CC BY
29
УДК 612.35:615.244:591.1
Ключевые слова: гистоморфологическая характеристика печени, гепатопротекторы, крысы, биомасса спирулины
Key words: histomorphological characteristics of the liver, hepatoprotectors, rats, spirulina biomass
Павлова О. Н., Григорьева Ю. В., Грибанова Е. А., Желонкин Н. Н., Первушкин С. В., Зайцев В. В.
РЕАКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТКАНИ ПЕЧЕНИ КРЫС
в результате нагрузки суспензией биомассы спирулины
REACTIVE CHANGES IN RAT LIVER TISSUE CAUSED BY THE LOAD OF SPIRULINA BIOMASS SUSPENSION
'НОУ ВПО «Самарский медицинский институт «РЕАВИЗ». Адрес: 443001, Россия, г. Самара, ул. Чапаевская, 227 'Samara Medical Institute "REAVIZ". Address: 443001, Russia, Samara, Chapaevskaya street, 227 2ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Адрес: 443099, Россия, г. Самара, ул. Чапаевская, 89 2Samara State Medical University. Address: 443001, Russia, Samara, Chapaevskaya street, 89 3ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана» Адрес: 420029, Россия, г. Казань, ул. Сибирский тракт, 35 3N. E. Bauman Kazan State Academy of Veterinary Medicine. Address: 420029, Russia, Kazan, Sibirsky tract, 35 4ФГОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» Адрес: 446442, Россия, Самарская область, пгт. Усть-Кинельский, ул. Учебная, 2 4Samara State Agricultural Academy. Address: 446442, Russia, Samara region, Ust'-Kinel'skii, Uchebnaya street, 2
Павлова Ольга Николаевна, к. б. н., доцент каф. естественнонаучных дисциплин1
Pavlova Olga N., Ph.D. in Biology Science, Associate Professor of the Dept. of Natural Sciences' Григорьева Юлия Владимировна, к. м. н., доцент каф. гистологии, цитологии и эмбриологии2 Grigor 'eva Yulia V., Ph.D. in Medical Science, Associate Professor of the Dept. of Histology, Cytology and Embryology2 Грибанова Екатерина Александровна, соискатель каф. физиологии3 Gribanova Ekaterina A., Competitor for Science Degree of the Physiology Dept.3 Желонкин Николай Николаевич, к. фарм. н., ст. преподаватель каф. фармацевтической технологии2 Zhelonkin Nikolai N., Ph.D. in Pharmaceutical Science, Senior Lecturer of the Dept. of Pharmaceutical Technology2 Первушкин Сергей Васильевич, д. фарм. н., проф., зав. каф. Фармацевтической технологии2 Pervushkin Sergei V, PharmDr., Prof., Head of the Dept. of Pharmaceutical Technology2 Зайцев Владимир Владимирович, д. б. н., проф., проф. каф. физиологии и биохимии с.-х. животных4 Zaitsev Vladimir V., Doctor ofBiological Science, Professor, Prof. of the Dept. of Physiology and Biochemistry of Farm Animals4
Аннотация. В статье рассмотрена структура ткани печени крыс в процессе эмбриогенеза и онтогенеза на фоне дополнительной нагрузки (внутрижелудочно) суспензией биомассы спирулины. Выявлено, что наиболее заметные изменения ткани печени в результате нагрузки биомассой спирулины происходят у эмбрионов на начальном этапе эмбриогенеза и у взрослых беременных самок. У эмбрионов печень более продолжительное время сохраняет роль органа кроветворения, поскольку сроки эритропоэза существенно удлиняются по сравнению с животными контрольной группы, а впоследствии гемопоэз возобновляется в онтогенезе у беременных самок, что подтверждается многочисленными участками эритропоэза в ткани печени взрослых крыс. Паренхиматозные клетки печени на нагрузку суспензией водоросли отвечают увеличением количества митотически делящихся ге-патоцитов и увеличением слоев клеток наружной терминальной пластинки.
Summary. The paper examines the structure of rats' liver tissue in embryogenesis and ontogenesis against the additional intragastric load of spirulina biomass suspension. It was revealed that the most significant changes in the liver tissue caused by the spirulina biomass load occur in embryos at an early stage of embryogenesis and in adult pregnant females. Embryos' liver preserves the role of the blood-forming organ for a longer time, since erythropoiesis time significantly extends in comparison with control animals, and subsequently hematopoiesis revives in ontogeny in pregnant females, as evidenced by the numerous sites of erythropoiesis in liver tissue of adult rats. Parenchymal cells of the liver respond to the algal suspension load by the increasing number of mitotically dividing hepatocytes and the increase in cell layers of the outer terminal plate.
