РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ МУТАЦИИ A2058G В ГЕНЕ 23S РРНК, ОПРЕДЕЛЯЮЩЕЙ УСТОЙЧИВОСТЬ К МАКРОЛИДНЫМ АНТИБИОТИКАМ В РОССИЙСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ TREPONEMA PALLIDUM Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

RM'AX

https://cmac-journal.ru

КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ И АНТИМИКРОБНАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ

2022

DOI: 10.36488/cmac.2022.4.369-374

Оригинальная статья

Распространенность мутации A2058G в гене 23S рРНК, определяющей устойчивость к макролидным антибиотикам в российской популяции Treponema pallidum

Образцова О.А., Шпилевая М.В., Катунин Г.Л., Обухов А.П., Шагабиева Ю.З., Соломка В.С.

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава России, Москва, Россия

Контактный адрес:

Марина Валентиновна Шпилевая

Эл. почта: [email protected]

Ключевые слова: Treponema pallidum, макролиды, мутация A2058G.

Конфликт интересов: авторы заявляют об отсутствии конфликтов интересов.

Внешнее финансирование: исследование проведено без внешнего финансирования.

Цель. Исследовать распространенность мутации A2058G в российской популяции T. pallidum и ее связь с молекулярными субтипами.

Материалы и методы. Анализировали ДНК, выделенную из 325 образцов клинического материала, полученного от пациентов лечебно-профилактических учреждений дерматовенерологического профиля 6 федеральных округов России в период с 2014 по 2021 гг. У пациентов был диагностирован первичный сифилис половых органов, первичный сифилис других локализаций или вторичный сифилис кожи и слизистых оболочек. ДНК выделяли с использованием набора реагентов «Проба-НК» (ДНК-технология, Россия) согласно инструкции производителя. Присутствие генетического материала T. pallidum подтверждали методом ПЦР с праймерами к видоспецифичному гену polA. Молекулярное типирование проводили на основании анализа полиморфных участков видо-специфичных генов T. pallidum. Первичную расшифровку нуклеотидных последовательностей фрагмента гена 23S рРНК осуществляли в программе Sequencing Analysis 5.3.1. Для выравнивания анализируемых фрагментов использовали программу Mega 5.

Результаты. В интервале 2014-2021 гг. на территории России идентифицированы 8 молекулярных субтипов T. pallidum - 14d/f, 14d/g, 14b/f, 14c/f, 14i/f, 9d/f, 14b/g и 14e/f с устойчивым доминированием субтипа 14d/f. Выделены три субтипа - 14d/g, 14b/g и 14b/f, несущие ассоциированную с резистентностью к азитромицину мутацию A2058G.

Выводы. Исследования по молекулярному типированию штаммов T. pallidum на территории России показали значительную гетерогенность популяции. Показано существование трех сублиний, содержащих мутацию A2058G, одна из которых - 14b/f описывается как редкая. Полученные данные подтверждают актуальность непрерывного мониторинга появления резистентных штаммов и развития новых мутаций.

Original Article

Prevalence of the A2058G mutation in 23S rRNA gene, which determines Treponema pallidum macrolide resistance in Russian population

Obraztsova O.A., Shpilevaya M.V., Katunin G.L., Obukhov A.P., Shagabieva Yu.Z., Solomka V.S.

State Scientific Center of Dermatology, Venerology and Cosmetology, Moscow, Russia

Objective. To investigate prevalence of the A2058G mutation in the Russian population of T. pallidum and its association with molecular subtypes.

Materials and methods. We analyzed DNA isolated from 325 samples of clinical material obtained from patients of dermatovenereological treatment and prophylactic institutions in 6 federal districts of the Russia in the period from 2014 to 2021. Patients were diagnosed with primary syphilis of the genital organs, primary syphilis of other sites, or secondary syphilis of the skin and mucous membranes. DNA was isolated using the Proba-NK reagent kit (DNA-technology, Russia) according to the manufacturer's instructions. The presence of T. pallidum genetic material was confirmed by PCR with primers for the species-specific polA gene. Molecular typing was performed based on the analysis of polymorphic regions of species-specific T. pallidum genes. The primary decoding of the nucleotide sequences of the 23S rRNA gene fragment was carried out using the Sequencing Analysis 5.3.1 program. The analyzed fragments were aligned using the Mega 5 program.

