CC BY
31
© ГОЛОВАНОВА А.Е., САВЧЕНКО A.A., КУРТАСОВА Л.М. -
СОСТОЯНИЕ КЛЕТОЧНОГО И ГУМОРАЛЬНОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ С ИНФЕКЦИОННЫМ МОНОНУКЛЕОЗОМ
А.Е. Голованова, A.A. Савченко, Л.М. Куртасова
(ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, директор — д.м.н., проф. В.Т. Манчук; Красноярский государственный университет, ректор — д.ф.-м.н., проф. АС. Проворов; Красноярская государственная медицинская
академия, ректор — д.м.н., проф. И.П. Артюхов)
Резюме. Проведены наблюдения за 82 детьми в возрасте 1-14 лет с инфекционным мононуклеозом, вызванном вирусом Эпштейна-Барр (ЕВУ) в острый период со среднетяжелой формой заболевания. Изучены показатели клеточного и гуморального иммунитета у детей в трех возрастных группах (1-3 года, 4-6 лет и 7-14 лет). Установлено значительное повышение содержания лейкоцитов в крови, увеличение количества лимфоцитов с изменением их фенотипического спектра, снижение индекса дифференцировки и повышение продукции гуморальных факторов защиты. У детей с инфекционным мононуклеозом в острый период заболевания сохраняются закономерности иммунологических изменений в онтогенезе, однако с существенными колебаниями, вероятно, обусловленными ЕВУ—инфекцией.
Ключевые слова. Инфекционный мононуклеоз, иммунный статус.
В последние годы отмечается рост заболеваемости инфекционным мононуклеозом, что обусловлено как истинныш его увеличением, так и улучшением методов диагностики [3,4,10,11]. Инфекционный мононуклеоз — лимфопролиферативное заболевание, возбудителем которого чаще всего является вирус Эпштейна-Барр (EBV), относящийся к семейству герпесвирусов. До недавнего времени было известно, что вирус обладает тропизмом к эпителию носоглотки и В-лимфоцитам, однако в последние годы установлено, что мишенями EBV могут быгть также Т-лимфоциты, макрофаги и нейтро-филы [5,6,7,9].
На сегодняшний день инфекционный мононуклеоз рассматривается как заболевание иммунной системы. Однако до сих пор иммунные механизмы патогенеза данного заболевания изучены не до конца и требуют дальнейшего углубленного исследования [2].
Целью данного исследования явилось изучение особенностей показателей иммунного статуса у детей с инфекционным мононуклеозом в разных возрастных группах.
Материалы и методы
Обследованы 82 ребенка в возрасте 1-14 лет с инфекционным мононуклеозом, вызванным EBV, со среднетяжелой формой в острую фазу заболевания (2-5 день болезни). Согласно возрастной периодизации по И. А. Аршавскому [1] наблюдаемые дети были разделены на три возрастные группы (1-3 года - 41 чел., 4-6 - 20, 7-14 - 21). Тяжесть заболевания оценивалась с учетом выраженности симптомов общей интоксикации, степени лимфопролиферативного синдрома, характера поражения рото- и носоглотки, величины паренхиматозных органов, а также на основании гематологических изменений. Исследования проведены на базе Городской клинической детской инфекционной больницы №1 и Краевого центра по профилактике и борьбе со СПИД г. Красноярска. Диагноз инфекционного мононуклеоза верифицировали методом
ПЦР с применением набора реагентов для выявления ДНК вируса Эпштейна-Барр в плазме, лимфоцитах и слюне фирмы «ДНК-технологии» (Москва) и методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем фирмы «Human» (Германия) определяли IgM VCA, IgG EA-D, IgG NA-1 в сыворотке крови.
Контрольную группу составили 133 практически здоровых детей аналогичного возрастного диапазона (29 детей в возрасте 1-3 года, 33 — 4-6 и 71 — 7-14).
