CC BY
79
УДК 616.988.55:612.017.1:616-053.2/.5 Кубанский научный медицинский вестник № 2 (131) 2012
Л. Ю. БАРЫЧЕВА, М. В. ГОЛУБЕВА, А. В. ВОЛКОВА
ПОКАЗАТЕЛИ АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ С ИНФЕКЦИОННЫМ МОНОНУКЛЕОЗОМ, ОБУСЛОВЛЕННЫМ ВИРУСОМ ЭПШТЕЙНА-БАРРА
Кафедра детских инфекционных болезней ГБОУ ВПО «Ставропольская государственная медицинская академия»
Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации,
Россия, 355017, г. Ставрополь, ул. Мира, 310, тел. (8652) 35-23-31. E-mail: [email protected]
У детей, перенесших инфекционный мононуклеоз, выявляются признаки дефицита общих Т-лимфоцитов, относительного и абсолютного содержания Т-хелперов. При обследовании через год и через 3 года после заболевания сохраняются существенные сдвиги Т-клеточного звена иммунитета с преимущественным дефицитом общих Т-лимфоцитов и Т-хелперов. В 11,4% случаев отмечаются низкое содержание T-NK, а также снижение способности к экспрессии маркеров ранней и поздней активации. У 25,7% детей формируется стойкая недостаточность IgA.
Полученные данные свидетельствуют о необходимости иммунологического обследования детей с инфекционным мононуклеозом через 6 месяцев, через год и через 3 года после перенесенного заболевания, что будет способствовать своевременному выявлению затяжных форм инфекционного процесса и уменьшению риска формирования хронической ВЭБ-инфекции.
Ключевые слова: дети, ВЭБ-инфекция, иммунодефицит, диспансерное наблюдение.
L. U. BARYCHEVA, M. V. GOLUBEVA, A. V. VOLKOVA
INDICATORS OF ADAPTIVE IMMUNITY FOR CHILDREN WITH INFECTIOS MONONUCLEOSIS, CONDITIONED WITH THE VIRUS OF EPSHTEIN-BARR
The cathedral of children’ infectious diseases, GBOU VPO «Stavropol state medical academy»
Ministry of health guard and social evelopment of Russian Federation,
Russia, 355017, Stavropol, Mira street, 310, tel. (8652) 35-23-31. E-mail: [email protected]
Signs of deficiency of T-lymphocyte, relative and absolute T-helper level can be traced in children of post infectious mononucleosis disease. In the course of examination after a year and after three years of the past disease, variability of a T-cell component of immune system with high-grade deficiency of T- lymphocyte and T helper cells is still steady. In 11,4% cases low T-NK level and decreasing selectivity of early and late markers activation can be traced. Steady IgA insufficiency are formed in 25,7% children.
Obtained data analysis shows necessity of immunoassay of children after 6 months, 1 year and 3 years of the past disease, furthers timely detection of lingering disease forms and risk reduction of forming chronic EBV-infection.
Key words: children, VEB-infections, immunological deficit, dispensary observation.
Инфекционный мононуклеоз относится к заболеваниям иммунной системы, затрагивающим как специфический иммунитет, так и факторы естественной цитотоксичности [2, 3, 14]. Формирующиеся иммунные нарушения часто носят устойчивый характер и даже при легком течении заболевания сохраняются около 3 месяцев, а при среднетяжелом и тяжелом - до года и дольше [5, 6, 10]. Иммунная компрометированность лежит в основе повышенной восприимчивости переболевших детей к инфекционным заболеваниям [16]. При затяжном характере иммунных нарушений формируются условия для перехода ВЭБ-инфекции в хроническую форму, а в отдаленном будущем - для развития хронических ВЭБ-ассоциированных заболеваний.
Цель исследования - изучить особенности адаптивного (специфического) иммунитета у детей с инфекционным мононуклеозом, обусловленным вирусом Эпштейна-Барра, в острый период заболевания и в динамике диспансерного наблюдения.