Results. Eight molecular subtypes of T. pallidum - 14d/f, 14d/g, 14b/f, 14c/f, 14i/f, 9d/f, 14b/g and 14e/f with stable dominance of subtype 14d/f - were identified in the Russian Federation in the interval

Contacts:

Marina V. Shpilevaya E-mail: [email protected]

Key words: Treponema pallidum, macrolides, A2058G mutation.

Conflicts of interest: all authors report no conflicts of interest relevant to this article.

External funding source: no external funding received.

Образцова О.А. и соавт.

2014-2021. Three subtypes, 14d/g, 14b/g and 14b/f, carrying the A2058G mutation associated with azithromycin resistance, were identified.

Conclusions. Studies on molecular typing of T. pallidum strains in the Russia have shown significant population heterogeneity. Three sublines containing the A2058G mutation were shown to exist, one of which - 14b/f - is described as rare. The obtained data confirm the relevance of continuous monitoring of the emergence of resistant strains and the development of new mutations.

Введение

Сифилис - инфекционное заболевание, передающееся половым путем, возбудителем которого являются бактерии вида Treponema pallidum подвида pallidum. К 2019 г. во многих странах мира отмечено резкое увеличение количества случаев заболевания сифилисом [1]. В 2020 г. во всем мире было зарегистрировано 7 млн новых случаев заражения [2]. В России по данным официального государственного статистического наблюдения показатель заболеваемости сифилисом снизился с 15 на 100 тыс. населения в 2019 г. до 10,4 - в 2020 г. [3], а в 2021 г. вырос до 14,5 [4].

Препаратом выбора для лечения всех форм сифилиса является пенициллин. Несмотря на его применение в течение многих десятилетий (с момента открытия антибиотика до настоящего времени), T. pallidum не выработала механизмов резистентности к пенициллину. Тем не менее у 1-10% больных лечение пенициллином сопровождается развитием аллергических реакций, среди которых самыми частыми являются крапивница и отек Квинке, а наиболее тяжелыми - анафилактический шок и синдром Стивенса-Джонсона. Это подтолкнуло исследователей к поиску новых антибактериальных препаратов для лечения больных сифилисом с непереносимостью пенициллина. В 90-х гг. XX в. для лечения больных ранними формами сифилиса начали применять азитро-мицин - антибиотик группы макролидов, но уже в начале 2000-х гг. стали появляться сообщения о неудачах в лечении данным антибиотиком [5-6].

Было показано, что устойчивость T. pallidum к антибиотикам группы макролидов ассоциирована с участком гена 23S рРНК, включающим центральную петлю домена V, формирующую пептидил-трансферазный центр большой субъединицы бактериальной рибосомы. Наличие мутаций (A2058G и/или A2059G) на этом участке модифицирует мишень для связывания антибиотика, обуславливая развитие резистентности T. pallidum к макролидам [7]. Точечная мутация A2058G, характеризующаяся заменой аденина на гуанин в положении 2058 23S рРНК, имеет более широкое распространение, чем A2059G, и доля ее продолжает увеличиваться [8-10].

Из-за сложности культивирования T. pallidum in vitro важным инструментом для понимания биологии микроорганизма стало молекулярное типирование. Метод, предложенный Pillay A. и соавт. и впоследствии усовершенствованный Marra C. и соавт., позволяет классифицировать T. pallidum на различные молекулярные

субтипы на основании полиморфизма ряда видоспеци-фичных генов - arp, tprIl, tp0548 [11, 12]. Ген arp содержит уникальные повторы от 2 до 22, состоящие из 60 пар оснований, количество которых варьирует у разных штаммов T. pallidum. Семейство генов tprIl (от T. pallidum repeat) включает в себя 12 генов, часть из которых кодирует экспонированные на поверхность T. pallidum белки. Нуклеотидная последовательность участка гена tp0548 у разных штаммов T. pallidum варьирует. Результат молекулярно-генетического типиро-вания отдельного клинического изолята выражается тройным цифровым и буквенным обозначением (например, 14a/a), характеризующим обнаруженные у него варианты генов arp, tprll и tp0548.

Использование предложенного метода показало, что современная популяция T. pallidum представлена двумя основными линиями - Nicols и Street Strain 14 (SS14), из которых лидирующее положение в мире занимает SS14 [13, 14]. В обеих линиях есть резистентные к макролидам штаммы, однако линия Nichols содержит около 25% таких штаммов, тогда как SS14 - около 90% [15, 16].