Лимфоциты периферической крови выделяли в градиенте плотности фиколл-верографина. Методом непрямой иммунофлуоресценции, используя ФИТЦ-ме-
Таблица1
Иммунологические показатели у здоровых детей и больных инфекционным мононуклеозом в возрасте 1-3 лет
Показатель CpeÄH^ вeличины пoказатeлeй (M + m) P
Здоровью, n=29 Больньге, n=41
Лейкоциты, (109/л) 7,66+0,50 13,48+0,93 <0,001
Лимфоциты, (%) 49,5+2,0 55,0+2,9 <0,05
Лимфоциты, (109/л) 3,64+0,26 6,90+0,70 <0,001
СО3+-клетки, (%) 62,0+1,5 66,3+1,9
CD3+-KreTKH, (109/л) 2,41+0,22 4,36+0,44 <0,01
CD4+-KrerKn, (%) 28,0+1,4 29,0+1,5
CD4+-KneiKH, (109/л) 1,01+0,08 1,99+0,24 <0,001
CD8+-KrerKn, (%) 23,3+1,0 37,1+2,5 <0,001
CD8+-KrerKH, (109/л) 0,87+0,08 2,33+0,27 <0,001
CD19+-KrerKn, (%) 14,7+1,6 9,7+1,5 <0,01
CD19+-KneiKn, (109/л) 0,54+0,09 0,65+0,14
CD16+-KrerKn, (%) 13,3+0,8 14,8+2,5
CD16+-KneiKn, (109/л) 0,48+0,04 0,99+0,25 <0,05
CD4+/CD8+ 1,22+0,09 0,93+0,07 <0,05
Ig A, (г/л) 0,82+0,1 1,03+0,09
Ig M, (г/л) 1,14+0,1 1,83+0,11 <0,01
Ig G, (г/л) 7,89+0,36 10,35+0,65 <0,01
ЦИК, (o.e.) 31,31+2,74 38,58+4,06
ченные моноклональные антитела серии CD фирмы «DAKO», определяли CD3+, CD4+, CD8+, CD16+ и CD19+ - клетки. Концентрацию иммуноглобулинов классов A, М, G в сыворотке крови оценивали методом радиальной иммунодиффузии в геле. Удержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови изучали методом селективной преципитации в полиэтиленгликоле [8].
Для всех полученных данных определяли среднее арифметическое значение (M) и ошибку средней арифметической (m). Проверку гипотезы о статистической достоверности выборок проводили с помощью критерия Манна-Уитни. Cтатистическую обработку результатов осуществляли с помощью пакета прикладных программ SPSS 8.0.
Результаты и обсуждение
Результаты проведенного исследования показали, что у детей с инфекционным мо-нонуклеозом во всех обследуемых возрастных группах наблюдалось значительное увеличение количества лейкоцитов в периферической крови и повышение абсолютного числа лимфоцитов (табл. 1, 2, 3). Кроме того, у больных в младшей и старшей возрастных группах обнаружено статистически значимое повышение процентного содержания лимфоцитов в крови (табл. 1,3).
При изучении иммунофенотипического спектра
Таблица 3
Иммунологические показатели у здоровых детей и (больных инфекционным мононуклеозом в возрасте 7-14 лет
Таблица 2
Иммунологические показатели у здоровых детей и больных инфекционным мононуклеозом в возрасте 4-6 лет
Показатель Cредние величины показателей (M + m) Р
Здоровые n=33 Больные n=20
Лейкоциты, (109/л) 6,32+0,31 10,24+1,13 P<0,01
Лимфоциты, (%) 44,7+2,1 46,7+4,3
Лимфоциты, (109/л) 2,78+0,17 4,47+0,56 P<0,01
CD3+-клетки, (%) 58,4+1,4 68,7+2,4 P<0,001
CD3+-клетки, (109/л) 1,73+0,13 2,66+0,28 P<0,01
CD4+-клетки, (%) 35,5+1,3 30,1+1,8 P<0,01
CD4+-клетки, (109/л) 0,99+0,07 1,25+0,14
CD8+-клетки, (%) 19,6+1,0 36,9+3,6 P<0,001
CD8+-клетки, (109/л) 0,52+0,04 1,38+0,20 P<0,001
CD19+-клетки, (%) 20,0+1,3 12,3+3,01 P<0,01
CD19+-клетки, (109/л) 0,57+0,06 0,39+0,08 P<0,05
CD16+-клетки, (%) 15,5+1,0 12,4+1,3 P<0,05
CD16+-клетки, (109/л) 0,41+0,04 0,46+0,10
CD4+/CD8+ 2,09+0,23 1,00+0,12 P<0,001
Ig A, (г/л) 0,98+0,08 1,73+0,19 P<0,001
Ig M, (г/л) 1,26+0,10 1,77+0,20 P<0,05
Ig G, (г/л) 9,80+0,73 13,16+1,10 P<0,01
ЦИК, (о.е.) 30,85+2,49 37,53+5,31
Показатель Cредние величины показателей (M + m) Р
Здоровые n=71 Больные n=21
Лейкоциты, (109/л) 6,35+0,31 9,72+0,65 P<0,001
