CC BY
10
© Сакевич В. Д.
УДК [577.21:616.5-002]-053.3/.5
РОЗПОВСЮДЖЕН1СТЬ ГАПЛОТИП1В ПОЛ1МОРФНИХ ГЕН1В ТЬк 2, ТЬк 4, еье-Ю ТА 1Х ЗВ'ЯЗОК З ОКРЕМИМИ 1МУНОЛОГ1ЧНИМИ ПОКАЗНИКАМИ У ХВОРИХ НА АЛЕРГ1ЧНИИ РИН1Т
Сакевич В. Д.
ВДНЗУ «Укра'нська медична стоматолопчна академiя», м. Полтава
С целью определения роли полиморфизма отдельных генов, которые контролируют структурные и регуляторные элементы неспецифической резистентности организма, в развитии аллергического ринита определена распространенность полиморфизма 2258в / А гена ТШЯ2 ( К5743708) гена ТШЯ 4 ( к4986790) и гена СШС -10 (гв420297) в группе наблюдения и в группе популяционного контроля, проведен анализ иммунологических показателей и клинических проявлений у больных с полиморфными вариантами исследуемых генов. Для выяснения возможного сочетания различных генотипов всех генов, которые определяются проведен анализ гаплотипов. При сравнении частот гаплотипов определенных полиморфизмов генов ТШЯ2 (гв5743708), ТШЯ 4 (&4986790) и ЮС-10 (гв420297) в группах больных АР и популяционного контроля не выявлено достоверной зависимости между наличием в генотипе аллеля Т гена галектину -10, аллеля А гена ТШЯ 2 или аллеля в гена ТШЯ 4 и развитием АР. При изучении распространенности возможного сочетания генотипов генов ТШЯ 4 (Авр299в!у) и СШС10 (гв420297)) обнаружено , что чаще встречается гаплотип ААСС, как в группе контроля ( 30%), так и у больных АР ( 24%), в группах больных АР и популяционного контроля не выявлено достоверной зависимости между наличием в генотипе аллеля Тгена галектину -10 и аллеля в гена ТШЯ 4 с развитием АР. У больных АР носителей гаплотипов ТШЯ4 / СШС10 содержащие полиморфные аллели в и Т выявлен достоверно более высокий уровеньэкспрессии молекул Сй4 СЭ25 Еохр3 Трегклеток (критерий Манна- Уитни и (п = 4; п = 41) = 25,50; р = 0,024), составивший 6,29 ± 0,50 % ( тыс/мкл ) со снижением содержания И-10 и повышением И- 4 ( 55,9 ± 11,33 пг/мл). Полученные результаты позволяют рассматривать ОНП генов ТШЯ 4 (&4986790) и СШС-10 (&420297), как дополнительный прогностический показатель при патогенетических исследованиях.
Ключовi слова: полiморфiзм, Toll-подiбнi рецептори, галектин-10, алерiчний ришт.
Вступ
На сьогодш юнуе тенден^я до CTpiMKoro поширен-ня алерпчних захворювань у свт, що становить сер-йозну проблему в зв'язку з широким розповсюджен-ням, щорiчним повсюдним зростанням захворюванос-Ti, частими ускладненнями, а також рiзким зниженням працездатност та якост життя па^етчв.
Аперпчний ришт (АР) розглядають як важливу проблему алергологи, осктьки це захворювання в 6i-льшост випадгав е першим кл^чним проявом атопи з подальшою трансформа^ею в бронхiальну астму (БА) [4].
Вивчення генетичних основ атопи е актуальною проблемою сьогодення, необхщною для встановлен-ня взаемозв'язку мiж спадковими та середовищними факторами в реалiзацií досить складного патолопчно-го фенотипу та розумЫню механiзмiв взаемоди поль гених систем в процес реалiзацií спадково''' Ыформа-ци на рiвнi цтюного оргашзму. Знаючи молекулярш та кштинш мехашзми формування захворювань, можли-во намiтити гени, бтю^ продукти яких е найбтьш значущими. Зпдно дослщжень, гени атопи та пов'яза-них з нею сташв сконцентровано в основному у 10 дь лянках геному людини.
