CC BY
18профилактическая медицина preventive medicine
DOI: 10.12731/wsd-2016-2-7 УДК 577.112: 615.371
МОЛЕКУЛЯРНАЯ КОНСТРУКЦИЯ НА ОСНОВЕ АНТИГЕНОВ ВИРУСА ГРИППА
Зайцева Е.С., Трухин В.П., Москвичев Б.В.
Проведена химическая модификация антигенов (AG) вируса гриппа штамма B/Florida 04/2006 с помощью частично окисленного декстрана (Д).
Химическую модификацию AG вируса гриппа проводили при разных молярных соотношениях AG и Д в реакционном растворе (AG:Д) - 1:10; 1:20; 1:40; 1:100, при степени окисления Д- 20%. Иммуногенность модифицированного антигена (AG хим. мод) вируса гриппа, проверяли на беспородных белых мышах весом 10-12 г. В качестве контрольного образца использовали AG вируса гриппа B/Florida 04/2006 без модификации.
Ключевые слова: антигены вируса гриппа; химическая модификация; окисленный декстран; иммуногенность.
MOLECULAR STRUCTURE BASED OF THE ANTIGENS INFLUENZA
Zaitseva E.S., Truhin V.P., Moskvichev B.V.
Followed by chemical modification of antigens (AG) influenza virus strain B/Florida 04/2006 with partially oxidized dextran (D).
Ag chemical modification of the influenza virus was carried out at different molar ratios of AG and D in the reaction solution (AG: D) - 1:10, 1:20, 1:40, 1:100, with oxidation D - 20%. The immunogenicity of the modified
antigen (AG Chem. Modes) influenza virus were examinedfor outbred white mice weighing 10-12 g as a control sample used Ag influenza В/Florida 04/2006 until modification.
Keywords: antigens influenza; chemical modification; oxidized dextran; immunogenicity.
Во второй половине прошлого столетия наблюдалось усиленное развитие медицинской энзимологии. Появились лекарственные средства на основе ферментов и их ингибиторов для лечения желудочно-кишечных, сердечно-сосудистых, легочных, онкологических и других заболеваний [1, 2, 3, 4].
При этом, стало ясно, что белковые субстанции требуют дополнительной подготовки перед их использованием в качестве субстанций лекарственных средств по причине их невысокой устойчивости [5, 6]. Кроме этого, нативные белки часто негативно воздействуют на организм пациента, вызывая аллергическую реакцию или иные нежелательные последствия [7, 8, 9], а также быстро инактивируются в организме пациента [8]. Поэтому, наряду с успешным развитием биотехнологических приемов получения ферментов и других белковых биологически-активных веществ (БАВ) стало успешно развиваться направление, посвященное поиску путей модификации белковых субстанций. Наиболее перспективным показал себя прием химической модификации БАВ с помощью полимеров различного состава и структуры [10, 11]. Поскольку химическая модификация БАВ с помощью нерастворимых полимеров, так называемая иммобилизация, как правило, приводила к резкому падению специфической активности [12, 13], мы в своих исследованиях с самого начала сделали выбор в пользу водорастворимых полимеров, разрешенных к применению в медицине. Таким наиболее приемлемым полимером, с нашей точки зрения, оказался декстран [14, 15]. В нашей стране выпускается две лекарственные формы декстрана: полиглюкин и реополиглюкин [16].
Декстраны, как полимеры-модификаторы БАВ, используются во множестве работ, направленных на создание высокоактивных лекарственных
препаратов [17, 18]. Широкое распространение полисахаридные матрицы получили благодаря высокой биосовместимости и способности легко выводиться из организма. Разработаны различные способы активации декстранов, которые в мягких условиях вступают во взаимодействие с функционально активными группами белков. При этом, ферменты приобретают устойчивость к действию эндогенных протеиназ и ингибиторов. Усиливается их конформационная стабильность. Образование коньюгатов с полисахаридами обеспечивает также увеличение времени циркуляции модифицированных ферментов в кровяном русле, снижает их антигенность [19, 20].
