CC BY
81
Оригинальные статьи
55
РАЗРАБОТКА НОВОЙ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ ФОРМЫ ДЛЯ ВНУТРИВЕННОГО ВВЕДЕНИЯ ПРОИЗВОДНОГО ИНДОЛОКАРБАЗОЛА ЛХС-1208
И. Д. Гулякин, А. Хашем, Л. Л. Николаева, М.В. Дмитриева, Д. А. Афанасьева, М.А. Барышникова, Н.А. Оборотова, А.В. Ланцова
ФГБУ«Российский онкологический научный центр им. Н.Н. Блохина» Минздрава России; Россия, 115478, Москва,
Каширское шоссе, 24
Контакты: Илья Дмитриевич Гулякин [email protected]
Цель исследования — создание стабильной липосомальной лекарственной формы отечественного гидрофобного противоопухолевого соединения из группы производных индолокарбазолов — ЛХС-1208.
Материалы и методы. Количественное содержание препарата в липосомах определяли спектрофотометрическим методом с использованием стандартного образца при X = 320 ± 2 нм. Эффективность включения рассчитывали по соотношению концентрации препарата в липосомальной дисперсии после фильтрации через нейлоновые мембранные фильтры «Pall» с порами диаметром 0,22 мкм на экструдере к концентрации ЛХС-1208 в липосомальной дисперсии до фильтрации. Определяли рНлипосом методом потенциометрии. Размер липосом изучали с использованием наносайзера. Цитотоксическую активность изучали в МТТ-тесте.
Результаты. Были получены и проанализированы экспериментальные модели составов липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208 с различными молярными соотношениями компонентов. Выбран состав со следующими молярными соотношениями ЛХС-1208: лецитин — 1:150 и лецитин : холестерин : PEG-2000 — 1:0,2:0,003. В данном составе наблюдался максимальный уровень включения ЛХС-1208 (94 %) в липосомы с наиболее приемлемым размером везикул (185 ± 10 нм). Изучена цитоток-сическая активность липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208, концентрация вещества, вызывающая гибель 50 % клеток (ИК50), составила 1,24 мкг/мл.
Заключение. В результате проведения комплекса фармацевтических исследований определен оптимальный состав компонентов и разработана технология получения липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208.
Ключевые слова: ЛХС-1208, липосомы, стерилизующая фильтрация, наносайзер
DOI: 10.17650/1726-9784-2016-15-2-55-60
THE DEVELOPMENT OF NEW TECHNOLOGY OF THE DOSAGE FORM FOR INTRAVENOUS ADMINISTRATION INDOLOCARBAZOLE DERIVATIVE LHS-1208
I.D. Gulyakin, A. Hashem, L.L. Nikolaeva, M. V. Dmitrieva, D.A. Afanasieva, M.A. Baryshnikova, N.A. Oborotova, A. V. Lantsova
N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center, Ministry of Health of Russia; 24 Kashyrskoe Shosse, Moscow, 115478, Russia
Objective. Aim of this work was to create a stable liposomal dosage form of native hydrophobic antitumor compound from the group of indolocarbazoles — LHS-1208.
Materials and methods. Quantitative analysis of the drug content in liposomes was determined by spectrophotometry with a standard sample at X = 320 ± 2 nm. The encapsulation was investigated as the ratio of LHS-1208 concentration in the liposomal dispersion after extrusion through nylon membrane filters 0.22 ^m "Pall" to concentration LHS-1208 in liposomal dispersions before filtration. pH of the liposome was determitaned by the method of potentiometry. The size of liposomes was evaluated by nanosizer. Cytotoxic activity was studied by MTT-test.
Results. Experimental liposomal models of LHS-1208 with different molar ratios of the components were obtained and analyzed. Composition with the molar ratios LHS-1208: lecithin 1:150, and lecithin : cholesterol : PEG-2000 — 1:0,2:0,003 was selected. Encapsulation percentage of LHS-1208 was 94 % and size of the vesicles was 185+10 nm. Cytotoxic activity of liposomal LHS-1208 was studied, IC00 was 1.24 ^g/ml.
Conclusion. As a result of complex pharmaceutical research determined the optimum composition of the components and the technology for production of liposomal dosage form LHS-1208.