Введение серьезные нарушения метаболизма, иммун-
Печень вовлечена во многие патологиче- ного ответа, процессов детоксикации и анти-ские процессы, и ее повреждения вызывают микробной защиты организма. Печень отно-
сится к органам, способным к регенерации после повреждений, благодаря клеточной кооперации, наличию молекулярных механизмов реакции острой фазы и синтезу ряда веществ протекторной природы. Наиболее часто повреждения печени реализуются через химические и иммунологические механизмы [2, 4].
Выделяют несколько основных механизмов повреждения печени посредством молекулярных механизмов, относящихся к иммунным реакциям: функционирование киллерных лимфоцитов и клеточных коопераций, образование неоантигенов и ауто-антител, действие медиаторов (цитокины, оксид азота), активация системы комплимента [6, 9].
В соответствии с современными принципами лечения заболеваний печени, программа комплексной терапии такой патологии включает два основных направления. Первое представляет этиотропную терапию, направленную на подавление патологического возбудителя, его элиминацию и санацию организма. В клинической практике этиотропную терапию применяют только при вирусных гепатитах с парентеральным механизмом заражения. Второе направление соответствует патогенетической терапии, имеющей целью адекватную фармакологическую коррекцию универсальных, мультифакторных и разновременных звеньев патогенеза. При этом нужно отметить, что универсализм основных звеньев патогенеза различных поражений печени и позволяет при всей полиэтиологич-ности данной патологии использовать достаточно близкую патогенетическую терапию, основу которой могут составлять лекарственные средства с направленным действием на печеночные клетки [2, 4, 9].
В целом ассортимент лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии заболеваний печени и желчевыводящих путей, насчитывает более 1000 наименований. Однако среди такого многообразия препаратов выделяют сравнительно небольшую группу оказывающих избирательное действие на печень - гепатопротекторов. Их действие направлено на восстановление гомеостаза в печени, повышение устойчиво-
сти органа к действию патогенных факторов, нормализацию функциональной активности и стимуляцию репаративно-регенерацион-ных процессов в печени [1, 4, 9].
На наш взгляд, таким средством может явиться биомасса сине-зеленой микроводоросли спирулины платенсис, которая имеет богатый набор биологически активных соединений (белки, витамины группы В, С, Е, полиненасыщенные жирные кислоты, пигменты: каротиноиды, хлорофилл, фикоциа-нин), которые обуславливают ее позитивное влияние на организм человека [3, 6, 7].
По данным Всемирной организации здравоохранения, спирулина платенсис по своим потенциальным возможностям должна быть поставлена в первый ряд медицинских препаратов, используемых для оздоровления организма [6].
В связи с вышесказанным цель нашего исследования состояла в изучении реактивных изменений ткани печени крыс на фоне нагрузки суспензией сине-зеленой микроводоросли Spirulina platensis как потенциального гепатопротекторного средства.
Для реализации поставленной цели предстояло решить следующие задачи: провести гистологический анализ ткани печени крыс в эмбриогенезе и онтогенезе на фоне дополнительной нагрузки внутрижелудочно сине-зеленой микроводорослью Spirulina platensis в виде суспензии.
Материалы и методы
Исследование было выполнено на 20 белых беспородных крысах массой 190-210 г, которые были поделены поровну на контрольную (интактную) и опытную группы.
Материалом для гистоструктурного анализа послужила печень от эмбрионов, находящихся на 15 и 21 сутки развития, и взрослых половозрелых самок, которые в течение 30 дней до наступления беременности и до родов в качестве дополнительной нагрузки внутрижелудочно получали суспензию биомассы спирулины в дозе 10 мг / 100 г веса тела, объемом 1 мл, приготовленную на дистиллированной воде [5, 8].
Контролем послужил материал от интакт-ных крыс аналогичных сроков развития.
Для получения самок с датированным сроком беременности использовали 4-4,5 месячных крыс, которым с учетом эстраль-ного цикла вечером подсаживали самцов, а утром брали влагалищные мазки. Первым днем беременности считали день обнаружения спермы в мазке.
По окончанию эксперимента животных подвергали декапитации после ночного голодания в соответствии с этическими нормами, а затем извлекали печень. Фиксацию печени взрослых крыс и эмбрионов проводили в 10%-м забуференном формалине, затем заливали в парафиновые блоки, из которых готовили срезы толщиной 6-7 мкм. Срезы ткани печени окрашивали гематоксилином и эозином [5, 8].
Фотографическую съемку образцов ткани печени проводили с помощью светового микроскопа «Микромед» при увеличении 40*, 100х и 200*.
Визуализацию препаратов проводили при помощи светового микроскопа «Микромед» и цифровой фотовидеокамеры.
