CC BY
31
БИОЛОГИЯ ПОЧВ
УДК 631.46
ПСИХРОТОЛЕРАНТНЫЕ АКТИНОМИЦЕТЫ В ПОЧВАХ ТУНДРЫ И СЕВЕРНОЙ ТАЙГИ
М.С. Дуброва, Д.А. Лубсанова, Е.П. Макарова,
П.А. Кожевин, Н.А. Манучарова, Г.М. Зенова
Исследование актиномицетов, адаптированных к условиям низкой температуры, показало, что они присутствуют в холодных почвах тундры и северной тайги в количествах, сопоставимых с мезофильными формами, и в почвенном актиномицетном комплексе составляют более значительную часть, чем мезофилы. Выделенные из холодных почв культуры актиномицетов идентифицированы как представители рода Streptomyces. По температурам, предпочтительным для роста, большинство этих культур относятся к психротолерантным формам. Две из них являются условно психрофильными. Использование метода мультирес-пирометрического тестирования почвенных актиномицетов с разными температурными предпочтениями позволило выявить некоторые специфические особенности исследуемых популяций в отношении спектра потребляемых субстратов.
Ключевые слова: психротолерантные актиномицеты, почва.
Введение
Долгое время считалось, что актиномицеты с трудом адаптируются к низким температурам, и среди них очень мало представителей, способный жить в холодных местах обитания. В последнее время появились сообщения о выделении психротолерант-ных актинобактерий из наземных и водныгх экосистем, арктических песчаных пород, лесных горных и луговыгх почв, фьордов Норвегии, полярных льдов, почв Арктики [4, 7, 10].
Исследования показали, что в северных почвах, в том числе торфяных, где в неблагоприятных для большинства микроорганизмов условиях — насыщенность водой, анаэробиоз, низкие значения рН, дефицит питательных веществ, присутствие токсических соединений, низкие температуры, не превышающие 10° даже в поверхностный слоях в летнее время года, — активно растут и развиваются почвенные психротолерантные актиномицеты. Они образуют мицелий и составляют неотъемлемую часть гидролитического микробного блока, принимающего участие в деградации растительных остатков [1].
Исследования актиномицетов, населяющих почвы и растительные субстраты холодных мест обитания, позволяют не только расширить представление о пределах экологической ниши, занимаемой мице-лиальными бактериями, но и выявить среди холодостойких видов продуценты новых биологически активных веществ.
Цель настоящей работы — исследование места психротолерантных актиномицетов в почвенных актиномицетных комплексах, их температурные границы роста и возможности проявления ими функ-
ционалыной специфичности в холодныгх почвах тундры и тайги.
Объекты и методы исследования
Объекты исследования — тундровые почвы: тор-фяно-криозем типичный (п-ов Ямал), криозем гру-богумусный глееватый (близ г. Воркуты), глее-сла-боподзолистая северной тайги (в районе г. Надыма). Почвы холодные, промерзающие, на глубине 10 см в них отмечены отрицателыные среднегодовые температуры. Следующие — почвы северной тайги: подзолы гипсовые, петроземы серогумусовые турбиро-ванные (Чугский заказник, Архангелыская обл.), пе-лоземы гумусовые глеевые (Пинежский заповедник, Архангелыская обл.), подзолы железистые (Соловецкие о-ва, Архангелыская обл.). Они характеризуются положителыными среднегодовыми температурами (4—8°) (таблица).
Для выделения и учета актиномицетов исполы-зовали традиционный метод посева разведений почвенных и растителыных суспензий на агаризован-ную среду Гаузе 1. Учитывая температурные границы и оптимумы роста исследуемых мезофилыных и психротолерантных актиномицетов, чашки с посевами инкубировали при температурах 5, 20 и 28°.