В настоящее время в мире идентифицированы 10 субтипов T. pallidum линии SS14. Нуклеотидная замена A2058G типична для субтипов 14b/f, 14b/g, 14d/g, получивших широкое распространение в США и странах Европейского союза [9]. На территории России устойчиво доминирует субтип 14d/f [17]. О выделении на территории России устойчивых к азитромицину штаммов T. pallidum сообщалось в 2013 г.: два штамма, выделенных от больных в республике Тыва, были отнесены к субтипам 14d/g и 14b/f [18].

Целью данной работы стало исследование распространенности мутации A2058G в российской популяции T. pallidum и ее связь с молекулярными субтипами.

Материалы и методы

Лабораторные исследования были проведены с использованием 325 образцов отделяемого эрозив-но-язвенных высыпаний кожи и слизистых оболочек, полученных в период с 2014 по 2021 г. от пациентов лечебно-профилактических учреждений дерматовенерологического профиля 6 федеральных округов (ФО) России: Дальневосточного, Северного, СевероЗападного, Поволжского, Северо-Кавказского и Центрального. У пациентов был диагностирован первичный сифилис половых органов (А51.1 по МКБ-10), первич-

Образцова О.А. и соавт.

Таблица 1. Последовательности праймеров для амплификации генов, используемых в системе молекулярного типирования T. pallidum

Ген Название праймера Нуклеотидная последовательность

polA polA-F 5'-TGCGCGTGTGCGAATGGTGTGGTC-3'

polA-R 5'-CACAGTGTCCAAAAACGCCTGCACG-3'

arp ARP-F 5'-ATCTTTGCCGTCCCGTGTGC-3'

ARP-R 5'-CCGAGTGGGATGGCTGCTTC-3'

tprii TPR1-F 5'-ACTGGCTCTGCCACACTTGA-3'

TPR1-R 5'-CTACCAGGAGAGGGTGACGC-3'

TPR2-F 5'-CAGGTTTTGCCGTTAAGC-3'

TPR2-R 5'-AATCAAGGGAGAATACCGTC-3'

tp0548 TP0548-F 5'-GGTCCCTATGATATCGTGTTCG-3'

TP0548-R 5'-GTCATGGATCTGCGAGTGG-3'

23S рРНК 23S-F 5'- GTCTCCCACCTATACTACACAT-3'

23S-R 5'-GGAGAGGTTCGTGGTAACACA-3'

ный сифилис других локализаций (А51.2) или вторичный сифилис кожи и слизистых оболочек (А51.3).

Выделение ДНК из образцов клинического материала проводили с использованием набора реагентов «Проба-НК» (ДНК-технология, Россия) согласно инструкции производителя. Присутствие генетического материала T. pallidum в образцах клинического материала подтверждалось методом ПЦР с праймерами к видо-специфичному гену polA, кодирующему ДНК-полимеразу I данного микроорганизма (Таблица 1) [19].

Молекулярное типирование образцов с подтвержденным наличием генетического материала T. pallidum проводили в соответствии с алгоритмом, рекомендованным Центрами США по контролю и профилактике заболеваний (CDC). Данный подход основан на анализе полиморфных участков видоспецифичных генов T. pallidum, а именно - определении количества внутренних нуклеотидных повторов в гене arp, анализе полиморфизма длин фрагментов рестрикции участка генов подсемейства tprII, а также исследовании нуклеотид-ной последовательности вариабельного участка гена tp0548. Алгоритм проведения и порядок оценки результатов метода описаны ранее [20].

Амплификацию генов T. pallidum осуществляли на основе пар праймеров, представленных в Таблице 1, с использованием ДНК-амплификатора Т100 Thermal Cycler (Bio-Rad, США).

С целью поиска генетических детерминант резистентности к макролидам проводили анализ фрагмента гена 23S рРНК. Первичную амплификацию выполняли с использованием специфических праймеров (Таблица 1). Полученные ДНК-фрагменты использовали в качестве матриц для повторного цикла амплификации

Образцова О.А. и соавт.

