CC BY
81
mayer M. et al. The global burden of headache in children and adolescents - developing a questionnaire and methodology for a global study. J.
Headache Pain. 2014; 15: 86.
Поступила 20.05.15
REFERENCES
1. Murinova N, Krashin D. Chronic daily headache. Phys. Med. Rehabil. Clin. N. Am. 2015; 26 (2): 375-89.
2. Androsenko N.V., Smirnov I.E., Abalakina M.V., Lyashko, V.V. Headache tension in adolescents. Voprosy sovremennoy pediatrii. 2003; 2 (1): 14-5. (in Russian)
3. Baranov A.A., Namazova-Baranova L.S., Ilin A.G., Bulgakova V.A., Antonova E.V., Smirnov I.E. Scietific research in pediatrics: directions, achivements, prospects. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2013; 5: 4-14. (in Russian)
4. Baranov А.А., Al'bitskiy V. Yu, Ivanova A.A., Terletskaya R.N., Kosova S.A. Trends and the health status of the child population of the Russian Federation. Rossiyskiy pediatricheskiy zhurnal. 2012; 6: 4-9. (in Russian)
5. Blume H.K. Pediatric headache: a review. Pediatr. Rev. 2012; 33 (12): 562-76.
6. Suetterlin K., Turner C. Diagnosis and management of headache. Br. J. Hosp. Med (Lond.). 2014; 75 (12): 178-82.
7. Bramley H., HeverleyS., Lewis M.M., Kong L., Rivera R., Silvis M. Demographics and treatment of adolescent posttraumatic headache in a regional concussion clinic. Pediatr.Neurol. 2015; 52 (5): 493-8.
8. Androsenko N.V., Smirnov I.E. Oksibral in the treatment of tension cephalgia in adolescents. Voprosy sovremennoy pediatrii. 2003; 2 (2): 24-5. (in Russian)
9. Androsenko N.V., Pak L.A., Smirnov I.E. Cortexin in the treatment of tension cephalgia in children. Voprosy sovremennoy pediatrii. 2004; 3 (2): 136-7. (in Russian)
10. Boboshko I. E., Zhdanova, L. A. Constitutional approach to the assessment of the health status of children. Tichookeanskiy meditsinskiy zhurnal. 2011; 1: 83-5. (in Russian)
11. Androsenko N.V., Smirnov I.E. Principles of rehabilitation of children with headaches. In: Reabilitologiya. Moscow: RGMU; 2003; 1: 127-9. (in Russian)
12. Boboshko I. E. Systematic Analysis of the Constitutional Peculiarities of Children of School Age and Differentiated Programmes of the Formation of their Health: Diss. Ivanovo; 2010. (in Russian)
13. Epifanova, O.S., Boboshko I.E., Novikov A.E, Krasnoshekova L.I., Chelysheva I.A. Characteristics of cerebral hemodynamics in adolescents with headaches tension depending on the type of psychosomatic constitution. VestnikIvanovskoy meditsinskoy akademii. 2012; 17: 73. (in Russian)
14. Roser T., Bonfert M., Ebinger F., Blankenburg M., Ertl- B., Heinen F. Primary versus secondary headache in children: a frequent diagnostic challenge in clinical routine. Neuropediatrics. 2013; 44 (1): 34-9.
15. Massano D., Julliand S., Kanagarajah L., Gautier M., Vizeneux A., El-malehM. et al. Headache with focal neurologic signs in children at the emergency department. J. Pediatr. 2014; 165 (2): 376-82.
16. Guidetti V., Dosi C., Bruni O. The relationship between sleep and headache in children: implications for treatment. Cephalalgia. 2014; 34 (10): 767-76.
17. Walter S. Lifestyle behaviors and illness-related factors as predictors of recurrent headache in U.S. adolescents. J. Neurosci. Nurs. 2014; 46 (6): 337-50.
18. Wober-Bingol Q, Wober C., Uluduz D., Uygunoglu U., Aslan T.S., Kernmayer M. et al. The global burden of headache in children and adolescents - developing a questionnaire and methodology for a global study. J.
Headache Pain. 2014; 15: 86.
Received 20.05.15
Сведения об авторах:
Жданова Людмила Алексеевна, заслуженный деятель науки РФ, доктор мед. наук, проф., зав. каф. поликлинической педиатрии с курсом здорового ребенка и общего ухода за детьми ГБОУ ВПО ИГМА, e-mail: [email protected]; Новиков Александр Евгеньевич, доктор мед. наук, проф., зав. каф. неврологии, нейрохирургии, функциональной и ультразвуковой диагностики ИПО ГБОУ ВПО ИГМА, e-mail: [email protected]
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2015 УДК 616.151.514-092:612.6.05]:577.21.08
Строзенко Л.А.1, Гордеев В.В.1, Лобанов Ю.Ф.1, Момот А.П.2
РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПОЛИМОРФНЫх ВАРИАНТОВ ГЕНОВ ФАКТОРОВ СВЕРТЫВАНИИ КРОВИ И ГЕНОВ ФОЛАТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У ПОДРОСТКОВ АЛТАЙСКОГО КРАЯ
'«Алтайский государственный медицинский университет» Минздрава России, 656038, г. Барнаул, пр. Ленина, д. 40; 2Алтайский филиал «Гематологический научный центр» Минздрава России, 656024, г Барнаул, ул. Ляпидевского, 1
Склонность к возникновению артериальных и венозных тромбозов - распространенная, но малоизученная в педиатрии проблема.
Цель исследования - установить распределение полиморфных вариантов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма у подростков Барнаула.
Материалом послужили образцы ДНК 1306 подростков (580 мальчиков и 726 девочек) в возрасте 15-16 лет. Кроме того, обследовано 29 семей подростков с высоким тромбогенным риском. Основу анализа составил метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR) с использованием конкурирующих TagMan- зондов.