Филогенетическое положение выщеленных псих-ротолерантныгх актиномицетов (штаммы 5-4-1 и мох 18) определяли на основании секвенирования гена 16S рРНК. ДНК выщеляли из бактериалыной биомассы с исполызованием набора реактивов Wizard Genomic DNA Purification Kit, технологии Pro-mega (США) согласно рекомендациям производителя с незначителыными модификациями [2]. Для проведения полимеразной цепной реакции и далы-
Характеристика исследуемых образцов
Название почвы, профиль или глубина взятия образца, см Район взятия образца Среднегодовая температура почвы на глубине 20 см Сумма активных температур почвы выше 10° на глубине 20 см
Торфяно-криозем типичный TO-T1-BCg типичная тундра, Центральный Ямал —12°——8° 400°
Криозем грубогумусный глее-ватый TO—T1—A—BG мохово-лишайниково-кустарнич-ковая тундра в районе г. Воркуты —8°——4° 400°—1200°
Глее-слабоподзолистая Ad—AE—Eg—Bg,t,f,h,al (0—10) северная тайга, Надымский р-н Ямало-Ненецкого автономного округа, окрестности г. Надыма —8°——4° 400°—1200°
Подзолы гипсовые, петроземы серогумусовые турбированные (0—5) северная тайга, Чугский заповедник, Архангельская обл. 4°—8° 1200°—2000°
Пелоземы гумусовые глеевые (0—5) северная тайга, Пинежский заповедник, Архангельская обл. 0°—8° нет данных
Подзол иллювиально-желези-стый (лесные подстилки) северная тайга, Большой Соловецкий о-в 4°—8° 1200°—2000°
Торфяная олиготрофная ТО—ТТ (0—10) южная тайга, Западнодвинский р-н, Тверская обл. 4°—8° 1200°—2000°
нейшего секвенирования ПЦР-фрагментов гена 16S рРНК использовали универсальную праймерную систему [6, 8]. Полноразмерную копию гена получали на приборе Mastercycler personal («Eppendorf» 11F, Германия) с использованием праймеров: 11F 5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3' 1492R 5 -TAC-GGYTACCTTGTTACGACTT-3', где М = С или A, Y = С или Т.
Объем амплификационной смеси составлял 50 мкл и имел следующий состав: 1 — буфер ДНК полимеразы BioTaq (17 мМ (NH4)2SÜ4, 67 мМ трис-HCl, рН 8,8, 2 мМ MgCl2); 12,5 нмоль каждого из dNTP, 50 нг ДНК-матрицы; 5 пмоль соответствующих праймеров (11F и 1492R), 3 ед. ДНК полимеразы BioTaq («Диалат» ЛТД, Россия).
Температурно-временной профиль ПЦР был следующим: первый цикл — 94° — 9 мин., 55° — 1 мин., 72° — 2 мин.; последующие 30 циклов — 94° — 1 мин., 55° — 1 мин., 72° — 2 мин.; завершающий цикл — 72° — 7 мин.
Первичный анализ сходства нуклеотидных последовательностей гена 16S рРНК изучаемого штамма был проведен с помощью программы BLAST. Построение бескорневых филогенетических деревьев исследуемых актиномицетов производили с помощью методов, реализованных в пакете программ MEGA.
Оптимальные и ограничительные для роста культур стрептомицетов температуры определяли по величине радиальной скорости роста колоний на плотной питательной среде Гаузе 1 при температурах 5, 8, 10, 15, 20, 28 и 37°. Расчет радиальной скорости роста колоний проводили по формуле
K = (¿2 - dO/fe - t1),
r#e di h dj — ^HaMeTp KonoHHH (mm) b HananbHMH h KOHe^HMH MOMeHTM H3MepeHHa cooTBeTCTBeHHo; ty h ?2 — BpeMH (cyT.) Ha^anbHoro h KOHe^Horo H3MepeHHa. H3MepeHHH npOBO^HnH b 20-KpaTHOH noBTOpHOCTH.