Нами был выбран наиболее простой метод активации декстрана для последующего связывания с белками. Суть этого метода заключается в дозированном окислении декстрана периодатом калия или натрия.
Окисленные звенья декстрана остаются в полимерной цепи, преобразуясь в открытые кольца с альдегидными группами. Поскольку все белки имеют концевые первичные аминогруппы и еще дополнительно некоторое количество в - аминогрупп за счет встроенных в белковую цепь звеньев лизина, то дальнейшее взаимодействие между альдегидными и первичными аминными группами обеспечивает образование конъюгатов белок-полисахарид [21].
Восстановление проводили в присутствии боргидрида натрия [21].
Впервые у нас в стране были предприняты исследования на получение полимерных производных протеолитического фермента террилитина [22, 23, 24] и активатора фибринолиза - стрептокиназы [25, 26, 27]. Эти
исследования завершились разработкой лекарственных форм терридека-зы® (ФСП NЛП 001258-221111) [28] и стрептодеказы ФС 42-2471-87.
В отличие от нативного террилитина® острая токсичность терридека-зы® в десятки раз меньше, причем заметно снижена анафилактогенная активность препарата. Стабильность белковой субстанции повышена на порядок по сравнению с исходным ферментом [27, 28]. Еще более интересно проявились свойства белкового активатора в стрептодеказе®, причем модификация активатора приводила к повышению активности субстанции в десятки раз по сравнению с исходной субстанцией. Анафилактогенная активность нативной стрептокиназы позволяет применять препарат только при капельном введении, в то время, как стрептодеказу® можно вводить струйно, добиваясь быстрого положительного эффекта при лечении тромбоэмболии [27]. Причем в клинике было показано, что активатор проявляет свою активность в организме несколько суток. Такие очевидные успехи в модификации белковых субстанций позволили нам предположить, что подобный подход позволит получить положительный эффект в работе с профилактическими средствами, а именно с антигенами вакцины против гриппа с целью создания новых лекарственных препаратов.
Один из таких вариантов вакцины против гриппа реализован. Это известная вакцина Гриппол®, которая состоит из антигенов вируса гриппа - гемагглютинина и нейраминидазы, которые обволакиваются гибко-цепным сополимером - полиоксидонием [29].
Проведенный Киселевым О.И. [30] анализ структуры такой вакцины методом электронной микроскопии показал присутствие антигенов частично в денатурированном или дезорганизованном состоянии.
С целью понижения реактогенности и повышения стабильности вакцины, нами предложена концепция построения молекулярной конструкции путем построения коньюгатов антигенов вируса гриппа с окисленным декстраном.
Для химической модификации АG вируса грппа использовали окисленный декстран. В качестве декстрана (Д) брали полиглюкин по ФСП 42-0088-4747-03.
Антигены вируса гриппа были предоставлены ФГУП СПбНИИВС ФМБА России.
Синтез антигена вируса гриппа B/Florida 04/2006 (MAG) модифицированного окисленным декстраном в присутствии некоторых аминокислот осуществляли по ранее описанной схеме [31, 32].
В качестве антигенов могут быть использованы белки любых типов вирусов гриппа, в частности антигены B/Florida, B/Brisbane, A/California (H1N1), A/Perth (H3N2) или их смеси.
Соединяясь с модифицируемыми веществами, полисахариды увеличивают молекулярную массу конъюгата, обуславливая тем самым пролонгированное действие препаратов.
Окисленный декстран, который используется в предложенном техническом решении, обладает высокой биосовместимостью, а также тропно-стью к вакуалярному аппарату клеток иммунной системы [33].
