CC BY
101
ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ОНКОГЕННЫХ... 29
УДК 575.113:616-092.9:615.36.018.1
Н.В. Андронова, Н.Т. Райхлин, Е.М. Трещалина, Н.В. Шалунова, А.Ю. Барышников РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ
ОНКОГЕННЫХ ПОТЕНЦИЙ МЕДИЦИНСКИХ КЛЕТОЧНЫХ ПРЕПАРАТОВ НА ИММУНОДЕФИЦИТНЫХ МЫШАХ
РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН
ФГУН ГИСК им. Л. А. Тарасевича Роспотребнадзора РФ Контактная информация:
Андронова Наталья Владимировна, кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории комбинированной терапии опухолей НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей адрес: 115478, Москва, Каширское ш., 24; тел.: +7(499)612-81-39 e-mail: treshalina@vandex. ru
Статья поступила: 14.12.2009, принята к печати 01.04.2010.
Резюме
В работе дан краткий обзор показаний к применению МИБП и описана методика изучения онкогенных потенций (туморогенности) на иммунодефицитных мышах Balb/c nude разведения РОНЦ 6 новых клеточных препаратов, предназначенных для клинического применения: 2 культур диплоидных клеток человека, полученных из легкого эмбриона (штаммы ЛЭЧ 4/81 и MRC-5), 1 культуры фибробластов (штамм cmbt-F), 1 новой противоопухолевой вакцины «Мелавак» из культуры у-облученных клеток меланомы человека Mel Kor, 2 препаратов культур аутологичных хондропрогениторных клеток из МСК, иммобилизованных в трехмерных матриксах (скаффолдах) коллагеновых или из орто-полимолочной кислоты (OPLA), и одного имплантата-носителя из пористого титана, предназначенного для иммобилизации ЛАК человека. Показано, что мыши Balb/c nude пригодны для изучения туморогенно-сти современных иммунобиологических препаратов. Сделаны выводы об отсутствии туморогенности у всех изученных агентов. Выбор в качестве отрицательного контроля адекватной культуры опухолевых клеток позволяет верифицировать опухолевый процесс. Визуальная и патоморфологическая оценка патологических изменений в зонах имплантации и возможной локализации метастазов клеточного материала или его носителя дают возможность выявить признаки реактивного воспаления для дифференциальной диагностики со специфическим поражением. Носители клеточного материала любого происхождения провоцируют пролиферацию соединительнотканных элементов хозяина, на фоне которой трудно достоверно верифицировать жизнеспособные потенциально злокачественные клетки, что требует более длительного наблюдения и повторной морфологической верификации.
Ключевые слова: онкогенные потенции, медицинские клеточные препараты, иммунодефицитные мыши.
N. V. Andronova, N. T. Raichlin, H.M. Treshalina, N. V. Shalunova, A. Yu. Baryshnikov INVESTIGATION OF TUMORIGENICITY THE DIFFERENT CELL PREPARATIONS ON IMMUNODEFFICIENT MICE
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center of RAMS, Moscow
FSInstitutions, SRIe for standardization and control of medical biological preparations named of L.A. Tarasevich Abstract
In this study we present a short observation of the medical prescription for different medical immunobiology preparations, and described the methods of investigation of tumorigenic potency on genetically immunocompromise Balb/c nude mice breaded at the Blokhin’s Russian Cancer Center cell for new 6 cell preparations and one matrix for cell cultures recommended for medical employment. We have examined two human diploid karyotype cell lines, obtained from lung of embryo (LACH 4/81 and MRC-5), one cell culture of fibroblasts (cmbt-F), one new anticancer vaccine «Melavak» from the X-ray radiated cell culture of human melanoma Mel Kor, two cultures of autological chondroprogenicity cell from human MSC immobilized in triplet matrix (scaffolds) with collagen, OPLA, or porous titan, recommended for human LAC. We show, that Balb/c nude mice are adequate for tumorigenicity investigation of cell preparations as the biological products. All of tested preparations were non-tumorigenic. The choice of adequate cancer cell culture is the good as a negative control allows to verify the tumor growth. Visual and morphological characteristics of implantation zones or lymphatic metastases sites give a possibility to reveal such side effects as the reactive inflammation for differential diagnoses of specific cancer pathology. The cellular biologics induce the host connective tissue proliferation making of difficult to verify the living malignant tumor cells. This requires more long follow up period with repeated morphological control.