За даними дослщжень юнують вщомост щодо асо^аци алерпчного ришту iз полiморфiзмом гену TIM-1 9], CD14 5],TLR 2-46], RNA se 3 7].
Специфiчнiсть системи вродженого iмунiтету реа-лiзуeться через родину Toll-подiбних рецепторiв (ТЬРб). Важливими структурно-молекулярними еле-ментами системи патерн - розтзнавальних рецепто-рiв (ППР) е Toll-подiбний рецептор 2 (Т1_Р 2) та То11-подiбний рецептор 4 (Т1_Р4). Гени, що кодують Т1_Р2 та Т1_Р4, виявляють високу варiабельнiсть у популяци [1]. Останнiм часом з'являються вiдомостi, щодо ви-явлення функцюнального полiморфiзму генiв Т1_Р, зумовленого замЫою одиничних нуклеотидiв (вiд англ. Этд^ nucleotide polymorphism - ЭЫР). В резуль-татi таких замЫ знижуеться здатнiсть до розпiзнання вщповщних лiгандiв та ефективнiсть проведення сиг-нальних iмпульсiв, що призводить до порушення ак-тиваци клiтин iмунноí системи. Функцiональний поль морфiзм Т1_Р 2-4 порушуе регуляцiю вроджено'' iмун-но' вiдповiдi, що е основним чинником дисбалансу Т1/Т2-хелперiв . Подiбний механiзм може вiдiгравати вирiшальну роль у формуванш хронiчного запального процесу та привертае увагу, як потенцшний чинник ризику розвитку атотчно' патологи, зокрема АР [6].
В дослщженнях закордонних учених вивчаеться асо^а^я алерпчного ришту iз полiморфiзмом гену галектину-10 (С1_С-10) [3]. Галектин-10 е представ-ником родини ендогенних лектинiв (вщомий, як лiзо-фосфолiпаза, бiлок Шарко - Лейдена), виявлений в еозинофтах та базофiлах. Точнi дослiдження довели
* Цитування при атестаци кадpiB: Сакевич В. Д. Розповсюдженсть гаплотипв полiморфних aeHie TLR 2, TLR 4, CLC-10 та ¡х зв'язок з окремими iмунологiчними показниками у хворих на алергчний ринт //Проблеми екологп i медицини. - 2013. - Т. 17, № 5-6. - С. 16 -20.
значну внутр^тинну експресiю галектину-10 в CD25+ Treg кгiтинах. В зв'язку з цим, bîh безпосеред-ньо не приймае участi в пригнiченнi функцiï CD25+ Treg клiтин, однак специфiчна блокада галектину-10 вщновлюе пролiферативну здатнiсть CD25+ Treg H:ri-тин та пщсилюе ïx супресивнi функцiï. Отже галектин -10 е необxiдним для здшснення регуляторноï актив-
H0стi Treg штин [8].
З метою визначення ролi полiморфiзму окремих генiв, яга контролюють структурнi та регуляторнi еле-менти неспецифiчноï резистентностi органiзму, в роз-витку алергiчного ринiту визначена розповсюдь-женiсть полiморфiзму 2258G/A гену TLR2 (rs5743708), гену TLR 4 (rs4986790) та гену CLC-10 (rs420297) в групi спостереження i в грут популяцiйного контролю, проведено аналiз iмунологiчниx показникiв та шыч-них проявiв у хворих з полiморфними варiантами до-слiджуваниx генiв. Для з'ясування можливого поед-нання рiзниx генотипiв всix генiв, що визначаються проведено аналiз гаплотипiв.
Матерiали та методи дослщження
Для вирiшення висунутих завдань проведено об-стеження 45 хворих на АР вiком вщ 19 до 65 рокiв (35,6 ± 1,57) (чоловiки склали 51% (23 хворих), а жЫки - 49 % (22 хворих)). На момент обстеження xворi зна-ходились в стади клiнiчноï ремiсiï та припиняли при-йом протиалергiчниx препара^в за 72 години, xворi не мали важко'1' супутньо!' патологiï.
Дiагноз АР встановлювали на основi критерив дiа-гностики ARIA (2008) за алгоритмом дiагностики при-йнятим в Укра1ы та затвердженим МОЗ Украши. Якiсть життя хворих визначали за допомогою загаль-новизнаних опитувальникiв (Adult Rhinoconjunctivitis Quality of Life Questionnaire).