Key words: LHS-1208, liposomes, sterilizing filtration, nanosayzer
Введение
Актуальной задачей онкологии является создание новых отечественных противоопухолевых препаратов, избирательно разрушающих опухолевую ткань [1—4]. Среди широкого спектра химических соединений особый интерес представляют препараты из группы производных индолокарбазолов. К-гликозиды замещенных индоло[2,3-а]карбазолов и родственных соединений — это группа синтетических соединений, обладающих противоопухолевой, антибактериальной и иммуномодулирующей активностью [5—8].
Значительные успехи фундаментальной медицины в изучении механизма злокачественной трансформации клеток и процесса метастазирования новообразований позволили определить новые мишени воздействия потенциальных противоопухолевых средств. Отличительной особенностью механизма действия препаратов группы производных индоло-карбазолов является способность взаимодействовать с несколькими мишенями и индуцировать различные пути гибели опухолевых клеток. Для этих соединений такими мишенями служат топоизомеразы, ДНК и протеинкиназы [9—12].
В настоящее время работу по исследованию возможностей получения новых препаратов на основе производных индолокарбазолов проводит НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России [13]. В лаборатории химического синтеза синтезирована субстанция производного индоло[2,3-а]карба-зола ЛХС-1208, для которой в лаборатории разработки лекарственных форм создана модель лекарственной формы «лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 9 мг» (ЛХС-1208-лио) [14—18]. Доклинические исследования показали высокий противоопухолевый эффект разработанной лекарственной формы ЛХС-1208 на опухолях различного гистогенеза, а также установлено преимущество данного препарата по длительности противоопухолевого действия в сравнении с иринотеканом. Кроме того, изучены механизмы противоопухолевого действия ЛХС-1208 [19, 20]. В результате изучения «острой» токсичности ЛХС-1208-лио были получены расчетные токсические дозы при внутрибрюшинном применении у мышей, самок и самцов [21].
Однако при изучении «субхронической» токсичности ЛХС-1208-лио установлено, что препарат вызывает недозозависимые изменения на электрокардиограмме: увеличение интервалов Рр и РТ, понижение вольтажа зубца Я и выпадение зубца Я (нарушение сердечного ритма), что свидетельствует о нарушении электрической проводимости. Эти изменения могут расцениваться как признаки кардиотоксичности [22]. Разработка липосомальной лекарственной формы (ЛЛФ) может решить вопрос об устранении дан-
ных побочных эффектов, поскольку липосомальные препараты в незначительном количестве проникают в миокард и скелетные мышцы [23].
Низкая избирательность противоопухолевого действия цитотоксических препаратов приводит к дозо-зависимому эффекту, ограничивающему их применение в клинике. Чем больше доза препарата, тем выше терапевтический эффект и тем больше токсических проявлений [24]. Противоопухолевые препараты отличаются от других лекарств высокой агрессивностью, химической нестабильностью во внешней среде и сильным местнораздражающим действием. В связи с этим большинство препаратов выпускаются в виде жидких или лиофилизированных растворов и применяются в виде внутривенных инфузий. Эти свойства могут меняться с изменением лекарственной формы препарата и путей его введения. Терапевтиче -ские подходы к совершенствованию химиотерапии рака сфокусированы на разработке новых систем доставки лекарств непосредственно к злокачественной клетке без повреждения нормальной ткани [25].
По сравнению с обычными инъекционными растворами применение ЛЛФ имеет преимущества. Включение лекарственных веществ в липосомы снижает концентрацию свободных препаратов в кровяном русле и препятствует их ферментативному разрушению и, следовательно, их быстрому выведению почками, за счет изменения фармакокиненетики и биораспределения препарата снижается общая токсичность и возрастает терапевтический индекс. Кроме того, липосомы преодолевают множественную лекарственную устойчивость, они биодеградируемы и не вызывают иммунного ответа [26—31].
Цели исследования — создание стабильной ЛЛФ ЛХС-1208, а также изучение и оценка ее цитотокси-ческой активности в сравнении с ранее разработанной лекарственной формой.
