CC BY
9
cytochrome C.
УДК 616.831-009.11.
11 2 М.Г. Соколова , С.В. Лобзин , В.А. Пеннияйнен ,
2 2 А.В. Кипенко, Е.В.Лопатина
РОЛЬ ПРОТЕИНКИНАЗЫ С В НЕЙРИТИНГИБИРУЮЩЕМ ЭФФЕКТЕ ПЛАЗМЫ КРОВИ БОЛЬНЫХ СПИНАЛЬНОЙ МЫШЕЧНОЙ АТРОФИИ 2 ТИПА39
1 Северо-западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова, Институт физиологии им. И.П. Павлова РАН, Санкт-Петербург, Россия, [email protected]
Введение:Спинальная мышечная атрофия (СМА) 2 типа - аутосомно-рецессивное заболевание, характеризующееся дегенеративным изменением а-мотонейронов передних рогов спинного мозга [1]. Ранее поведенная серия опытов с сывороткой крови больных СМА 2 типа в органотипической культуре ткани выявила ингибирующий эффект на рост нейритов сенсорных ганглиев[2, 3]. Дальнейшее исследование данного феномена проводилось в направлении определения биологически активных субстанций, которые могли бы участвовать в этом процессе. Одним из претендентов является семейство протеинки-наз, которые регулируют клеточный цикл, рост и дифференцировку клеток, апоптоз.
Цель исследования: выяснить участие протеинкиназы С в нейритингибирую-щем действии плазмы пациентов со СМА 2 в эксперименте с органотипической культурой ткани в присутствие сыворотки крови больных СМА 2 типа. Материалы и методы:Было обследовано 12 пациентов в возрасте 7-14 лет с СМА 2 типа. Диагноз СМА 2 типа был подтвержден молекулярно-генетическим исследованием, с выявлением дефекта на длинном плече 5-ой хромосомы (в интервале между D5S629 и D5S557). Для выяснения участия протеинкиназы С в нейрит-ингибирующем действии плазмы пациентов со СМА
39 1 1 2 2 2
M.G. Sokolova , S.V. Lobzin ,V.A. Penniyaynen ,A.V. Kipenko , E.V. Lopatina The role of protein kinase c of neuroinhibitory effect of blood plasma in patientswith spinal muscular atrophy of
1 2 the 2 type / North-West State Medical University named after I.I. Mechnikov, Pavlov Institute of
Physiology of the Russian Academy of Sciences, St. Petersburg, Russia Saint-Petersburg
2 типа использовали метод органотипической культуры ткани. Объектами исследования были 1200 сенсорных ганглиев 10-12-дневных куриных эмбрионов, культивируемых в чашках Петри на подложках из коллагена в СО2-инкубаторе («Sanyo», Япония) в течение 3-х суток при 36,5°С и 5% СО2 [4]. Контрольные эксплантаты культивировали в питательной среде стандартного состава. В 600 экспериментальных чашках в культуральную среду добавляли сыворотку крови больных СМА 2 типа. В остальные чашки вместе с сывороткой крови больных СМА 2 типа в культуральную среду добавляли ингибитор протеинкиназы Ста-моксифен (tamoxifen) (10-5 М) ("Sigma", США). Статистическая обработка - В ходе исследования применяли следующие процедуры и методы статистического анализа: оценка статистической значимости различия количественного показателя в двух группах с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни (Mann-Whitney U Test). Описание количественных признаков выполнено с использованием медианы, 25% и 75% перцентилей. Нулевая статистическая гипотеза отвергалась при уровне значимости p<0,05. Статистический анализ осуществлялся с использованием пакета STATISTICA 8.0 (StatSoft®, Inc., USA).
Результаты и обсуждение: сыворотка крови 12 больных СМА 2 типа была исследована в широком диапазоне разведений (1:100-1:2). В разведениях 1:2, 1:10, 1:50 сыворотка больных полностью блокировала рост нейритов сенсорных ганглиев. При добавлении в культуральную среду сыворотки крови в разведении 1:70 наблюдали достоверное нейритингибирующее действие. Индекс площади исследуемых эксплантатов был ниже контрольных значений в среднем на 25%. При дальнейшем разведении сыворотка крови на рост нейритов не влияла. Культивирование сенсорных ганглиев в среде, содержащей плазму пациентов со СМА 2 типа (1:70) и ингибитор протеинкиназы Стамоксифен (tamoxifen) (105 М) устраняло нейритингибирующий эффект плазмы. Индекс площади экспериментальных эксплантатов практически не отличался от контрольного значения. Полученные результаты свидетельствуют о том, что протеинкиназа С участвует в реализации нейритингибирующего действия плазмы больных со СМА 2 типа. Результаты исследования диктуют необходимость дальнейшего научного поиска.
Выводы: Проведенные исследования показали, что ингибитор протеинкиназы С-тамоксифен устраняет нейрит-ингибирующий эффект плазмы сыворотка крови больных СМА 2 типа в органотипической культуре ткани. Это подтвер-
ждает участие протеинкиназы С в процессе ингибирования роста нейритов в эксперименте с сывороткой крови больных СМА 2 типа. Дальнейший научный поиск позволит определить биомолекулярный путь данного феномена.
Литература
1. Неврология: национальное руководство / Под ред. акад. РАМН Е. И. Гусева. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 936 с.
2. Морфологические основы патологии: монография; [под ред. В.П. Волкова]. Новосибирск: Изд. «СибАК», 2015. - 176 с.
3. Соколова М.Г. Оценка реиннервационного процесса у больных спиналь-ной мышечной атрофией 2 типа в комплексном клинико-экспериментальном исследование // М.Г. Соколова, В.А. Пеннияйнен, М.В. Резванцев, С.В. Лобзин, Н.Ю. Александров / Вестник СЗГМУ. - 2014. - Т.6. - №4. - С. 45 -52.
4. Пеннияйнен В.А. Влияние оуабаина на рост нейритов чувствительных нейронов в органотипической культуре ткани / В.А. Пеннияйнен, Б.В. Крылов // Цитология. - 2003. - Т. 45. - №4. - С. 377-379.
Ключевые слова: спинальная мышечная атрофия 2 типа (СМА), сыворотка крови, протеинкиназа С.
bywords: spinal muscle atrophy of type 2 (SMA), blood serum, protein kinase C.
