CC BY
39
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
2. Li B, Tsui HC, LeClerc JE, Dey M, Winkler ME, Cebula TA. Molecular analysis of mut S expression and mutation in natural isolates of pathogenic Escherichia coli. Microbiology. 2003 May; 149(Pt 5): 1323-1331.
3. Goncharov АE, Zueva LP, Suvorov А^ Glazovskaya LS, Brusina EB, Аzizov IS, Lavrinenko АУ, Suborova TN, Sofronova ON, Ushkareva OА, Yadrikhin-skaya VK. Leading epidemiologically important clones of Staphylococcus aureus circulating in geographically remote regions of Eurasia. Medical almanac. 2014. № 4(34). S. 27-30. Russian (Гончаров А.Е., Зуева Л.П., Суворов А.Н., Глазовская Л.С., Брусина Е.Б., Азизов И.С., Лавриненко А.В., Су-борова Т.Н., Софронова О.Н., Ушкарева О.А., Ядрихинская В.К. Ведущие эпидемиологически значимые клоны золотистого стафилококка, циркулирующие в географически удаленных регионах Евразии //Медицинский альманах. 2014. № 4(34). С. 27-30.).
4. Prunier AL, Malbruny B, Laurans MJ, Brouard JF, Duhamel and R. Leclercq. High rate of macrolide resistance in Staphylococcus aureus strains from patients with cystic fibrosis reveals high proportions of hypermutable strains. J. Infect. Dis. 2003; 187: 1709-1710.
5. Abramson JH. WINPEPI (PEPI-for-Windows): computer programs for epidemiologists. Epidemiol Perspect Innov. 2004 Dec 17; 1(1): 6.
6. Lindsay JA, Sung JM. The RM test for determining methicillin-resistant Staphylococcus aureus lineages. Methods Mol Biol. 2010; 642: 3-11.
7. Hsieh P. Molecular mechanisms of DNA mismatch repair. Mutat. Res. 2001; 486: 71-87.
8. Rayssiguier C, Thaler DS, Radman M. The barrier to recombination between Escherichia coli and Salmonella typhimurium is disrupted in mismatch-repair mutants. Nature. 1989 Nov 23; 342(6248): 396-401.
9. Cox EC. Recombination, mutation and the origin of species. Bioessays. 1995 Sep; 17(9): 747-749.
Статья поступила в редакцию 12.10.2015 г.
Захарова Ю.В., Леванова Л.А.
Кемеровская государственная медицинская академия,
г. Кемерово
СТОЯНИЕ ІМИКРОБМОЦеНОЗА М1Ч-ИНфИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕ
Предмет исследования. В работе использованы 378 штаммов, изолированных из кишечника 75 ВИЧ-инфицированных детей.
Цель исследования - изучение состояния микробиоценоза кишечника у ВИЧ-инфицированных детей.
Методы исследования. Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили общепринятыми методами. Были изучены факторы адгезии, колонизации и антагонизма доминантной микрофлоры и характер взаимодействия между доминантными и ассоциативными микросимбионтами.
Основные результаты. Показано, что при ВИЧ-инфекции снижение интенсивности колонизации слизистой кишечника бифидобактериями и лактобациллами обусловлено низкой адгезивной активностью микроорганизмов. Условно-патогенные бактерии формируют ассоциации с грибами рода Candida и проявляют антагонизм по отношению к доминантной микрофлоре. Область их применения. Медицинская микробиология.
Выводы. Полученные данные раскрывают механизмы нарушений колонизационной резистентности слизистой кишечника у ВИЧ-инфицированных детей.
Ключевые слова: микробиоценоз; биологические свойства; ВИЧ-инфекция.
Zakharova J.V., Levanova L.A.
Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo
HIV-INFECTED CHILDREN'S INTESTINE MICROBIOCENOSIS CONDITION Objective. 378 strains isolated from intestine of 75 HIV-infection children were used for the study.
Aim - researching of HIV-infected children's intestine microbiocenosis condition.
Methods. Isolation and identification of microorganisms were performed by conventional methods. Factors of adhesion, colonization and antagonism of the dominant microflora and the nature of the interaction between dominant and associative microsymbionts have explored.