Было показано, что в определенных условиях модификации полученное полимерное производное антигенов обладает повышенной иммуногенностью. В связи с этим представляет интерес усилить это полезное свойство модифицированного антигена (MAG) путем дополнительного введения в структуру MAG аминокислотных остатков как потенциальных адъювантов. С этой целью нами были синтезированы образцы модифицированного окисленным декстраном антигена (AG) вируса гриппа B/Florida04/2006 в присутствии некоторых аминокислот (MAGAK).
В качестве дополнительных аминокислот выбраны аминокапроновая кислота, L-Аргинин и L-Тирозин структурные формулы и молекулярные массы которых приведены на рис.1.
В работе использовали аминокапроновую кислоту (АКк) производства ООО «Полисинтез», производимую как субстанцию для стерильных лекарственных форм по ФСП ЛС-0001130280909; L-Аргинин (Arg) (1-ами-но-4-гуанидиновалериановая кислота) фирмы SERVA Feinbiochemica; L-Тирозин (Tyr) (1-амино-3-(п-оксифенил) пропионовая кислота) фирмы
SERVA Feinbiochemica. Тирозин мало растворим в воде, раствор в 0,1 М HCl имеет два четких максимума при Xmax=223 нм (молярный коэффициент поглощения вТ=8200, L =1см) и 274,5 нм (молярный коэффициент поглощения вТ = 8200, L = 1 см.)
а б в
Рис. 1. Структурные формулы: аминокапроновой кислоты (а), L-Аргинина (б)
и L-Тирозина (в)
Основной задачей исследования являлось определить количество аминокислотных остатков ковалентно связанных с MAG, в синтезированных образцах, а также изучить как влияет наличие в MAG дополнительных аминокислотных остатков на иммуногенность антигена.
В основе спектрофотометрического метода определения концентрации Туг в MAG Туг лежит закон аддитивности оптических плотностей формула (1):
^Hag*^^ xLxcTyr О)
где D223- оптическая плотность раствора MAg с Туг в 0,1 М соляной кислоте, при 223 нм;
bag, вТуг - молярные коэффициенты поглощения AG и Туг, соответственно, л*моль-1* см-1;
L - толщина поглощающего слоя, см;
CAg, СТуг - молярные концентрации AG и Туг соответственно, моль/л.
Количественное определение содержания Туг в MAG^ проводили спектрофотометрическим методом в соответствии с ОФС 42-0042-07 [341
при длине волны равной 223 нм, в кювете из кварцевого стекла с толщиной слоя 1 см.
Среднее арифметическое значение содержания Туг в MAG Туг определенное спектрофотометрическим методом составляло 0, 264 мг на 1 мг Ag (100,9 моль/моль AG). Сравнение результатов, определения содержания Туг в MAGTyr, полученных различными методами приведены в таблице №1.
Таблица 1.
Сравнение результатов, определения содержания Туг в МАGТyг полученных
методом сжигания по Къельдалю и спектрофотометрическим методом
Определение Туг методом сжигания по Къельдалю Определение Туг спектрофотометрическим методом
Средне арифметическое значение содержания Туг в МАGТyг Средне арифметическое значение содержания Туг в MAG15""
мг/мгAG моль/мольAG мг/мгAG ммоль/мольAG
0,200,02± 78,806,30± 0,260,01± 100,904,04±
Из представленных в таблице 1 результатов следует, что в пределах допустимой погрешности опытов (10%) содержание Туг в полимерных производных антигена с Туг определенное различными методами дает одинаковые значения.
Можно считать, что на одну молекулу AG в модифицированной форме антигена приходится 80-100 аминокислотных остатков Туг. Отсюда следует, что одна макромолекула декстрана, связанная с антигеном, несет на себе в среднем 3 аминокислотных остатка Туг. На рисунке 2 изображена предположительная схема строения MAG1^.
В результате проведённой работы определено количественно содержание аминокислот в образцах MAG с соответствующими аминокислотами, а также разработан спектрофотометрический метод определения Туг в MAG Туг. Разработанный спектрофотометрический метод отличается от используемого ранее метода определения аминокислот в MAGAK точностью, простотой определения и сокращением времени затрачиваемого на проведение анализа.