Материалы и методы
Препараты и реактивы
Субстанция ЛХС-1208 (аминоиндолокарбазол) — аморфный порошок оранжевого цвета без запаха (ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, патент РФ № 2548045); яичный фосфатидилхо-лин — лецитин E PC S (Lipoid, Германия); холестерин (Sigma, Япония); пегелированный дистеароилфос-фатидилэтаноламин PEG-2000-DSPE (Lipoid, Герма -ния); ацетон стабилизированный, химически чистый («Химмед», Россия); хлороформ стабилизированный, химически чистый («Химмед», Россия); спирт этиловый 95 % (ФС. 2.1.0036.15, «РосБио», Россия).
Приборы и аппаратура
Весы аналитические Sartorius 2405 (Sartorius AG, Германия), весы лабораторные Sartorius LA 1200 S (Sar-
Оригинальные статьи 57
torius AG, Германия ), pH-метр HANNA pH 211 (Han- Определение pH липосомальной дисперсии na Instruments, Германия), испаритель роторный Определение значения pH осуществляли мето-Rotavapor R-200 (BUCHI Labortechnik AG, Швейца- дом потенциометрии с использованием pH-метра рия), экструдер Lipex™ Thermobarrel Extruder на 10 мл HANNA pH 211. В липосомальной дисперсии значение (Northern Lipids Inc., Lipids Biomembranes, Inc., Ка- pH измеряли не разбавляя. Предварительно опреде-нада), нейлоновые мембранные фильтры «Pall» с по- ляли значение рН воды для инъекций. рами диаметром 1,2 мкм, 0,45 мкм и 0,22 мкм (Pall Corporation, США; ООО «Палл Евразия», Россия), Изучение цитотоксической активности гомогенизатор Microfluidizer M- 110S (Michael Benalt в МТТ-тесте Inc., США), наносайзер Nicomp-380 Submicron Par- Исследование проводили на клеточной линии ticle Sizer (Particle Sizer Systems, США), спектрофо- карциномы толстой кишки НСТ-116. Клетки куль-тометр Cary 100 (Varian, Inc., Австралия). тивировали в среде RPMI-1640 с добавлением 10 % телячьей эмбриональной сыворотки, глутамина и ан-Количественное определение ЛХС-1208 в липосомах тибиотиков. С культуральных флаконов клетки сни-Количественное содержание препарата в липо- мали раствором Версена. сомах определяли спектрофотометрическим методом Для постановки МТТ-теста клетки рассаживали с использованием стандартного образца (СО) при в 96-луночные планшеты в количестве 3 тыс. клеток X = 320 ± 2 нм. Оптическую плотность спиртовых на лунку. Через сутки, после того как клетки прикре-растворов липосомального ЛХС-1208 и СО измеряли плялись к пластику, в лунки добавляли исследуемые в кювете с толщиной оптического слоя 10 мм отно- препараты в концентрациях 1,8; 0,9; 0,4 мкг/мл и ин-сительно 95 % этилового спирта. Концентрацию кубировали в течение 48 ч при температуре 37 °С ЛХС-1208 в липосомальной дисперсии (мг/мл) рас- и 5 % СО2. Через 48 ч в лунки добавляли раствор считывали по формуле МТТ, который в митохондриях метаболически актив-A • у • a ных клеток восстанавливается с помощью дегидро-X = a . у , гиназ в формазан, представляющий собой кристаллы 0 0 фиолетового цвета. Через 4 ч в лунки добавляли ди-где Aj — оптическая плотность испытуемого раст- метилсульфоксид для растворения образовавшихся вора; A — оптическая плотность раствора СО ЛХС- кристаллов формазана и производили подсчет опти-1208; а — навеска СО; Vt — величина разбавления ческой плотности на фотометрическом анализаторе испытуемого раствора; V0 — величина разбавления СО. «Multiskan» (Thermo Labsystems) при длине волны 540 нм. Величина поглощения прямо пропорцио-Определение степени включения ЛХС-1208 нальна числу живых клеток. в липосомы Цитотоксичность (Ц, %) рассчитывали по формуле В связи с тем, что ЛХС-1208 является гидрофобным веществом и при получении липосом включа- Ц = (1— (Оо/Ок)) * 100 %, ется непосредственно в липидный бислой, эффективность включения