Key words: tumorigenicity, medical cell preparations, immunodeficient Balb/c nude mice.
Введение
В последние годы в России принят ряд важных правительственных решений по вопросам развития высокотехнологичных видов медицинской помошц, среди которых - открытие новых криобанков для клеточных культур, основы клеточных МИБП [21]. Предпосылкой этому были разработки и успешное приме-
нение многих клеточных препаратов на основе различных функционально активных клеток [2; 6-10; 11; 26; 35; 38; 39; 41]. МИБП проявляют регуляторно-репаративное и иммуностимулирующее действие, ориентированное на различные терапевтические цели. Соответственно свойствам МИБП используются для посттравматической реконструкции тканей, тканевой инженерии крупных сосудов [4-6; 23; 25].
Есть данные об использовании таких моделей в лечении инсулин-зависимого сахарного диабета [26; 34; 39; 40; 41], производстве противоин-фекционных или противоопухолевых вакцин и/или для заместительной терапии [2-4; 8; 10-12; 23; 24; 29; 35; 39; 42]. На доклинической стадии изучаются мезенхимальные и эмбриональные стволовые клетки (МСК, ЭСК), способные к переживанию in vivo [8; 19; 22; 35]. Поскольку имплантаты из культур клеток in vivo достаточно уязвимы для иммунологического надзора хозяина, разрабатываются методы иммобилизации с использованием различных матриксов в виде близких к структуре губчатой кости микро- или трехмерных капсул (скаффол-дов), в том числе из металлов [17; 18; 26; 36; 37]. Однако при этом возрастает опасность малигниза-ции клеток внутри «скаффолда» in vivo, не только в результате исключения иммунной реакции на атипичные клетки, но и по причине реставрации исходного клеточного фенотипа. Морфологические исследования срезов могут выявить возможную атипию, но только в мягких материалах. Канцерогенная или мутагенная активность некоторых металлов (никель или хром) известны, а онкогенные потенции современных пористых материалов из других металлов, например, титана, не изучены [1]. Применение новых МИБП невозможно без доклинического изучения их безопасности, что регламентировано рядом документов [14-15; 21]. Одним из обязательных разделов доклинического изучения МИБП является определение онкогенных потенций или туморогенности, т.е. способности вызывать развитие злокачественной опухоли. Для выявления этого побочного действия на доклиническом этапе в настоящее время используются различные методики, наиболее достоверной из которых является п/к имплантация клеточного препарата мышам, лишенных трансплантационного иммунитета. Среди рекомендованных для изучения туморогенности животных - обычные иммунокомпетентные мыши, депрессированные классическими иммунодепрессантами (цик-лоспорином, азатиоприном, имура-ном, циклофосфаном, АЛС, АТС или антилимфо-цитарным иммуноглобулином) или наследственные ИДМ, полученные нокаутированием генов, ответственных за трансплантационный иммунитет.
Обычные иммунокомпетентные мыши дешевле и не требуют особых условий содержания, но биологически не вполне адекватны для современных МИБП. Но применение депрессанта создает не длительную, а временную иммуносупрессию, что не дает возможности достоверно оценить отдаленные проявления туморогенности, особенно при изучении иммобилизованных или инкапсулированных на носителях препаратов с отсроченным эффектом [28; 31; 42]. Кроме того, наличие индуцированной системной иммуносупрессии, подавляющей все иммунные клеточные реакции, не дает возможности выявить пролиферативную активность клеток в лимфатических узлах (мишенях возможного метастазирования) и дифференцировать ее от воспалительных изменений при применении нестерильных объектов. ИДМ биологически интактны, т.к. не подвергаются экзогенным имму-нодепрессивным воздействиям и вследствие этого могут давать адекватный биологический ответ на наличие туморогенности как в отношении опухолевого узла, так и диссеминации процесса [42]. Важно то, что в качестве контроля в опытах на ИДМ параллельно используется группа животных, которым имплантируется такое же количество раковых
клеток с близким к исследуемому препарату гистогенезом из доступных коллекций культур клеток [10; 20], что дает возможность иметь доказательный отрицательный результат. Для подтверждения значимости указанной модели с использованием ИДМ при изучении онкогенных потенций МИБП различного происхождения, состава и назначения было предпринято настоящее исследование.