Рис. 2. Схема строения модифицированного вируса гриппа B/Florida04/2006, синтезированного в присутствии Туг дополнительно введенного в реакционную смесь
• - молекула Туг,
■ -Д полимерная макромолекула декстрана,
- жесткоцепная макромолекула AG вируса гриппа B/Florida04/2006.
Содержание аминокапроновой кислоты в MAG АКК определено методом сжигания по Къельдалю и составляет 129 моль на 1 моль AG.
Содержание аргинина в MAGAg определено методом сжигания по Къельдалю и составляет 42 моль на 1 моль Ag.
Содержание тирозина в MAG1^ определено двумя методами. Определение тирозина методом сжигания по Къельдалю (78,8 моль/моль AG) подтверждено данными полученными спектрофотометрическим методом (100,9 моль/моль
AG ). Содержание аргинина и аминокапроновой кислоты в образцах MAG*18 и MAGA™ проводили методом сжигания по Къельдалю, результаты представлены в таблице 2.
Уровень специфических антител в сыворотке крови иммунизированных животных определяли в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) [35].
В таблице 3 показана зависимость антигенной активности опытных образцов молекулярной конструкции от соотношения белка и декстрана (Б:Д) в исходной реакционной смеси.
Таблица 2.
Молярное соотношение компонентов в исследуемых образцах
Объект исследования Молярное соотношение реагирующих компонентов введенных в реакцию модификации Молярное соотношение компонентов в синтезированном МАg АК
А&Д:АК моль/моль/ моль Д:АК моль/моль АG:Д:АК моль/моль/ моль Д:АК моль/моль
1 2 3 4 5
MAG 1:46:0 1:0 1:25:0 1:0
MAG 1:46:2059 1:44 1:25:129 1:5,2
MAG 1:46:1551 1:33 1:16:42 1:2,6
MAGTy 1:46:745 1:16 1:30:89 1:3,0
Таблица 3.
Антигенная активность образцов молекулярной конструкции на основе субъединиц вируса гриппа B/Florida 04/2006/
Среднее значение титра специфических
№ Вирус гриппа B/Florida антител в группе животных (n=8-10), по
группы 04/2006 дням учета
7 14 21
1 Контроль 23±3 161±45 335±150
2 Б:Д=1:10 38 ± 5 133±48 704±212
3 Б:Д=1:20 18 ± 1 124±54 416±152
4 Б:Д=1:40 22±2 144±42 342±82
5 Б:Д=1:100 18±2 156±35 168±51
Введение декстрана (Д) в реакционной в количестве 10 молей на 1 моль AG приводит к двукратному увеличению значения титра специфических антител по сравнению с контролем, что свидетельствует об увеличении антигенной активности.
По мере увеличения доли Д эта величина падает и при соотношении Б:Д=100 она в два раза меньше контрольного значения.
Зависимость антигенной активности образцов синтезированных в присутствии дополнительного количества аминокислот определяли на группе мышей (8-10 голов) весом 10-12 г. Значения антигенной активности синтезированных образцов представлены в таблице 4. Значимость различий средних величин оценивали по т-критерию Стьюдента, разница во всех случаях достоверна (Р<0,05).
Таблица 4.
Антигенная активность образцов молекулярной конструкции на основе субъединиц вируса гриппа B/Florida04/2006 в зависимости от типа аминокислот
№ группы Вирус гриппа B/Florida 04/2006/ Среднее значение титра специфических антител в группе животных (п=8-10), по дням учета
7 14 21
1 Контроль 23±3 161±45 335±150
2 Модифицированный L- тирозином 17 ± 6 208±75 1191±205
3 Модифицированный L-аргинином 81 ± 26 648±230 824±132
4 Модифицированный хитоза-ном 24±16 453±185 936±270
5 Модифицированный аминока-проновой кислотой 40±16 324±57 1200±174
Из таблицы 4 следует, что титр специфических антител при иммунизации исследованными образцами превышает контроль, причем в некоторых случаях до трех раз.
