CC BY
5
D е 1 о п g С. W., Thompson R. С., С о г n b е г g Н. A., Am. J. Roentgenol., 1951, v. 71, p. 1038. — P i n s о n E. A., S a n g h a m W. H., J. appl. Physiol., 1957, v. 10, p. 108. — Widdowson E. M., Dickerson J.W. M. В кн.: С. L. Comar, F. Bron-ner. Mineral Metabolism. New York, 1964, v. 11, part A, chapter 17, p. 2.
Поступила 5/11 1968 p.
THE EFFECT OF A SEASON AND TEMPERATURE ON THE EXTENT OF TRITIUM OXIDE ABSORPTION THROUGH THE SKIN
V. V. Khorobrykh
The effect of a season of the year, and the air temperature on the extent of tritium oxide absorption through the tail skin was studied experimentally over 94 albino female rats, weighing 203±0,9 gm. The specific activity of the solution amounted to 20,3 Mcurie/ml. Tritium oxide was found to be absorbed in summer 1 and '/a times more than in autumn and 4 and 1/2 times more than in winter. The main factor affecting the absorption is, apparently, the surrounding air temperature.
МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
S3
УДК 816.154.95:632.9541-074
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАРБИНА, ИФК, ПРЕВЕНОЛА В КРОВИ
Л. Г. Александрова, М. А. К.лисенка
Киевский научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний
Гербициды карбин (4-хлор-бутин-2-ил-Ы-3-хлорфенилкарбамат), ИФК (изопропил-Ы-фенилкарбамат) и превенол (изопропил-Ы-З-хлорфенилкар-бамат), широко применяемые в сельском хозяйстве, токсичны для человека и теплокровных животных. В связи с этим возникает вопрос об определении этих препаратов в крови с целью диагностики возможных отравлений.
Описано несколько методов изучения ИФК, превенола и карбина в сельскохозяйственных культурах и почве, однако они сложны и трудоемки по технике исполнения и потому не могут быть использованы для клинической диагностики.
При исследовании пестицидов в биологических средах необходимо решить такие вопросы, как выбор растворителя (экстрагента), способ очистки экстракта, способ количественного определения препарата.
Известно, что хлорорганические ядохимикаты, гексахлоран, некоторые фосфорорганические ядохимикаты (фосфамид) и динитрофенольные производные экстрагируются из крови серным эфиром, бензолом или метилэтил-кетоном. Количественное определение основано на колориметрировании продуктов разрушения препаратов (М. А. Клисенко и Т. А. Лебедева).
Описан также быстрый метод экстракции смесью ацетона и эфира и идентификации 23 хлорорганических и фосфорорганических ядохимикатов с помощью газовой хроматографии (Jain с соавторами).
Мы ставили своей целью исследование возможности определения кар-бина, ИФК и превенола методом ультрафиолетовой спектроскопии без применения сложной очистки экстракта. Известно, что карбин, ИФК и превенол хорошо растворимы в органических растворителях и почти нерастворимы в воде. Нами были сняты на спектрофотометре СФ-4а спектры поглощения в ультрафиолетовой области исследуемых препаратов в некоторых органических растворителях — метиловом и этиловом спиртах, н-гексане, дихлорэтане. Найдено, что карбин независимо от растворителя имеет характерный спектр поглощения с максимумом при к=278 и 286лшкдля химически чистого вещества и Х=276 и 285 ммк для технического препарата (содержание действующего начала 11,8%). Сдвиг максимумов у технического препарата, очевидно, объясняется влиянием веществ, входящих в технический препарат.
ИФК и превенол (содержание действующего начала 50%) в спиртовом растворе имеют размытые спектры с максимумами при Я=237 и 241 ммк; характерные пики на спектре наблюдаются в н-гексане. Первый имеет
^макс = 275 и 282 ммк, второй — 267, 274 и 286 ммк (рис. 1 и 2).
Ввиду того что у карбина, ИФК и превенола характерные спектры с максимумами при X = 278 ммк (276 ммк для технического препарата), 275 и 274 ммк соответственно наблюдались в н-гексане, мы определяли в дальнейшем оптическую плотность на этих длинах волн. При выборе растворителя для извлечения препарата из крови мы остановились на этиловом спирте и н-гексане. Однако рядом опытов было установлено, что при применении спирта экстракты контрольных образцов крови дают непостоянные, довольно высокие показания оптической плотности в исследуемых интервалах длин волн. В случае применения н-гексана коэстрактивные вещества крови не мешают определению препаратов.
Таким образом, в основу спектрофотометрического метода определения карбина, ИФК и превенола (50%) в крови была положена их способность в н-гексановом растворе давать максимумы поглощения в ультрафиолетовой области при Х=278 , 275 и 274 ммк соответственно.
Определение проводили следующим образом. В ряд пробирок с притертыми пробками вносили по 0,5 мл цельной крови и н-гексановые растворы, содержащие известное количество исследуемого препарата. Затем в каждую пробирку наливали по 5 мл н-гексана и экстрагировали, энергично встряхивая 30 мин. Экстракты сливали в чистые пробирки, заранее прокалиброванные на 6 мл. Доводили объем до 6 мл н-гексаном. Определяли оптическую плотность растворов на спектрофотометре СФ-4а, в ультрафиолетовом свете, в кювете 1 = 1 см при максимальной длине волны. По калибровочному графику находили содержание препарата и сравнивали его с внесенным количеством. Точность определения карбина, ИФК и превенола показана в таблице. Как видно из таблицы, точность определения карбина составляет 91,4% (технического 96,7%), относительная ошибка определения 3,5% (технического 4,5%); точность определения ИФК равняется 92,2% (относительная ошибка определения 1,6%) и превенола — 92,4% (относительная ошибка 4,1%).