Сенсибозацю до алергенiв дiагностували на пщста-вi комплексу алергологiчниx методiв обстеження: збiр алергологiчного анамнезу, позитивних шгарних скарифь кацiйниx тестiв на алергени з використанням стандарт-них наборiв (ТОВ «1мунолог», Украина).
За стандартною методикою проведене визначення числа лейкоци^в в кровi та пщрахунок формених еле-ментiв кровi в мазках. Фенотип лiмфоцитiв аналiзу-вали у венозшй кровi, використовуючи моноклональн антитiла до CD4,CD25 (виробництво «Сорбент», Ро-сiя) та внутрiшньоклiтинного бтку Foxp3 («Bioscience», США) методом проточно! цитофлюориметрiï за допомогою проточного цитофлюориметра EPIX LX-MCL (Beckman Coulter, США), використовуючи про-граму System II TM software.
Рiвнi загального IgE, iнтерлейкiну-4 (1Л-4) та Ытер-лейкiну-10 (1Л-10) визначали за допомогою тест-систем 1ФА (ТОВ «Укрмед-Дон», Украша) з використанням iмуноферментного аналiзатора "Stat - Fax 2100" (США).
Для визначення полiморфiзму rs420297 гену CLC-10 проводили видтення геномноï ДНК з периферич-ноï кровi обстежуваних за допомогою набору «ДНК-экспресс-кровь» (ООО НПФ «Литех», Россия). Визначення полiморфiзму генiв TLR2 (rs5743708) та TLR 4 (rs4986790) проведено методом полiмеразноï ланцю-говоï реакцiï [1].
Тип алелей (С\Т) гену CLC-10 амплiфiкували за допомогою алель-специфiчноï полiмеразноï ланцюго-воï реакцiï в 35 мкл реакцiйноï сумiши, що мiстила: 2,5 мкл 10 х Buf для амплiфiкацiï; 2 мМ хлориду магню; 0,2 мМ кожного dNTP; 2,5 од. ДНК-полiмерази Tag з
додаванням по 5 пкмоль спец^чних праймерiв: CLC_up 5-CCC AGC AAC CAT GCT TCT TGT TAC-3'; CLC_low 5-TGA GCA AAC CCA CCT-3' та по 5 пкмоль специфiчних зондiв мiчених флуоресцентними барв-никами FAM i R6G з 5'- ганця i BHQ-1, BHQ-2 з 3'-ганця, вiдповiдно:
CLC_wt (FAM)CG-CTG-GAG-GAA-CAG-GAA-
AA(BHQ-1);
CLC_m (R6G)CG-CTG-GAG-GAA-CAA-GAA-
AAA(BHQ-2)
До сумiшi додавали 20-50 нг геномноТ ДНК обстежуваних. Амплiфiкацiю гену галектину-10 проводили на амплiфiкаторi детектуючому ДТ-322 (ООО „НПО ДНК-Технология", Россия) в режимi реального часу, наступним чином:
- перший цикл - 950С/3 хвилини;
- 40 цик^в - 950С/15 секунд;
630С/40 секунд
Продукти амплiфiкацiТ гену CLC-10 щентифкували за допомогою флуорисцентноТ реестраци накопичення ДНК за каналами флюоресценцп: для «дикоТ» алелi (wt): 1 канал - барвник FAM, для мутантноТ алелi (m): 2 - канал барвник R6G, безпосередньо в ходi реакци.
Групу контролю становили 95 практично здорових оаб з бази генетичних зразгав НД1 Генетичних та iму-нологiчних основ розвитку патологи та фармакогене-тики ВДНЗУ «УМСА». В групу контролю для вивчення полiморфiзму гену CLC-10 вiдiбрано 45 зразгав ДНК оаб, що не страждали на алергiчну патологiю. Досль дження проводили вiдповiдно наданоТ письмовоТ зго-ди на проведення обстеження та заключення комiсiТ з етичних питань та бюетики УкраТнськоТ медичноТ сто-матологiчноТ академiТ.