Результаты и обсуждение
Исследование реакции ткани печени на введение суспензии биомассы спирулины показало, что в целом развитие органа в эмбриогенезе не нарушено. На 15 сутки эмбриогенеза доли печени были сформированы, присутствовали радиальные балки, портальные тракты были не выражены. Синусоид-ные капилляры расширены, заполнены клетками гемопоэтического ряда (рис. 1).
■ Ау ^ ■ I
4- * .г*
V , ш ■ ^ Л«1 ч
мл. _ . ■
ЯК2 Ч „
«¡г*
Гепатоциты с высоким ядерно-цитоплаз-матическим соотношением (3 : 1) делятся митотически, встречались единичные двуя-дерные, в ядрах преобладал гетерохроматин. В отдельных полях зрения наблюдали участки мелко- и средневакуольной жировой дистрофии (рис. 2).
Рис. 1. Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 40*.
Рис. 2. Расширенные капилляры, заполненные дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Митотически делящиеся гепатоциты (15 сутки эмбриогенеза). Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 200*.
По сравнению с контролем у животных опытной группы на 15 сутки эмбриогенеза печень отличалась увеличенным количеством митозов (18,61±0,66 вместо 4,37±0,17 при увеличении 200*).
К 21 суткам эмбриогенеза мы наблюдали сформированное балочное строение печени. Соединительная ткань между дольками в виде тонких прослоек была не развита.
Имела место диффузная белковая зернистая дистрофия. По периферии органа наблюдались активные регенеративные процессы, о чем свидетельствовало расширение наружной терминальной пластинки от 18 до 26 слоев клеток, имеющих небольшие размеры и более базофильную цитоплазму (рис. 3).
В пересинусоидальных пространствах сохраняются островки гемопоэза, в которых лимфопоэз преобладает на эритропоэзом (рис. 4).
Структура печени взрослых 4-месячных крыс опытной группы не имела выраженных нарушений. Отмечалось сформирован-
<: ■.■■ ч ц ■■ . * . V
ь
л»л
>1 м
Ь* ■к а
■*-*'■- V 1 - ; J 1 ■
* ..у * ■ -
Рис. 3. Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Подкапулярная зона с расширенной наружной терминальной пластинкой. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 100*.
Рис. 4. Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Крупные клетки лимфоидного ряда в пересинусоидальных пространствах. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 200*.
а ж у.
.АЛ
\ г
Ч I V*1 - _ х 4
уг * ' _ * ч'
% ' щ?
Г » V
Рис. 5. Ткань печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Участки активного лимфопоэза и эритропоэ-за. Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение 200*
ное дольчатое строение печени, портальные тракты мелкие, соединительная ткань в виде тонких прослоек. Гепатоциты крупные, имели большие ядра, в которых были видны от 1 до 3 ядрышек. Встречались единичные дву-ядерные клетки (рис. 5).
Пересинусоидальные пространства расширены, и в них у беременных крыс встречаются мелкие участки лимфопоэза и выявляются очаги эритропоэза (рис. 5).
Заключение
Таким образом, по результатам проведенных исследований можно сделать вывод, что наиболее заметные изменения ткани печени в результате нагрузки биомассой спирулины происходят у эмбрионов на начальном этапе эмбриогенеза и у взрослых беременных самок. Биомасса спирулины оказывает влияние на клетки гемопоэтического ряда, удлиняя сроки гемопоэза и возобновляя его в онтогенезе у беременных самок. Также суспензия водоросли воздействует на паренхиматозные клетки печени, увеличивая количество мито-тически делящихся гепатоцитов, а также количество слоев клеток наружной терминальной пластинки.
Список литературы
1. Авдеева, Е. В. Гепатопротекторные свойства фе-нилпропаноидов и их производных / Е. В. Авдеева // Экология и здоровье человека: материалы Х Всероссийского конгресса. - Самара, 2007. - С. 89-96.
2. Белозерова, Л. А. Роль перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты в патологии печени и эритроцитов / Л. А. Белозерова, Т. П. Генинг; под. ред. д. б. н., проф. Т. П. Генинг // Система перекисного окисления липидов - антиокси-данты в норме и патологии. - Ульяновск : Вектор-С, 2008. - С. 113-141.
3. Блинкова, Л. П. Биологическая активность спирулины / Л. П. Блинкова, О. Б. Горобец, А. П. Батуро // Журн. микробиологии. - 2001. - № 2. -С.14-18.
4. Буеверов, А. О. Место гепатопротекторов в лечении заболеваний печени // Болезни органов пищеварения. - 2001. - № 1. - С. 16-18.
