialov.pdf (20.04.2017)
8. Зайцева Е.С., Титова Т.Г., Полякова И.Н. Изучение модификации антигена вируса
гриппа B/Florida/04/2006 окисленным декс-траном в присутствии различных первичных аминов: Сборник статей третьей международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине». С-Пб., 2012. Т. 1. С. 130-131.
9. Полякова И.Н., Москвичев Б.В., Гинак А.И. Изучение химической модификации ремантадина с помощью полисахаридов // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (технического университета). 2009. N 6 (32). С. 57-59.
10. Нынь И.В., Москвичев Б.В., Иванова Г.П., Таратина Т.М. Нанобиотехнология в действии. Нанотехнологичная форма лечебного протеоллитического фермента террилитина -терридеказа® // Поликлинника. 2011. N 1-2. С. 93-95. URL: http://poliklin.ru/article201102LO_93-95.php (15.04.2017)
11. Taratina T.M., Moskvichev B.V. Specific
activity of streptokinase modified by linear hydro-philic copolymer // Pharmaceutical chemistry journal. 1985. v. 19, N.1. P. 20-24
12. Roe J.H. The determination of dextran in blood and urine with anthrone reagent // J. Biol. Chem. 1954. V. 208, N 2. P. 889-896.
13. Государственная фармакопея Российской Федерации издание XII часть 1. М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. С.101.
14. Зайцева Е.С., Талалаева О.Ю., Москви-чева Я.Б., Нынь И.В., Гинак А.И. Иммуногенность химически модифицированных полисахаридами антигенов вируса гриппа // Известия Санкт-Петербургского государственного технологического института (Технологического университета). СПбГТИ (ТУ), 2012. N 15 (41). С.75-78.
15. Influenza Research Database [Электронный ресурс]. URL: https://www.Audb. org/brc/pro-teinSequence.spg? ncbiProteinId=AGM53847&de-corator=influenza (11.04.2013)
REFERENCES
1. Mashkovskii D.M. Lekarstvennye sredstva [Pharmaceuticals]. Moscow: Novaya volna Publ., 2002, 540 p.
2. Nossel G. Antitela i immunitet [Antibodies and immunity]. Moscow: Meditsina Publ., 1973, 174 p.
3. Nikonorov I.Yu. Actual aspects of cure and prophylaxis of influenza. Rossiiskii meditsinskii zhurnal [Medical Journal of the Russian Federation]. 2015, vol. 23, no. 2. pp. 66-69. (in Russian)
4. Gendon Yu.Z.High level of effectiveness anf safety antiviral vaccines and anfair criticue. Voprosy virusologii [Problems of Virology]. 2013, vol. 58, no. 6. pp. 5-13. (in Russian)
5. Zaitseva E.S., Titova T.G., Petrovskii S.V., Moskvichev B.V. Polimernye nanokonstruktsii an-tigenov virusa grippa [Polymeric nanoconstructions of antibodies of influenza virus]. Sbornik 7 mos-kovskogo mezhdunarodnogo kongressa «Bio-tekhnologiya: sostoyanie i perspektivy razvitiya» [Proc. 7th Int. Congress «Biotechnology: condition and prospects]. Moscow, 2013, vol. 1. pp. 128129 Available at: http://www.biomos.ru/conferen-ce/articles.htm?god=2013 (accessed 16.04.2017) (in Russian)
6. Zaytseva E.S. Molecular structures suitable for the development of antiviral new generation vaccines. Applied and Fundamental Studies Proceedings of the 6th International Academic Conference. St. Louis, Missouri, USA, 2014, pp. 162-165.
7. Zaitseva E.S. Povyshenie immunogen-nosti sub"edinichnoi grippoznoi vaktsiny s pomoshch'yu kon"yugirovaniya poverkhnost-nykh antigenov virusa grippa s okislennym dekstranom. Sbornik statei nauchno-praktiches-koi konferentsii - biennale «Gripp: virusologiya, epide-miologiya, profilaktika i lechenie». Sankt-Peterburg. 2016. pp. 40-43. Available at:
http://www.influenza.spb.ru/files/publications/conf-2016-sbornik-materialov.pdf (accessed 20.04.2017)
8. Zaitseva E.S., Titova T.G., Polyakova I.N. Izuchenie modifikatsii antigena virusa grippa B/Florida/04/2006 okislennym dekstranom v pri-sutstvii razlichnykh pervichnykh aminov. Sbornik statei tret'ei mezhdunarodnoi nauchno-praktiches-koi konferentsii «Vysokie tekhnologii, fundamen-tal'nye i prikladnye issledovaniya v fiziologii i med-itsine». Sankt-Peterburg. 2012. T. 1. P. 130-131.