с мечеными терминирующими нуклеотидами Big Dye Terminator v.3.1 Sequencing RR-100 (Applied Biosystems, США) на приборе 3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, США) с использованием программного обеспечения 3730 Data Collection v.3.0. Первичная расшифровка нуклеотидных последовательностей проведена в программе Sequencing Analysis 5.3.1. Для выравнивания анализируемых фрагментов целевых генов на референсные сиквенсы T. pallidum использовали программу Mega 5.

Результаты

Анализ 325 образцов клинического материала методом ПЦР с праймерами к гену polA подтвердил присутствие ДНК T. pallidum в 254 случаях (78%). Молекулярное типирование polA-позитивных изолятов по генам arp, trpII и tp0548 позволило идентифицировать полный молекулярный субтип каждого изолята. Всего было выявлено 2 варианта гена arp (9 и 14), 5 вариантов генов trpII (b, c, d, i, e) и 2 варианта гена tp0548 (f, g). В проанализированной популяции определены 8 молекулярных субтипов T. pallidum. 91,3% изолятов отнесены к субтипу 14 d/f. Доля семи минорных субтипов составила 8,7% и распределилась следующим образом: 14d/g -5%, 14b/g - 1,4%, 14c/f - 0,7%, 14i/f, 9d/f, 14b/f и 14e/f - по 0,4% каждый.

Секвенирование гена 23S рРНК обнаруживало тран-зицию A2058G с доказанной ролью в обеспечении высокого уровня резистентности к макролидным антибиотикам у 14 (5,5%) из 254 изолятов T. pallidum. Молекулярные субтипы носителей данной мутации были определены как 14 d/g, 14 b/g и 14b/f.

Обсуждение

Популяция T. pallidum на территории представленных ФО отличается высоким уровнем молекулярной гетерогенности. В интервале 2014-2021 гг. идентифицированы 8 субтипов - 14d/f, 14d/g, 14b/f, 14c/f, 14i/f, 9d/f, 14b/g и 14e/f с устойчивым доминированием субтипа 14d/f, который определен как эндемичный для российской популяции T. pallidum [21]. По сравнению с данными 2013 г. [18] идентифицированы 2 новых субтипа - 14b/g и 14e/f и не выделено ни одного изолята с субтипом 4d/f, то есть динамика популяции характеризуется изменением как структуры, так и численности минорных субтипов за счет возможного трансграничного переноса.

Несущие ассоциированную с резистентностью к азитромицину мутацию A2058G в гене 23S рРНК изо-ляты T. pallidum отнесены к трем молекулярным субтипам - 14 d/g, 14 b/g и 14b/f. Образцы субтипа 14 d/g были выделены в двух ФО: 5 - в Сибирском ФО и 8 - в Центральном ФО. Изоляты редко встречаемых подтипов 14 b/g и 14b/f поступили из Сибирского ФО. В исследовании 2013 г. [18] мутация A2058G преимущественно была ассоциирована также с субтипом 14d/g. Можно

констатировать, что в выборке изолятов T. pallidum 2014-2021 гг. устойчивость к азитромицину связана с подтипом «д» гена tp0548. На связь между типом 14d/g и резистентностью к макролидам указывается в исследованиях, выполненных в США [9], Австралии [22], Нидерландах [23], Южной Африке [24], Великобритании [25], Чехии [26], где указанный тип штамма был доминирующим или одним из доминирующих.

Другой резистентный к азитромицину минорный штамм 14b/f, обнаруженный в этом же регионе в 2013 г., обладал мутацией A2058G, не ассоциированной с последовательностью гена tp0548 типа «д». Следует отметить, что тип 14b/f является достаточно редким - в России за период 2014-2021 гг. данный тип составил 0,4% всей выборки изолятов. Сообщения о единичных выделениях такого штамма поступали из Дании [27], Калифорнии [28], Японии [29], Южной Африки [24], но мутация A2058G была обнаружена только у двух штаммов данного подтипа в Южной Африке [24] и у одного штамма в России [18]. Таким образом, как и в случае с подтипом 14b/g, наши результаты подтверждают выводы других авторов [12, 18, 22] о существовании в определенных географических областях уникальных подтипов T. pallidum.

