CC BY
10Актуальность
Белки MICA и MICB относят к неклассическим молекулам главного комплекса гистосовместимости I класса. Эти белки относятся к маркерам клеточного стресса и появляются на мембране инфицированных, поврежденных или трансформированных клеток. Оба белка связываются с рецепторами NKG2D NK-клеток, что приводит к запуску их цитотоксиче-ской реакции. Злокачественная трансформация клеток приводит к усилению экспрессии белков MICA и MICB. Под действием металлопротеиназ образуются растворимые формы белков MICA и MICB, которые связываются с рецептором NKG2D и вызывают де-сенситизацию NK-клеток. Ряд злокачественных онкологических заболеваний органов пищеварительной, кровеносной систем, кожи сопровождается ростом концентрации растворимых форм MICA и MICB в крови пациентов. Повышенная концентрация растворимого MICA отрицательно коррелирует с общей и безрецедивной выживаемостью пациентов. Повышение уровня растворимых белков MICA и MICB можно рассматривать как индикатор избегания иммунного надзора опухолью.
Цель
Получение моноклональных антител, связывающих растворимые и мембранные формы белков MICA и/или MICB.
Материалы и методы
Для индукции иммунного ответа мышам F1 (DBAxBalb/c) вводили экстраклеточные участки белков MICA*008 или MICB*005. Слияние спленоцитов мыши проводили с миеломной линией клеток Sp2/0. Тестирование иммунного ответа и скрининг надоса-
дочных жидкостей гибридом проводили с помощью 2 вариантов непрямого иммуноферментного анализа. В 1-м варианте в качестве антигена использовали адсорбированный на твердой фазе белок MICA или MICB, в 2-м варианте — молекулы MICA и MICB экспрессировали на мембране клеток линии С6.
Результаты
Получено 11 новых моноклональных антител, которые распознавали мембранную и растворимую формы белков MICA (5 антител) или MICB (6 антител). Среди них 3 антитела распознавали эпитопы, уникальные для белка MICA, и 2 антитела связывали эпитопы, уникальные для MICB. Остальные антитела обладали перекрестной реактивностью. С помощью иммуноферментного анализа установлена роль фолдинга и дисульфидных связей в формировании эпитопов белка MICA, распознаваемых антителами. Тепловая денатурация антигена не приводила к изменению их структуры, тогда как восстановление дисульфидных связей снижало аффинитет взаимодействия 3 антител; 1 антитело одинаково эффективно связывало как нативный, так и денатурированный антиген. Проведен подбор комплиментарных пар антител для выявления растворимой формы MICA с помощью двухцентрового иммуноферментного анализа. Установлено несколько сочетаний реагентов, позволяющих специфично выявлять MICA в растворе.
Выводы
Создана панель моноклональных антител, которая будет использована для изучения роли белков MICA и MICB в онкологическом процессе. Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ (№ 21-15-00021).
Список литературы
1. de Andrade F. L . et al . Inhibition of MICA and MICB Shedding Elicits NK cell-mediated Immunity against Tumors Resistant
to Cytotoxic T cells Lucas // Cancer Immunity. 2020 . Vol . 8 . No . 6 . P769-780 . 2 . Zhao Y et al . Prognostic value of MICA/B in cancers: a systematic review // Oncotarget, 2017 . Vol . 8 . No . 56 . P 9638496395.
Сигнальные пути клеток рака молочной железы с приобретенной резистентностью к фулвестранту
Авторы
Филиппова Маргарита Николаевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Бло-хина» Минздрава России, Москва
Андреева Ольга Евгеньевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Сорокин Данила Владимирович, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Щербаков Александр Михайлович, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Бло-хина» Минздрава России, Москва
Ключевые слова:
рак молочной железы, S6K, метформин, фулвестрант
Актуальность
Большинство опухолей молочной железы относятся к гормонозависимым и демонстрируют высокую чувствительность к гормонотерапии. Стероидный антиэстроген нового поколения фулвестрант вызывает полную деградацию рецептора эстрогенов альфа и таким образом блокирует влияние эстрадиола на опухолевые клетки. Длительное применение фулвестран-та может приводить к формированию резистентности, молекулярные механизмы которой исследованы недостаточно.
Цель
Характеристика клеточной сублинии рака молочной железы с приобретенной резистентностью к антиэстрогену фулвестранту; поиск подходов для ингибирования роста резистентных клеток.
Материалы и методы
Клетки MCF7 получены из коллекции ATCC. Для оценки биологических эффектов использовали МТТ, иммуноблоттинг и ген-репортерный тест.
Результаты
С помощью длительной инкубации клеток MCF7 с фулвестрантом получена резистентная сублиния MCF7/FUL. Выявлена высокая активность киназы Akt в резистентных клетках, которая не сопровождалась изменениями в экспрессии рецептора эстрогенов
альфа — основной мишени фулвестранта. Транскрипционная активность рецептора эстрогенов альфа также не снижалась в резистентных клетках. Экспрессия рецептора прогестерона, которая в значительной степени регулируется эстрогенами, не изменялась в резистентных клетках. Установлено увеличение экспрессии активной формы рибосомальной протеинки-назы S6, отвечающей за регуляцию синтеза белка и скорости пролиферации клеток, в сублинии MCF7/ FUL. Бигуанид метформин может оказывать существенное влияние на различные сигнальные пути опухолевых клеток, в том числе в ряде работ описано его воздействие на путь mTOR/S6 [1-3]. Сравнение анти-пролиферативной активности метформина в тестах in vitro показало, что фулвестрант-резистентные клетки характеризуются высокой чувствительностью к нему.
Выводы
Развитие резистентности к антиэстрогену фул-вестранту сопровождается изменением различных сигнальных путей, поддерживающих синтез белка, защитные механизмы и пролиферацию клеток. В резистентных клетках сохраняется экспрессия и активность рецептора эстрогенов альфа. Выявленная в клетках MCF7/FUL гиперактивация молекулярного пути киназы S6 открывает широкие перспективы для применения антидиабетического препарата метфор-мин как потенциального средства для резистентных форм рака.
Список литературы
1. Han J ., Wysham W. Z ., Zhong Y et al . Increased efficacy of metformin corresponds to differential metabolic effects in the ovarian tumors from obese versus lean mice // Oncotarget . 2017 . 8 . (67) . Р 110965-110982 .
2 . Honjo S ., Ajani J . A ., Scott A .W. et al . Metformin sensitizes chemotherapy by targeting cancer stem cells and the mTOR pathway in esophageal cancer // International journal of oncology 2014. 45 (2) . Р. 567-574.
3 . Berstein L . M . , Yue W., Wang J . P, Santen R . J . Isolated and combined action of tamoxifen and metformin in wild-type, tamox-ifen-resistant, and estrogen-deprived MCF-7 cells // Breast cancer research and treatment . 2011. 128 (1) . Р. 109-117 .
Митохондриальная терапия способна тормозить развитие меланомы
Авторы
Франциянц Елена Михайловна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Нескубина Ирина Валерьевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Шихлярова Алла Ивановна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Черярина Наталья Дмитриевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Сурикова Екатерина Игоревна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Бандовкина Валерия Ахтямовна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Немашкалова Людмила Анатольевна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
Каплиева Ирина Викторовна, [email protected], ФГБУ «НМИЦ онкологии» Минздрава России, Ростов-на-Дону