рассчитывали по соотношению где Оо — оптическая плотность в опытных лунках, концентрации препарата в липосомальной диспер- Ок — оптическая плотность в контрольных лунках. сии после фильтрации через нейлоновые мембран- Для характеристики цитотоксического эффекта ные фильтры «Pall» с порами диаметром 0,22 мкм определяли ИК50 — концентрацию вещества, вызы-на экструдере к концентрации ЛХС-1208 в липосо- вающую гибель 50 % клеток. мальной дисперсии до фильтрации. Показатель выражали в процентах: Результаты и обсуждение Сф Молярные соотношения липидов ЛЛФ ЛХС-1208 ЭВ = Сп x 100 (%), подбирали экспериментально с учетом гидрофобных свойств действующего вещества. В качестве основ-где ЭВ — эффективность включения, %; Сф — кон- ного компонента, формирующего бислой, применя-центрация ЛХС-1208 в дисперсии после фильтрации, ли лецитин. Для придания бислою необходимого мг/мл; Сп — концентрация ЛХС-1208 в дисперсии уровня жесткости добавляли холестерин. Для предот-до фильтрации, мг/мл. вращения опсонизации и поглощения липосом клетками ретикулоэндотелиальной системы в состав ле-Определение размера липосом карственной формы вводили PEG-2000-DSPE. Анализ среднего диаметра липосом проводили Были получены и проанализированы экспери-методом корреляционной спектроскопии светорас- ментальные модели составов ЛЛФ ЛХС-1208 с раз-сеяния с использованием наносайзера. личными молярными соотношениями компонентов
2'2016 ТОМ 15 I VOL.15 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ I RUSSIAN JOURNAL OF BIOTHERAPY
Таблица 1. Модельные составы липосомальной лекарственной формы ЛХС-1208
№ Молярное соотношение Молярное соотношение лецитин : Эффективность Размеры везикул Концентрация
ЛХС-1208 : лецитин холестерин : PEG-2000 включения, % после экструзии, нм ЛХС-1208, мг/мл
1 1:50 1:0,25:0,003 59 215 ± 10 0,6
2 1:100 1:0,25:0,003 75 195 ± 10 0,4
3 1:125 1:0,25:0,003 85 200 ± 10 0,3
4 1:150 1:0,25:0,003 91 205 ± 10 0,2
5 1:150 1:0,33:0,003 92 185 ± 10 0,3
6 1:150 1:0,2:0,003 94 185 ± 10 0,3
7 1:150 1:0,14:0,003 80 185 ± 10 0,3
8 1:150 1:0,1:0,003 75 185 ± 10 0,3
9 1:175 1:0,25:0,003 65 190 ± 10 0,2
(табл. 1). Наибольшее количество включенного препарата в липосомах — основной показатель качества дисперсии. Также для эффективного применения липосомальной лекарственной формы важно, чтобы размеры везикул составляли 100—200 нм [32, 33].
В процессе определения оптимального состава липосомальной формы с ЛХС-1208 с учетом указанных выше критериев качества липосомальной дисперсии был выбран состав № 6 со следующими молярными соотношениями ЛХС-1208 : лецитин — 1:150 и лецитин : холестерин : PEG-2000 — 1:0,2:0,003. При использовании данного состава наблюдался максимальный уровень включения ЛХС-1208 (94 %) в ли-посомы с наиболее приемлемым размером везикул (185 ± 10) (см. табл. 1).
Липосомы с ЛХС-1208 получали по методу Бэн-гема в модификации для гидрофобных субстанций с использованием лецитина, холестерина и PEG-2000-DSPE [34]. Ацетоно-хлороформный раствор (1:1) компонентов ЛЛФ упаривали на роторном испарителе до образования полупрозрачной липидной пленки, которую досушивали под вакуумом (—0,9 бар) в течение 30 мин. Затем пленку гидратировали водой для инъекций с получением дисперсии многослойных липосом с рН = 7,0 ± 0,5, которые потом измельчали до получения однослойных и однородных везикул приемлемого размера.
В процессе разработки ЛЛФ ЛХС-1208 исследовали способы измельчения многослойных липосом — гомогенизацию (микрофлюидизацию) и экструзию. Поскольку ЛХС-1208 является термолабильным лекарственным веществом, для измельчения липосо-мальной дисперсии ультразвуковую обработку не применяли.