Лимфоциты, (%) 40,0+1,2 58,3+3,8 P<0,01
Лимфоциты, (109/л) 2,13+0,26 5,77+0,65 P<0,001
CD3+-клетки, (%) 66,5+2,6 72,1+3,3
CD3+-клетки, (109/л) 1,47+0,25 4,22+0,66 P<0,001
CD4+-клетки, (%) 39,92+3,57 26,0+2,4 P<0,01
CD4+-клетки, (109/л) 0,7+0,1 1,49+0,22 P<0,01
CD8+-клетки, (%) 28,54+1,13 40,8+5,2 P<0,05
CD8+-клетки, (109/л) 0,49+0,06 2,05+0,23 P<0,001
CD19+-клетки, (%) 9,29+1,26 10,2+3,9
CD19+-клетки, (109/л) 0,21+0,05 0,37+0,18
CD16+-клетки, (%) 18,0+0,8 12,0+2,1 P<0,01
CD16+-клетки, (109/л) 0,39+0,07 0,47+0,17
CD4+/CD8+ 1,39+0,13 0,83+0,12 P<0,01
Ig A, (г/л) 1,31+0,11 2,39+0,19 P<0,001
Ig M, (г/л) 1,09+0,12 2,13+0,18 P<0,001
Ig G, (г/л) 9,13+0,98 14,97+1,00 P<0,001
ЦИК, (о.е.) 28,1+2,4 58,45+5,58 P<0,001
лимфоцитов периферической крови у детей с инфекционным мононуклеозом во всех наблюдаемых возрастных группах установлено повышение абсолютного количества зрелых Т-лимфоцитов (CD3+), относительного и абсолютного числа CD8+-клеток на фоне снижения величины иммунорегуляторного индекса (табл. 1, 3).
Одновременно с отмеченными изменениями у больных в средней возрастной группе наблюдалось достоверное увеличение процентного содержания зрелых Т-лимфоцитов (CD3+) относительно контрольных показателей (табл. 2). Следует отметить, что у больных в старшей возрастной группе выявлено статистически значимое снижение относительного и увеличение абсолютного количества CD4+-клеток по сравнению с контрольными параметрами (табл. 3). При этом у больных в средней возрастной группе установлено понижение процентного содержания CD4+-лимфоцитов, а у больных раннего возраста повышение абсолютного числа CD4+-клеток в периферической крови. Кроме того, только в группе больных младшего возраста обнаружено увеличение абсолютного числа CD16+-клеток, в то время как в средней и старшей возрастных группах отмечалось достоверное снижение процентного содержания CD16+-лимфоцитов. В то же время только у больных в средней возрастной группе наблюдалось достоверное понижение как относительного, так и абсолютного со-
держания В-лимфоцитов, экспрессирующих CD19+ антиген, по сравнению с показателями контрольной группы (табл. 2).
При оценке гуморального звена иммунитета обнаружены однонаправленные (достоверное повышение) изменения уровней ^ М и Ig G в сыворотке крови во всех обследуемых группах детей с инфекционным мо-нонуклеозом (табл. 1, 2, 3). При этом концентрация ^ А в сыворотке крови оказалась повышенной в средней и старшей возрастных группах, в то время как у больных раннего возраста данный показатель статистически значимых различий с параметрами контроля не имел. Удержание ЦИК в крови достоверно от контрольных величин отличалось только у больных старшей возрастной группы.
Результаты проведенных исследований установили у детей с инфекционным мононуклеозом в острый период заболевания изменения показателей клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Cравнительный анализ иммунологических параметров показал, что у детей в возрастной группе 1-3 года отмечалась недостаточная активность факторов гуморальной защиты. Возможно, подобные изменения связаны с относительно незрелой иммунной системой у детей раннего возраста.
Таким образом, полученные нами данные убедительно свидетельствуют, что у детей с инфекционным мононуклеозом в острый период болезни сохраняются закономерности иммунологических изменений в онтогенезе. Однако с существенными колебаниями, вероятно, обусловленными ЕВУ-инфекцией.