Математичну обробку отриманих даних здмснюва-ли з використанням програми «STATISTICA 6.0» (StatSoft Inc). Порiвняння частот генотипiв мiж дослщжу-ваними групами проводили шляхом аналiзу таблиць спряженостi за допомогою точного тесту Фшера. Для порiвняння частот алелей використовували критерiй х2 Для оцiнки достовiрностi вiдмiнностей мiж групами використовували точний двостороннм критерiй Фiшера (для малих груп). Для уах видiв аналiзу статистично значу-щими вважали вiдмiнностi при р < 0,05.
Результати та |'х обговорення
При вивченнi амейного алергологiчного анамнезу у хворих на АР виявлен рiзноманiтнi прояви алергп в сiм'Т у 76%. Наявнють алергiчних захворювань у роди-чiв 1-11 ступеню спорiдненостi з боку матерi виявлена в 35%, з боку батька - у 30%, з боку обох батьгав - у 11% уах обстежених хворих на АР. Не виявлено даних про обтяжений алерголопчний анамнез у 24% хворих на АР. Отримаы результати узгоджуються з даними, що свщчать про переважний зв'язок з атотчними захво-рюваннями з боку матерi [2].
Як вище зазначалося, у результат спостереження за переб^ом захворювання в динамiцi у хворих на АР було встановлено ступеш тяжкост1 АР: легкий перебiг - у 11 (25%), середньо-важкий - у 32 (71%), важкий -у 2 (4%). Також виявлена наявнють спадковоТ алерп-чноТ схильнос^ у родичiв 1-11 ступеня спорщненосп з боку матерi виявлена в 35%, з боку батька - у 30%, з боку обох батьгав - у 11% уах обстежених хворих на АР. У 44% переб^ АР був пов'язаний з рiзними нозо-лопчними формами алерпчноТ патологи. У 20% обстежених хворих на АР був установлений супутшй дь агноз БА, у 15% присутня симптоматика АД, повна
трiада атопп виявлена у 11% обстежених нами хворих на АР. При алерголопчному обстеженш хворих на АР у 89% па^етчв були виявлеш позитивы шфш проби на пилков^ грибковi, побутовi, епiдермальнi та харчовi алергени. При чому, у 7% мала мюце сенсибiлiзацiя до одшеТ групи алергену, у 29% - до двох груп, у 36% -до трьох груп, у 13% - до чотирьох груп, а в 4% - до
Розподл частот гаплотипв полiморфiзму TLR 2,
вах п'яти груп алергешв. У 11% хворих шфш проби були негативними до вах використаних алергешв.
Для з'ясування можливого поеднання рiзних гено-титв вах гешв, що визначаються проведено аналiз гаплотипiв. Виявлено, що найчастiше зуст^чаеться гаплотип ООААСС, як в груп контролю (30%), так i у хворих на АР (23%) (табл.1).
Таблиця 1.
ПН 4 та гену галектину-10 серед осб полтавськоТ популяцц' та хворих на алергчний ринт, %(п)
CLC10
TLR 4 C C C C C C 1-О T О 1-о 11- к к 11- о о о о о о 1-о T О T и 11- T T t-t- и О о о о о 1-о t-о t-о T T t-t- t-t-
< < < < < < < < < < < < A A A < < < о с а < о с о с а < а A о с о с о с О о о о о о о о о о о о о о о о о о
TLR 2 О а < О < < а а < О < < о а < о 3 о а A а < с о а A а A A о а с о с с а а с о с с а а с о с с о а с о < <
Група 66,7 4,4 0 17,8 2,2 0 2,2 0 0 4,4 0 0 2,2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
контро- (30) (2) (8) (1) (1) (2) (1)
(n=45)
Хворi 51,1 2,2 0 20,0 0 0 11,1 4,4 0 4,4 0 0 4,4 0 0 2,2 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
на АР (23) (1) (9) (5) (2) (2) (2) (1)
(n=45)
CLC10 CT/TT носiТ алелi Т X2 2,45; ВШ = 2,26 (0,92-5,56); р = 0,118
TLR 4 896A/G AG/GG носи алелi G X2 0,49; ВШ = 2,15 (0,50-9,21); р = 0,482
TLR 2 2258G/A GA/AA носи алелi A X2 0,18; ВШ = 1,00 (0,19-5,24); р = 0,673
При порiвняннi частот гаплотитв визначених поль морфiзмiв гешв TLR2 (rs5743708), TLR 4 (rs4986790) та CLC-10 ( rs420297) у групах хворих на АР та популяцй ного контролю не виявлено достг^рноТ залежност мiж наявнiстю у генотип алеля Т гену галектину -10, алеля А гену TLR 2 або алеля G гену TLR 4 та розвитком АР.
