CC BY
28
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
их относительного количества, сопровождаемая изменением соотношения CD56dim/CD56bnsht NK-клеток в группе больных. Сравнение полученных данных для пациенток с пре-инвазивным (in situ) и микроинвазивным раком позволяет предполагать усиление наблюдаемых отклонений при дальнейшей прогрессии неоплазии, но достоверных различий между этими подгруппами не установлено. Результаты поиска корреляций между 80 выбранными фе-нотипическими параметрами позволяют говорить о том, что при развитии инвазивного РШМ происходит согласованное увеличение экспрессии маркеров иммунорегуля-торных CD4/CD8 клеток, становятся более выраженными взаимосвязи между Tregs, уровнем экспрессии CD95 на CD4 и CD8 Т-клетках и апоптозом, что может иметь непосредственное отношение к механизму формирования патологических отклонений в иммунной системе.
Заключение. Индукция инвазивного роста при РШМ поддерживается широким спектром нарушений, при этом, системные изменения баланса регуляторных клеток врожденного и адаптивного иммунитета могут играть ключевую роль и должны рассматриваться в качестве объекта более детального исследования при разработке новых методов иммунотерапии.
Работа выполнена при поддержке РФФИ (проект №16-34-60019).
ОПЫТ ФЕНОТИПИРОВАНИЯ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА У БОЛЬНЫХ С МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
Моруга Р.А.1, Родкина Г.Н.1, Путков С.Б.1, Казаков С.П.1 2
1ФГКУ «Главный военный клинический госпиталь
им. Н.Н. Бурденко» Министерства обороны РФ, Москва,
Россия
2 ФГБОУДПО «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Цель. Проведение сравнительных исследований костного мозга на проточном цитофлюориметре и оценка фе-нотипических особенностей популяций плазматических клеток пациентов с множественной миеломой (ММ), для его анализа и использования полученных результатов в диагностической лабораторной практике.
Материалы и методы. Для исследования использовался пунктат костного мозга, полученный от 10 пациентов с подозрением на ММ на разных стадиях заболевания и лечения. Фенотипически оценивалась популяция клеток, предполагаемая как миеломные плазматические клетки, в результате чего был получен фенотип, как правило, присутствующий на опухолевых миеломных клетках: CD45+dimCD19-CD38+CD138+CD56+dim. А также исследовалось относительное количество внутриклеточного и мембранного содержания легких цепей иммуноглобулинов — Kappa+ и Lambda+, с применением технологии пер-мобилизации клеток. Образцы сыворотки крови и мочи пациентов исследовались методом электрофореза, имму-нофиксации, нефелометрии с определением количества белка в сыворотке и моче, фенотипа миеломы — тяжелых с общими и свободными цепями, количества свободных и общих легких цепей. Костный мозг больных так же направлялся на исследование иммуногистохимическими и цитогенетическими методами.
Результаты. От пациентов с установленным диагнозом ММ, в процессе исследования был выявлен материал, со-
держащий легкие цепи фенотипа Kappa+ и Lambda+, неоднородный по степени их экспрессии. В ходе дальнейших исследований были получены три группы пациентов.
Первая: с положительными результатами иммунофик-сации по IgG, Lambda в сыворотке крови, повышенным содержанием общих легких цепей Lambda, повышенное количество, как клеток костного мозга, несущих легкие цепи Lambda+ медиана — 93,2% (88,7-97,8%) в исследуемой популяции и средней плотности данного рецептора на клетках медиана — 22,7 (21,7-23,7).
Вторая — с аналогичной тенденцией по IgG, Kappa и клетками Kappa+ медиана — 89,5% (83,3-95,7) и невысокой плотностью экспрессии рецепторов медиана — 4 (2,8-5,2).
Третья — в данной группе методом иммунофиксации сыворотки крови выявлялся фенотип IgG, Lambda или IgG, Kappa и повышенное количественное содержание данных легких цепей. Однако в этой, группе по результатам проточной цитометрии, отмечалось невысокое относительное содержание клеток, несущих легкие цепи медиана — 3,25% (3,2-3,3%), и невысокой экспрессией плотности рецепторов медиана — 3,2 (1,9-4,5).
У других пациентов, не имевших диагноза ММ, в ходе исследования косного мозга определялся значительно меньший процент количества плазматических клеток экспрессирующих легкие цепи Kappa+ или Lambda+ 5,7% (0,5-11%) клеток, а средняя плотность экспрессии по данным маркерам, не превышала — 1,0.