Results. It is shown that in HIV infection the reduction in the intensity of colonization of the mucosa of the intestine with Bifidobacteria and Lactobacilli due to low adhesive activity of microorganisms. Opportunistic bacteria form associations with fungi of the genus Candida, and show antagonism towards the dominant microflora.
Field. Medical Microbiology.
Conclusions. Obtained data reveal mechanisms of disorders of colonization resistance of the intestinal mucosa in HIV-infected children.
Key words: microbiocenosis; biological properties; HIV-infection.
кишечника
Й
Важнейшей функцией нормальной микрофлоры является ее участие в формировании колонизационной резистентности, что предотвращает заселение и избыточное размножение на сли-
зистых оболочках патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. При этом поддержание стабильного микроэкологического состояния является особенно актуальным для ВИЧ-инфицированных паци-
ОК{едицина
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 4 2015
29
СОСТОЯНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ
ентов, так как вторичные бактериальные и грибковые инфекции, вызванные условно-патогенной микрофлорой, нередко являются причиной смертельных исходов наряду с туберкулезом и протозойными инфекциями [1, 2]. Сокращение продолжительности жизни ВИЧ-инфицированных детей, инвалидизация, снижение качества жизни, как детей, так и их родителей — все это предопределяет необходимость в разработке новых подходов в предупреждении развития оппортунистических инфекций или поиске возможностей для их отсроченного наступления [2].
Относительно недавно была выдвинута новая теория развития оппортунистических инфекций у ВИЧ-инфицированных людей, согласно которой основным фактором, обуславливающим вторичные бактериально-грибковые заболевания, является нарушение нормальной микрофлоры — естественной защиты против микробов-оппортунистов [3-5]. Симбиотическая микрофлора у таких пациентов страдает из-за длительного использования антибиотиков широкого спектра, противопаразитарных препаратов и, возможно, препаратов с антиретровирусной активностью. Кроме того, положительный тест на ВИЧ приводит к тяжелому устойчивому психологическому стрессу у взрослого пациента, а у детей стрессовые ситуации связаны с пребыванием в стационарах, что также вносит свой вклад в развитие микроэкологических нарушений у данной категории пациентов. Прогрессирование CD4-лимфоцитопении и первые признаки бактериально-грибковых инфекций, в свою очередь, побуждают врача усилить терапию антибиотиками и противовирусными препаратами. Это приводит к дальнейшему нарушению нормальной микрофлоры и возникает порочный круг [5].
Многие работы демонстрируют, что микроэкологические нарушения кишечника, вне зависимости от причины, которые вызвали их, имеют сходный характер, т.е. обычно отмечают снижение числа доминантных микросимбионтов и увеличение интенсивности колонизации слизистой условно-патогенными бактериями и грибами. Однако также известно, что в процессе формирования ассоциаций микроорганизмы меняют свои биологические свойства [4]. При этом исследования чаще всего демонстрируют изменения вирулентности условно-патогенных микросимбионтов, а данные по функциональным характеристикам доминантной микрофлоры у ВИЧ-инфицированных пациентов немногочисленны и практически отсутствуют. У них плохо изучены видовая структура бифидо-и лактофлоры, их способность к адгезии, колонизации в условиях иммунодефицита, антагонистические свойства по отношению к условно-патогенным микроорганизмам, что не позволяет говорить о механизмах развития микроэкологических нарушений и оп-
Корреспонденцию адресовать:
ЛЕВАНОВА Людмила Александровна, 650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, д. 22а, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России.
Тел.: 8 (3842) 73-28-71.
E-mail: [email protected]
портунистических бактериальных и грибковых инфекций при ВИЧ-инфекции. Также знание биологических свойств доминантной микрофлоры необходимо для определения конкретных точек приложения для средств и методов коррекции микробиоценоза у ВИЧ-пози-тивных пациентов.
