CC BY
29
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 107
глетного кислорода, возможность реализации широкого К. С. Титов1, М.В. Киселевский2, синтетического разнообразия 1,4-диазепинового гетероци- И.Ж. Шубина2, И.Н. Михайлова2 кла делают 5,7-бис(стирил)-1,4-диазепинопорфиразины РОЛЬ БИОТЕРАПИИ В ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ перспективными для создания синтетических ФС 3-го по- С МЕТАСТАТИЧЕСКИМИ ПЛЕВРИТАМИ, коления. АСЦИТАМИ И ПЕРИКАРДИТАМИ Работа выполнена при поддержке РФФИ(№ 14-03-32031). 1ГБУЗ МКНЦ ДЗМ, Москва; 2ФГБУ«РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва Л. В. Татьяненко, А. И. Котельников, О. В. Доброхотова, Цель исследования — провести сравнительную оценку Н.Ю. Шматко, Н.А. Санина, С.М. Алдошин клинической эффективности и переносимости различных НИТРОЗИЛЬНЫЕ КОМПЛЕКСЫ ЖЕЛЕЗА методов внутриполостной иммунотерапии у больных С ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ ЛИГАНДАМИ с опухолевыми серозитами, резистентными к системной ТИОКАРБАМИДОМ И ЕГО АЛИФАТИЧЕСКИМИ лекарственной терапии. ПРОИЗВОДНЫМИ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ Материалы и методы. В исследование включены 203 АНТИМЕТАСТАТИКИ больных с различными диссеминированными злокачест-ФГБУНИПХФ РАН, Черноголовка, Московская область венными опухолями с морфологически подтвержденными Введение. Известно, что активный транспорт ионов опухолевыми серозитами (плевриты — 93, асциты — 72 Са2+ через мембрану саркоплазматического ретикулума и перикардиты — 38). Для генерации лимфокин-активиро-(СР) происходит за счет энергии гидролиза аденозинтри- ванных киллеров (ЛАК) использовали мононуклеарные фосфата (АТФ), осуществляемого Са2+-АТФазой СР. Ин- лейкоциты, полученные из серозного экссудата больного гибирование транспорта Са2+ изменяет соотношение вну- (аутологичные) или при сепарации периферической крови три- и внеклеточного содержания Са2+, что предотвращает здоровых доноров (аллогенные), которые далее генериро-образование тромбов и адгезию метастатических клеток вали в СО2-инкубаторе в присутствии интерлейкина-2 к эндотелию капилляров, препятствуя росту метастазов. (ИЛ-2) (Ронколейкин, ООО «Биотех», Россия) в течение 3 Цель исследования — изучение влияния новых катион- сут. Для проведения внутриполостной биотерапии серозных динитрозильных комплексов железа с тиокарбамидом ную полость катетеризировали Плевроканом (B. Braun, и его алифатическими производными — новых синтетиче- Германия) по стандартным методикам. Экссудат макси-ских аналогов природных доноров NO — на ферментатив- мально удаляли до начала лечения и через каждые 2 дня ную активность Са2+-АТФазы СР. в процессе иммунотерапии. В серозную полость 1 раз в день Материалы и методы. Исследовали соединения ежедневно вводили Ронколейкин (ИЛ-2) по 1 млн МЕ ± ЛАК [Fe(C3N2H8S)Cl(NO)2]0[Fe(NO)2(C3N2H8S)2]+Cl- (I), [Бе^С по 100-150 млн клеток № 10 при плевритах, № 15 при ас-(N(CH3)2)2(NO)2]Q (II), [Fe^QNH^yNO^Cl х H2O (III) цитах и № 5 при перикардитах. В конце иммунотерапии и [Fe^QNH^^NO^SO^j х H2O (IV). Фермент Са2+-АТ- Плеврокан удаляли. По окончании лечения отсутствие Фазу СР выделяли из белых мышц задних конечностей опухолевых клеток в остаточном экссудате в результате кроликов, удельная активность Са2+-АТФазы составляла их лизиса активированными лимфоцитами коррелировало 15000 нМ/мг белка/мин. Гидролитическую активность с наступлением клинического эффекта. Са2+-АТФазы рассчитывали из тангенса угла наклона ки- Результаты. Внутриполостная биотерапия у больных нетической кривой гидролиза АТФ. О скорости изменения с опухолевыми серозитами позволяет достичь объективно-концентрации ионов Са2+ судили по кинетике их поглоще- го ответа для опухолевых плевритов: при использовании ния везикулами СР. Обратимость действия исследованных ИЛ-2 и аутологичных ЛАК — 92,9 %, ИЛ-2 и аллогенных соединений определяли путем диализа буферного раство- ЛАК — 93,4 %, ИЛ-2 — 80 % (продолжительность объектив-ра Са2+-АТФазы СР, содержащего 10-5 М соединений I—IV. ного ответа 8,2; 8,5 и 7,9 мес соответственно); для опухолевых Диализ проводили против 100-кратного избытка буферного асцитов: при применении ИЛ-2 и аллогенных ЛАК — 73,2 %, раствора в отсутствие комплексов в течение 24 ч при 4 °С. ИЛ-2 — 61,3 % с продолжительностью объективного отве-Результаты. Показано, что нитрозильные комплексы та 5,1 и 4,8 мес (в 69,5 и 64,7 % случаев в 2 группах больных железа I—IV полностью тормозят транспортную и гидро- раком яичников после внутрибрюшинной иммунотерапии литическую функции Са2+-АТФазы СР в концентрации в сыворотке крови отмечалось достоверное снижение уров-10—4 М. В концентрации 10—5 М они на 57 ± 6; 75 ± 8; 80 ± 8 ня онкомаркера СА-125 по сравнению с исходно повышен-и 85 ± 9 % тормозят активный транспорт Са2+ и на 0; 40 ± 4; ным уровнем; р < 0,05); для опухолевых перикардитов: при 48 ± 5 и 38 ± 4 % гидролиз АТФ соответственно. Комплекс II использовании ИЛ-2 и аллогенных ЛАК — 95,7 %, ИЛ-2 — обратимо и неконкурентно тормозит гидролитическую 86,7 % (продолжительность объективного ответа 3,4 и 3,2 мес). функцию Са2+-АТФазы СР с К = 1,7 х 10—6 М, что указы- Основным побочным эффектом внутриполостной биоте-вает на нековалентное связывание соединения с фермен- рапии в 83 % случаев был гриппоподобный синдром. Ге-том и предполагает его влияние на структурно-функцио- матологической и других видов токсичности у пациентов нальное состояние мембраны СР. отмечено не было. Заключение. Полученные данные позволяют предпо- Заключение. Таким образом, внутриполостную биоте-ложить наличие у соединений I—IV антиметастатической рапию у больных с опухолевыми серозитами, возникаю-активности. щими при прогрессировании заболевания после 1—3 линий Исследования поддержаны Программой Президиума РАН № 1 системной цитостатической терапии, следует начинать «Наноструктуры: физика, химия, биология, основы технологий». с введения ИЛ-2 в монорежиме, как не менее высокоэф-
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
108 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
фективного и доступного для практического применения рону первых. Ключевым белком, стимулирующим образо-метода, а при его неэффективности необходимо допол- вание кровеносных сосудов, является фактор роста нять лечение введением в серозную полость аллогенных эндотелия сосудов (VEGF), а его эффекты определяются ЛАК-клеток. взаимодействием с соответствующим рецептором. Наиболее противоречива информация о VEGFR1: до сих пор А.С. Тихомиров1-2, Л.Г. Деженкова1, А.Е. Щекотихин12 точно не установлена ни его функция, ни клеточная лока-ЦИТОТОКСИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА лизация. Различные изоформы этого рецептора могут про-АНТРАФУРАНКАРБОКСАМИДОВ, являть противоположные свойства. Полноразмерный мем-СОДЕРЖАЩИХ CF3-ГРУППУ В ПОЛОЖЕНИИ 2 браносвязанный mVEGFRl способствует правильному ФГБНУ«НИИНА им. Г.Ф. Гаузе», Москва; созреванию кровеносных сосудов в эмбриогенезе, а рас-2ФГБОУВПО «РХТУ им. Д.И. Менделеева», Москва творимый sVEGFRl подавляет ангиогенез. Помимо «сосу-Введение. Антрафурандион-3-карбоксамиды высоко- дистых» функций, VEGFR1 экспрессируется многими активны в отношении ряда культур опухолевых клеток, опухолевыми клетками и ответственен за их выживание, в том числе резистентных, a наиболее активное производное миграцию, инвазию и метастазирование. Установление ЛХТА-2034 (Щекотихин А. Е. и др. Патент РФ № 2554939, точной локализации VEGFR1 в опухолевых клетках позво-2015) прошло доклинические исследования и рекомендо- лит в будущем рассматривать его как перспективную ми-вано для проведения I стадии клинических испытаний. шень в терапии злокачественных новообразований. Цель исследования — синтез аналогов антрафурандио- Цель исследования — выявить и установить локализа-на ЛХТА-2034 и исследование влияния трифторметильно- цию белка VEGFR1 