Однак при вивченш амейного алерголопчного анамнезу у даноТ групи хворих на АР виявлеш рiзно-маштш прояви алергiТ в сiм'Т у 100%. У результат спостереження за переб^ом захворювання в динамiцi у хворих було встановлено ступеш тяжкост АР (сере-дньо-тяжкий - у 89%, легкий переб^ - у 11%) та ви-значенi кгмшчш форми АР ( цiлорiчний (або персисту-ючий) - 100%). При алерголопчному у 100% па^етчв були виявлеш позитивш шкiрнi проби на пилков^ гри-бковi, побутовi, епщермальш та харчовi алергени.
Розподл частот гаплотипiв п
Аналiз клiнiчного переб^у захворювання у даних хворих показав наявнють супутньоТ патологiТ: частi ГРВ1, що вiдзначались тривалим перебiгом та усклад-неннями з боку бронхо-легеневоТ системи (бронхiти, пневмонп) - у 83%; полипозний риносинусит - 67%; гастродуодешти - 50%.
При аналiзi iмунологiчних показникiв серед носив гаплотитв виявлена рiзниця на рiвнi статистичноТ те-нденцiТ (р< 0,06) за показником CD4+/25+/Foxp3+ у носив гаплотипiв з мутантним алелем.
Для кращого вивчення та розумшня генетичноТ схильностi до виникнення АР об^рунтованим е вивчення поширеностi можливого поеднання генотитв генiв TLR 4 та CLC10 (табл.2).
Таблиця 2.
TLR 4 та гену галектину-10 серед осб полтавськоТ популяц/'Т та хворих на алергчний ринiт, %(n)
CLC 10 TLR4 AA CC AA CT AA TT AG CC AG CT AG TT GG CC GG CT GG TT
Група контролю (n=45) 66,7 (30) 17,8 (8) 2,2 (1) 4,4 (2) 2,2 (1) 0 0 0 0
Хвор1 на АР (n=45) 53,3 (24) 20 (9) 13,3 (6) 4,4 (2) 4,4 (2) 4,4 (2) 0 0 0
(CLC10) СТ/ТТ, ( TLR 4) AG/GG X2 = 0,26; ВШ = 3,14 (0,31-31,42); р = 0,609
Виявлено, що найчастше зустрiчаеться гаплотип ААСС, як в груп контролю (30%), так i у хворих на АР (24%). При порiвняннi частот гаплотитв визначених полiморфiзмiв гешв ИР 4 (гб4986790) та 010-10 (гб420297) у групах хворих на АР та популярного контролю не виявлено достовiрноí залежностi мiж наяв-нiстю у генотипi алеля Т гену галектину -10 та алеля О гену ИР 4 з розвитком АР.
Для бтьш детально'1' оцЫки стану штанного та гуморального iмунiтету у хворих на АР залежно вщ гаплотитв полiморфiзмiв Т1_Р4 та С1_С-10 були оцiненi показни-ки iмунограм хворих на АР з гаплотипом Т1_Р4/С1_С 10 (табл.3) в порiвнянi з показниками обстежених хворих на АР, що не е ноаями зазначених гаплотитв.
Як зазначалося рашше, порушення рiвноваги Т1\Т2-хелперiв з переважанням Т-2 iмунноТ вiдповiдi вiдiграе провщну роль в розвитку АР. У вщповщь на вплив алергенiв у хворих на АР вщбуваеться вивть-нення Т2-цитокiнiв та iндукуеться актива^я еозинофь лiв, опасистих клiтин та пщвищений синтез Ig E. 1сну-ють вiдомостi, зазначенi реакцiТ вщбуваються опосе-редковано через TLR4. Галектин-10 безпосередньо не приймае участi в пригшченш функцiТ CD25 Treg кль тин, однак е необхiдним для здмснення регуляторноТ активностi Treg клтин [8]. Були оцiненi показники iму-нограм хворих на АР з гаплотипом TLR4/CLC 10 (табл.3) в порiвнянi з показниками обстежених хворих на АР, що не е ноаями визначених гаплотитв.