В исследование включены МИБП интакт-ные, в том числе нестерильные, и иммобилизованные на различных носителях, включая скаффолды из пористого титана.
Цель. На иммунодефицитных мышах Balb/c nude оценить результативность выявления онко-генных потенций современных иммунобиологических препаратов, предназначенных для клинического применения.
Задачи
1. Составление плана экспериментального исследования для каждого МИБП или иммобилизующего объекта;
2. Выбор адекватной культуры опухолевых клеток для группы контроля;
3. Выявление признаков опухолевого роста или метастазирования и контроль скорости роста пальпируемых новообразований при визуальном наблюдении места имплантации/инокуляции;
4. Выявление морфологических признаков опухолевого роста или метастазирования в месте имплантации/инокуляции и области регионарного и отдаленного метастазирования;
5. Выявление визуальных и патоморфологических признаков реактивного воспаления в зонах возможной локализации метастазов и дифференциальная диагностика со специфическим поражением.
Материалы и методы
Животные
Для экспериментов использованы конвенциональные 8-9 нед мыши-самки Balb/c nude массой тела 19-21 г. из разведения РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, которых содержали в специализированном кондиционированном отсеке (2 зоны) на стерильных бумажной подстилке, экструдированном корме («МЭСТ», РФ) и питьевой воде. В каждой группе было 60-70 мышей, которых делили на 2 группы по 30-35 особей (опыта и контроля). В опытную группу входили мыши, которым однократно подкожно выполняли инъекцию по 1 млн. исследуемого клеточного препарата или подшивали один скаффолд - имплантат-носитель (ИН) пустой или содержащий 1 млн. исследуемых клеток. Для групп контроля культуры опухолевых клеток человека получали из Банка опухолевых штаммов РОНЦ [27] или из Российской коллекции клеточных культур [20] и вводили мышам однократно подкожно по 1 млн. клеток. Контролем для препаратов, полученных из легкого эмбриона человека, служила линия клеток рака легкого человека А-549; для препаратов, полученных из фибробластов или МСК, - линия клеток рака кожи человека А-431 [27], для вакцины «Мелавак» - исходная культура клеток меланомы человека Mel Kor [16]. До перевивки по прижизненной окраске трипановым синим определено 98 % живых клеток в культуре.
Изученные агенты
Всего изучено 7 образцов. Среди них 4 нативных клеточных препарата, в том числе 2 культуры диплоидных клеток человека, полученных из легкого эмбриона (штаммы ЛЭЧ 4/81 [9] и MRC-5 [34]), 1 культура фибробластов (штамм cmbt-F [40]), 1 новая противоопухолевая вакцина «Мелавак» из культуры клеток меланомы человека Mel Kor, подвергнутых ионизирующему облучению [1], 2 препарата культуры аутологичных хондропрогениторных клеток из МСК, иммобилизованных в трехмерных скаффолдах коллагеновых или OPLA [22], а также ИН из пористого титана, предназначенные для иммобилизации ЛАК человека [7; 20].