9. Polyakova I.N., Moskvichev B.V., Ginak A.I. Izuchenie khimicheskoi modifikatsii reman-tadina s pomoshch'yu polisakharidov. Izvestiya Sankt-Peterburgskogo gosudarstvennogo tekhnolog-icheskogo instituta (tekhnicheskogo universiteta). SPbGTI (TU), 2009. vol. 6 (32). pp. 57-59. (in Russian)
10. Nyn' I.V., Moskvichev B.V., Ivanova G.P., Taratina T.M. Nanobiotekhnologiya v deistvii. Nanotekhnologichnaya forma lechebnogo proteol-liticheskogo fermenta terrilitina - terridekaza®. Poliklinika [Polyclinic]. 2011, no. 1-2, pp. 93-95. Available at: http://poliklin.ru/article201102L0_93-95.php (accessed 15.04.2017) (in Russian)
11. Taratina T.M., Moskvichev B.V. Specific activity of streptokinase modified by linear hydro-philic copolymer. Pharmaceutical chemistry journal. 1985, vol. 19, no. 1, pp. 20-24.
12. Roe J.H. The determination of dextran in blood and urine with anthrone reagent. J. Biol. Chem. 1954, vol. 208, no. 2, pp. 889-896.
13. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiis-koi Federatsii. Izdanie XII [State Pharmacopoeia of the Russian Federation. Edition XII]. Moscow:. Nauchnyi tsentr ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya, 2008, p. 101.
14. Zaitseva E.S., Talalaeva O.Yu., Mos-kvicheva Ya.B., Nyn' I.V., Ginak A.I. Immunogen-
nost' khimicheski modifitsirovannykh polisakharid-ami antigenov virusa grippa. Izvestiya Sankt-Peterburgskogo gosudarstvennogo tekhnolog-icheskogo instituta (Tekhnologicheskogo universite-ta). SPbGTI (TU), 2012. N 15 (41). P.75-78.
Критерии авторства
Зайцева Е.С., Полякова И.Н., Гинак А.И. выполнили экспериментальную работу, на основании полученных результатов провели обобщение и написали рукопись. Зайцева Е.С., Полякова И.Н., Гинак А.И. имеют на статью равные авторские права и несут равную ответственность за плагиат.
Конфликт интересов
Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
СВЕДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ Принадлежность к организации
Елена С. Зайцева
Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов Федерального медико-биологического агентства, Научный сотрудник e.s.zaytseva@spbniivs
Ирина Н. Полякова
Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов Федерального медико-биологического агентства,
Уполномоченное лицо i.n.polakova@spbniivs
Анатолий И. Гинак
Санкт-Петербургский государственный технологический институт (технический университет), д. х. н. [email protected]
Поступила 07.07.2017
(in Russian)
15. Influenza Research Database. Available at:https://www.fludb.org/brc/proteinSequence.spg?n cbiProteinId=AGM53847&decorator=influenza (accessed 11.04.2013)
Contribution
Zaitseva E.S., Polyakova I.N., Ginak A.I. carried out the experimental work, on the basis of the results summarized the material and wrote the manuscript. Zaitseva E.S., Polyakova I.N., Ginak A.I. have equal author's rights and bear equal responsibility for plagiarism.
Conflict of interests
The authors declare no conflict of interests regarding the publication of this article.
AUTHORS' INDEX Affiliations
Elena S. Zaitseva
The Saint-Petersburg Scientific Research
Institute of Vaccines and Serums
and the Enterprise for the Production of
Bacterial Preparations»
of Federal Medical and Biologic Agency,
Research Scientist
e.s.zaytseva@spbniivs
Irina N. Polyakova
The Saint-Petersburg Scientific Research Institute of Vaccines and Serums and the Enterprise for the Production of Bacterial Preparations» of Federal Medical and Biologic Agency, Qualified Person i.n.polakova@spbniivs
Anatolii I. Ginak
Saint-Petersburg State Institute of Technology
Doctor of Chemistry
Received 07.07.2017