Таблиця 3
lмунологiчнi показники у хворих на АР залежно eid гаплотитв полiморфiзмiв TLR4 та CLC 10
Показник Показники практично здорових оаб Хворi на АР з гаплотипом AG/(CT+TT), (n=4) Хворi на АР, з гаплотипом AA+AG/CC+TT+CT (n=41)
Лейкоцити, 109/л 4,0 - 8,8 4,72 ± 0,60 5,69 ± 0,33
Лiмфоцити, % 18 - 40 28,75 ± 3,75 28,73 ± 1,19
Еозинофти, % 0 - 5 6,25 ± 1,03 4,10 ± 0,45
Загальний IgE, МОд/мл 0 - 130 206,78 ± 5,08 197,41 ± 12,53
CD4+, % 39 ± 5 41,68 ± 3,14 40,43 ± 1,30
CD4+/CD25+,% 9,4 ± 2,05 13,83 ± 2,87 17,21 ± 2,10
CD4+CD25+Foxp3+,% (тис/мкл) 5-10% вщ CD4+ 6,29 ± 0,50 4,5 ± 0,40
1Л-10, пг/мл 0- 50 пг/мл 0,34 ± 0,02 0,36 ± 0,02
1Л-4,пг/мл 0-20пг/мл 55,9 ± 11,33 49,84 ± 3,80
При дослщженш показнигав периферичноТ кровi хворих на АР носив зазначених гаплотитв виявлено, що рiвень лейкоцитiв в середньому склав 4,72 ± 0,60*109/л, тобто не виходив за межi показникiв практично здорових оаб (4,0 - 8,8*109/л). Вiдносна кть-кiсть лiмфоцитiв у середньому склала 28,75 ± 3,75%, що також не виходить за межi показнигав практично здорових осiб (18 - 40%); виявлена помiрна еозино-фоя зi збiльшенням вiдносноТ кiлькостi еозинофов, що в середньому склала 6,25 ± 1,03%. За результатами обстеження хворих на АР носив гаплотитв Т1_Р4 СЮ 10 в iмунологiчних показниках рiвень експресiТ молекул С04+ у хворих на АР мав тенденцю до збь льшення, та в середньому склав 41,68 ± 3,14% при показниках практично здорових людей 39±5%; рiвень експреси С04+/С025+ становив 13,83 ± 2,87%, що пе-ревищуе показники здорових людей (9,4 ± 2,05%). По-
казник рiвню експресiТ молекул С04 С025 Рожр3 мав тенденцiю до збтьшення (в середньому склав 6,29 ± 0,50%). При визначеннi рiвню загального 1дЕ в середньому концентра^я в групi хворих на АР носив гаплотитв Т1_Р4 С1_С 10 становила 206,78 ± 5,08 МО/мл при показниках у практично здорових оаб 0-130 МО/мл.
Умют у сироватцi 1Л-10 у хворих на АР у середньому склав 0,34 ± 0,02 пг/мл, що не перевищуе показники практично здорових людей 0- 50 пг/мл; вщзна-чаеться збтьшення вмюту 1Л-4 у сироватцi та становив 55,9 ± 11,33 пг/мл при показниках у практично здорових оаб 0 - 20 пг/мл.
З метою виявлення вщмшностей за iмунологiчни-ми показниками у хворих на АР носив гаплотитв Т1_Р4 С1_С 10 було проведене порiвняння вщповщних груп з використанням критерю Манна-Уiтнi (таб.4).
Таблиця 4
В1дм1нност1 за ¡мунолог1чними показниками у хворих на АР носП'в гаплотитв TLR4 ас 10
Показник Хворi на АР з гаплотипом TLR4 CLC 10 , (n=4) Хворi на АР, (n=41)
CD4+CD25+Foxp3+,% (тис/мкл) 6,29 ± 0,50 4,5 ± 0,40
U, р U(n=4;n= 41) = 25,50; p=0,024
U, р - eidMiHHQcmi мiж групами за криmepieM Манна- YimHi.