1. Штамм ЛЭЧ 4/81. Медицинский иммунобиологический препарат «Культуры клеток диплоидных человека для заместительной терапии» (ККДЧ) представляет собой культуру диплоидных клеток легкого эмбриона человека ЛЭЧ 4/81 (Спецификация AtCc на CCL 5; ECACC 89111004; ЕСКК. LECH-4), которая получена однократно в Екатеринбургском НИИ вирусных инфекций МЗ РФ в 1972 г. Препарат представляет собой морфологически однородную популяцию клеток с ограниченным сроком жизни, определенного тканевого происхождения, имеющих частичную дифференцировку, по фенотипу - фиб-робластоподобную. Культура клеток сохраняет стабильный кариотип (2n не менее 75% клеток), лишена антигенов гистосовместимости (HLA). В предварительных опытах на обычных мышах, обработанных антитимо-цитарной сывороткой (СП 3.3.2.561-96) установлено отсутствие туморогенности. Клеточная 3-4-суточная культура на 10-м пассаже в лекарственной форме с концентрацией 50-100 000 клеток в 1 мл/см2 рекомендована для лечения глубоких поражений кожных и слизистых покровов. Препарат производится ООО Компании «Медицина и биотехнологии» (Екатеринбург).
2. Штамм MRC-5. Линия диплоидных клеток человека MRC-5 представляет собой клеточную взвесь и является субстратом для производства вакцины против краснухи. MRC-5 получена из легкого эмбриона человека (автор Дж.П. Джекобс, 19б6 г.) и закуплена на 14 пассаже в АТСС (спецификация ATTC на CCL-171). Исследование выполнено с 23-м пассажем MRC-5, последние 3 пассажа велись без добавления антибиотика. Препарат производится ФГУП НПО «МИКРОГЕН» МЗ РФ (Москва).
3. Штамм cmbt-F/7. Субстанция клеточной культуры диплоидных фибробластов человека cmbt-F/7 является суспензией живых, функционально активных клеток, обладающих выраженным регуляторно-репаратив-ным действием, с пролонгированным до 7 дней эффектом, связанным с переживанием клеток. Культура представлена морфологически однородной популяцией пластик-ад-гезивных веретенообразных клеток (индекс пролиферации >2), предварительно культивированной на искусственных питательных средах, стерильной. Клетки экспрессируют человеческие аллели главного комплекса гистосовместимости и синтезируют коллаген I и II типа. Cmbt-F/7 обладает ранозаживляющим действием, стимулирует рост
новых микрососудов, улучшая трофику тканей, стимулирует регенерацию поврежденных тканей кожи, слизистых оболочек. Препарат производится ООО «Центр медико-биологических технологий - ЦМБТ-Ла-бораторис» (Москва).
4. Вакцина «Мелавак» представляет собой клеточную линию меланомы человека Mel Kor стабильно трансфецированную человеческим геном ГМ-КСФ, имеет генетическую конструкцию: вектор pBK-CMV (Clon Tech, США) со встроенной к ДНК ГМ-КСФ человека. Вид трансфекции - стабильная, интегрированная. Трансфекция - липофекция при помощи набора Unifectin Зб. Уровень трансфекции - 100%. Количество секретируемого ГМ-КСФ клетками - 78,1-84,0 нг/1 млн. клеток /24 часа. Перед введением животным вакцина инактивирована на у-установке АГАТ-Р облучением в дозе 100 Гр. Вакцина предназначена для клинического изучения у больных меланомой кожи в качестве средства иммунотерапии, производится РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН.
5-6. Иммобилизованная культура дифференцированных МСК. Хондропрогениторные клетки человека получены из МСК, выделенных в результате липосакции из подкожно-жировой клетчатки пациентов по оригинальной методике [23]. Митотический индекс для каждой популяции клеток не менее 1х106. Направленная дифференцировка МСК в хон-дропрогениторные клетки выполнена с помощью TGFfil 100 нг/мл в дифференциро-вочной среде DMEM-LG с антибиотиками без сыворотки. Клетки трипсинизированы и подсчитаны, через 3 нед. фиксированы и окрашены толуидиновым синим, сафронином О, alcian blue. Для культивирования использован внеклеточный матрикс (ВМ), представляющий собой природную подложку для тканевого развития и репарации тканей. Для получения трехмерной структуры использованы продажные (РФ, Германия) матриксы
- коллагеновые или на основе OPLA, которые насыщались полученной культурой клеток. ТТИ стерильны, переданы на исследование в физиологическом растворе хлористого натрия в центрифужных пробирках объемом 15 мл. После извлечения из среды ТТИ готов для трансплантации. Препарат произведен в
ООО «Институт стволовой клетки» (Москва).