Также все обследованные пациенты были распределены согласно прогностической классификации предлагаемой клиникой Mayo (США, 2013 г.). Было отмечено повышение количества плазматических клеток в миело-грамме у пациентов с более высоким риском прогрессии ММ, по данным, полученным цитогенетическими методами исследования. Было проведено распределение пациентов по группам риска и прогнозу злокачественности. Так высокий прогностический риск по цитогенетическо-му исследованию и классификации клиники Mayo — у 1 пациента с 76,4% плазматических клеток в костном мозге. Промежуточный риск — у 1 пациента с 46,6% плазматических клеток. Стандартный риск выявлен у 4 пациентов с 36% (9,6-63,6) плазматических клеток.
Выводы. По результатам проведенных исследований нами были сформированы три, выше описанных, группы фенотипа «плазматических миеломных» клеток и прослежен ряд тенденций.
Дальнейшая работа в данном направлении, по нашему мнению, может оказаться необходимой при оценке стадии и прогноза заболевания, а также начала лечения и выживаемости пациентов с множественной миеломой, при сравнительной характеристике фенотипа и генотипа.
РОЛЬ ГИПЕРВИРУЛЕНТНЫХ Н. PYLORI, ГЕНЕТИЧЕСКОГО ПОЛИМОРФИЗМА ЦИТОКИНОВ В ИММУНОПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКОГО ГАСТРИТА И ИХ ВЗАИМОСВЯЗЬ С КАНЦЕРОГЕНЕЗОМ
Москалев А.В., Рудой А.С.
Военно-медицинская академия им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, Россия
На протяжении ряда лет, опираясь на данные собственных исследований и литературы, изучали вопросы иммунопатогенеза острого и хронического гастрита (ХГ), язвенной болезни. Однако вопросы взаимосвязи хронического атрофического гастрита (ХАГ) с риском развития
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Онкоиммунология и гемобластозы Cancers and hematological malignancies
аденокарциномы желудка оставались незатронутыми. Установлено, что риск развития рака желудка возрастает экспоненциально в зависимости от стадии и степени тяжести атрофического гастрита. В настоящее время считаются доказанными различия канцерогенного потенциала штаммов Н. pylori. Считается, что сочетание вирулентности микроорганизма и генетической восприимчивости хозяина ведет к более тяжелому хроническому воспалению и более быстрому прогрессированию рака желудка. Главной де-терминантой выраженной степени воспаления является содержание фактора вирулентности CagA. В частности, значительная часть штаммов Н. pylori содержит CagA-ген, являющийся маркером цитотоксичности и отвечающий за выработку так называемого CagA белка. Метаанализ 16 исследований по принципу «случай-контроль», показал, что среди Н. pylori-инфицированных пациентов инфицирование CagA-позитивными (CagA+) штаммами в 1,64 раз увеличивает риск возникновения рака желудка. Такие бактериальные факторы вирулентности как CagA-формы с множественными EPIYA-C сегментами и штаммы с harbor VacA сигнальной областью типа si и mid-region ml также связаны с повышенным риском рака желудка.
В последние годы широко изучена роль и генетического полиморфизма интерлейкинов (IL) в патогенезе желудочного канцерогенеза. Прежде всего, описаны IL-lß, антагонист рецептора IL-1 (IL-lra), IL8, IL-10 и TNFa, играющие важную роль в воспалительной реакции на Н. pylori и воспаление СОЖ, что приводит к атрофии слизистой оболочки и прогрессированию рака желудка. Подтверждена ассоциация риска развития рака желудка с генотипами IL-1 (IL-1B-511 T IL-1B-31 T, и генотипом х2/х2 антагониста рецептора IL-1 с отношением шансов 2,5; 2,6 и 3,7 для развития рака желудка у гомозиготных носителей этих аллелей по сравнению с не носителями. Обнаружена связь IL-lß и IL-1RNx2 с риском возникновения рака желудка. Установлен повышенный риск рака желудка для носителей IL-RNx2, специфичный для дистального рака. Лица, которые являются носителями TNFa-308A, имеют повышенный риск развития рака желудка. Также доказано, что функциональные полиморфизмы Toll-like рецепторов 4 типа (TLR4), участвующих в распознавании Н. pylori, лежат в основе избыточного иммунного ответа и связано с повреждением СОЖ. В частности, носители TLR4+ 896А > G полиморфизма имеют более тяжелую атрофию желудка и степень воспаления, а также повышенный риск развития некардиального рака желудка.