Россия относится к географическим регионам с низкой распространенностью устойчивости к макролидам

[17, 18]. Как уже указывалось, наиболее распространенный генотип T. pallidum на территории России -14d/f, и в интервале 2014-2021 гг. не было выделено ни одного азитромицинорезистентного изолята этого типа. В то же время связь между штаммами T. pallidum типа 14d/f и A2058G-ассоциированной резистентностью к макролидам выявлена в Южной Африке [24], Японии [30], Китае [31]. Данный факт подтверждает целесообразность изъятия антибиотиков группы ма-кролидов как препаратов второй линии из российских клинических рекомендаций по лечению сифилиса после ряда публикаций о распространении резистентных к ним штаммов в различных географических регионах мира [32].

Таким образом, исследования по молекулярному ти-пированию штаммов T. pallidum на территории России показали значительную гетерогенность популяции. Показано существование трех сублиний, содержащих мутацию A2058G, одна из которых - 14b/f - описывается как редкая. Полученные данные подтверждают актуальность непрерывного мониторинга появления резистентных штаммов и развития новых мутаций.

Исследование выполнено в рамках государственного задания ФГБУ «ГНЦДК» Минздрава России № 05600116-21-0 на период 2021-2023 гг.

Литература

1. World Health Organization. The global health observatory. Data on syphilis. Available at: www.who.int/data/gho/ data/themes/topics/topic-details/GHO/data-on-syphilis. Accessed July 21, 2021.

2. World Health Organization. New study highlights unacceptably high global prevalence of syphilis among men who have sex with men. Available at: www.who. int/news/item/09-07-202 1 -new-study-highlights-unacceptably-high-global-prevalence-of-syphilis-among-men-who-have-sex-with-men. Accessed July 9, 2021.

3. Kubanov A.A., Bogdanova E.V. Dermatovenereology of Russian Federation in 2020: working under pandemic. Vestnik dermatologii i venerologii. 2021;97(4):8-32. Russian. (Кубанов А.А., Богданова Е.В. Итоги деятельности медицинских организаций, оказывающих медицинскую помощь по профилю дерматовенерология, в 2020 году: работа в условиях пандемии. Вестник дерматологии и венерологии. 2021;97(4):8-32.) DOI: 10.25208/vdv1261

4. Kotova E.G., Kobyakova O.S., Kubanov A.A., Starodu-bov V.l., Aleksandrova G.A., Bogdanova E.V., et al. Resources and activities of medical organizations of the dermatovenerological profile. The incidence of sexually transmitted infections, contagious skin diseases and skin diseases in 2021: statistical materials. M.: Russian Research Institute of Health of the Ministry of Health of Russia,

2022; 209 p. Russian. (Котова Е.Г., Кобякова О.С., Кубанов А.А., Стародубов В.И., Александрова Г.А., Богданова Е.В. и соавт. Ресурсы и деятельность медицинских организаций дерматовенерологического профиля. Заболеваемость инфекциями, передаваемыми половым путем, заразными кожными болезнями и болезнями кожи в 2021 году: статистические материалы. М.: ЦНИИОИЗ Минздрава России, 2022; 209 с.)

Centers for Disease Control and Prevention. Brief report: azithromycin treatment failures in syphilis infections - San Francisco, California, 2002-2003. MMWR Morb Wkly Rep. 2004;53:197-198. PMID: 15017376.

Mitchell S.J., Engelman J., Kent C.K., Lukehart S.A., Go-dornes C., Klausner J.D. Azithromycin resistant syphilis infection: San Francisco, California, 2000-2004. Clin Infect Dis. 2006;42(3):337-345. DOI: 10.1086/498899

Morshed M.G., Jones H.D. Treponema pallidum macrolide resistance in BC. CMAJ. 2006;174(3):349. DOI: 10.1503/cmaj.1050256

Martin I.E., Gu W., Yang Y., Tsang R.S. Macrolide resistance and molecular types of Treponema pallidum causing primary syphilis in Shanghai, China. Clin Infect Dis. 2009;49:515-521. DOI: 10.1086/600878

Grimes M., Sahi S.K., Godornes B.C., Tantalo L.C., Roberts N., Bostick D., et al. Two mutations associated with

Образцова О.А. и соавт.

macrolide resistance in Treponema pallidum: increasing prevalence and correlation with molecular strain type in Seattle, Washington. Sex Transm Dis. 2012;39:954-958. DOI: 10.1097/0LQ.0b013e31826ae7a8