7. Имплантаты-носители из пористого титана для ЛАК. Имплантат-носитель (ИН) представляет собой пористый титан, полученный из спеченного титанового порошка. После спекания порошинки образуют упругий прочный каркас с открытыми порами размером 50+200 мкм, подобно губчатому веществу бедренной кости человека. ИН производится ООО «Центр информационно-клеточной медицины» (Москва).
Оценка онкогенных потенций Исследования выполнены в соответствии с методическими указаниями [15]. Визуальный контроль места имплантации/инокуляции и признаков реактивного воспаления за опытными и контрольными группами мышей производился в течение 21 сут. в случае нативного препарата и 56 дней в случае иммобилизованного на носителе.
В процессе наблюдения фиксировали гибель мышей от внешних причин, связанных с наличием иммунодефицита. На 21 сут после инокуляции или имплантации тестируемых образцов всех мышей умерщвляли с помощью передозировки эфирного наркоза и подвергали аутопсии.
При вскрытии мышей макроскопически оценивали состояние внутренних органов: кожи в месте введения, регионарных подколенных и аксил-лярных лимфатических узлов, легких, почек и печени для выявления каких-либо поражений, напоминающих опухоль.
Регионарные лимфатические узлы и легкие подвергали гистологическому исследованию. Морфологические признаки опухолевого роста, метаста-зирования или реактивного воспаления выявляли путем стандартного гистологического исследования материала, который фиксировали в 10 %-ном нейтральном формалине, заключали в парафин. Из парафиновых блоков готовили срезы толщиной 5-7 дк и окрашивали гематоксилин-эозином. Препараты просматривали и фотографировали в световом микроскопе «Поливар» (Австрия). В полученных гистологических препаратах оценивали наличие признаков злокачественного роста, а также воспалительных изменений.
Статистическая обработка данных
Использован стандартный метод Стьюдента в модификации Р.Б. Стрелкова для обработки параметров роста пальпируемых опухолей.
Завершение эксперимента
В соответствии с Правилами работы с лабораторными животными выживших животных умерщвляли путем передозировки эфирного наркоза. Трупы погибших или умерщвленных мышей подвергали замораживанию и кремировали в специализированном подразделении РОНЦ.
Результаты и обсуждение
В течение всего периода наблюдения за мышами в области инокуляции или имплантации стерильных нативных клеточных препаратов (ЛЭЧ 4/81, ^Ь^/7, вакцина «Мелавак») каких-либо визуальных или морфологических признаков опухолевого роста в месте введения, внутренних полостях и органах, метастазирования или реактивного воспаления не обнаружено.
При визуальном обследовании и многократной пальпации (1 раз в 5 дней) мышей, получивших нестерильный образец 23-го пассажа MRC-5, каких-либо визуальных или морфологических признаков опухолевого роста не обнаружено.
Однако у 7 мышей в этой группе при визуальном обследовании обнаружен двусторонний регионарный лимфаденит (подколенные лимфоузлы). Гистологическое исследование выявило лимфаденит в 2-х группах подколенных и аксиллярных лимфоузлов, не дающий возможности оценить истинную картину.
При дополнительном исследовании стерильного образца MRC-5 эти изменения отсутствовали. При изучении иммобилизованных препаратов показано, что в случае использования скаффолдов коллагеновых или OPLA, насыщенных клеточным материалом человека, каких-либо визуальных или морфологических проявлений туморогенности нет.
Однако через 4-7 дней начиналось постепенное врастание фибробластов мыши в скаффолд, и к концу наблюдения инокулят оказывался практически вытесненным.
Склерозирование микширует реальную картину состояния клеток, в том числе - возможную малигнизацию. При использовании ИН из пористого титана пустых или насыщенных ЛАК признаков туморогенности также не выявлено, однако интенсивная реакция соединительнотканных элементов мыши даже на пустые носители была выражена более резко.