в опухолевых клетках. го заместителя в положении 2 на способность новых со- Материалы и методы. В работе использованы линии единений блокировать рост опухолевых клеток и работу опухолевых клеток человека различного гистогенеза: A431, топоизомеразы 1. A549, Sn12c. Ведение культур осуществляли по стандарт-Материалы и методы. ЛХТА-2251 — новый аналог пре- ной методике. Оценку уровня экспрессии гена VEGFR1 парата ЛХТА-2034, содержащий CFj-группу в положении проводили методом полимеразной цепной реакции 2 гетероцикла, получен конденсацией 4,11-дигидрокси-5,10- с обратной транскрипцией. Наличие белка в целых клетках диоксо-2-трифторметилантра[2,3-6]фуран-3-карбоновой регистрировали с помощью иммуноцитохимического (ИЦХ) кислоты [Тихомиров А. С. и др. Химия гетероциклических исследования и непрямой реакции иммунофлуоресценции соединений 2014; (2):298] и циклического диамина. Анти- (РИФ) с последующим анализом на проточном цитофлу-пролиферативную активность веществ определяли в МТТ- ориметре. Вклад ядерной локализации VEGFR1 оценива-тесте на опухолевых клетках меланомы B16, миелоидного ли разработанным методом РИФ с экстрагированными лейкоза человека К562 и карциномы кишечника HCT116. интактными ядрами. Влияние на активность топоизомеразы 1 (Promega, США) Результаты. Во всех трех клеточных линиях обнаруже-изучали в реакции релаксации суперскрученной плазмиды на базальная экспрессия гена VEGFR1. По данным ИЦХ-pBR322 (Fermentas, Литва). исследования также было установлено, что все перечислен-Результаты. Новый 2-CF3-антрафурандион ЛХТА-2251 ные линии содержат белок VEGFR1, причем наибольшее обладает более высокой растворимостью по сравнению количество зафиксировано в клетках A431. В связи с этим с ЛХТА-2034, однако модификация метильной группы указанная линия была выбрана для детальных исследовав CF^^^^ приводит к 5-10-кратному снижению актив- ний. РИФ с интактными клетками A431 показала практи-ности препарата ЛХТА-2251 в отношении тестируемых чески полное отсутствие VEGFR1 на цитоплазматической линий клеток. Изучение влияния веществ на работу топо- оболочке (не более 2,7 %), однако после пермеабилизации изомеразы 1 показало, что новый антрафурандион ЛХ- метанолом уровень сигнала возрос до 47,0 %. С целью ТА-2251 также уступает в способности блокировать актив- уточнения внутриклеточной локализации VEGFR1 оце-ность фермента соединению ЛХТА-2034. нивали количество белка снаружи и внутри ядра. В связи Заключение. Замена метильной группы в положении 2 с этим была разработана методика выделения интактных антрафуран-3-карбоксамидов на трифторметильную по- ядер для РИФ. Результаты экспериментов свидетельствуют вышает растворимость производных данного химического о присутствии VEGFR1 на наружной ядерной мембране класса, однако приводит к падению антипролиферативных (5,0 %), однако значительно большее количество белка свойств, что коррелирует со снижением их способности зарегистрировано внутри ядра (18,4 %). ингибировать топоизомеразу 1. Заключение. Полученные данные по выяснению лока-Исследование выполнено при финансовой поддержке РФФИ лизации VEGFR1 позволят подбирать адекватные способы в рамках научного проекта № 16-33-00908мол_а. ингибирования его активности, что может привести к снижению злокачественного потенциала опухоли и степени ее Е.Г. Тырсина, С. И. Никулицкий, О.О. Рябая, А.Н. Иншаков васкуляризации. ЛОКАЛИЗАЦИЯ РЕЦЕПТОРА VEGFR1 В ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТКАХ ЧЕЛОВЕКА Е.Г. Тырсина, С.И. Никулицкий, А.Н. Иншаков ФГБУ«РОНЦим. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва ИССЛЕДОВАНИЕ РЕЦЕПТОРА VEGFR1 Введение. Любые нарушения регуляции ангиогенеза НА ИНТАКТНЫХ ЯДРАХ приводят к тяжелым последствиям. В опухоли баланс про- ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» ангиогенных и антиангиогенных факторов сдвинут в сто- Минздрава России, Москва
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