Размер везикул при экструзии определяется главным образом диаметром пор фильтрующих мембран
и количеством циклов пропускания дисперсии через фильтр [35]. Липосомальную дисперсию ЛХС-1208 последовательно экструдировали через нейлоновые мембранные фильтры «Pall» с уменьшающимся размером пор (1,2; 0,45 и 0,22 мкм) на экструдере «Lipex™ Thermobarrel Extruder» под давлением 0,9 бар. Из результатов исследования, представленных в табл. 2, видно, что оптимальным режимом экструзии липосом ЛХС-1208 является последовательное пропускание дисперсии через нейлоновые мембранные фильтры с уменьшающимся размером пор: 1 раз через фильтр с порами 1,2 мкм, 1 раз через фильтр с порами 0,45 мкм и 2 раза через фильтры с порами 0,22 мкм.
Таблица 2. Влияние экструзии на качество ЛЛФ ЛХС-1208
Диаметр пор фильтра, мкм
Количество циклов
Размеры везикул, нм
0,45 1 205 ± 5
1 195 ± 5
0,22 2 185 ± 5
3 185 ± 5
Помимо экструзии липосомы измельчали с применением метода гомогенизации на Мюгойш^ег М-110Б. Использование гомогенизации позволило получить дисперсию липосом ЛХС-1208 с меньшим, чем при экструзии, размером частиц (диаметр преобладающей фракции 60 нм). Однако при гомогенизации наблюдаются большие потери препарата — около 50 % объема дисперсии. В связи с этим данный метод при дальнейших технологических исследованиях не использовали [36].
Таким образом, в результате эксперимента установлено, что наиболее оптимальным способом из-
Оригинальные статьи
59
100 90 # 80 £ 70
и
I 60
5 50 о 40 ? 30 ^ 20 10 0
0 0,5 1 1,5 2
Концентрация, мкг/мл
Рис. 1. Цитотоксическая активность лекарстееннъа форм ЛХС-1208 на клеточной линии НСТ-116
мельчения липосом ЛХС-1208 является экструзия под давлением с использованием нейлоновых фильтров.
При хранении в холодильнике в течение нескольких дней происходило расслоение липосомальной дисперсии ЛХС-1208, что свидетельствует о низкой стабильности данной лекарственной формы. В связи с этим для увеличения устойчивости и продления срока 0одности препарата целесообразно применение метода лиофилизации [37—39]. В настоящее время проводятся исследования по разработке технологии лиофилизации ЛЛФ ЛХС-1208: выбор) криопротек-тора и режима сублимационной сушки.
Результаты сравнения цитотоксической активности ЛЛФ ЛХС-1208 с ЛХС-1208-лио показали, что обе лекарственные формы дозозависимо вызывали гибель клеток линии НСТ-116 после 48 ч инкубации с препаратами (рис. 1). По степени цитотоксической активности обе лекарственные формы оказались практически идентичны: ИК для ЛХС-1208-лио соста-
1,5
I
ф
I
о
0,5
лио липосомы
Рис. 2. ИК50 ЛХС-1208-лио и ЛЛФ-лио ЛХС-1208
вила 1, 14 мкг/мл, а для ЛЛФ ЛХС-1208 - 1,24 мкг/мл (рис. 2).
Выводы
Определен оптимальный состав компонентов и разработана технология получения ЛЛФ ЛХС-1208. Определены молярные соотношения ЛХС-1208: лецитин — 1:150 и лецитин : холестерин : РБ0-2000 — 1:0,2:0,003. Проводятся исследования по разработке технологии лиофилизации ЛЛФ ЛХС-1208. Включение ЛХС-1208 в липосомы составило 94 %, размер везикул — 185 ± 10 нм. Сравнение цитотоксическо-кой активности ЛЛФ ЛХС-1208 с таковой ЛХС-1208-лио на клеточной линии карциномы толстой кишки НСТ-116 показало, что уровень активности обеих лекарственных форм идентичен. Ввиду большей направленности и оказания меньшего токсического эффекта ЛЛФ ЛХС-1208 (по сравнению с ЛХС-1208-лио) представляются целесообразными дальнейшие исследования эффективности этой лекарственной формы.
2
0
ЛИТЕРАТУРА / REFERENCES
1. Гулякин И.Д., Николаева Л.Л., Санарова Е.В. и др. Применение фармацевтической технологии для повышения биодоступности лекарственных веществ. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(3):101—8.