Таким образом, образование тройного МОЛКОНа, где белок связан с декстраном и остатками аминокислот, как это схематично показано на рисунке 2, активирует звено иммунитета на выработку специфических антител в высоком титре.
Список литературы
1. Стручков В.И. Григорян А.В., Гостищев В.К. Протеолитические ферменты в гнойной хирургии. М.: Медицина, 1970. 407 с.
2. Вотяков В.И., Никандров В.Н., Савченко А.Н. Проблемы разработки тромболитических препаратов и тактика тромболитической терапии // Здравоохранение Беларусии. 1984. №8. С. 14-19.
3. Desnick R.J. Enzyme therapy in genetic diseases / Eds. R.J. Desnick - Alan Liss, 1980. Vol. 2. 450 р.
4. Олейник И.И. Влияние ферментов на злокачественные опухоли // Вопросы онкологии. 1966. №11. С. 104-109.
5. Березин И.В., Антонова В.К., Мартинек К. Иммобилизованные ферменты. Современное состояние и перспективы / М.: изд. МГУ 1976. Т. 2. 358 с.
6. Лечебные свойства фермента террилитина и его модифицированной фор-мытерридеказы. Нынь И.В. Иванова Г.П. Таратина Т.М. Москвичев Б.В. // Terra Medica. 2007. №1. С. 49-50.
7. Линденбаум Г.М. Миргородская О.А. Терешин И.М. Исследование некоторых физико-химических свойств полимерных производных террилити-на на основе декстрана // ХФЖ. 1977. Т. 11. №7. С. 81-85.
8. Линденбаум Г.М. Терешин И.М. Изучение взаимодействия ингибиторов сыворотки крови человека с нативными и модифицированными декстра-нами протеиназами - террилитином и трипсином // Биохимия. 1978. Т. 43, № 12. C. 2143-2149.
9. Лечебные свойства протеолитического фермента террилитина и его модифицированной формы терридеказы. Нынь И.В. Иванова Г.П., Таратина Г.М., Москвичёв Б.В. // Terra medica. 2007. № 1. С 49-50.
10. Шпрунка И.К. Препараты на основе модификации - аспарагиназы // Хим.-фарм. Журнал. 1988. №1. С. 32-34.
11. Leo T.K., Sokoloski T.D. Royer G.P. Serum albumin beads: an injectable, biodegradable system for the sustained release of drugs // Science.1981. Vol. 213. Pp. 223-235.
12. Березин И.В. Иммобилизованные ферменты. М.: МГУ 1976. Т. 1.
13. Березин И.В. Введение в прикладную энзимологию. М. МГУ 1982. 383 с.
14. Marshall J.J., Rabinowitz M.I. Preparation and characterization of dextran -trypsin conjugate // J.Biol. Chem. 1976. Vol. 251. Рр. 1081-1087.
15. Таратина Т.М. Синтез и свойства полимерных производных стрептокина-зы: Дис. канд. хим. наук. Л., 1985. 195 с.
16. Хлябич Г.Н. Кровезаменители. Справочник лекарственных средств для инфузионной терапии / Г. Н. Хлябич, Г. Т. Черненко. Изд. доп. и перераб. М., 2011. 272 с.
17. Kuo J.-Y., Goldstein J. a- D- galactosidase immobilized on a soluble polymer // Enzyme Microb. Technol. 1983. Vol. 5. № 4. Рр. 285-290.
18. Odya C.E. Soluble dextran complexes of kallikrein, bradykinin and enzyme inhibitors / Odya C.E. et al. // Biochem. Pharmacol. 1978. Vol.27, №2. Рр. 173-179.