Установлено, что частоты минорных аллелей А 20210 гена FII и аллеля С 1565 GPI11а были выше у девочек, доля аллеля 4G гена PAI-1 фиксировалась чаще у мальчиков. Установлено отклонение от канонического равновесия по частотам генотипов генов факторов свертывания крови и по генотипам генов фолатного метаболизма. Популяция подростков характеризуется высокой гетерозиготностью по полиморфным вариантам генов фолатного метаболизма и трем генам факторов свертывания крови: G (-455)A гена FGB, G226A гена FX1II и 4G (-675)5G гена PAI-1. Таким образом, частоты генотипов фолатного метаболизма в популяции подростков Алтайского края отличаются от европейских. Наблюдается высокий процент гомозиготного генотипа 66GG гена MTRR (41,8%) и частоты минорного аллеля G 66 гена MTRR (56,9%). Полиморфные варианты генов повышенного риска развития тромбоза выявлены у 94,3% подростков. Протромботические аллельные полиморфизмы достоверно чаще встречаются в младшем поколении в сравнении с родственниками I и II степени родства.
Ключевые слова: полиморфные варианты генов; гены факторов свертывания крови; гены фолатного метаболизма; гетерозиготность; подростки.
Для цитирования: Российский педиатрический журнал. 2015; 18 (4): 19-25.
Для корреспонденции: Строзенко Людмила Анатольевна, канд. мед. наук, доцент каф. пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздрава России, e-mail: [email protected]
Strozenko L.A., Gordeev V.V., Lobanov Yu. F.
POLYMORPHIC VARIANTS OF COMBINATIONS OF GENES OF HEMOSTASIS SYSTEM AND FOLATE CYCLE IN A POPULATION OF ADOLESCENTS OF THE ALTAI TERRITORY
'Altai state medical university, 40, Lenina Avenue, Barnaul, Altai Krai, Russian Federation, 656038
Introduction The forms ofpathology associated with thromboses occupy a leading position in the structure of morbidity and mortality rate of the population over the world, including children and teenagers. Data on distribution, phenotypic realization ofpolymorphic options of genes associated with the system of a hemostasis, a folate cycle, an homocysteine exchange in children are small in number quantity and hardly comparable. In the last decades problems of the early the thrombotic episodes occur in children's and adolescents with the increasing frequency. In pediatrics this problem remains to be understudied and demands further development.
Research objective To establish the distribution, frequency of occurrence of polymorphic options of combinations of genes of the system of hemostasis and the folate cycle in population of teenagers of the Altai Krai. Materials and methods As material for the study of the distribution ofpolymorphic options of genes of the system of hemostasis and genes of the folate cycle, samples of DNA of 1306 teenagers (580 boys and 726 girls) aged of 15-16 years were used. The method of polimerase chain reaction in real time (Real-Time of PCR) with the use of competing TaqMan probes was the cornerstone of the analysis.
Results Polymorphic options of genes of the increased risk of development of thrombosis are revealed in 94,3% of teenagers. Combinations of compounds of C677T of a gene of MTHFR and 4G (-675)4G of the PAI-lgene in boys were revealed more often. Considerable frequency of the allele 4G of the PAI-1 gene in teenage boys gives the grounds to assume the high probability of development of vascular events in males to be established.
Conclusion Research of candidate genes in teenagers and timely phenotypic correction of their functional realization will allow to reduce significantly the number of patients in whom thrombosis - the associated disease is realized. Prenosological identification of teenagers from the group of high thrombogenic risk will provide the opportunity to implement the primary prevention.
Key words: polymorphic options of genes; a gene - gene combinations; compounds; genes of system of a hemostasis; genes of a folate cycle; teenagers.
Citation: Rossiiskii Pediatricheskii Zhurnal. 2015; 18(4): 19-25. (In Russ.)
еуклонный рост тромбозов и тромбоэм-болий - одна из актуальных проблем современной медицины. Известен широкий спектр наследственных и приобретенных факторов тромбогенного риска, способствующих тромбофи-лии, проявляющейся тромбозами на протяжении жизни человека. К приобретенным формам тром-бофилии относят антифосфолипидный синдром, к врожденным факторам риска - состояния с установленными генетическими полиморфизмами. В частности, описаны гены-кандидаты, полиморфизмы и мутации которых формируют предрасположенность к повышенной свертываемости крови [1].
Склонность к возникновению артериальных и венозных тромбозов - распространенная, но малоизученная в педиатрии проблема. Это состояние не является болезнью в общепринятом понимании и практически не имеет клинических проявлений, что затрудняет его распознавание до развития первого эпизода сосудистой катастрофы (инсульт, инфаркт и др.). Наблюдение детей, имеющих генетические предикторы развития наследственных тромбофилий, соответствующими специалистами, своевременная модификация факторов риска и коррекция состояния тромботической готовности способны снизить вероятность развития и тяжесть сердечно-сосудистых заболеваний и в более старшем возрасте [2].
В литературе все еще недостаточно данных, описывающих роль наследственных факторов риска в развитии тромбозов у детей, хотя проблема ранних тромботических эпизодов встречается в детском и подростковом возрасте с возрастающей частотой. В связи с этим нами выполнена работа в рамках Всероссийского регистра «Генетические факторы риска
тромбоза у жителей, проживающих на территории РФ, клиническое фенотипирование и тромбопрофи-лактика тромбоэмболических осложнений в онтогенезе» [3]. Проект был одобрен локальным этическим комитетом [2]. Все лица подписали информированное согласие на участие в исследовании.