^na Ha6nro#eHHH 3a npopacTaHHeM cnop h ^epeHnHanHen MHnenHa b ycnoBHax hh3koh TeMne-paiypM Hcnonb3OBaHM TpH mTaMMa ncHxpOTonepaHT-hmx cTpenTOMHneTOB, #Ba H3 hhx (S. beijiangensis mT. 5-4-1 h S. wedmorensis mT. H-5-2) BbroeneHM H3 TyH^pOBMx no^B npH 5°, a miaMM S. parvus mT. mox 18 — H3 Mxa npH TeMnepaType 20°. nonynanHH KynbTHBHpOBanHcb Ha arapH3OBaHHOH cpe^e Tayje 1 npH 5° b Te^eHHe 21 cyT.
OyHKnHOHanbHMH noTeHnHan ncHxpOTonepaHT-hoh nonynanHH aKTHHOMHneTOB Hccne^OBanH c no-mo^bk MeTO^a MynbTHpecnHpOMeTpmecKoro TecTHpo-BaHHa (MPT), ocHOBaHHoro Ha aHanH3e noKa3aieneH №ixaHHH coo6mecTBa HnH nonynanHH Ha pa3HMx pe-cypcax [5]. HcnOnb3OBanH MO^H^HnHpOBaHHMH Me-to^ MPT [3], b kotopom #na noceBa aKTHHOMHneTOB npHMeHaKTca cnenHanbHMe TecT-nnaHmeTM (24-ny-HO^HMe nnaHmeTM NUNC, «Denmark»). B Kax^yro meHKy BHocHnH no 0,5 Mn cycneH3HH cnop h MHnenHa aKTHHOMHneia c bmcokoh nonynanHOHHOH nnoT-hoctbk (He MeHee 109 KOE/Mn) h o^hh h3 Tpex pe-cypcoB: rHcTH^HH, MaHHHTon, caxapO3y (KOHnempanHa 35 Mr/Mn). B Ka^ecTBe KOHTpona 6panH ^HcTHnnHpo-BaHHyro BO^y. Heo6xo^HMyro repMeTH3anHK o6ecne-HHBanH npH ^ociaTOHHOH TonmHHe cnoa arapa (npH-6nH3HTenbHO 2—3 mm). nnaHmeTM HHKy6HpOBanH npH 28° b Te^eHHe Tpex cyT. O KonmecTBe yrneKHc-noro ra3a, o6pa3OBaBmeroca b a^eHKax, cy^HnH no H3MeHeHHK onimecKoH nnoTHocTH HH^HKaropHoro rena b KpbimKe nnaHmeTM. HHTeHcHBHocTb OKpacKH HH^HKaTOpHoro rena oneHHBanH c noMomtro KonopH-
метрических измерений по специальной программе. Анализ данных, полученных при сканировании крышек с индикаторным гелем, производили методом многомерной математической статистики (STATGRAPHICS Plus 5.1).
Результаты и их обсуждение
Численность психротолерантных актиномицетов в исследуемых почвах сопоставима с количеством мезофильных форм (тысячи и десятки тысяч КОЕ/г субстрата). Психротолерантные актиномицеты составляют приблизительно половину актино-мицетного комплекса.
Особое место среди них занимают комплексы мицелиальных бактерий пелоземов гумусовых глееватых на территории Пинежского заповедника Архангельской обл. Эти почвы расположены в карстовом ландшафте, где за счет перепадов рельефа образуются крупные замкнутые понижения, в которых после зимы застаивается холодный воздух и не тает снег под затененными склонами. Важным фактором формирования здесь низких температур является поток холодного воздуха из трещин, связанных с карстовыми пещерами. В результате в летний период температура почвы на дне карстовой воронки на глубине 10 см не превышает 4°. Почвенный профиль пелозема имеет мощность 3—5 см и состоит из верхнего горизонта подстилки, гумусового и нижнего оглеенного горизонтов. Низкие температуры этих почв способствуют развитию в них психротолерантных актиномицетов в количестве десятков тысяч и сотен тысяч КОЕ/г субстра-
igN I
6г
5 -
4 -
3 -
2 -
1 -
0 -
12 3 4
Образцы почвы
IgN II
1 2 3 4 5
Образцы подстилок
Рис. 1. Численность психротолерантных актиномицетов, выделенных из пелоземов гумусовых глееватых (I, 1—4 — отобраны методом случайных проб) и лесных подстилок подзолов иллюви-ально-железистых (II, 1, 2 — кедровый лес, 3 — сосняк, 4 — ельник, 5 — лиственничные посадки) при 5° (незаштрихованные столбики), 20° (заштрихованные), и мезофильных актиномицетов, выделенных из этих почв при 28° (черные столбики)
та (рис. 1, I). Доля этих актиномицетов в комплексе превышает долю мезофильных форм. Значительное количество (сотни тысяч КОЕ/г субстрата) психротолерантных форм, часто превышающее количество мезофильных, выявлено в лесных подстилках подзолов железистых Большого Соловецкого острова (рис. 1, II). Психротолерантные актиномицеты составляют значительную часть актиномицетного комплекса (а иногда и целиком комплекс) в лесных подстилках этих почв.