19. Tereshin I.M. Wingrard L.B. Modification of enzymes with water-soluble polymers // Plenum Press. 1980. Vol. 5. Pp. 295-311.
20. Wileman T.E. Soluble aspsrsginase-dextran conjugates show 986. increased circulatory persistence and lowered antigen reactivity / T.E. Wileman, R.L. Foster, P.N. Elliott // J.Pharmacol. 1986. Vol. 38. Рр. 264-271.
21. Линденбаум Г.М., Миргородская О.А. Химическая модификция водорастворимых декстранов // ХФЖ. 1977. т. 11. №6. С. 80-83.
22. Линденбаум Г.М., Миргородская О.А. Модифицированный террилитином декстран, обладающий фибринолитической активностью // Б.И. 1980. №16.
23. Кашкин А.П. Линденбаум Г.М. Антигеннные свойства протеолитическо-го фермента террилитина, модифицированного декстраном // ХФЖ. 1977. Т.12. № 7. С. 27-30.
24. Терешин И.М. Иммобилизованные ферменты в медицине и медицинской промышленности // Актуальные проблемы гемостазиологии. М., 1979. С. 200-207.
25. Скуя А.Ж., Тратина Т.М. Технология получения стрептокиназы - препарата пролонгированного тромболитического действия // Сборник ЦБНТИ «Передовой опыт в химико-фармацевтической промышленности». М., 1983.
26. Таратина Т.М., Арбузова Т.А. Влияние условий проведения реакции на специфическую активность модифицированной стрептокиназы // Пере-редовой опыт химико-фармацевтической промышленности ЦБНТИ Мед-пром. М., 1984.
27. Таратина Т.М. Специфическая активность стрептокиназы, модифицированной линейным гидрофильным сополимером // ХФЖ. 1985 г. Т. 19. №1. С. 31-35.
28. Терридеказа - усовершенствованная лекарственная форма протеолитиче-ского фермента продуцируемого Aspergillus terricola / И.В. Нынь, Я.Б. Мо-сквичева, Г.П. Иванова, Т.М. Таратина // Поликлинника. 2007. №6. С. 87-89.
29. Viktor A. Kabanov. IUPAC From synthetic polyelectrolytes to polymersubunit vaccines // Pure Appl. Chem. 2004. Vol. 76. № 9. Рр. 1659-1677.
30. Киселёв О.И. Прогресс в создании пандемических противогриппозных вакцин и технологии их производства // Биотехнология. 2010. № 2. С. 8-24.
31. Иванова Г.П Исследование влияния полимерной модификации на физико-химические и каталитические свойства некоторых протеолитических ферментов. Дисс. канд. хим. наук. Л., 1983. 175 с.
32. Полякова И.Н. Синтез и противовирусная активность модифицированного ремантадина / И.Н. Полякова, Г.С. Шитикова, И.В. Нынь // Вторая международная научно-практическая конференция «Наука и современность». Новосибирск, 2010. Ч. 3. С. 27-31.
33. Шкурупий В.А. Туберкулезный гранулематоз // Цитофтзиология и адресная терапия. М., 2007. С. 109-150.
34. Государственная фармакопея Российской Федерации, издание XII, часть 1. М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. С. 56.
35. Методы определения показателей качества иммунобиологических препаратов для профилактики и диагностики гриппа: Методические указания. М.: Федеральный центр ГОССАНЭПИДНАДЗОРА Минздрава России. 2003. С.32.
References
1. Struchkov V.I. Grigoryan A.V., Gostishchev V.K. Proteoliticheskie fermenty v gnoynoy khirurgii [The proteolytic enzymes in purulent surgery]. M.: Meditsi-na, 1970. 407 p.