10. Grillova L., Petrosova H., Mikalova L., Strnadel R., Dastychova E., Kuklova I., et al. Molecular typing of Treponema pallidum in the Czech Republic during 2011 to 2013: increased prevalence of identified genotypes and of isolates with macrolide resistance. J Clin Microbiol. 2014;52:3693-3700. DOI: 10.1128/JCM.01292-14

11. Pillay A., Liu H., Chen C.Y., Holloway B., Sturm A.W., Steiner B., et al. Molecular subtyping of Treponema pallidum subspecies pallidum. Sex Transm Dis. 1998;25(8):408-414. DOI: 10.1097/00007435-199809000-00004

12. Marra C.M., Sahi S.K., Tantalo L.C., Godornes C., Reid T., Behets F., et al. Enhanced molecular typing of Treponema pallidum: geographical distribution of strain types and association with neurosyphilis. J Infect Dis. 2010;202:1380-1388. DOI: 10.1086/656533

13. Stamm L.V. Global challenge of antibiotic-resistant Treponema pallidum. Antimicrob Agents Chemother. 2010;54(2):583-589. DOI: 10.1128/AAC.01095-09

14. Matejkova P., Strouhal M., Smajs D., Norris S.J., Palzkill T., Petrosino J.F., et al. Complete genome sequence of Treponema pallidum ssp. pallidum strain SS14 determined with oligonucleotide arrays. BMC Microbiol. 2008;8:76. DOI: 10.1186/1471-2180-8-76

15. Arora N., Schuenemann V.J., Jäger G., Peltzer A., Seitz A., Herbig A., et al. Origin of modern syphilis and emergence of a pandemic Treponema pallidum cluster. Nat Microbiol. 2017;2:16245. DOI: 10.1038/nmicrobiol.2016.245

16. Nechvatal L., Petrosova H., Grillova L., Pospisilova P., Mikalova L., Strnadel R., et al. Syphilis-causing strains belong to separate SS14-like or Nichols-like groups as defined by multilocus analysis of 19 Treponema pallidum strains. Int J Med Microbiol. 2014;304:645-653. DOI: 10.1016/j.ijmm.2014.04.007

17. Obraztsova O.A., Aleynikova K.A., Obukhov A.P., Ku-banov A.A., Deryabin D.G. Genetic antimicrobial resistance determinants and their prevalence in molecular subtypes of Treponema pallidum subsp. pallidum. Kliniceskaa mikrobiologia i antimikrobnaa himioterapia. 2018;20(3):217-221. Russian. (Образцова О.А., Алейникова К.А., Обухов А.П., Кубанов А.А., Дерябин Д.Г. Генетические детерминанты резистентности к антимикробным препаратам и их распространенность у различных молекулярных субтипов Treponema pallidum subsp. pallidum. Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2018;20(3):217-221.) DOI: 10.36488/cmac.2018.3.216-221

18. Khairullin R., Vorobyev D., Obukhov A., Kuular U-H., Kubanova A., Kubanov A., et al. Syphilis epidemiology in 1994-2013, molecular epidemiological strain typing and determination of macrolide resistance in Treponema pallidum in 2013-2014 in Tuva Republic, Russia. APMIS. 2016;124:595-602. DOI: 10.1111/apm.12541

19. Liu H., Rodes B., Chen C.Y., Steiner B. New tests for

Образцова О.А. и соавт.

syphilis: rational design of a PCR method for detection of Treponema pallidum in clinical specimens using unique regions of the DNA polymerase I gene. J Clin Microbiol. 2001;39(5):1941-1946. DOI: 10.1128/ JCM.39.5.1941 -1946.2001

20. Kubanov A.A., Vorob'ev D.V., Obraztsova O.A., Derya-bin D.G., Obukhov A.P. Molecular epidemiology of Treponema pallidum in a frontier region of the Russian Federation (Tuva Republic). Molecular genetics, microbiology and virology. 2017;32(1):29-34. Russian. (Куба-нов А.А., Воробьев Д.В., Обухов А.П., Образцова О.А., Дерябин Д.Г. Молекулярная эпидемиология Treponema pallidum в приграничном регионе Российской Федерации (республика Тыва). Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 2017;1:26-30.) DOI: 10.18821/0208-0613-2017-35-1 -26-30