Материалы и методы
Иммунологическое обследование выполнено у 35 детей с ВЭБ-инфекцией в острый период заболевания
и в динамике катамнестического наблюдения - через 6, 12 месяцев и через 3 года после перенесенного инфекционного мононуклеоза.
Обследование детей и наблюдение за ними проводились на базе 2-го и 3-го детских отделений ГУЗ краевой клинической инфекционной больницы (ККИБ) г. Ставрополя, кабинета инфекционных заболеваний ГУЗ ККИБ, МАУЗ городской поликлиники № 3. В работе использован архивный материал ККИБ, краевого клинического диагностического центра за период с 2006 по 2011 год.
Диагноз ВЭБ-инфекции верифицировали методом ПЦР с применением набора реагентов для выявления ДНК ВЭБ в лимфоцитах крови фирмы «ДНК-техноло-гии» (Москва) и методом ИФА (анти-ВЭБ IgG, IgM) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест».
Для реализации цели исследования использованы стандартизированные методы оценки иммунного статуса. Исследование клеточного звена иммунитета включало определение относительного и абсолютного содержания CD3+-, CD4+-, CD8+-, CD25+-, HLA-DR+-, CD16+-, CD3+CD56+-, CD19+-лимфоцитов методом проточной цитометрии с применением моноклональных антител («Beckman Coulter», США) на проточном
цитометре «Cytomics FC 500» («Beckman Coulter», США). Определение IgA, IgM, IgG осуществлялось турбодиметрическим методом с использованием тест-систем и биохимического анализатора «KONELAB», Финляндия. В ходе проведения индивидуального частотного анализа были использованы региональные нормы [9].
Для статистического анализа данных использовали пакет программ «Primer of Biostat 4,0», «Attestat 10.5.1». Анализ качественных признаков выполняли с использованием критерия х2 . Достоверными считали различия при р<0,05.
Результаты и обсуждение
В результате индивидуального частотного анализа в острый период заболевания у большей части пациентов выявлены признаки активации противовирусных механизмов иммунной защиты в виде повышения содержания лимфоидных клеток, относительного (20%) и абсолютного (45,7%) уровней Т-лимфоцитов, относительного (68,6%) и абсолютного (71,4%) содержания Т-цитотоксических эффекторов, показателей естественных киллеров (CD16+) (таблица).
Повышение численности Т-лимфоцитов, вероятно, связано с периферической экспансией CD3+- клеток, прежде всего за счет пула ЦТЛ (CD8+), которые, как
известно, являются основным механизмом противовирусной защиты организма [1, 7, 17, 18, 20].
В острую фазу инфекционного мононуклеоза нами отмечено повышение относительного (54,3%) и абсолютного (80%) содержания Т-цитотоксических лимфоцитов с признаками натуральных киллеров (CD3+CD56+). Известно, что эти клетки участвуют в распознавании антигенов, вырабатывают ИЛ 4, активируют гуморальный иммунитет. Однако для патогенеза инфекционного мононуклеоза, вероятно, очень важной является способность Т^К экспрессировать большое количество Fas-лигандов (CD95+), взаимодействующих с Fas-рецепторами на активированных Т-лимфоцитах и запускающих их апоптоз. Выполняя функцию аутокиллеров, CD3+CD56+-клетки вносят свой вклад в постепенное угасание активированного в острый период ВЭБ-инфекции клеточного иммунного ответа [5, 6].
В острый период заболевания, как правило, увеличивалось содержание лимфоидных клеток, экспрессирующих маркеры ранней (CD25+) и поздней (HLADR+) активации, что также свидетельствовало о развитии эффекторной фазы цитотоксического иммунного ответа [12, 13].