2. Гулякин И. Д., Николаева Л. Л., Санарова Е.В. и др. Особенности создания лекарственных форм противоопухолевых препаратов для парентерального применения. Разработка и регистрация лекарственных средств 2015;
2(11):96—110.
3. Гулякин И.Д., Оборотова Н.А., Печенников В.М. Солюбилизация гидрофобных противоопухолевых препаратов.
Химико-фармацевтический журнал 2014;48(3):43-8.
4. Дмитриева М.В., Оборотова Н.А., Санарова Е.В. и др. Наноструктури-рованные системы доставки противоопухолевых препаратов. Российский биотерапевтический журнал 2012;11(4):21-7.
5. Смирнова З.С., Борисова Л.М., Киселева М.П. и др. Противоопухолевая активность соединения ЛХС-1208 (N-гликозилированные производные индоло[2,3-а]карбазола). Российский биотерапевтический журнал 2010;9(1):80.
6. Смирнова З.С., Борисова Л.М., Киселева М.П. и др. Противоопухолевая
эффективность прототипа лекарственной формы соединения ЛХС-1208 для внутривенного введения. Российский биотерапевтический журнал 2012;11(2):49.
7. Смирнова З.С., Борисова Л.М., Киселева М.П. и др. Доклиническое изучение противоопухолевой активности производного индолокарбазола ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(1):129.
8. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Борисова Л.М. и др. Изучение противоопухолевой активности производного индоло[2,3-а]карбазола ЛХС-1006. Российский биотерапевтический журнал 2005;4(1):70—71.
60 Оригинальные статьи
9. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Борисова Л.М. и др. Изучение связи структуры и противоопухолевой активности в ряду М-гликозидов, производных индоло[2,3-а]карбазола. Российский биотерапевтический журнал 2006;5(1):20.
10. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Борисова Л.М. и др. Корреляция цито-токсической и противоопухолевой активности в отношении лейкозов в ряду М-гликозилированных производных ин-доло[2,3-а]карбазола. Российский биотерапевтический журнал 2007;6(1):50— 1.
11. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Борисова Л.М. и др. Противоопухолевая активность М-гликозидов производных индоло[2,3-а]карбазола. Российский биотерапевтический журнал 2006;5(3):123-127.
12. Смирнова З.С., Кубасова И.Ю., Миникер Т.Д. и др. Изучение противоопухолевой активности М-гликозидов замещенных индоло[2,3-а]карбазолов. Российский биотерапевтический журнал 2004;3(2):34.
13. Киселева М.П., Смирнова З.С., Борисова Л.М. и др. Поиск новых противоопухолевых соединений среди производных М-гликозидов индоло[2,3-а]карбазолов. Российский онкологический журнал 2015;(2):33—37.
14. Гулякин И. Д., Николаева Л. Л, Санарова Е.В. и др. Изучение влияния фильтрующего материала на содержание действующего вещества при разработке лекарственной формы нового соединения из группы производных индолокарбазо-лов. Материалы I Международной научно-практической Интернет-конференции «Технологические и биофармацевтические аспекты растворения лекарственных препаратов разной направленности действия». Харьков: 7—8 ноября 2014 года. НФУ Минздрава Украины. 2014. 208-209.
15. Гулякин И.Д., Николаева Л.Л., Санарова Е. В. и др. Оценка показателей качества лиофилизированной лекарственной формы ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(3):62.
16. Ланцова А. В., Полозкова А. П., Орлова О. Л. и др. Разработка композиции для внутривенного введения гидрофобной субстанции производной индолокар-базола ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2013;12(2):50.
17. Ланцова А. В., Санарова Е.В., Оборотова Н.А. и др. Разработка технологии получения инъекционной лекарственной формы на основе отечественной субстанции производной индолокарбазо-ла ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(3):25—32.
18. Ланцова А. В., Санарова Е.В., Полозкова А.П. и др. Разработка лекар-
ственной формы производного индоло-карбазола ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(1):104.
19. Киселева М.П., Шпрах З.С., Борисова Л. М. и др. Доклиническое изучение противоопухолевой активности производного М-гликозида индолокарба-зола ЛХС-1208. Сообщение I. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(2):71-7.
20. Киселева М.П., Шпрах З.С., Борисова Л. М. и др. Доклиническое изучение противоопухолевой активности производного М-гликозида индолокарба-зола ЛХС-1208. Сообщение II. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(3):41-7.