Таким образом, имунопатогенез канцерогенеза атро-фического гастрита является многогранным, в котором существенную роль играют генетическая предрасположенность, гипервирулентность Н. pylori и выраженность воспалительной реакции в СОЖ.
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПРЕДИКТОРЫ РАЗВИТИЯ МУКОЗИТОВ В ПОСТТРАНСПЛАНТАЦИОННОМ ПЕРИОДЕ У БОЛЬНЫХ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМОЙ
Назарова Е.Л., Минаева Н.В., Хоробрых М.Н., Зорина Н.А., Шардаков В.И., Демьянова В.Т., Парамонов И.В.
ФГБУН«Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства», Киров, Россия
Введение. Высокодозная химиотерапия с трансплантацией аутологичных гемопоэтических стволовых
клеток (ауто-ТГСК) способствует увеличению общей выживаемости и удлинению периода бессобытийной выживаемости пациентов с множественной миеломой (ММ). Одним из осложнений высокодозного кондиционирования в период гипоплазии кроветворения является токсическое повреждение слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта. Мукозиты проявляются болевым синдромом разной степени выраженности, диспепсией, присоединением тяжелых инфекционных и, в ряде случаев, жизнеугрожающих осложнений, терапия которых увеличивает расходы на лечение и сроки пребывания больных в стационаре. К независимым факторам риска развития тяжелых мукозитов при ММ относят гендерную принадлежность пациента, нарушения функции почек и используемые режимы кондиционирования. В результате проведенных E.A. Coleman et al. (2015) исследований, было убедительно показано, что генетические особенности пациента, в частности наличие полиморфизма генов иммунного ответа, может также играть важную роль в патогенезе данных осложнений в качестве дополнительного фактора.
Цель и задачи. Определить участие полиморфизма генов иммунного ответа в развитии мукозитов в раннем периоде после аутологичной трансплантации гемопоэти-ческих стволовых клеток у больных множественной ми-еломой.
Материалы и методы. Генотипирование 20 полиморфных локусов 14 генов иммунного ответа TLR2, TLR3, TLR4, TLR6, TLR9, IL-lß, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-I7A, CDI4, TNFa, FCGR2A проводили методом полимеразной цепной реакции с аллель-специфичными праймерами и электрофоретической детекцией продуктов реакции в агарозном геле у 20 пациентов с ММ и ауто-ТГСК. Степень выраженности мукозитов оценивали на основании критериев CTCAE (Common Terminology Criteria for Adverse Events) version 4.0 for Gastrointestinal Events, 2009 [http://www.acrin.org/Portals/0/Administration/Regulatory/ CTCAE_4.02_2009-09-15_QuickReference_5x7.pdf]. Соответствие распределения генотипов равновесию Хар-ди—Вайнберга, расчет наблюдаемой и ожидаемой ге-терозиготности, сравнение частот аллелей и генотипов проводили общепринятыми методами популяционной биометрии. Поиск ассоциаций выявленных гаплотипов с мукозитами различной степени выраженности производили путём сравнения частот аллелей и генотипов между группами больных, используя критерий %2 с поправкой Йетса на непрерывность. Об ассоциации аллелей или генотипов с предрасположенностью к данному осложнению судили по величине отношения шансов (OR) с уровнем статистической значимости результатов p < 0,05.
Результаты. Установлено, что у всех пациентов с ММ после ауто-ТГСК отмечалось развитие мукозитов различной степени тяжести. Так, у семи больных (35%) поражение слизистых оболочек соответствовало 0-I степени (согласно CTCAE), а у большинства обследованных — 13 человек (65%) — симптомы мукозита отнесены к II-III степеням токсичности. Жизнеугрожающих (IV-V степени) повреждений слизистых оболочек отмечено не было. Среди 20 исследованных полиморфных локусов генов иммунного ответа диагностически значимыми выступили гены IL-lß и IL-10 в точках мутации -1473 и -819, соответственно. Так, в группе пациентов с более выраженными симптомами мукозита (2 группа) практически отсутствовали мутантные гомозиготы гена IL-lß (%2 = 6.11; р = 0,01; OR = 19,44; 95%CI: 0,83-455,15) наряду с преоб-