Для выяснения судьбы попавших в зоны склерозирования имплантированных клеток ИН были подшиты в брюшную полость обычных мышей, и оказалось, что в прослойках соединительной ткани находится большое количество жизнеспособных клеток с митозами. Рост опухолей человека у мышей контрольных групп после инокуляции 1 млн клеток на мышь был стандартным по срокам появления и скорости роста пальпируемых подкожных узлов, но при неполной прививаемости: в случае А549 опухоли появились у 68-71 % мышей, в случае А-431 - у 43-46 % животных.
Исключение составила культура клеток Mel Kor, которая дала 100%-ную прививаемость. Морфологическое исследование подтвердило развитие специфического опухолевого поражения и отсутствие признаков метастазирования для всех использованных контрольных опухолевых культур, что характерно для использованных моделей.
Выводы
1. Иммунодефицитные бестимусные мыши Nude удовлетворяют цели изучения онкогенных потенций современных иммунобиологических препаратов, предназначенных для клинического применения.
2. Выбор адекватной культуры опухолевых клеток для группы контроля позволяет верифицировать опухолевый процесс в качестве отрицательного контроля.
3. Визуальная и патоморфологическая оценка патологических изменений в зонах имплантации и возможной локализации метастазов клеточного материала или его носителя дает возможность выявить признаки реактивного воспаления для дифференциальной диагностики со специфическим поражением.
4. Носители клеточного материала любого происхождения провоцируют пролиферацию соедини-тельно-тканных элементов хозяина, на фоне которой трудно достоверно верифицировать жизнеспособные потенциально злокачественные клетки, что требует более длительного периода наблюдения и повторной морфологической верификации.
Литература
1. Авцын А.Б.М. Микроэлементы человека: этиология, классификация, органопатология. - М.: Медицина, 1991. - 496 с.
2. Беникова Е.А., Турчин И.С., Белякова Л.С. и др. Опыт лечения детей, страдающих сахарным диабетом, при помощи алла- и ксенотрансплантации культуры островковых клеток поджелудочной железы // Проблемы эндокрин. - 1987. - №2. - С. 19-22.
3. Блюмкин С.Н., Скалецкий Н.Н., Попов В.Л. и др. Внеселезеночная трансплантация культур остров-ковых клеток поджелудочной железы плодов человека крысам с экспериментальным сахарным диабетом // Бюл. Эксп. Биол. и мед. - 1983. - №5. - С. 89-91.
4. Буравкова Л.Б., Капланский А.С., Андреева Е.Р. и др. Особенности формирования костной мозоли у крыс после введения в область перелома мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток, культивированных при различном содержании кислорода // Клет. Транспл. - 2009. - Т. IV, № 3. - С. 52-7.
5. Григорян А.С., Гилерович Е.Г., Павличенко Н.Н. др. Влияние трансплантации мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток на посттравматические процессы при экспериментальной травме головного мозга // Клет. Транспл. - 2009. - Т. IV, № 3. - С. 58-67.
6. Григорян А. С., Кругляков П.В. Применение в тканевой инженерии крупных сосудов трансплантатов на основе аутогенных мононуклеарных клеток костного мозга // Клет. Транспл. - 2009. - Т. IV, №
3. - С. 37-41.
7. Давыдов М.И., Нормантович В.А., Киселевский М.В. и др. Адоптивная иммунотерапия при опухолевых плевритах. Клинико-лабораторное исследование // Российский онкологический журнал. -2000. - № 6. - С. 14-7.
8. Донцов В.И., Чернилевский В.Е. Пересадка эмбриональных клеток: новые возможности в биологии и медицине // Ж. Профилактика старения. - 2001. - Вып.4. - С. 78-84.
9. Зорин В.Л., Зорина А.И., Черкасов В.Р. Анализ зарубежного рынка регенеративной медицины // Клет. Транспл. - 2009. - Т. IV, № 3. - С. 68-78.