Повышение относительного содержания В-лимфоци-тов выявлено у 20% детей, их снижение - у 37,1%. При этом абсолютное количество CD19+-клеток за счет относительного и абсолютного лимфоцитоза было увеличенным
Изменения показателей иммунного статуса у детей с ВЭБ-инфекцией (n=35)
Острый период Через 6 мес. Через 12 мес. Через 3 года
Показатель ф Ф ф Ф ф Ф ф Ф
(%) (%) (%) (%) (%) (%) (%) (%)
Лейкоциты 71,4 5,7 28,6 8,6 11,4 14,3 11,4 11,4
Лимфоциты 62,9 2,9 37,1 5,7 17,1 28,6 2,8 20
CD3+, % 20 17,1 14,3 40 2,9* 42,9 2,9* 20
CD3+, *109/л 45,7 14,3 17,1* 25,7 8,6* 28,6 5,7* 28,6
CD4+,% - 17,1 - 31,4 - 42,9 2,9 28,6*
CD4+, *109/л 17,1 14,3 2,9 28,6 5,7 22,9 2,9 31,4
CD8+,% 68,6 8,6 22,9* 11,4 14,3* 20 5,7* 8,6
CD8+, *109/л 71,4 5,7 31,4* 11,4 8,6* 20 8,6* 11,4
HLADR+, % 25,7 - 22,9 8,6 11,4 14,3 8,6 8,6
HLADR+, *109/л 37,1 - 28,6 5,7 14,3 14,3 5,7* 8,6
CD25+, % 22,9 2,9 34,3 17,1 14,3 5,7 8,6 8,6
CD25+, *109/л 31,4 5,7 34,3 17,1 17,1 14,3 8,6* 11,4
CD16+, % 22,9 2,9 17,1 14,3 11,4 11,4 8,6 5,7
CD16+, *109/л 34,3 5,7 22,9 17,1 11,4 14,3 5,7 5,7
CD3+CD56+, % 54,3 2,9 37,1 8,6 17,1* 14,3 8,6* 11,4
CD3+CD56+, *109/л 80 2,9 42,9* 5,7 22,9* 17,1 8,6* 17,1
CD19+, % 20 37,1 34,3 17,1 28,6 5,7* 8,6 2,9*
CD19+, *109/л 34,3 17,1 37,1 20 31,4 5,7 11,4* 2,9
IgM, г/л 45,7 - 22,9 - 14,3* - 8,6* -
IgG, г/л 17,1 - 20 5,7 - 2,9 -
IgA, г/л 31,4 25,7 8,6* 20 5,7* 28,6 5,7* 25,7
Примечание: ф- повышение показателей, Ф - снижение показателей по сравнению с нормой, * - р<0,05 по сравнению с острым периодом заболевания (критерий х2).
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (131) 2012
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (131) 2012
у 34,3%, уменьшенным - у 17,1%. В 45,7% случаев отмечено повышение 1дМ, в 31,4% - 1дС, в 17,1% - 1дА.
Снижение относительного содержания CD19+-кле-ток может быть компенсаторно-перераспределительным или являться следствием активной элиминации ВЭБ-инфицированных В-лимфоцитов под действием различных факторов противовирусной защиты (в первую очередь ЦТЛ) [19, 23].
Повышенная концентрация иммуноглобулинов при относительном дефиците В-лимфоцитов, вероятно, отражает поликлональную стимуляцию CD19+-клеток в ответ на действие антигенов возбудителя [5, 6].
Признаки активации Т-клеточного звена иммунитета выявлялись достаточно длительно, что может указывать на пролонгированную персистенцию возбудителя [11]. Так, спустя 6 месяцев после перенесенной инфекции регистрировалось повышение уровня лимфоидных клеток (37,1%), относительного (22,9%) и абсолютного (31,4%) содержания Т-цитотоксических лимфоцитов, Т^К (CD3+CD56+) (42,9%), показателей лимфоцитов, экспрессирующих ранние и поздние маркеры активации, высокие цифры относительного (34,3%) и абсолютного (37,1%) содержания В-лимфоцитов, увеличенные концентрации 1дМ (22,9%) 1дС (20%), 1дА (8,6%).
По сравнению с острым периодом заболевания достоверно реже (р<0,05) выявлялось увеличение абсолютного содержания общих Т-лимфоцитов (CD3+), Т-киллеров с признаками NK-клеток, относительного и абсолютного уровней Т-цитотоксических (CD8+), показателей 1дА. Отмечалась устойчивая тенденция к нарастанию В-лимфоцитов.