Материалы и методы
В качестве материала для проведения молекулярно-генетического исследования на носительство полиморфных вариантов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма были использованы образцы ДНК 1306 подростков (580 мальчиков и 726 девочек) в возрасте 15-16 лет, отобранных методом случайной выборки. Кроме того, обследовано 29 семей подростков с высоким тромбогенным риском.
Определение аллельных вариантов генов осуществлялось в группе фармакогеномики Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск). В основе анализа лежал метод полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (Real-Time PCR) с использованием конкурирующих TagMan-зондов. Проведено генетическое исследование семи протромботических полиморфных маркеров генов-кандидатов: фактора II протромбина (G20210^); фактора V Лейден (Arg506Gln); фактора VII свертывания крови (Arg353Gln); фактора XIII свертывания крови (Val134Leu); фибриногена G (-455)A; тромбоцитарного рецептора фибриногена -ITGB3-b интегрин (71565С) GPIIIa; ингибитора активатора плазминогена PAI-l 4G (-675)5G и четырех полиморфных вариантов генов, ассоциированных
Высокий уровень ожидаемой гетерозиготности по полиморфным вариантам генов факторов свертывания крови был определен нами лишь для трех генов: G (-455)A гена FGB (0,343); G226A гена FXIII (0,362); 4G (-675)5G гена PAI-1 (0,492).
Установлено, что наблюдаемое распределение генотипов С677Т и А1298С гена MTHFR согласуется с ожидаемыми частотами распределения. Выявлено, что фактическое распределение Htzg (AG) гена MTR статистически значимо снижено по сравнению с теоретическим, а наблюдаемая частота Hmzg (GG) гена MTR достоверно выше, чем ожидаемая. Наблюдаемое распределение Htzg (AG) A66G генаMTRR также существенно снижено по сравнению с ожидаемым, и наоборот, фактическая частота генотипа Hmzg (GG) гена MTRR была достоверно выше теоретической.
Отмечен высокий уровень теоретической гетеро-зиготности по полиморфным вариантам генов фолат-ного метаболизма (от 0,332 до 0,492), что является показателем значительного разнообразия популяции, близкого к максимальному (0,5). В связи с этим можно полагать, что гетерозиготность обусловливает высокую жизнеспособность и приспособляемость растущего организма к изменяющимся условиям среды и имеет большое значение для экологической пластичности популяции.
Частоты встречаемости генотипов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма с учетом половых различий представлены в табл. 2.
Анализ показал, что гетерозиготный полиморфный вариант гена FV Лейден встречался у 3,2% подростков Барнаула. Полученные нами данные по распространенности гетерозиготного полиморфизма G1691A гена FV соответствуют европейским, так, данный полиморфный вариант встречается у 3-5% европейцев и у 2-15% кавказоидов [4]. Многими исследователями установлено, что при носи-тельстве мутантного аллеля А гена FV Лейден риск развития тромбоза возрастает в 3-8 раз, а риск развития инсульта у детей - до 3-5 раз [5, 6, 7]. При чем у европейских детей, перенесших инсульт, лейденская мутация обнаруживалась в 18% случаях, у американских - в 20,2%, у российских - в 6,5% [8, 9].
В нашем исследовании у 2,7% подростков выявлялся гетерозиготный полиморфный вариант гена протромбина. Частота встречаемости гетерозиготной мутации 20210 GA гена FII в общей популяции населения Европы не превышает 1-4%, однако среди населения южных областей Европы она встречается значительно чаще, чем среди населения северных областей [4, 10]. Наличие данного полиморфизма повышает риск венозных тромбозов в 3 раза, рекуррентных тромботических эпизодов в 1,4-12 раз, инфаркта миокарда до 6 раз и является значимым фактором риска инсультов у детей и лиц молодого возраста
[11-13].
Гомозиготных полиморфизмов (минорных аллелей) 20210 AA гена FII, 1691 AA гена FV в нашей работе не обнаружено.
Нами (см. табл. 2) установлены гендерные особенности распределения генотипов у подростков.
с нарушениями фолатного цикла: метилентетраги-дрофолатредуктазы - (MTHFR Ala223Val, С677Т, rs1801133 и MTHFR Е429А, А1298С, rs1801131), В12-зависимой метионинсинтазы (MTR Asp919Gly, A2756G, rs1805087) и метионинсинтазыредуктазы (MTRR Ile22Met, A66G, rs1801394).
Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета программ Statistica for Windows 5.0 (STATSoft). Для проверки гипотезы о нормальном распределении использовали критерий Шапиро-Уилка. Попарное сравнение частот аллелей и генотипических групп в разных популяциях проводили с помощью двустороннего точного критерия Фишера и критерия Пирсона. Соответствие распределения генотипических частот равновесию Харди-Вайнберга проверяли посредством критерия X2, используя при этом онлайн калькулятор (http:// www.oege.org/software/hardy-weiberg.shtml). Обнаружено отклонение от канонического распределения. Состояние генного разнообразия оценивали вычислением индекса D - относительного отклонения наблюдаемой (Ho) гетерозиготности от ожидаемой (He). Различия сравниваемых величин считали статистически значимыми при p < 0,05.
Результаты и обсуждение
Гены-кандидаты предрасположенности к повышенному тромбообразованию были исследованы у 580 (44,4%) мальчиков и 726 (55,6%) девочек. В популяции подростков были рассчитаны частоты аллелей и генотипов изученных полиморфных вариантов генов системы свертывания крови и фолатного метаболизма. Результаты генотипирования показали, что частота минорного аллеля А20210 гена FII (р = 0,025) и минорного аллеля С1565 гена GPIIIa (р = 0,010) в популяции девочек статистически значимо больше по сравнению с мальчиками. Доля минорного аллеля 4G (-675) гена PAI-1 достоверно чаще определялась у мальчиков (р = 0,027), а доля мажорного аллеля 5G (-675) гена PAI-1 с большей частотой выявлялась у девочек (р = 0,044). По остальным частотам аллелей в исследованных полиморфных вариантах генов факторов свертывания крови и фолатного метаболизма статистически значимых различий не наблюдалось.