21. Николина А.А., Кульбачевская Н.Ю., Коняева О. И. и др. Изучение изучения «острой» токсичности нового противоопухолевого лекарственного средства на основе производного индолокарбазо-ла — ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(4):59—64.
22. Кульбачевская Н.Ю., Коняева О.И., Ермакова Н.П. и др. «Субхроническая» токсичность лекарственного средства
на основе производного индолокарбазола на крысах. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(1):99.
23. Оборотова Н.А., Санарова Е.В. Роль новых фармацевтических технологий
в повышении избирательности действия противоопухолевых препаратов. Российский химический журнал 2012;(3-4):33—40.
24. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов(обзор). Химико-фармацевтический журнал 2001;35(4):32—8.
25. Саквина О.И., Барышников А.Ю. Липосомы в направленной доставке противоопухолевых препаратов. Российский биотерапевтический журнал 2008;7(4): 80—5.
26. Афанасьева Д. А., Барышникова М.А., Барышников А.Ю. Молекулярные механизмы преодоления множественной лекарственной устойчивости липосомаль-ными противоопухолевыми препаратами. Российский биотерапевтический журнал 2015;14(1):3—10.
27. Барышников А.Ю., Оборотова Н.А. Иммунолипосомы — новое средство доставки лекарственных препаратов. Современная онкология 2001;3(2):4.
28. Барышников А.Ю., Оборотова Н.А., Герасимова Г. К. и др. Противоопухолевые препараты, разработанные в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н. Блохина. Вестник Московского онкологического общества 2004;(11):3—4.
29. Барышникова М.А., Барышников А.Ю. Иммунолипосомы и мишени их действия. Журнал Российского химического
общества им. Д.И. Менделеева 2012; Ш(3—4):60—7.
30. Барышникова М.А., Грищенко Н.В., Бурова О.С. и др. Роль С095/РЛ8-рецеп-тора в индукции апоптоза противоопухолевыми препаратами. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(3):3—7.
31. Оборотова Н.А., Барышников А.Ю. Липосомальные лекарственные формы
в клинической онкологии. Успехи современной биологии 2009;(5):464.
32. Барышников А.Ю. Наноструктуриро-ванные липосомальные системы
как средство доставки противоопухолевых препаратов. Вестник РАМН 2012;(3):23—30.
33. Гуревич Д.Г., Меерович И.Г., Меерович Г. А. и др. Влияние размеров липосом на уровень и селективность накопления тиосенса в опухоли. Российский биотерапевтический журнал 2007;6(2):45—9.
34. Гулякин И.Д., Санарова Е.В., Ланцова А.В. и др. Разработка нанострук-турированной модели лекарственной формы производного индолокарбазола ЛХС-1208. Российский биотерапевтический журнал 2014;13(1):78.
35. Гулякин И.Д., Николаева Л.Л., Санарова Е. В. и др. Применение мембранных фильтров в технологии получения стерильных лекарственных препаратов. Химико-фармацевтический журнал 2016;50(1):28—32.
36. Гулякин И.Д. Создание липосомаль-ной лекарственной формы отечественного противоопухолевого препарата ЛХС-1208. Материалы научно-практической конференции с международным участием «Фармацевтическая наука
и практика: достижения, инновации, перспективы». Пермь: 25—27 ноября 2015 года. Вестник ПГФА 2015;16:41—3.
37. Аршинова О.Ю., Оборотова Н.А., Санарова Е. В. Вспомогательные вещества в технологии лиофилизации лекарственных препаратов. Разработка
и регистрация лекарственных средств 2013;(2):20—5.
38. Николаева Л.Л., Гулякин И.Д., Санарова Е. В. и др. Влияние вспомогательных веществ на процесс лиофилиза-ции ЛХС-1208 и 0Я-2011. Материалы
I Международной научно-практической Интернет-конференции «Технологические и биофармацевтические аспекты растворения лекарственных препаратов разной направленности действия». Харьков: 7—8 ноября 2014 года. НФУ Минздрава Украины 2014. 216.
39. Оборотова Н.А., Краснюк И.И., Томашевская Н. В. Технологические возможности сублимационной сушки фармацевтических препаратов. Фармация 2007;(2):25—6.