Постепенное снижение общих Т-лимфоцитов в динамике заболевания происходит, вероятно, за счет выведения значительного количества ЦТЛ из циркулирующего пула лимфоцитов, что характерно для окончания эффекторной фазы цитотоксического иммунного ответа [21] и отражает естественную динамику противовирусного иммунного ответа по мере выздоровления.
Динамическое увеличение содержания CD19+ является, вероятно, интегративным показателем действия различных факторов: снижения активности механизмов противовирусной защиты, возрастания устойчивости ВЭБ-инфицированных клеток к апоптозу и повышения продолжительности их жизни [5, 6]. Кроме того, постепенное повышение В-лимфоцитов у части детей может быть связано с активацией гуморальных механизмов иммунного ответа в условиях недостаточности клеточного иммунитета [4].
Через год после заболевания повышение показателей Т-клеточного звена иммунитета практически не выявлялось. Так, высокое относительное содержание CD8+ отмечалось у 14,3% пациентов, абсолютное - у 8,6%. В ряде случаев сохранялись признаки абсолютного повышения экспрессии маркеров ранней (CD25+) -17,1% и поздней (HLADR+) - 14,3% активации лимфоидных клеток. У 14,3% детей выявлялись высокие концентрации уровня 1дМ.
Через 3 года признаки активации иммунной системы отмечались в единичных случаях, что, вероятно, связано с интеркуррентными инфекциями среди переболевших детей.
Признаки уменьшения относительного показателя Т-лимфоцитов и Т-хелперов в острый период заболевания выявлялись у 17,1% детей.
Через 6 месяцев динамического наблюдения количество детей, имеющих низкие показатели специфиче-
ского иммунитета, увеличивалось. В высоком проценте случаев выявлялись признаки относительного (40%) и абсолютного (25,7%) дефицита общих Т-лимфоцитов, относительного (31,4%) и абсолютного (28,6%) снижения Т-хелперов. У 17,1% детей отмечались низкие показатели Т^К, у 20% - 1дА, что согласуется с литературными данными [15].
Снижение общих Т-лимфоцитов на фоне естественного уменьшения уровня ЦТЛ при выздоровлении может свидетельствовать о замедлении Т-лимфопоэза [5]. При этом относительное и даже абсолютное восполнение лимфоцитов происходит за счет клеток костномозгового происхождения: NK и CD19+-клеток.
Снижение уровня CD4+-лимфоцитов в острый период заболевания носит преимущественно относительный характер и во многом определяется увеличением относительного и абсолютного содержания CD8+-лим-фоцитов. Дефицит Т-хелперов в последующие периоды наблюдения указывает на формирование вторичной недостаточности по Т-клеточному типу [5, 6, 21].
Через 12 месяцев после перенесенной инфекции число детей с низкими показателями Т-клеточного звена иммунитета имеет тенденцию к увеличению. Снижение относительного содержания CD3+ выявляется у 42,9% детей, абсолютного - у 28,6%. При обследовании через 3 года признаки относительного дефицита Т-лимфоцитов сохраняются в 20% случаев, абсолютного - в 28,6%. Относительная недостаточность Т-хел-перов регистрируется у 28,6% детей, абсолютная - у 31,4%.
В ряде случаев отмечаются низкое содержание Т^К, а также снижение способности лимфоцитов к экспрессии маркеров ранней и поздней активации. У 25,7% детей формируется стойкая недостаточность 1дА.
Очевидно, что при имеющейся Т-клеточной недостаточности дополнительная антигенная нагрузка может привести к активации антигеннеспецифических механизмов иммунного ответа, что, с одной стороны, малоэффективно для элиминации антигенов, а с другой, может быть основой для формирования иммунопатологических процессов [6].
Заключение
Таким образом, в острый период инфекционного мононуклеоза отмечается активация факторов противовирусной защиты: повышается общий уровень лейкоцитов, лимфоидных клеток, преимущественно за счет пула ЦТЛ (CD8+), естественных киллеров (CD16+), Т^К (CD3+CD56+), абсолютного содержания В-лимфо-цитов (CD19+).