5. Венгеровский, А. И. Методические указания по изучению гепатозащитной активности фармакологических веществ / А. И. Венгеровский, И. В. Марков, А. С. Саратиков; под ред. В. П. Фисененко // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению любых фармакологических веществ. - М. : Ремодиум, 2000. - С. 228-231.
6. Литвинова, Н. В. Мембраностабилизирующее действие таблеток спирулины в условиях острого токсического повреждения печени тетрахлорметаном / Н. В. Литвинова, А. Н. Марченко, Е. Л. Левицкий и др. // Совр. пробл. токсикол. - 1999. - № 4. - С. 25-28.
7. Первушкин, С. В. Биомасса спирулины: исследования и перспективы использования : монография / С. В. Первушкин, А. В. Воронин, А. А. Сохина. - Самара : СамГМУ, 2004. - 100 с.
8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р. У Хабриева. -2-изд., перераб. и доп. - М. : Медицина, 2005. -832 с.
9. Ткач, С. М. Эффективность и безопасность ге-патопротекторов с точки зрения доказательной медицины / С. М. Ткач // Здоровье Украины, 2009. - № 6 -С. 7-10.
-LL—LI—Li—U—Li—U—а—U—а—U—U—a—L1—И—LI—И—LI—И—U—Li—U—а—U—U—U—U—U-
ОГЛАВЛЕНИЕ
ПРЕДИСЛОВИЕ
ВСКРЫТИЕ ТРУПОВ ЛОШАДЕЙ
1. Место вскрытия и инструментарий
2. Техника безопасности
3. Некоторые анатомические особенности лошади
4. Определение возраста лошади
5. Масть лошади
6. Порядок вскрытия
7. Техника исследования отдельных органов
8. Протоколирование вскрытия (протокол вскрытия)
9. Отбор и сохранение патологического материала, предназначенного для лабораторных исследований
ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНЕЙ ЛОШАДЕЙ
ИНФЕКЦИОННЫЕ БОЛЕЗНИ
1. Сибирская язва
2. Злокачественный отек
3. Некробактериоз
4. Столбняк
5. Ботулизм
6. Сальмонеллез
7. Листериоз
8. Лептоспироз
9. Моноцитарный эрлихиоз
10. Эпизоотический лимфангит
11. Язвенный лимфангит
12. Мыт
13. Кровопятнистая болезнь
14. Сап
15. Туберкулез
16. Бруцеллез
17. Инфекционная анемия
18. Герпесвирусные болезни
19. Грипп лошадей
20. Аденовирусная инфекция
21. Вирусные энцефалиты и энцефаломиелиты
22. Африканская чума однокопытных
23. Вирусный артериит
24. Бешенство
25. Болезнь Ауески
26. Оспа лошадей
27. Везикулярный стоматит
28. Коринебактериоз жеребят
29. Микотоксикозы
30. Идиопатический колит
ИНВАЗИОННЫЕ БОЛЕЗНИ
1. Бабезиоз
2. Трипаносомозы
3. Параскариоз
4. Деляфондиоз
5. Гастрофилез
НЕЗАРАЗНЫЕ БОЛЕЗНИ
1. Паралитическая миоглобинурия
2. Острое расширение желудка
3. Метеоризм кишечника
4. Перекручивание и заворот кишок
5. Амилоидоз печени
ИЛЛЮСТРАЦИИ
Новинка! Вышла в свет книга проф. Кудряшова А.А.
«ПАТОЛОГОАНАТОМИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА БОЛЕЗНЕЙ ЛОШАДЕЙ»
Данная книга является второй в серии «Ветеринарная патологическая анатомия», выпускаемой НОУ ДО «Институт Ветеринарной Биологии». Как и первая книга «Патологоанатомическая диагностика болезней собак и кошек» (www.invetbio.spb.ru/Kudryashov-2011.htm), настоящее издание является учебным пособием как для студентов ветеринарных факультетов, так и для врачей-иппологов.
В книге изложены порядок вскрытия лошадей, составления протоколов, правила отбора материала для дальнейших исследований, даны детальные описания 40 наиболее часто встречающихся заболеваний лошадей. Подробно освещены этиология, патогенез, клинические проявления и патологоанатоми-ческие изменения. Особое внимание уделено дифференциальной диагностике. Книга иллюстрирована большим количеством авторских фотографий, а также рисунками со схемами.
Тираж: 1000 экз. Формат: А5 (145 х 205 мм), мягкий переплет, 184 с. с илл.
Розничная цена книги - 800 руб. (с учетом почтовых расходов - 1040 руб.).
По вопросу приобретения обращайтесь по тел. +7 921 095-89-27, e-mail: [email protected]
Форма on-line заказа: www.invetbio.spb.ru/form_kniga_Kudryashov-loshadi.htm