2. Votyakov V.I., Nikandrov V.N., Savchenko A.N. Zdravookhranenie Belarusii. 1984. №8. Pp. 14-19.
3. Desnick R.J. Enzyme therapy in genetic diseases / Eds. R.J. Desnick - Alan Liss, 1980. Vol. 2. 450 p.
4. Oleynik I.I. Voprosy onkologii. 1966. №11. Pp. 104-109.
5. Berezin I.V., Antonova V.K., Martinek K. Immobilizovannye fermenty. Sovre-mennoe sostoyanie i perspektivy [Martinek immobilized enzymes. Current status and prospects]. M.: izd. MGU. 1976. Vol. 2. 358 p.
6. Nyn' I.V., Ivanova G.P., Taratina T.M., Moskvichev B.V. TerraMedica. 2007. №1. Pp. 49-50.
7. Lindenbaum G.M., Mirgorodskaya O.A., Tereshin I.M. Khimiko-farmatsev-ticheskiy zhurnal. 1977. V.11. №7. Pp. 81-85.
8. Lindenbaum G.M., Tereshin I.M. Biokhimiya. 1978. V. 43, № 12. Pp. 2143-2149.
9. Nyn' I.V., Ivanova G.P., Taratina G.M., Moskvichev B.V. Terra medica. 2007. № 1. Pp. 49-50.
10. Shprunka I.K. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1988. №1. Pp. 32-34.
11. Leo T.K., Sokoloski T.D. Royer G.P. Serum albumin beads: an injectable, biodegradable system for the sustained release of drugs. Science.1981. Vol. 213. Pp. 223-235.
12. Berezin I.V. Immobilizovannye fermenty [Immobilized enzymes]. M.: MGU. 1976. Vol. 1.
13. Berezin I.V. Vvedenie vprikladnuyu enzimologiyu [Introduction to applied en-zymology]. M. MGU. 1982. 383 p.
14. Marshall J.J., Rabinowitz M.I. Preparation and characterization of dextran -trypsin conjugate. J.Biol. Chem. 1976. Vol. 251. P. 1081-1087.
15. Taratina T.M. Sintez i svoystvapolimernykhproizvodnykh streptokinazy [Synthesis and properties of polymer derivatives of streptokinase]. L., 1985. 195 p.
16. Khlyabich G.N., Chernenko G.T. Krovezameniteli. Spravochnik lekarstvenny-kh sredstv dlya infuzionnoy terapii [Blood substitutes. Handbook of drugs for infusion therapy]. M., 2011. 272 p.
17. Kuo J.-Y., Goldstein J. a- D- galactosidase immobilized on a soluble polymer. EnzymeMicrob. Technol. 1983. Vol. 5. № 4. P.p 285-290.
18. Odya C.E. et al. Soluble dextran complexes of kallikrein, bradykinin and enzyme inhibitors. Biochem. Pharmacol. 1978. Vol.27, №2. P. 173-179.
19. Tereshin I.M. Wingrard L.B. Modification of enzymes with water-soluble polymers. Plenum Press. 1980. Vol. 5. Pp. 295-311.
20. Wileman T.E., Foster R.L., Elliott P.N. Soluble aspsrsginase-dextran conjugates show 986. increased circulatory persistence and lowered antigen reactivity. J.Pharmacol. 1986. Vol. 38. Pp. 264-271.
21. Lindenbaum G.M., Mirgorodskaya O.A. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1977. V.11. №6. Pp. 80-83.
22. Lindenbaum G.M., Mirgorodskaya O.A. B.I. 1980. №16.
23. Kashkin A.P. Lindenbaum G.M. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1977. V.12. № 7. Pp. 27-30.
24. Tereshin I.M. Aktual'nyeproblemygemostaziologii. M., 1979. Pp. 200-207.
25. Skuya A.Zh., Tratina T.M. Sbornik TsBNTI «Peredovoy opyt v khimiko-far-matsevticheskoy promyshlennosti» [Collection TsBNTI "Best Practices in the chemical and pharmaceutical industry"]. M., 1983.