Распределение частот аллелей и генотипов в изученных генах факторов свертывания крови и фо-латного метаболизма проверено на соответствие равновесию Харди - Вайнберга (табл. 1). Обнаружено отклонение от канонического распределения для частот генотипов A10976G гена FVII (%2 = 9,620; р = 0,002), 4G (-675J5G гена PAI-1 (x2 = 5,177;p = 0,023) и для частот генотипов A2756G гена MTR (%2 = 40,205; р = 0) и A66G гена MTRR (x2 = 63,541; р = 0).
Установлено, что фактическое распределение генотипа 10976 GA гена FVII было существенно уменьшено по сравнению с теоретическим, тогда как, наблюдаемое распределение генотипа 10976 AA гена FVII было увеличено. Напротив, фактическое распределение Htzg (4G/5G) и Hmzg (4G/4G) генотипа 4G (-675)5G гена PAI-1 было значительно повышено по сравнению с теоретическим за счет избытка гетерозигот.
Таблица 1
Распределение полиморфных вариантов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма
в популяции подростков Барнаула
Локус Генотип N.O., % N.E., % x2 d.f. = 1 Частота аллеля Ho±S.E. He±S.E. D
FII G20210A (n = 1306) GG 97,3 97,3 0,241 G = 0,987 Ho = 0,027±0,004 0
GA 2,7 2,7 p = 0,624 A = 0,013 He = 0,027±0,004
AA 0 0
FV G1691A (n = 1306) GG 96,8 96,8 0,349 G = 0,984 Ho = 0,032±0,005 0
GA 3,2 3,2 p = 0,555 A = 0,016 He = 0,032±0,005
AA 0 0
FVII G10976A (n = 280) GG 81,8 80,1 9,620 G = 0,895 Ho = 0,154±0,021 -0,181
GA 15,4 18,8 p = 0,002 A = 0,105 He = 0,188±0,023
AA 2,8 1,1
FXIII G226A (n = 430) GG 59,1 58,2 1,028 G = 0,762 Ho = 0,344±0,021 -0,050
GA 34,4 36,2 p = 0,311 A = 0,237 He = 0,362±0,021
AA 6,5 5,6
FGB G (-455)A (n = 239) GG 62,2 60,9 1,712 G = 0,780 Ho = 0,314±0,030 -0,085
GA 31,4 34,3 p = 0,191 A = 0,220 He = 0,343±0,031
AA 6,4 4,8
GPIIIa T1565C (n = 447) TT 78,7 78,9 0,079 Т = 0,888 Ho = 0,201±0,019 +0,010
Tc 20,1 19,9 p = 0,777 С = 0,112 He = 0,199±0,019
cc 1,2 1,2
PAI-1 4G (-675)5G (n = 1306) 5G/5G 20,6 19,0 5,177 5G = 0,436 Ho = 0,461±0,014 -0,063
4G/5G 46,1 42,2 p = 0,023 4G = 0,564 He = 0,492±0,014
4G/4G 33,3 31,8
MTHFR С677Т (n = 1306) СС 50,5 50,0 0,637 С = 0,707 Ho = 0,405±0,014 -0,022
СТ 40,5 41,4 p = 0,425 T = 0,293 He = 0,414±0,014
ТТ 9,0 8,6
MTHFR А1298С (n = 491) АА 50,8 49,7 1,148 A = 0,705 Ho = 0,395±0,023 -0,050
АС 39,5 41,6 p = 0,284 С = 0,295 He = 0,416±0,023
СС 9,7 8,7
MTR A2756G (n = 405) AA 67,6 62,4 40,205 A = 0,790 Ho = 0,227±0,021 -0,316
AG 22,7 33,2 p = 0 G = 0,210 He = 0,332±0,023
GG 9,7 4,4
MTRR A66G (n = 433) AA 27,9 19,2 63,541 A = 0,431 Ho = 0,303±0,022 -0,384
AG 30,3 46,3 p = 0 G = 0,569 He = 0,492±0,024
GG 41,8 31,5
П р и м е ч ан и е. N.0. - наблюдаемые частоты генотипов; ^Е. - ожидаемые частоты генотипов; критерий х2 оценка соответствия равновесию Хард - Вайнберга; число степеней свободы; Ho±S.E. и He±S.E. - соответственно наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность с ошибкой; Б - относительное отклонение наблюдаемой гетерозиготности от ожидаемой.
Так, мутация генотипа 20210 GG гена FII с большей частотой определялась у мальчиков-подростков (р = 0,025), гетерозиготная форма этого полиморфизма имела место преимущественно у девочек (р = 0,025). Полиморфизм G1691A гена FV Leiden, мутация G (-455)A гена FGB, полиморфизм 4G (-675)5G гена PAI-1 выявлялись с одинаковой частотой у мальчиков и девочек (р > 0,05).