10. Кармацких О.Л., Ерофеев С.А., Кононович Н.А. и др. Опыт использования иммунологического препарата диплоидной клеточной культуры ЛЭЧ-4 (81) для замещения локального дефекта костной ткани длинных трубчатых костей собак // Г ений ортопедии: научно-теоретический и практический журнал. - 2006. - № 1. - С. 17-21. - ISSN 1028-4427.
11. Комиссаренко В.П., Турчин И.С., Комиссаренко И.В. и др. Трансплантация культуры островковых клеток поджелудочных желез плодов человека и животных как метод лечения сахарного диабета // Врач. Дело. - 1983. - № 4. - С. 52-6.
12. Кругляков П.В., Григорян А.С. Рецензия на книгу «Биология стволовых клеток и клеточные технологии» под редакцией М. А. Пальцева // Клет. Транспл. - 2009- Т. IV, № 3. - С. 79-80.
13. Методические указания «Выделение, культивирование и контроль штаммов диплоидных клеток». Одобрено Советом ГИСК им. Л. А. Тарасевича Мз СССР, протокол №14 от 29.09.1978 г. МЗ СССР.
- М., 1979. - С. 37.
14. Методические указания «Аттестация перевиваемых клеточных линий - субстратов производства и контроля медицинских и иммунобиологических препаратов». - РД-42-28-10-89. - МЗ СССР. - М., 1989. - С. 10-21.
15. Методические указания «Доклинические испытания новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные положения». - РД42-28-8-89. - МЗ СССР. - М, 1989. - С. 26.
16. Михайлова Л.М., Ермакова Н.П., Меркулова И.Б. Исследование туморогенности противоопухолевой вакцины мелавак // Российский биотерапевтический журнал. - 2007. - Т. 6, № 1. - С. 60-1.
17. Новиков И.И. Морфологические изменения губчатого вещества кости после его трансплантации под фиброзную капсулу почки // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1972. - № 1. - С. 31-7.
18. Панарин Е. Ф., Нудьга ПА., Петрова В.А. и др. Матрицы для культивирования клеток кожи человека на основе природных полисахаридов - хитина и хитозана // Клет. Транспл. - 2009. - Т. IV, № 3. - С. 42-6.
19. Панин А.М., Иванов С.Ю., Нури Ф. и др. Морфологическое изучение тканевых реакций на подкожную имплантацию биоматериалов // Биомедицинская технология. Репродукция тканей и биопротезирование. - 2001. - № 17. - С. 55-63.
20. Полянская Г.Г. Российская коллекция клеточных культур, Коллекция: ATCC CCL 185; ECACC 86012804, НИИ вирусологии РАМН; НИИ гриппа РАМН; ИНЦ РАН.-J.Natl.Cancer Inst. 1973. 51: 14171423; Int. J. Cancer 1976. 17: 6270; Tissue Antigens 1978. 11: 279.
21. Путин В. В. О единой национальной системе высокотехнологичной медицинской помощи. Порядок открытия новых медицинских центров, лабораторий, криобанков в России Стенографический отчёт
о совещании по вопросам развития высокотехнологичных видов медицинской помощи http://www.biocells.ru/vip-moneY-5-5.html.
22. Тепляшин А.С., Коржикова С.В., Шарифуллина С.З. и др. Дифференцировка мультипотентных мезенхимных стромальных клеток костного мозга человека в клетках хрящевой ткани при культивировании их в трехмерных матриксах OPLA // Ж.Цитология. - 2007. - Т. 49, № 7. - С. 544-51.
34 ОРИГИНАЛЬНЫЕ СТАТЬИ РЕЗУЛЬТАТЫ ИЗУЧЕНИЯ ОНКОГЕННЫХ...
23. Трансплантология: Руководство / Под ред. В.И. Шумакова. - М.: Медицина, 1995. - 391 с.
24. Шумаков В.И., Блюмкин В.Н., Скалецкий Н.Н. и др. Трансплантация культур островковых клеток поджелудочной железы (очерки). - М.: Медицина, 1994. - 384 с.