Повышение концентрации иммуноглобулинов (1дМ, 1дС, 1дА), вероятно, отражает поликлональную стимуляцию CD19+-клеток.
Признаки активации Т-клеточного звена иммунитета выявляются в течение 6 месяцев и более, что может указывать на пролонгированный иммунный ответ и длительную репродукцию возбудителя.
У 42,9% детей через год и у 28,6% через 3 года продолжают выявляться существенные сдвиги Т-кле-точного звена иммунитета с преимущественным дефицитом общих Т-лимфоцитов и Т-хелперов. В 11,4% случаев отмечаются низкое содержание Т^К, а также снижение способности к экспрессии маркеров ранней и поздней активации. У 25,7% детей формируется стойкая недостаточность 1дА.
Полученные данные свидетельствуют о необходимости иммунологического обследования детей, перенесших инфекционный мононуклеоз, через 6 месяцев, через год и через 3 года после начала заболевания (в последующем - по показаниям), что будет способствовать своевременному выявлению затяжных форм инфекционного процесса и уменьшению риска формирования хронической ВЭБ-инфекции. Активная реабилитация позволит уберечь ребенка от присоединения интеркуррентных инфекций, развития иммунопатологических процессов, вероятность реализации которых заметно возрастает на фоне длительной пер-систенции вируса Эпштейна-Барра.
ЛИТЕРАТУРА
1. Атауллаханов Р. И., Гинцбург А. Л. Иммунитет и инфекция: динамичное противостояние живых систем // Детские инфекции. - 2005. - № 1. - С. 11-21.
2. Боковой А. Г., Домрачева М. Е. Клиническое значение иммунологических показателей при инфекционном мононуклеозе у детей // Детские инфекции. - 2006. - № 3. - С. 18-22.
3. Кельцев В. А., Петрова Е. В., Санталова Г. В. Состояние иммунной системы у детей с инфекционным мононуклеозом и обоснование иммунокорригирующей терапии // Детские инфекции. - 2004. - № 3. - С. 15-20.
4. Краснова Е. И., Васюнин А. В., Никифорова Н. А., Писаренко О. В. Особенности иммунного ответа при инфекционном мононуклеозе у детей и подходы к иммуномодулирующей терапии // Инфекционные болезни. - 2006. - № 2. - С. 29-33.
5. Кудин А. П. Иммунологические нарушения при инфекционном мононуклеозе у детей // Медицинские новости. - 2007. -№ 4. - С. 102-105.
6. Кудин А. П., Романовская Т. Р., Белевцев М. В. Состояние специфического иммунитета при инфекционном мононуклеозе у детей // Медицинские новости. - 2006. - Т. 1. № 8. - С. 25-65.
7. Куртасова Л. М. Структурно-функциональные параметры иммунной системы у детей с инфекционным мононуклеозом // Материалы I конгресса педиатров-инфекционистов России. -М., 2002. - С. 96.
8. Новицкий В. В., Уразова О. И., Помогаева А. П. Цитогенетическая характеристика лимфоцитов крови у детей разных возрастных групп при инфекционном мононуклеозе различной этиологии // Гематология и трансфузиология. - 2005. - Т. 50. № 3. - С. 20-24.
9. Орехов К. В., Барычева Л. Ю. Формирование системы иммунитета у детей с врожденными инфекциями: Монография. -Ставрополь, 2006. -130 с.
10. Пархоменко В. П., Виноградов А. Ф. Инфекционный мононуклеоз у детей // Российский медицинский журнал. - 2005. -№ 2. - С. 56-58.
11. Родионова О. В., Аксенов О. А. Инфекционный мононуклеоз. Клиника, новые подходы к диагностике и терапии у детей: Пособие для врачей. - СПб, 2000. - 164 с.
12. Савина О. Г., Шаркова В. А., Гордец А. В. Рейтинговая оценка цитокинового статуса у детей, больных инфекционным мононуклеозом, в Приморском крае // Фундаментальные исследования. - 200S. - № 5. - C. 50-51.