21. Solomka V.S., Komyagina T.M., Chestkov A.V., Obukhov A.P., Deryabin D.G. Molecular typing of T. pallidum clinical isolates and their resistance to macrolides in the Russian Federation during 2018-2019. Vestnik dermatologii i venerologii. 2019;95(6):29-36. Russian. (Соломка В.С., Комягина Т.М., Честков А.В., Обухов А.П., Дерябин Д.Г. Молекулярное типирование и устойчивость к макролидным антибиотикам у российских клинических изолятов Treponema pallidum: данные 2018-2019 гг. Вестник дерматологии и венерологии. 2019;95(6):29-36.) DOI: 10.25208/0042-4609-201995-6-29-36

22. Read P., Tagg K.A., Jeoffreys N., Guy R.J., Gilbert G.L., Donovan B. Treponema pallidum strain types and association with macrolide resistance in Sydney, Australia: new tp0548 gene types identified. J Clin Microbiol. 2016;54(8):2172-2174. DOI: 10.1128/JCM.00959-16

23. Zondag H.C., Cornelissen A.R., van Dam A.P., Brui-sten S.M. Molecular diversity of Treponema pallidum subspecies pallidum isolates in Amsterdam, the Netherlands. Sex Transm Infect. 2020;96:223-226. DOI: 10.1136/ sextrans-2019-054044

24. Venter J.M.E., Müller E.E., Mahlangu M.P., Kularatne R.S. Treponema pallidum macrolide resistance and molecular epidemiology in Southern Africa, 2008 to 2018. J Clin Microbiol. 2021;59(10):0238520. DOI: 10.1128/ JCM.02385-20

25. Tipple C., McClure M.O., Taylor G.P. High prevalence of macrolide resistant Treponema pallidum strains in a London centre. Sex Transm Infect. 2011;87:486-488. DOI: 10.1136/sextrans-2011 -050082

26. Matejkova P., Flasarova M., Zakoucka H., Borek M, Kremenova S, Arenberger P., et al. Macrolide treatment failure in a case of secondary syphilis: a novel A2059G mutation in the 23S rRNA gene of Treponema pallidum subsp. pallidum. J Med Microbiol. 2009;58(6):832-836. DOI: 10.1099/jmm.0.007542-0

27. Kirsten S.R., Susan C., Jan G., Helle K., Steen H., Troels B.K., et al. Molecular typing of Treponema pallidum in Denmark: a nationwide study of syphilis. Acta Derm Venereol. 2016;96:202-206. DOI: 10.2340/000155552190

28. Sanjiv K., Melissa J.C., Arvind A., Abhishek D., Kelly L.H., Morgan E.D., et al. Sequence variation of rare outer membrane protein ß-barrel domains in clinical strains provides insights into the evolution of Treponema pallidum subsp. pallidum, the syphilis spirochete. mBio. 2018;9(3):01006-18. DOI: 10.1128/ mBio.01006-18

29. Koizumi Y., Watabe,T., Ota Y., Nakayama S., Asai N., Hagihara M., et al. Cerebral syphilitic gumma can arise within months of reinfection: a case of histologically proven Treponema pallidum strain type 14b/f infection with human immunodeficiency virus positivity. Sex Transm Dis. 2018;45(2):1-4. DOI: 10.1097/ OLQ.0000000000000701

30. Nishiki S., Arima Y., Kanai M., Shimuta K., Nakayama S., Ohnishi M. Epidemiology, molecular strain types, and macrolide resistance of Treponema pallidum in Japan,

2017-2018. J Infect Chemother. 2020;26(10):1042-1047. DOI: 10.1016/j.jiac.2020.05.022

31. Xiao Y., Liu S., Liu Z., Xie Y., Jiang C., Xu M., et al. Molecular subtyping and surveillance of resistance genes in Treponema pallidum DNA from patients with secondary and latent syphilis in Hunan, China. Sex Transm Dis. 2016;43(5):310-316. DOI: 10.1097/ OLQ.0000000000000445

32. Krasnoselskikh T.V., Sokolovskiy E.V. Current standards for diagnosis of syphilis: comparing the Russian and foreign guidelines (part I). Vestnik dermatologii i venerologii. 2015;91(2):11-22. Russian. (Красносельских Т.В., Соколовский Е.В. Современные стандарты терапии сифилиса: сравнение российских и зарубежных клинических рекомендаций (сообщение II). Вестник дерматологии и венерологии. 2015;2:23-40.) DOI: 10.25208/0042-4609-2015-91-2-11-22

Образцова О.А. и соавт.