При з'ясуванн залежност рiвня експреси молекул CD4+CD25+Foxp3+ у хворих на АР носив гаплотитв TLR4 CLC 10 вщмичено, що в зазначенш rpyni показ-ник був статистично значимо вищий (критерм Манна-Упн U(n=4;n= 41) = 25,50; p=0,024) та склав 6,29 ± 0,50% (тис/мкл).
Отриманi результати дозволяють розглядати ОНП гетв TLR 4 (rs4986790) та CLC-10 ( rs420297), як до-датковий прогностичний показник при патогенетичних дослщженнях.
Висновки
1. При порiвняннi частот гаплотипiв визначених полiморфiзмiв гетв TLR2 (rs5743708), TLR 4 (rs4986790) та CLC-10 ( rs420297) у групах хворих на АР та популярного контролю не виявлено достовiр-ноТ залежностi мiж наявнiстю у генотип алеля Т гену галектину -10, алеля А гену TLR 2 або алеля G гену TLR 4 та розвитком АР.
2. При вивченн поширеност можливого поеднан-ня генотипiв генiв TLR 4 (rs4986790) та CLC10 ( rs420297) ) виявлено, що найчастше зyстрiчаеться гаплотип ААСС, як в грут контролю (30%), так i у хворих на АР (24%), у групах хворих на АР та популярного контролю не виявлено достовiрноТ залежност мiж наявнiстю у генотипi алеля Т гену галектину -10 та алеля G гену TLR 4 з розвитком АР.
3. У хворих на АР носив гаплотитв TLR4/ CLC 10, яга мютять полiморфнi алелi G та Т виявлено достовь рно вищий рiвень експреси молекул CD4+CD25+Foxp3+ Трег кгитин (критерм Манна-Уiтнi U(n=4;n= 41) = 25,50; р=0,024),що склав 6,29 ± 0,50% (тис/мкл) iз зниженням вмiстy lL-10 та пiдвищенням IL-4 (55,9 ± 11,33 пг/мл).
Лiтература
1. 1змайлова О.В. Зв'язок полiморфiзмiв гежв TLR2 та TLR4 ai схильнютю до окремих yрогенiтальних iнфек-цш./ О.В. 1змайлова, О.А. Шликова, Н.О. Боброва [та 1н.].// Цитология и генетика 2011; № 4: 29-35.
2. Охотникова Е.Н. Аллергический «марш»: связь поколений и эскалация аллергии у детей (лекция) // Совре-мен. педиатрия. - 2008. - №4(21). - С.190-197.
3. Bryborn M., Hallden C., Sail T., Cardell L. O. CLC-a novel susceptibility gene for allergic rhinitis?//Allergy.-2010.-65(2).-P.220-228
4. Ciprandi G., Cirillo I., Pistorio A. Impact of allergic rhinitis on asthma: effects on spirometric parameters // Allergy.-2007.- Р.18-20.
5. Han D., She W., Zhang L. Association of the CD14 gene polymorphism C-159 T with allergic rhinitis\\ Am I Phinol Allergy.- 2010. -24(I). - P.1-3
6. Identification of polymorphisms in the Toll-like receptor gene and the association with allergic rhinitis |\\Eur Arch Otorhinolaryngol.- 2010.-267 (3).-P.385-389
7. Kang I., An X.H., Oh Y.K. et al. Identification of polymorphisms in the RNA se 3 gene and the association with al-
lergic rhinitis // Eur Arch 0torhinolaryngol.-2010.-267(3).-P.391-5
8. Kubach I.,Lutter P., Bopp T.,et al. Human CD4 CD25 regulatory T cells: proteome analysis identifies galectin -10 as a novel marker essential for their anergi and suppressive function // Blood.- 2007.-110(5).-p.1550-1558
9. Mou Z, Shi J, Tan Y. Et al. Association between TIM-1 gene polymorphisms and allergic rhinitis in a Han Chinese population \\ J Invest Allergol Clin Immunol.-2010.-20(1).-P.3-8.
English version: PREVALENCE OF HAPLOTYPES OF POLYMORPHIC GENES TLR 2, TLR 4, CLC-10 AND THEIR ASSOCIATION WITH SOME IMMUNOLOGICAL PARAMETERS IN PATIENTS WITH ALLERGIC RHINITIS*
Sakevych V. D.