Генотип 10976 GG фактора VII чаще встречался у девочек (р = 0,037), у мальчиков отмечена большая частота гетерозиготного генотипа 10976 GA гена фактора VII (р = 0,036). Встречаемость полиморфной замены Arg353Gln 10976 ОА в популяциях варьирует от 10 до 20%. Полиморфизм фактора VII может как повышать риск образования тромбозов, так и, наоборот, снижать его. Предполагают, что полиморфизм
Таблица 2
Распределение частот генотипов генов факторов свертывания крови и генов фолатного метаболизма у подростков Барнаула Алтайского края
Ген Генотип Мальчики Девочки Всего Р
БД 20210 ОО 571 (98,4) 700 (96,4) 1271 (97,3) 0,025
20210 ОА 9 (1,6) 26 (3,6) 35 (2,7) 0,025
20210 АА 0 0 0 -
п = 580 п = 726 п = 1306
FV 1691 ОО 561 (96,7) 703 (96,8) 1264 (96,8) 1,000
1691 ОА 19 (3,3) 23 (3,2) 42 (3,2) 1,000
1691 АА 0 0 0 -
п = 580 п = 726 п = 1306
FVП 10976 ОО 78 (75,7) 151 (85,3) 229 (81,8) 0,037
10976 ОА 22 (21,4) 21 (11,4) 43 (15,3) 0,036
10976 АА 3 (2,9) 5 (2,8) 8 (2,9) 1,000
п = 103 п = 177 п = 280
БХШ 226 ОО 90 (60,4) 164 (58,4) 254 (59,1) 0,681
226 ОА 49 (32,9) 99 (35,2) 148 (34,4) 0,597
226 АА 10 (6,7) 18 (6,4) 28 (6,5) 1,000
п = 149 п = 281 п = 430
БОВ (-455) ОО 55 (61,8) 94 (62,7) 149 (62,3) 1,000
(-455) ОА 30 (37,7) 45 (30,0) 75 (31,4) 0,567
(-455) АА 4 (4,5) 11 (7,3) 15 (6,3) 0,422
п = 89 п = 150 п = 239
РА1-1 (-675) 5О5О 115 (19,8) 154 (21,2) 269 (20,6) 0,582
(-675) 4О5О 259 (44,7) 343 (47,3) 602 (46,1) 0,372
(-675) 4О4О 206 (35,5) 229 (31,5) 435 (33,3)0,140
п = 580 п = 726 п = 1306
ОРША 1565 ТТ 104 (86,0) 248 (76,1) 352 (78,7) 0,027
1565 ТС 17 (14,0) 73 (22,4) 90 (20,2) 0,063
1565 СС 0 5 (1,5) 5 (1,1) 0,330
п = 121 п = 326 п = 447
МТНБЯ 677СС 295 (50,9) 364 (50,1) 659 (50,5) 0,469
677 СТ 230 (39,6) 299 (41,2) 529 (40,5) 0,363
677 ТТ 55 (9,5) 63 (8,7) 118 (9,0) 0,845
п = 580 п = 726 п = 1306
МТНБЯ 1298 АА 84 (49,7) 140 (51,5) 224 (50,8) 0,769
1298 АС 63 (37,3) 111 (40,8) 174 (39,5) 0,484
1298 СС 22 (13,0) 21 (7,7) 43 (9,7) 0,072
п = 169 п = 272 п = 491
МТЯ 2756 АА 100 (68,5) 74 (67,2) 274 (67,7) 0,825
2756 АО 35 (24,0) 57 (22,0) 92 (22,7) 0,711
2756 ОО 11 (7,5) 28 (10,8) 39 (9,6) 0,300
п = 146 п = 159 п = 405
МТЯЯ 66 АА 51 (33,1) 70 (25,1) 121 (27,9) 0,093
66 АО 37 (24,0) 94 (33,7) 131 (30,3) 0,038
66 ОО 66 (42,9) 115 (41,2) 181 (41,8) 0,761
п = 154 п = 279 п = 433
П р и м е ч а н и е. В скобках - проценты.
Arg353Gln 10976 GA гена фактора VII может ассоциироваться с повышением артериального давления, понижением уровня фактора VII G10976A на 30% и 2-кратным снижением риска инфаркта миокарда. У новорожденных возможны проявления геморраги-
ческого диатеза, кровотечение из пупочной ранки, желудочно-кишечного тракта [4, 14].
В результате исследования генов фолатного метаболизма выявлено, что 40,5% подростков Барнаула Алтайского края являются гетерозиготными носителями полиморфизма С677Т гена MTHFR. Частота аллеля 677 СТ значительно варьирует в различных популяциях мира. Его наибольшая частота наблюдается в популяциях Мексики (58,6%), Колумбии (48,7%), у европейцев - в пределах 20,3-52,8%, в азиатских популяциях - 8,1-40,3% [15]. Частота аллеля 677 ТТ в Европе варьирует в пределах 7,2-12,1% [16]. Аналогичные исследования в Ростове-на-Дону позволили установить, что 47,9% подростков являются гетерозиготными носителями полиморфизма с677Т гена MTHFR и только у 7,1% обследованных был зафиксирован гомозиготный вариант 677 ТТ [17]. Однако у подростков Барнаула частота минорного аллеля Т 677 гена MTHFR составила 9,0%. Есть данные о том, что в русской популяции (Россия) частота аллеля Т 677 составляет 31,8% [18]. При наличии гомозиготного полиморфизма (минорный аллель) отмечается снижение активности фермента метилентетраги-дрофолатредуктазы до 35%, что сопровождается повышением уровня гомоцистеина в крови, способствует троекратному повышению риска кардиоваскулярных заболеваний в молодом возрасте, является фактором риска инсультов у детей и у лиц молодого возраста, тромбоэмболии, невынашиванию беременности, антенатальной гибели плода, задержки и дефектам внутриутробного развития плода [19-21].
В ходе анализа установлено, что частота гетерозиготного генотипа 1298 АС гена MTHFR у обследованных подростков составила 39,5%, а генотипа 1298СС - 9,7%. Встречаемость данного полиморфизма соответствует показателям распределения в других популяциях мира, достоверные различия выявлены при сравнении с афро-американцами (1298АС - 26,8%; 1298СС - 2,1%, р = 0,013). Гомозиготное носительство мутантного гена снижает активность фермента МТНБЯ А1298С до 60% от нормы, повышает риск развития тромбозов, невынашивания беременности, эмбриональных опухолей [22].