Цель исследования — анализ состояния микробиоценоза кишечника у ВИЧ-инфицированных детей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Изучен микробиоценоз кишечника 120 детей. В опытную группу вошли 75 детей с ВИЧ-инфекцией 11в (36 %) и 111а (64 %) стадий, средний возраст детей составил 2,3 ± 0,2 года. Диагноз ВИЧ-инфекция был выставлен на основании данных эпидемиологического анамнеза (перинатальный контакт) и подтвержден результатами ИФА, ПЦР, иммуноблотин-га. Группа сравнения включала 45 ВИЧ-негативных относительно здоровых детей. Группы были сопоставимы по возрасту и полу. Объектом исследования были 378 микроорганизмов, выделенных из содержимого толстой кишки детей с ВИЧ-инфекцией, и 223 штамма от детей группы сравнения.
Исследование кишечного микробиоценоза проводили с помощью количественного бактериологического метода. Для выделения облигатно-анаэробных бактерий применяли анаэростаты и газогенерирующие пакеты. Идентификацию бактерий и грибов осуществляли с использованием коммерческих тест систем ANAERO-TEST 23, ПБДС, STREPTO-TEST 16, AU-XOCOLOR, СИБ для энтеробактерий набор № 2. Проведено 886 опытов по изучению биологических свойств участников симбиотических ассоциаций.
Адгезивные свойства микроорганизмов изучали согласно методике В.И. Брилиса (1986). Для этого культуры выращивали в течение 24 часов на скошенном мясо-пептонном агаре с учетом типа дыхания. Взвесь микроорганизмов готовили на стерильном изотоническом растворе хлорида натрия в концентрации 109 КОЕ/мл. Клеточным субстратом служили формализированные эритроциты человека 0(1) группы Rh(+), густотой 100 млн/мл. Эритроциты и взвесь микроорганизмов в равных объемах по 50 мкл соединяли в пробирках и инкубировали при 37°С в течение 1 часа, регулярно встряхивая смесь. После этого готовили мазок, высушивали, фиксировали 96 % спиртом 15 мин и окрашивали по Романов-скому-Гимза. Изучение адгезии проводили под световым микроскопом, подсчет вели на 50 эритроцитах. Оценку результатов опыта вели по индексу адгезивности микроорганизма (ИАМ), который характеризует среднее количество микробных клеток на одном участвующем в адгезивном процессе эритроците. Микроорганизмы считали неадгезивными при ИАМ < 1,75; низкоадгезивными — от 1,76 до 2,5; среднеадгезивными — от 2,51 до 4,0 и высокоадгезивными — при ИАМ > 4,0.
Активность кислотообразования бифидобактерий определяли титрометрическим методом. С этой целью
30
T. 14 № 4 2015 MediciinnLass
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
к суточным культурам бифидобактерий, выращенных на среде Блаурокка в объеме 5 мл, добавляли по 2 капли индикатора фенолфталеина и титровали 0,1н NaOH. Количество щелочи, пошедшей на титрование, соответствует количеству образуемой кислоты в 5 мл культуральной жидкости. Окончательный результат выражали в градусах Тернера: Т° = А х К х 20, где А — количество 0,1н щелочи, пошедшее на титрование 5 мл исследуемой жидкости, К — поправка к титру, определяемая при титровании 0,1н раствора щелочи 0,1н янтарной кислотой, Т° — величина, выражающая количество 0,1н щелочи, пошедшей на титрование 100 мл исследуемого образца.
Антагонистическую активность микроорганизмов определяли методом перпендикулярных штрихов на плотной питательной среде. На чашку с плотной питательной средой петлей 2 мм наносили полоску культуры бактерий и инкубировали 24-48 часов с учетом типа дыхания. Далее к выросшей культуре подсевали участников ассоциаций, предварительно выращенных на скошенном мясо-пептонном агаре в течение 18 часов. Посев производили петлей диаметром 1 мм в направлении от зоны роста изучаемых бактерий, не касаясь ее и перпендикулярно ей. Чашки инкубировали при температуре 37°С 24 часа. Учет результатов вели по величине зоны отсутствия роста мик-роба-ассоцианта в мм.
На начальном этапе статистической обработки полученной информации применяли программы Microsoft Office Excel 2003 (лицензионное соглашение 74017-640-0000106-57177). С использованием названной программы осуществляли формирование базы данных, включающей информацию о видовом составе и количественном уровне кишечных микросимбионтов, их адгезивных характеристиках, характере взаимоотношений, а также о распространенности и уровне экспрессии факторов вирулентности среди условно-патогенных бактерий. Количественные признаки представлены в виде M ± m, где М — среднее арифметическое, m — ошибка средней величины.