State Higher School of Ukraine "Ukrainian Medical Stomatological Academy", Poltava
To determine the role of specific polymorphisms of genes that control the structural and regulatory elements nonspecific resistance of the organism in the development of allergic rhinitis prevalence determined polymorphism 2258G / A gene TLR2 (rs5743708), TLR 4 gene (rs4986790) and CLC-10 gene (rs420297) in the group surveillance and population control group, the analysis of immunological parameters and clinical manifestations in patients with polymorphic variants studied genes. To clarify a possible combination of different genotypes of all genes that define haplotype analyzes . When comparing the frequencies of hapiotypes defined by polymorphisms of genes TLR2 (rs5743708), TLR 4 (rs4986790) and CLC-10 (rs420297) in patients with AR and population control were found reiiable relationship between the presence of T allele genotype haiektynu -10 gene, allele A gene TLR 2 or TLR gene allele G 4 and the development of RA. In the study of the prevalence of possible combinations of genotypes TLR 4 gene (Asp299Giy) and CLC10 (rs420297)) found that the most common haplotype AASS as in the control group (30% ) and in patients with AR ( 24%) in patients with AR and population control were found reliable relationship between the presence of T allele genotype haiektynu -10 gene and allele G TLR 4 gene with the development of RA. In patients with AR haplotype carriers TLR4 / CLC 10 containing polymorphic alleles G and T were found significantly higher levels of expression of molecules CD4 CD25 Foxp3 MPER cells ( Mann- Whitney U (n = 4 ; n = 41) = 25,50; p = 0.024 ), which was 6,29 ± 0,50% (thousands / ml) of reducing the amount of IL -10 and IL -4 increase (55,9 ± 11,33 pg / mi). The results obtained can be considered gene TLR 4 SNPs (rs4986790) and CLC-10 (rs420297), as an additional prognostic indicator in pathogenetic studies.
Keywords: polymorphism, Toll-like receptors, halektyn-10 , allergic rhinitis.
Introduction
There is a tendency to a rapid spread of allergic diseases in the world, which become a serious issue because of the widespread, annual growth of widespread disease, frequent complications, as well as a sharp decline in performance and quality of life of patients.
AR is seen as a major problem of allergology , since the disease in most cases is the first clinical manifestation of atopy , followed by transformation of bronchial asthma (BA ) [4 ].
The study of the genetic basis of atopy is a key issue, which is necessary to establish the relationship between hereditary and environmental factors in the implementation of very complex pathological phenotype and understanding the mechanisms of interaction polygenic systems in the implementation of genetic information at the level of the whole organism . Knowing the molecular and cellular mechanisms of disease, we may identify genes, whose protein products are the most significant. According to studies , the genes of atopy and associated states are concentrated mainly in the 10 areas of the human genome .
According to studies , there are data about the association of allergic rhinitis with gene polymorphisms TIM-1 [9], SD14 [5], TLR 2-4 [6], RNA se 3 [7].
Specificity of the innate immune system is realized through family Toll- like receptors (TLRs). Important structural and molecular elements of the pattern - distinctive receptor (SPR) is a Toll- like receptor 2 (TLR 2) and Toll- like receptor 4 (TLR4). The genes encoding TLR2 and TLR4 show high variability in the population [1]. Recently the information has appeared about the identification of functional polymorphisms of genes TLR, due to the replacement of single nucleotides (from Eng. Single nucleotide polymorphism - SNP). As a result of these substitutions there is a reduction of ability to recognize appropriate ligands and efficiency of signal pulses, which leads to disruption of the activation of immune cells. A functional polymorphism of TLR 2-4 gives the regulation of innate immune response that is essential imbalance T1/T2-helpers. Similar mechanism may play a crucial role in the formation of chronic inflammation and has attracted attention as a potential risk factor for the development of atopic diseases, including AR [6].
In studies of foreign scientists the association of allergic rhinitis with gene polymorphisms halektyn -10 (CLC-
* To cite this English version: Sakevych V. D. Prevalence of haplotypes of polymorphic genes TLR 2, TLR 4, CLC-10 and their association with some immunological parameters in patients with allergic rhinitis - // Problemy ekologii ta medytsyny. - 2013. - Vol 17, № 5-6. - P. 20 -23.