26. Taratina T.M., Arbuzova T.A. Pereredovoy opyt khimiko-farmatsevticheskoy promyshlennosti TsBNTI Medprom [Pereredovoy experience chemical-pharmaceutical industry TsBNTI Medprom]. M., 1984.
27. Taratina T.M. Khimiko-farmatsevticheskiy zhurnal. 1985. V.19. №1. Pp. 31-35.
28. Nyn' I.V., Moskvicheva Ya.B., Ivanova G.P., Taratina T.M. Poliklinnika. 2007. №6. Pp. 87-89.
29. Viktor A. Kabanov. IUPAC From synthetic polyelectrolytes to polymersubunit vaccines. Pure Appl. Chem. 2004. Vol. 76. № 9. Pp. 1659-1677.
30. Kiselev O.I. Biotekhnologiya. 2010. № 2. Pp. 8-24.
31. Ivanova G.P Issledovanie vliyaniya polimernoy modifikatsii na fiziko-khimi-cheskie i kataliticheskie svoystva nekotorykh proteoliticheskikh fermentov [Investigation polymer modification effect on the physico-chemical and catalytic properties of some proteolytic fermentov]. L., 1983. 175 p.
32. Polyakova I.N., Shitikova G.S., Nyn' I.V. Vtoraya mezhdunarodnaya nauch-no-prakticheskaya konferentsiya «Nauka i sovremennost'» [The Second International Scientific and Practical Conference "Science and Modernity"]. Novosibirsk, 2010. Part 3. Pp. 27-31.
33. Shkurupiy V.A. Tsitoftziologiya i adresnaya terapiya [Tsitoftziologiya and targeted therapy]. M., 2007. Pp. 109-150.
34. Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii [The State Pharmacopoeia of the Russian Federation] XII, part 1. M., 2008. P. 56.
35. Metody opredeleniyapokazateley kachestva immunobiologicheskikhprepara-tov dlya profilaktiki i diagnostiki grippa [Methods for determination of parameters of quality of immunobiological drugs for the prevention and diagnosis of influenza]. M., 2003. P. 32.
ДАННЫЕ ОБ АВТОРАХ
Зайцева Елена Сергеевна, и.о. руководителя Научно-производственного комплекса «Новые лекарственные формы»
ФГУП «Санкт-Петербургский научно исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России.
ул. Свободы, 52, г. Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320, Российская Федерация [email protected]
Трухин Виктор Павлович, директор, кандидат технических наук
ФГУП «Санкт-Петербургский научно исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России.
ул. Свободы, 52, г. Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320,
Российская Федерация
Москвичёв Борис Васильевич, заместитель директора по научной работе, доктор химических наук
ФГУП «Санкт-Петербургский научно исследовательский институт вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов» ФМБА России.
ул. Свободы, 52, г. Санкт-Петербург, г. Красное Село, 198320, Российская Федерация b.v. [email protected]
DATA ABOUT THE AUTHORS Zaitseva Elena Sergeevna, Adviser of the Department Research-Production «The New Dosage Forms»
Federal State Unitary Enterprise (FSUE) «Saint Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial Preparations» of the Federal Medico-Biological Agency 52, Svobodya St., St. Petersburg, Red Village, 198320, Russian Federation
[email protected] SPIN-code: 1921-5368 ORCID: 0000-0003-0763-0884 Researcher ID: C-5516-2016
Truhin Victor Pavlovich, Director, Cand. of Eng.
Federal State Unitary Enterprise (FSUE) «Saint Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial Preparations» of the Federal Medico-Biological Agency 52, Svobodya St., St. Petersburg, Red Village, 198320, Russian Federation
Moskvichev Boris Vasilyevich, Associate Director for Research, Dr. of Chem.
Federal State Unitary Enterprise (FSUE) «Saint Petersburg Research Institute of Vaccines and Sera & Enterprise for Production of Bacterial Preparations» of the Federal Medico-Biological Agency 52, Svobodya St., St. Petersburg, Red Village, 198320, Russian Federation