70-,
60-
50-
40-
о 2 п
S ■&
о. о 2
I
со Т
30-
20-
10-
48,3
V\
48,3
10,3
щ
0 0
41,4 37,9
10,5
FV
I I
MTHFR PAI-1
FII
Подростки
2,6
5,3
~Г
18,4
~Г
36,8
0 0 0 0
FV
FII MTHFR РАИ Родители
~г
26,7
6,7
I I
MTHFR PAI-1
FV FII Старшее поколение
Гетерозигота
Гомозигота, редкий аллель
Распределение генетических полиморфизмов в семьях подростков (%). Примечание. * -p < 0,05.
Для полиморфного варианта A66G гена MTRR в проведенном нами исследовании была обнаружена высокая частота генотипа 66GG в популяции подростков (41,8%) по сравнению с частотами других популяций за исключением украинской (35,5%) [15]. По данным литературы, в популяции жителей Африки распространенность аллеля G 66 составляет 10,3%, в европейских популяциях - 29,6%, у испанцев - 7,3% , у евреев Ашкенази - 19,5% [16, 17].
При анализе частоты встречаемости полиморфных вариантов с учетом половых различий определено, что мутация генотипа 66AG генаMTRR с большей частотой фиксировалась у девочек-подростков (p = 0,038). Носительство гомозиготного полиморфизма влечет за собой нарушение метаболизма гомоцисте-ина, повышение его концентрации в крови, способствует развитию пороков плода, в частности дефекта нервной трубки, риску рождения ребенка с синдромом Дауна, репродуктивной патологии [15, 16, 22].
Результаты молекулярно-генетического исследования показали отсутствие искомых мутаций и полиморфных вариантов генов лишь у 74 (5,7%) подростков. Общая частота встречаемости генетических «находок», имеющих отношение к повышению риска тромбоза, составила 94,3%.
Следующим этапом нашего исследования явилось определение носительства протромботических полиморфных вариантов генов-кандидатов в семьях подростков, у которых были выявлены полиморфизмы, предрасполагающие к высокому риску развития тромбоза (полиморфизм FV Лейден, полиморфизм FII, 677 TT MTHFR, 4G4G (-675JPAI-1, ген-генные ассоциации и др.). Исследование было проведено у родственников подростков I и II степени родства. Всего обследовано 85 членов семей, которым была выполнена молекулярно-генетическая диагностика носительства четырех основных тромбогенных полиморфизмов и мутаций.
При анализе частоты встречаемости генетических полиморфизмов в трех поколениях установлено, что полиморфный вариант генотипа 677 ТТ гена MTHFR
с большей частотой определялся у подростков (41,4%), чем у старшего поколения (6,7%) (р = 0,033). Генетический полиморфизм FV Лейден, гетерозиготный вариант 1691 ОА встречался с достоверно значимой частотой у подростков 31,0% (р = 0,018), тогда как в старшем поколении варианта этой мутации обнаружено не было (см. рисунок).
Учитывая полученные результаты, можно констатировать, что полиморфные варианты генов достоверно чаще встречаются в младшем поколении в сравнении с родственниками I и II степени родства, что может быть связано с уже состоявшимися фатальными тромботическими событиями у старшего поколения и с возрастанием генетического «груза» в последующих поколениях.
Таким образом, показано, что частоты минорных аллелей А 20210 гена FII и аллеля С 1565 ОРША статистически значимо чаще определялись в популяции девочек. Напротив, доля аллеля 4О гена РА^1 фиксировалась достоверно чаще у мальчиков. Популяция обследованных подростков Алтайского края характеризуется высокой гетерозиготностью по полиморфным вариантам генов фолатного метаболизма и трем генам факторов свертывания крови: О (-455)А гена FGB, О226А гена FXIII и 4О (-675)5О гена РАМ.
Частоты генотипов фолатного метаболизма в популяции подростков Барнаула отличаются от европейских: наблюдаются высокий процент гомозиготного генотипа 66ОО гена MTRR (41,8%) и частоты минорного аллеля О 66 гена MTRR (56,9%). Полиморфные варианты генов повышенного риска развития тромбоза выявлены у 94,3% подростков. Протромботи-ческие аллельные полиморфизмы достоверно чаще встречаются в младшем поколении в сравнении с родственниками I и II степени родства.
ЛИТЕРАТУРА
■
Момот А.П., Строзенко Л.А., Цывкина Л.П., Ройтман Е.В., Клименко О.В., Сердюк Г.В. и др. Первичная тромбопрофилактика у детей Алтайского края на основе выявления и модификации постоянных и временных факторов тромбогенного риска: методические рекомендации. Барнаул: АГМУ; 2013. Момот А.П., Цывкина Л.П., Тараненко И.А., Мамаев А.Н., Сердюк Г.В., Шахматов И.И. и др. Современные методы распознавания состояния тромботической готовности: Монография. Барнаул: АГМУ; 2011.
Момот А.П., Ройтман Е.В., Елыкомов В.А., Свирин П.В., Ольховский И.А., Жарков П.А. Протокол ведения Всероссийского регистра «Генетические факторы риска тромбоза у жителей, проживающих на территории РФ, клиническое фенотипирова-ние и тромбопрофилактика тромбоэмболических осложнений в онтогенезе». Тромбоз, гемостаз, реология. 2010а; 3: 30-78. Березовский Д.П., Внуков В.В., Корниенко И.В. Молекулярно-генетические основы тромбофилий. Гематология и трансфу-зиология. 2008; 56 (6): 36-41.