Для статистического анализа использовали пакет прикладных программ Statistica (версия 6.1 лицензионное соглашение BXXR 006ВО92218 FAN 11). Характер распределения переменных величин в рассматриваемой совокупности определяли с помощью построения гистограмм. В связи с тем, что характер распределения данных не соответствовал нормальному, для статистической обработки применяли непараметрические критерии оценки статистической значимости. Для определения значимости различий между двумя несопряженными совокупностями использовали критерий Манна-Уитни и критерий х2. Для анализа связей между колонизационным уровнем бактерий и их адгезивной активностью применяли коэффициент корреляции рангов Спирмена. Критический уро-
вень значимости при проверке статистических гипотез в данном исследовании принимался равным 0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
К числу доминантной микрофлоры кишечника относятся бифидобактерии и лактобациллы, основной функцией которых является формирование колонизационной резистентности (КР). Одним из механизмов КР является адгезивная активность доминантной микрофлоры, обуславливающая способность колонизировать биотоп и вступать в антагонизм с ассоциативными микросимбионтами. Проведенные исследования показали наличие статистически значимых различий между средними значениями индекса адгезии микроорганизмов (ИАМ) у доминантных и ассоциативных микросимбионтов, выделенных от ВИЧ-по-зитивных и ВИЧ-негативных детей, кроме фекальных энтерококков (табл.).
Среди бифидобактерий, выделенных от детей с ВИЧ-инфекцией, преобладали штаммы со средней или низкой адгезивной активностью, доля которых в структуре бифидофлоры составила 81,2 %. В группе сравнения таких культур было только 44,4 %, т.е. 55,6 % проявляли высокую способность к адгезии. Различия бифидофлоры по структуре адгезивной активности в сравниваемых группах были статистически значимы (х2 = 7,1; df = 2; p = 0,04). Установлено наличие прямой корреляционной связи между показателем специфической адгезии и интенсивностью колонизации слизистой кишечника бифидобактериями (r = 0,52; p = 0,001). Чем выше показатель специфической адгезии, тем более высокого количественного уровня достигает бифидофлора. Так как бифидобактерии у детей с ВИЧ-инфекций были отнесены к средне- и низкоадгезивным культурам, интенсивность колонизации кишечника бифидофлорой у детей с ВИЧ-инфекцией составила 7,2 ± 0,4 lg КОЕ/г, у
Таблица
Средние значения индексов адгезии (M ± m) микроорганизмов у ВИЧ-позитивных и ВИЧ-негативных детей Table
The average of the microorganisms' adhesive indexes (M ± m) of the HIV-positive and HIV-negative children
Микроорганизмы ВИЧ- позитивные дети ВИЧ- негативные дети Уровень значимости различий(p)
Bifidobacterium spp. 2,61 ± 0,3 4,12 ± 0,2 0,0009
Lactobacillus spp. 2,92 ± 0,2 4,50 ± 0,3 0,02
E. coli lac+ 2,44 ± 0,2 4,23 ± 0,2 0,0008
Enterococcus spp. 2,98 ± 0,2 3,12 ± 0,3 0,12
Staphylococcus spp. 3,74 ± 0,2 2,11 ± 0,4 0,001
Klebsiella spp. 3,51 ± 0,6 1,90 ± 0,2 0,0009
Сведения об авторах:
ЗАХАРОВА Юлия Викторовна, кандидат медицинских наук, доцент, кафедра микробиологии, иммунологии и вирусологии, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России, г. Кемерово, Россия. E-mail: [email protected]
ЛЕВАНОВА Людмила Александровна, доктор медицинских наук, зав. кафедрой микробиологии, иммунологии и вирусологии, ГБОУ ВПО КемГМА Минздрава России, г. Кемерово, Россия. E-mail: [email protected]
ОК{вдицина
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 4 2015
31
СОСТОЯНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗА КИШЕЧНИКА У ВИЧ-ИНФИЦИРОВАННЫХ ДЕТЕЙ
детей из группы сравнения содержание бифидофло-ры, обладающей высокими адгезивными свойствами, было статистически выше — 9,2 ± 0,2 lg КОЕ/г (р = 0,005).