13. Симованьян Э. Н., Денисенко В. Б., Бовтало Л. Ф., Григорян А. В. Эпштейна-Барра вирусная инфекция у детей: современные подходы к диагностике и лечению // Лечащий врач. - 2007. -№ 7. - С. 45-54.
14. Симовоньян Э. Н., Денисенко В. Б., Григорян А. В. Часто болеющие дети: оптимизация профилактики и лечения // Рус^ий медицинский журнал. - 2007. - Т. 15. № 2Э. - С. 1-5.
15. Симованьян Э. Н., Сизякина Л. П., Сарычев А. М. Хроническая Эпштейна-Барра вирусная инфекция у детей: комплексная терапия и возможности интенсификации лечения // Доктор Ру. -2006. - № 2. - С. Э7-44.
16. Фомин В. В., Удилова Е. Е., Бейкин Я. Б., Лагерева Ю. Г. Патогенетическое обоснование иммунокорригирующей терапии при инфекционном мононуклеозе у детей // Детские инфекции. -2006. - Т. 5. № Э. - С. 23-26.
17. Attarbaschi T., Willheim M., Ramharter M. Cytokine profile during primary Epstein-Barr virus infection // Eur. cytokine netw. -
2003. - Vol. 14. № 1. - P. Э4-Э9.
1S. Aoukaty A. Chronik active Epstein-Barr virus infection associated with low expression or leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor-1 (LAIR-1) on natural killer cells // J. clin. immunol. - 200Э. - № 2Э (2). - P. 141-145.
19. Callan M. F. C., Fazou C., Yang H. et al. The evolution of antigen-specific CD8+ T cell responses after natural primary infection of humans with Epstein-Barr virus // Viral Immunol. - 200Э. -№ 16 (1). - P. 3-16.
20. Maini M. K., Gudgeon N., Wedderburn L. R. et al. Clonal expansions in acute EBV infection are detectable in the CDS and not the CD4 subset and persist with a variable CD45 phenotype // J. immunol. - 2000. - № 165 (10). - P. 5729-5737.
21. Moraham G., Boutlis C., HuangR. A promoter polymorphism in the gene encoding IL-12p40 (IL12B) is associated with mortality from cerebral malaria and with reduced nitric oxide production. Genes // Immunol. - 2002. - № Э. - P. 414-41S.
22. Nakayama T., Hieshima K., Nagakubo D. et al. Selective induction of Th2-attracting chemokines CCL17 and CCl22 in human B cells by latent membrane protein 1 of Epstein-Barr virus // J. virol. -
2004. - № 7S (4). - P. 1665-1674.
23. Shi Y., Lutz C. T. Interferon-gamma control of EBV-transformed B cells: a role for CDS+ T cells that poorly kill EBV-infected B cells // Viral immunol. - 2002. - № 15 (1). - P. 213-225.
Поступила 02.05.2012
Н. Г. БАХМУТСКИЙ, В. А. ПОРХАНОВ, В. Н. БОДНЯ
КИНЕТИКА РОСТА НЕКОТОРЫХ ПЕРЕВИВАЕМЫХ ОПУХОЛЕЙ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ВИХРЕВОГО МАГНИТНОГО ПОЛЯ
Кафедра онкологии с курсом торакальной хирургии ФПК и ППС ГБОУ ВПО КубГМУ Минздравсоцразвития России,
Россия, 350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. 268-34-03. E-mail: [email protected]
В работе изучено влияние вихревого магнитного поля, генерируемого установкой «Магнитотурботрон», на кинетику роста перевиваемых опухолей РС-1 и карциносаркому Уокера. Выявлено, что вихревое магнитное поле индукцией 3 и 15 мТ угнетает рост этих опухолей, чему соответствуют уменьшение средних объёмов опухолей в опытных группах в период воздействия, высокий процент торможения и отрицательная удельная скорость роста опухолей.
Кубанский научный медицинский вестник № 2 (131) 2012 УДК 616 00б.6-08:б15.849.11] О92.9