25. Третьяк С.И. Длительное сохранение жизнеспособности аллогенных тканей в сосудах и сердце реципиента (экспериментальное исследование). Автореф. дисс. ... д-ра мед. наук. - Минск, 1996. - 33 с.
26. Третьяк С.И., Прохоров А.В., Глинник А.А. Отдаленные результаты ксенотрансплантации макроин-капсулированной культуры островковых клеток поджелудочной железы // Трансплантология. -2004. - Т. 7, № 3. - С. 364-6.
27. Трещалина Е.М., Ревазова Е.С., Соловьев Ю.Н. и др. Коллекция опухолевых штаммов человека / Под ред. акад. РАН и РАМН, засл. деятеля науки РФ, проф., д.м.н. М.И. Давыдова. - М.: «Практическая медицина», 233 с.
28. Трещалина Е.М., Андронова Н.В. Райхлин Н.Т. Изучение онкогенных потенций различных иммунобиологических препаратов на иммунодефицитных мышах // Российский биотерапевтический журнал. Материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты». - 2009. - Т.8, №2. - С. 22.
29. Appel J.Z., Alwayn J.P.N., Cooper D.K.C. Xenotransplantation: the challenge to current psychological attitudes // Progress in Transplantation. - 2000. - 10(4) - P. 217-25.
30. Abbas A.K., Murphy K.M, Sher A. Functional diversity of helper T lymphocytes // Nature. - 1996. - 383. -P. 1059-66.
31. Badet L., Titus T. The interaction between rpimate blood and mouse islets induces accelerated clotting with islet destruction // Xenjtransplantation. - 2002. -9. - Issue 2. - P. 91.
32. Brunetti P., Basta G. Immunoprotection of pancreatic islet grafts within artificial microcapsules // Int.J.Artif.Organs. - 1991. - 14. - P. 789-91.
33. De Vos P., Wolters G.H. Obstacles in the application of microencapsulation in islet transplantation // Int. J. Artif. Organs. - 1993. - 16. - P. 205-12.
34. De Vos P., De Haan B.J. Association between capsule diameter, adequacy of encapsulation and survival of microencapsulated rat islet allografts // Transplantation. - 1996. - 62. - P. 893-9.
35. Jacobs J.P., Jones C.M., Baille J.P. Characteristics of a human diploid cells designated MRC-5 // Nature.
- 1970. - 227. - P. 168-70.
36. Juang J.H., Bonner-Weir S., Vacantu J.P. et al. Outcome of subcutaneous islet transplantation improved by a polymer device // Transpl. Proc. - 1995. - 27. - P. 3215-6.
37. Lanza R.P., Hayes J.L., Chic W.L. Encapsulated cell technology//Biotechnology. - 1996. - 14. - P. 1107-11.
38. Prevost P., Flori S. Application of AN 69 hydrogel to islet encapsulation. Evaluation in streptozotocin-induced diabetic rat model // Ann. NY Acad. Sc. - 1997. - 831(1). - P. 344-9.
39. Rayat G.R., Rajotte R. V., Korbutt G.S. Potential application of neonatal porcine islets as treatment for type
1 diabetes: a review // Ann NY Acad. SCI. - 1999. - 875. -P. 75-188.
40. Rogers SA., Chen F., TalcottM. et al. Glucose tolerance normalization following transplantation of pig pancreatic primordia into non-immunosuppressed diabetic ZDF rats//Transpl. Immunol. - 2006. - 16 (3-4). - P. 176-84.
41. Stevens R.B., Matsumoto S., Marsh C.L. Is islet transplantation a realistic therapy for the treatment of type
1 diabetes in the near future // Clinical Diabetes. - 2001. - 19. - P. 51-60.
42. Todo S., Fung J.J. Liver, kidney and thoracic organ transplantation under FK506 // Ann. Surg. - 1990. -212. - P. 295-305.
Издание 2-е, переработанное и дополненное
ЭНЦИКЛОПЕДИЯ
КЛИНИЧЕСКОЙ
ОНКОЛОГИИ
Готовится к печати Издательская группа РОНЦ