На формирование определенного типа микробиоценоза оказывают влияние и химические факторы антагонизма доминантной микрофлоры. При изучении способности бифидобактерий к продукции кислот, образующихся при ферментации углеводов, у ВИЧ-инфицированных детей установлена низкая кислотообразующая активность бифидофлоры. Титруемая кислотность в среднем составила 74,14 ± 5,8°Т, тогда как в группе сравнения этот показатель достигал 111,21 ± 6,7°Т (р = 0,008). Также отмечали статистически значимую разницу в структуре кислотообразующих штаммов (х2 = 18,3; df = 2; р = 0,0001). Большинство штаммов бифидобактерий от детей с ВИЧ-инфекцией проявляли среднюю (53,7 %) или низкую (31,5 %) способность к кислотообразованию. От ВИЧ-негативных детей штаммы характеризовались средней (59,52 %) и высокой (40,47 %) кислотообразующей способностью.
Однако, несмотря на более низкий уровень продукции органических кислот бифидобактериями от детей с ВИЧ-инфекцией, распространенность антагонизма не отличалась от аналогичного показателя в группе сравнения и составила 72,7 ± 2,7 против 84,8 ± 3,1 на 100 культур, соответственно (р = 0,08). При этом бифидофлора у детей с ВИЧ-инфекцией чаще проявляла антагонизм не к условно-патогенным бактериям, а к факультативно-анаэробной индиген-ной микрофлоре: к Escherichia coli lac+ (38,2 %) и Enterococcus faecalis (24,6 %). Это свидетельствует об ослаблении регулирующей функции бифидофло-ры у ВИЧ-инфицированных детей на всех представителей кишечного микробиоценоза и сохранении ее только в отношении индигенных представителей. У детей из группы сравнения антагонистические взаимоотношения формировались, прежде всего, с условно-патогенными представителями микробиоценоза: Klebsiella spp. (42,3 %) и Staphylococcus spp. (36,4 %). Различия в структуре антагонизма бифидофлоры к представителям кишечного микробиоценоза в сравниваемых группах были статистически значимы (х2 = 17,12; df = 2; p = 0,03).
Изучение адгезивной активности позволило установить, что среди лактобацилл, выделенных от детей с ВИЧ-инфекцией, 51,5 % штаммов были отнесены к микроорганизмам со средней адгезивной активностью, а 44 % — к низкоадгезивным, на высокоадгезивные культуры приходилось не более 4,5 %. В группе сравнения среди лактофлоры преобладали высокоадгезивные бактерии (47,6 %), на долю среднеадгезивных штаммов приходилось 45,2 %, а к низкоадгезивным были отнесены только 7,2 % культур. Различия
структуры лактобацилл по адгезивной активности были статистически значимы (х2 = 34,3; df = 2; p = 0,0007). Адгезивные характеристики бактерий определяют не только способность бифидобактерий и лактофлоры защищать слизистую кишечника от колонизации нетипичной микрофлорой, но и популяционный уровень данных микросимбионтов. Установлена прямая корреляционная связь между ИАМ и интенсивностью колонизации слизистой кишечника бифидобактериями и лактобациллами (г = 0,52 и 0,56; p = 0,001 и 0,021). Поэтому преобладание среднеадгезивной активности у данных анаэробов обуславливает у ВИЧ-инфицированных детей низкий популяционный уровень как бифидобактерий (7,5 ± 0,4 lg КОЕ/г), так и лактобацилл (6,3 ± 0,3 lg КОЕ/г).