Вашукова Е.С., Глотов А.С., Иващенко Т.Э., Зайнулина М.С., Наседкина Т.В., Баранов В.С. Современные подходы к диагностике наследственных форм тромбофилии. Российский педиатрический журнал. 2008; 5: 49-53.
Шевела А.И., Егоров В.А., Севостьянова К.С., Новикова Я.В., Филиппенко М.Л. Флеботромбоз и врожденная тромбофилия. Ангиология и сосудистая хирургия. 2011; 17 (2): 95-9.
7. Young G., Albisetti M., Bonduel M. Impact of inherited thrombophilia on venous thromboembolism in children: a systematic review and meta-analysis of observational studies. Circulation. 2008; 118 (13): 1373-82.
8. Львова О.А., Гусев В.В., Кузнецов Н.Н., Баранов Д.А., Вороши-лина Е.С., Партылова Е.А. Наследственные прокоагулянтные и протромботические нарушения как ведущий этиологический фактор ишемических инсультов у детей раннего возраста. Журнал неврологии и психиатрии. Прил.: Инсульт. 2013; 9: 13-20.
9. Zadro R., Herak D.C.. Inherited prothrombotic risk factors in children with first ischemic stroke. Biochem. Med. (Zagreb). 2012; 22 (3): 298-310.
10. Yang J.Y., Chan A.K. Pediatric thrombophilia. Pediatr. Clin. N. Am. 2013; 60 (6): 1443-62.
11. Aziiar J., Mira X. Factor V Leiden and prothrombin G20210A mutation in young adults with cryptogenic ischemic stroke. Thromb. Haemost. 2004; 91 (5): 1031-4.
12. Жарков П.А., Ройтман Е.В., Свирин П.В., Вдовин В.В., Мали-цына Т.А., Румянцев А.Г. Влияние носительства протромботи-ческих полиморфизмов на риск развития венозного тромбоза у детей. Гематология и трансфузиология. 2012; 57 (4): 27-2.
13. Kenet G., Lutkhoff L.K., Albisetti M., Bernard T., Bonduel M., Brandao L. et al. Impact of thrombophilia on risk of arterial ischemic stroke or cerebral sinonenosus thrombosis in neonates and children: a systematic review and meta-analysis of observational studies. Circulation. 2010; 121 (16): 1838-47.
14. Bernardi F., Marchetti G. Factor VII gene polymorphisms contribute about one third of the factor VII level variation in plasma. Arte-rioscler. Thromb. Vasc. Biol. 1996; 16: 72-6.
15. Гречанина Е.Я., Гусар В.А. Распространенность полиморфизмов С677Т MTHFR и A66G MTRR генов системы фолатного цикла в популяции Восточной Украины. В кн.: Актуальные проблемы акушерства и гинекологии, клинической иммунологии и медицинской генетики. Киев-Луганск; 2010; 61-70.
16. Спиридонова М.Г., Степанов В.А., Пузырев В.П. О роли поли-морфныхвариантовгена5,10-метилентетрагидрофолатредуктазы (MTHFR) в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний. Клиническая медицина. 2001; 2: 10-6.
17. Миктадова А.В., Коваленко К.А., Машкина Е.В., Шкурат Т.П. Полиморфизм генов фолатного цикла и предрасположенность к сердечно-сосудистым заболеваниям. Главный врач юга России. 2011; 4 (27): 16-8.
18. Гречанина Е.Я., Маталон Р., Гречанина Ю.Б., Новикова И.В., Гусар В.А., Холмс Б. и др. Наследственные нарушения обмена серосодержащих аминокислот. Российский вестник перинато-логии и педиатрии. 2009; 1: 53-61.
19. Botto L.D., Yang Q. 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Am. J. Epidemiol. 2000; 151: 862-77.
20. Смирнов И.Е., Нечаева Н.Л., Кучеренко А.Г., Кузенкова Л.М. Факторы риска и маркеры эндотелиальной дисфункции у детей, перенесших острое нарушение мозгового кровообращения. Российский педиатрический журнал. 2014; 1: 9-14.
21. Вайнер А.С., Жечев Д.А., Ширшова Е.А., Кудрявцева Е.А., Ке-чин А.А., Гордеева Л.А. и др. Система фолатного обмена и врожденные пороки развития: эффект материнского генотипа. Мать и Дитя в Кузбассе. 2012; 4 (51): 7-12.
22. Фетисова И.Н., Добролюбов А.С., Липин М.А., Поляков А.В. Полиморфизм генов фолатного обмена и болезни человека. Вестник новых медицинских технологий. 2007; 10 (1): 91-6.
Поступила 20.05.15
REFERENCES
1. Momot A.P., Strozenko L.A., Tsyvkina L.P., Roytman E.V., Kli-menko О. V., Serdyuk G. V. et al. Primary Thromboprofilaktika at Children of Altai Krai on the Basis of Identification and Modification of Constant and Temporary Gactors of Thrombogenny Risk: Methodical Recommendations. Barnaul: AGMU; 2013. (in Russian)
2. Momot A.P., Tsyvkina L.P., Taranenko I.A., Mamaev A.N., Serdyuk G.V., Shakhmatov I.I. et al. Modern Methods of Recognition of a Condition of Thrombotichesky Readiness: Monograph. Barnaul: AGMU; 2011. (in Russian)
3. Momot A.P., Roytman E.V., Elykomov V.A., Svirin P.V., Ol'khovskiy I.A., Zharkov P.A. Protocol of maintaining the Vserossiysky register "Genetic Risk Factors of Thrombosis at a Zhitelea, Living in the Territory of the Russian Federation, Clinical Fenotipirovaniye and a Throm-boprofilactic the Thromboyembolicheskikh of an Oslozhnenia in Ontogenesis". Tromboz, gemostaz, reologiya. 2010a; 3: 30-78. (in Russian)
4. Berezovskiy D.P., Vnukov V.V., Korniyenko I.V. Molecular and ge-
netic bases of trombofiliya. Gematologiya i transfuziologiya. 2008; 56 (6): 36-41. (in Russian)
5. Vashukova E.S., Glotov A.S., Ivashchenko T.E., Zaynulina M. S., Nasedkina T.V., Boranov V.S. Modern approaches to diagnostics of hereditary forms of a trombofiliya. Rossiyskiy pediatricheskiy zhur-nal. 2008; 5: 49-3. (in Russian)
6. Shevela A.I., Egorov V.A., Sevostyanova K.S., Novikova Ya.V., Filippenko M.L. Flebotromboz and congenital trombofiliya. Angi-ologiya i sosudistaya khirurgiya. 2011; 17 (2): 95-9. (in Russian)
7. Young G., Albisetti M., Bonduel M. Impact of inherited thrombophilia on venous thromboembolism in children: a systematic review and meta-analysis of observational studies. Circulation. 2008; 118 (13): 1373-82.