Калибровочные графики, представленные на рис. 3, были построены следующим образом. В ряд пробирок вносили н-гексановые растворы иссле-
N к; г? ¡3
Рис. 1. Спектры поглощения в ультрафиолетовом свете спиртовых растворов. / — карбин технический; 2 — карбин химически чистый; 3— превенол 50 ; 4— ИФК.
Точность определения препаратов в крови
Препарат Внесено (в мкг) Найдено (в мкг) Процент определения Препарат Внесено (в мкг) Найдено (в мкг) Процент определения
* Карбин химически 20 20,6 103,0 ИФК химически чис- 70 68 97,1
чистый 20 18,0 90,0 ты и 70 62 88,6
20 18,6 93,0 70 63 90,0
20 17,0 85,0 70 66 94,2
20 17,2 86,0 70 64 91,4
В среднем . . . 91,4 В среднем . . . 92,2
Карбин технический 26 24 92,3 Превенол 50 % 75 61 81,3
препарат (11,8% 26 27 103,8 (50 % действующе- 75 63 84,0
действующего нача- 26 27 103,8 го начала) 75 77 102,8
ла) 26 24 92,3 75 77 102,8
26 25 96,0 75 76 101,3
26 26 100,0 75 61 81,3
26 24 92,3 75 70 93,3
20 18 90,3
10 10 100,0
В среднем . . . 96,7 В среднем . . . 92,4
дуемых препаратов, содержавшие 0, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60 и 70 мкг препарата (для технических препаратов количество внесенного вещества считали по действующему началу). Доводили объем раствора в каждой пробирке до 6 мл и определяли оптическую плотность на спектрофотометре
Рис. 2. Спектры поглощения в ультрафиолетовом свете н-гекса-
новых растворов. / — карбин технический; 2 — карбин химически чистый; 3— превенол 50?.; 4 — ИФК.
Рис. 3. Калибровочные графики
для определения / — карбин технический (С — его оптическая плотность); 2 — карбин химически чистый; 3 — превенол 50%; 4— ИФК.
/О ЗО 4О SO бО Л7 т ЗО
_111 I I
§ к £ & § ¡¡3 $
СФ-4а в ультрафиолетовом свете для карбина при Ямакс=278 ммк (276 ммк— техн.), ИФК при Амакс=275 ммк и превенола при ^макс=274 ммк.
Следует отметить, что при одной и той же концентрации действующего вещества оптическая плотность технического карбина значительно выше оптической плотности химически чистого. Это можно объяснить влиянием растворителя и эмульгатора, входящих в состав технического препарата.
Чувствительность определения технического карбина 1 мкг, химически чистого карбина 2 мкг, ИФК 10 мкг, превенола (50%) 6 мкг в анализируемом (спектрофотометрируемом) объеме.
Очевидно, наряду с карбином, ИФК и превенолом возможно спектрофотометр ическое определение и других ядохимикатов, имеющих характерные спектры в н-гексановых растворах в ультрафиолетовой области спектра.
ЛИТЕРАТУРА
Клисенко М. А., Лебедева Т. А. Определение малых количеств ядохимикатов в воздухе, продуктах питания, биологических и других средах. Киев, 1964, с. 32; 57; 62; 120. —Jain N. С., Fontan С. R., Kirk Р. L., J. Pharm. (Lond.), 1965, v. 17, p. 362.
Поступила 29/X1I 1967 P.
УДК в 14.777:576.SSI.214(Enterococcus).093.1
К МЕТОДИКЕ ВЫДЕЛЕНИЯ ЭНТЕРОКОККОВ ИЗ ВОДЫ
Л. Е. Корш, Н. Г. Киченко
Институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
В нашей стране энтерококк как санитарно-показательный организм изучался сравнительно мало; только в последние годы была разработана методика исследования воды на энтерококки и предложены питательные среды для их выделения (Г. П. Калина). К настоящему времени насчитывается довольно значительное количество селективных сред и методов выделения энтерококков из воды.
В связи с работой по унификации методов исследования качества вод, которая проводится в рамках СЭВ (1966), нами были испытаны некоторые методы и среды, предложенные учеными ГДР для выделения энтерококков из воды. Были испытаны жидкая полимиксиновая среда Г. П. Калины и глюкозо-пептонный бульон как первоначальные среды для накопления энтерококков, жидкая и плотная среды КФ, предложенные Kenner с соавторами (1960, 1961), и плотная среда с кристаллическим фиолетовым и ТТХ, разработанная Г. П. Калиной, как подтверждающие среды.
Схема испытаний следующая:
1-й метод. Посев исследуемой воды в нисходящих количествах различных 10-кратных разведений делают в пробирки с глюкозо-пептонным бульоном (по примеру посева на среду Эйкмана) с инкубацией посевов в течение 18—24 часов при 37° и последующим высевом среды из всех засеянных пробирок по 1 мл в пробирки с жидкой средой КФ. Через 18—24 часа инкубации в условиях указанной температуры при наличии энтерококков среда КФ желтеет, что расценивается как положительный результат.
2-й метод. Посев той же пробы воды в тех же количествах производят по тому же принципу, что и в 1-м методе, но в пробирки с жидкой поли-миксиновой щелочной средой Калины и с инкубацией посевов в течение 48 часов при 37° с последующим высевом из всех пробирок через 24 и 48 часов на плотную подтверждающую сахарно-дрожжевую среду Калины. Посев делают в виде штриха на чашку, разделенную на сектора. При положительном результате на подтверждающей среде вырастают колонии, характерные для энтерококков.
С целью проверки элективности испытанных сред этих 2 методов мы провели дополнительные исследования, которые сводились к характеристке наличия энтерококков, выделяемых с подтверждающих сред. Для этого