У детей из группы сравнения содержание бифи-до- и лактофлоры было статистически выше — 8,9 ± 0,2 lg КОЕ/г (p = 0,0075) и 8,1 ± 0,4 lg КОЕ/г (p = 0,0006), соответственно. Лактобациллы, как у детей основной группы, так и у детей группы сравнения, обладали выраженной способностью к антагонизму, так как распространенность этого признака достигала 88 % и 91 %, соответственно (х2 = 2,71; df = 2; р = 0,005). Способность к кислотообразованию была выше у лактофлоры здоровых детей и составила 97,6 ± 5,7°Т, против 86,7 ± 6,2°Т у детей с ВИЧ-инфекцией, однако различия статистически не значимы (р = 0,06). При этом установлено, что лактобациллы у ВИЧ-инфицированных детей проявляли антагонизм к условно-патогенным микробам-ассоци-антам: Candida albicans в 21,2 % случаев, Staphylococcus spp. в 19,6 %, Klebsiella spp. в 16,7 %. В группе сравнения регистрировали антагонизм лактобацилл к тем же представителям микробиоценоза и практически с той же частотой, которая составила 31 %, 23,8 % и 26,1 %, соответственно, (х2 = 2,79; df = 2; р = 0,21). Таким образом, у детей с ВИЧ-инфекцией лактобациллы, несмотря на низкий популяционный уровень, являются функционально полноценными в межмикробных взаимоотношениях, что позволяет им регулировать число условно-патогенных бактерий в кишечном биотопе. У относительно здоровых детей этот процесс осуществляют и бифидобактерии, и лактобациллы.
Дефицит анаэробной части доминантных микросимбионтов у детей с ВИЧ-инфекцией компенсируется более высоким количественным уровнем типичных кишечных палочек (8,3 ± 0,2 lg КОЕ/г) по сравнению с детьми группы сравнения (7,8 ± 0,2 lg КОЕ/г), хотя разница статистически не достоверна (р = 0,07). Однако в популяции E. coli lac+, выделенных от детей основной группы, преобладали низкоадгезивные штаммы, доля которых составила 52,9 %. Средней адгезивной активностью обладали 32,4 % штаммов, на высокоадгезивные эшерихии приходилось толь-
Information about authors:
ZAKHAROVA Yulia Viktorovna, candidate of medical sciences, docent, chair of microbiology, immunology and virology, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: [email protected]
LEVANOVA Lyudmila Aleksandrovna, doctor of medical sciences, professor, head of the chair of microbiology, immunology and virology, Kemerovo State Medical Academy, Kemerovo, Russia. E-mail: [email protected]
32
T. 14 № 4 2015 MediciinnLass
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ
ко 14,7 % культур. У детей группы сравнения 37,8 % штаммов типичных кишечных палочек были отнесены к высокоадгезивным, 44,4 % — к среднеадгезивным, низкоадгезивных культур было 17,8 %. Различия по адгезивной активности типичных кишечных палочек в сравниваемых группах были статистически значимы (х2 = 15,7; df = 2; р = 0,0008). Доля штаммов с антагонистической активностью к условно-патогенной микрофлоре среди эшерихий, выделенных от детей с ВИЧ-инфекцией, составила только 7,4 %, от здоровых — 26,7 % (х2 = 4,08; df = 1; p = 0,023). Указанные характеристики микрофлоры при ВИЧ-инфекции не позволяют типичным кишечным палочкам адекватно обеспечивать колонизационную резистентность, даже если их количественный уровень достаточно высок.
Изучение количественного уровня условно-патогенной микрофлоры позволило установить, что содержание стафилококков в кишечнике детей с ВИЧ-инфекцией в среднем составило 3,2 ± 0,2 lg КОЕ/г, грибов рода Candida — 4,1 ± 0,3 lg КОЕ/г, условно-патогенных энтеробактерий — 6,9 ± 0,2 lg КОЕ/г, актиномицетов — 7,2 ± 0,6 lg КОЕ/г. У детей группы сравнения количественный уровень грибов Candida spp. в ассоциациях не отличался от такового при ВИЧ-инфекции (3,9 ± 0,4 lg КОЕ/г; p = 0,07), тогда как в монокультурах титр данных микромицетов достигал только 2,2 ± 0,3 lg КОЕ/г. Интенсивность колонизации кишечника детей группы сравнения стафилококками и условно-патогенными энтеробактериями была ниже, чем в основной группе, и составила 3 ± 0,5 lg КОЕ/г (p = 0,057) и 5,2 ± 0,3 lg КОЕ/г (p = 0,0005).