THE CELLULAR AND HUMORAL IMMUNITY STATE IN CHILDREN WITH INFECTIOUS
MONONUCLEOSIS
A.E. Golovanova, A.A. Savchenko, L.M. Kurtasova (Medical Research Institute for Northern Problems — Siberian Division of Russian Academy of Medical Sciences; Krasnoyarsk State University; Krasnoyarsk State Medical Academy)
82 children at the age of 5-14 years having moderate form of infectious mononucleosis (caused by of EBV) in acute phase are observed. This research includes studying cell-mediated and humoral immunity indices that children of three age scales had (1-3 years old, 4-6 years old, 7-14 years old). The useful increase in leucocytes contenting in blood, the increase in lymphocytes with phenotype spectrum changes, the decrease of index of differentiation and the rising of humoral factors producing are determined. Children with infectious mononucleosis in acute phase have intact regularity of immunologic changes in ontogenesis, though with essential variations, probably, caused by EBV-infections.
ЛИТЕРАТУРА
1. Аршавский И.А Физиологические механизмы и закономерности индивидуального развития. — М.: Наука, 1982.
2. Зборовская А.А., Алейникова О.В., Коломиец Н.Д. и др. Вышвление серологических маркеров вируса Эп-шгейна-Барр при злокачественный лимфомах у детей. // Гематология и трансфузиология. — 1998. — № 1. - С.36-38.
3. Иванова В.В., Родионова О.В., Аксенов ОА и др. Новые подходы к диагностике и прогнозированию течения инфекционного мононуклеоза у детей. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2001. — J№ 4. — С.22-28.
4. Нисевич Н.И., Гаспарян М.О. Инфекционные болезни у детей — достижения и проблемы. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2001. — J№ 6. — С.5-9.
5. Поляков В.Е., Лялина В.Н., Воробьева МЛ. и др. Инфекционный мононуклеоз (болезнь Филатова) у детей и подростков. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 1998. — J№ 6. — С.50-55.
6. Уразова О.И., Помогаева А.П., Новицкий В.В. и др. Особенности течения у детей инфекции, вызванной
вирусом Эпштейна-Барр. // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2001. - № 4. - C.57-58.
7. Asada H., Miyagawa S., Sumikawa Y. et al. CD4+ T-lymphocyte-induced Epstein-Barr virus reactivation in a patient with severe hypersensitivity to mosquito bites and Epstein-Barr virus-infected NK cell lymphocytosis. // Arch. Dermatol. - 2003. - Vol. 139, №№ 12. - P.1601-1607.
8. Haskova V., Kaslik J., Riha J., Rovensky J. Simple method of circulating immune complex detection in human sera by polyethylene glycol precipitation. // J. Immunol. - 1978. -Vol. 154. - P.399-406.
9. Hochberg D., Souza T., Catalina M. et al. Acute infection with Epstein-Barr virus targets and overwhelms the peripheral memory B-cell compartment with resting, latently infected cells. // J. Virol. - 2004. - Vol.78, №№ 10. - P.5194-5204.
10. Schaade L., Kleines M., Hausler M. Application of virus-specific immunoglobulin M (IgM), IgG, and IgA antibody detection with a polyantigenic enzyme-linked immunosorbent assay for diagnosis of Epstein-Barr virus infections in childhood. // J. Clin. Microbiol. - 2001. -Vol. 39, №№ 11. - P.3902-3905.
11. Thorley-Lawson D.A., Gross A. Persistence of the Epstein-Barr virus and the origins of associated lymphomas. // N. Engl. J. Med. - 2004. - Vol. 350, №№ 13. - P. 1328-1337.
i> ХВОСТОВА О.И., КОЛТУН В.З., ЛОБЫКИНА E.H. -
СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ЛЕЧЕНИЮ ОЖИРЕНИЯ ПРИ ЭМОЦИОГЕННОМ ТИПЕ НАРУШЕНИЯ ПИЩЕВОГО ПОВЕДЕНИЯ
О.И. Хвостова, В.З. Колтун, E.H. Лобыкина
(Новокузнецкий государственный институт усовершенствования врачей, ректор —д.м.н., проф. ААЛуцик, кафедра медицинской экологии, эпидемиологии и здорового образа жизни, зав. — проф. В.З.Колтун)