8. L'vova O.A., Gusev V.V., Kuznetsov N.N., Baranov D.A., Voroshilina E.S., Partylova E.A. Hereditary prokoagulyantny and protrombotichesky violations as the leading etiologichesky factor of ischemic strokes at children of early age. Zhurnal nevrologii i psikhiatrii. Pril.: Insult. 2013; 9: 13-20. (in Russian)
9. Zadro R., Herak D.C.. Inherited prothrombotic risk factors in children with first ischemic stroke. Biochem. Med. (Zagreb). 2012; 22 (3): 298-310.
10. Yang J.Y., Chan A.K. Pediatric thrombophilia. Pediatr. Clin. N. Am. 2013; 60 (6): 1443-62.
11. Aziiar J., Mira X. Factor V Leiden and prothrombin G20210A mutation in young adults with cryptogenic ischemic stroke. Thromb. Haemost. 2004; 91 (5): 1031-4.
12. Zharkov P. A., Roytman E.V., Svirin P.V., Vdovin V. V., Malitsyna T.A., Rumyantsev A.G. Influence of a carriage the protromboticheskikh of polymorphisms on risk of development of venous thrombosis in children. Gematologiya i transfuziologiya. 2012; 57 (4): 27-2. (in Russian)
13. Kenet G., Lutkhoff L.K., Albisetti M., Bernard T., Bonduel M., Brandao L. et al. Impact of thrombophilia on risk of arterial ischemic stroke or cerebral sinonenosus thrombosis in neonates and children: a systematic review and meta-analysis of observational studies. Circulation. 2010; 121 (16): 1838-47.
14. Bernardi F., Marchetti G. Factor VII gene polymorphisms contribute about one third of the factor VII level variation in plasma. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 1996; 16: 72-6.
15. Grechanina E.Ya., Gusar V.A. Rasprostranennost of polymorphisms of C677T MTHFR and A66G MTRR of genes of system of a folatny cycle in population of East Ukraine. In: Actual Problems of Obstetrics and Gynecology, Clinical Immunology and Medical Genetics. Kiev-Lugansk; 2010: 61-70. (in Russian)
16. Spiridonova M.G., Stepanov V.A., Puzyrev V.P. About a role of polymorphicoptionsofageneofa5,10-metilentetragidrofolatreduktaza (MTHFR) in pathogenesis of cardiovascular diseases. Klinicheskaya meditsina. 2001; 2: 10-6. (in Russian)
17. Miktadova A.V., Kovalenko K.A., Mashkina E.V., Shkurat T.P. Polymorphism of genes of a folatny cycle and predisposition to cardiovascular diseases. Glavnyy vrach yuga Rossii. 2011; 4 (27): 16-8. (in Russian)
18. Grechanina E.Ya., Matalon R., Grechanina Yu.B., Novikova I.V., Gusar V.A., Kholms B. et al. Hereditary violations of an exchange of sulfur-containing amino acids. Rossiyskiy vestnik perinatologii i pediatrii. 2009; 1: 53-1. (in Russian)
19. Botto L.D., Yang Q. 5,10-Methylenetetrahydrofolate reductase gene variants and congenital anomalies: a HuGE review. Am. J. Epidemiol. 2000; 151: 862-77.
20. Smirnov I.E., Nechaeva N.L., Kucherenko A.G., Kuzenkova L.M. Risk factors and markers of endothelial dysfunction in children who have had an acute violation of cerebral circulation. Rossiyskiy pedi-atricheskiy zhurnal. 2014; 1: 9-14. (in Russian)
21. Vayner A.S., Zhechev D. A., Shirshova E.A., Kudryavtseva E.A., Kechin A.A., Gordeeva L.A. et al. System of a folatny exchange and congenital malformations: effect of a maternal genotype. Mat'i Ditya v Kuzbasse. 2012; 4 (51): 7-12. (in Russian)
22. Fetisova I.N., Dobrolyubov A.S., Lipin M. A., Polyakov A.V. Poli-morfizm of genes of a folatny exchange and illness of the person. Vestnik novykh meditsinskikh tekhnologiy. 2007; 10 (1): 91-6. (in Russian)
Received 20.05.15
Сведения об авторах
Гордеев Виктор Витальевич доктор мед. наук, проф. каф. пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздрава России; Лобанов Юрий Федорович, доктор мед. наук, проф., зав. каф. пропедевтики детских болезней ГБОУ ВПО Алтайский государственный медицинский университет Минздрава России; Момот Андрей Павлович, доктор мед. наук, проф., директор Алтайского филиала ФГБУ «Гематологический научный центр» Минздрава России, e-mail: [email protected]