При изучении ассоциативных микросимбионтов было установлено, что микроорганизмы, входящие в состав ассоциаций, как у ВИЧ-инфицированных детей, так и у относительно здоровых детей, не проявляют друг к другу антагонистических взаимоотношений. Более того, они формируют сателлитный симбиоз, так как дрожжевые грибы рода Candida потенцируют рост клебсиелл. Серия опытов по совместному культивированию K. pneumoniae и C. albicans показала,
что в течение 2 часов количество клебсиелл после инкубирования с грибами достигает 8 ± 0,3 lg КОЕ/г, тогда как в контроле (монокультура Klebsiella spp.) для достижения такого количественного уровня требуется 6 часов. При этом количественный уровень самих грибов в ассоциациях с клебсиеллами достигал 2 ± 0,2 lg КОЕ/г только через 4 часа и затем не изменялся в течение всего времени сокультивирования.
Бактерии, входящие в состав минорных ассоциаций ВИЧ-инфицированных детей, проявляли антагонизм по отношению к доминантной микрофлоре, распространенность которого составила 21,6 ± 1,7 на 100 культур. В антагонистические взаимоотношения с типичной кишечной палочкой вступали 18,2 % гемолизинпродуцирующих эшерихий, а с фекальными энтерококками — 22,2 % стафилококков. Распространенность антагонизма среди ассоциативных микросимбионтов по отношению к доминантным бактериям у детей группы сравнения составила только 8,9 ± 1,1 на 100 культур, что было статистически ниже, чем в основной группе (p = 0,00061).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В основе механизма нарушения колонизационной резистентности кишечника у ВИЧ-инфицированных детей лежит снижение способности бифидобактерий и лактобацилл к адгезии и колонизации данного биотопа. Нарушение продукции органических кислот доминантными микросимбионтами способствует тому, что условно-патогенные бактерии достигают высокого популяционного уровня и формируют ассоциации друг с другом. В ассоциациях они проявляют антагонизм по отношению к нормальной микрофлоре и формируют сателлитный симбиоз с грибами рода Candida. Полученные данные о механизмах развития микроэкологических нарушений при ВИЧ-инфекции могут быть основой для разработки способов и средств коррекции кишечного микробиоценоза у ВИЧ-инфицированных пациентов и предупреждения развития у них вторичных бактериально-грибковых инфекций.
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES:____________________________________________________________________________________
1. Alarcon JO, Freimanis-Hance L, Krauss M, Reyes MF et al. Opportunistic and other infections in HIV-infected children in Latin America compared to similar cohort in the United States. AIDS Research and human retroviruses. Mary Ann Liebert, Inc. 2012; 28(3): 1226-1233.
2. Levanovich VV, Timchenko VN, Arhipova UA et al. HIV-infection at the turn of the century: guidelness for doctors of all specialties. Levanovich VV, Timchenko VN, editors. St. Petersburg: N-L Publ., 2012. 496 p. Russian (Леванович В.В., Тимченко В.Н., Архипова Ю.А. и др. ВИЧ-инфекция на рубеже веков: руководство для врачей всех специальностей /под ред. В.В. Леванович, В.Н. Тимченко. СПб.: Издательство Н-Л., 2012. 496 с.)
3. Alberto Novaes Ramos Jr, Luiza Harunari Matida, Carlos Henrique Alencar, Norman Hearst et al. AIDS patient care and STDs. Mary Ann Liebert, Inc . 2011; 25(4): 176-223.
4. Tony Lance. Intestinal dysbiosis - a major mechanism in AIDS. HEAL London, 2008; Available at: http://www.heallondon.org/index.php/health-and-well-being/74-intestinal-dysbiolsis-a-major-mechanism-in-aids (accessed June 02, 2013).
5. Koliadin V. Destruction of normal resident microflora as the main cause of AIDS. Continuum, Aug. 1996; Available at: http://www.vi-rusmyth.com/aids/hiv/vkmicro.htm (accessed Feb. 15, 2008).
a
^Медицина
в Кузбассе
Medicine
in Kuzbass
T. 14 № 4 2015
33