В результате проведенных исследований выделены культуры актиномицетов. По фенотипиче-ским признакам установлено таксономическое положение выделенных штаммов. Все они отнесены к разным видам рода Streptomyces. Для штаммов 5-4-1 и мох 18 проведено определение фенотипиче-ских признаков и секвенирование генов 16S рРНК и показано сходство штамма 5-4 с новым видом психротолерантного стрептомицета S. beijiangensis, выделенного из почв Китая [9], а штамма мох 18 — с S. parvus (рис. 2).
С использованием расчета радиальной скорости роста колоний стрептомицетов установлены температурные границы их роста. Выявлено, что температурный диапазон роста стрептомицетов, выделенных из почв при 5°, 20° и 28°, различен (рис. 3). Мезофильный стрептомицет S. tenebrarius шт. 3 А, выделенный при 28°, растет в диапазоне температур от 12° до 45°, оптимум роста отмечен при 37°. Психротолерантные стрептомицеты S. wedmorensis шт. Н-5-2, S. xanthochromogenes шт. Н-5-1, S. parvus шт. мох 18, S. helvaticus шт. 8-5-3, шт. 8-5-2, S. caeruleus шт. H-5-4, выделенные из почвы при 5° или 20°, растут в диапазоне температур от 5° до 37°. Максимальная величина радиальной скорости роста колоний отмечена при 20°. S. beijiangensis шт. 5-4-1 и S. aburaviensis шт. H-5-6, выделенные при 5° из почвы, имеют диапазон роста от 0 до 28°. Оптимум роста отмечен у этих культур при 5°, по классификации психрофильных актиномицетов [1] их можно отнести к умеренным почвенным псих-рофильным стрептомицетам. Понятие «умеренные почвенные актиномицеты» вводится на основании положения о том, что почва состоит из множества микрозон, температурные границы которых значительно варьируют. Адаптация актиномицетов к жизни в почве способствует расширению границ роста психрофильных бактерий в ней по сравнению с температурными границами роста этих бактерий в гомогенных субстратах с постоянно низкими температурами, например на дне моря.
Наблюдение за развитием колоний психрофиль-ного актиномицета на плотной питательной среде в условиях низкой температуры (5°) показало, что исследуемый штамм растет медленно, образуя воздушный мицелий только к 21-м сут. роста. Спорообразование отмечено к 30-м сут. роста.
В процессе сравнительного исследования функционального потенциала психротолерантной и ме-
61
с
89
91
99
-Streptomyces luridiscabiei MR 025155 Streptomyces griseus EF571001
Streptomyces globosus EF371433
98
Г
lStt
Streptomyces caviscabies AF112160 Streptomyces setonii D63872 Streptomyces atratus DQ026638 treptomyces sanglieri AB249945
99IStreptomyces phaeochromogenes EU594476 ~~I Streptomyces zaomyceticus EF063456
94
40
Streptomyces drozdowiczii AM921646
_99j Streptomyces rectiviolaceus DQ026660
I—Streptomyces viridocyaneus AF513223
-Streptomyces tauricus EU594473
-Streptomyces beijiangensis AF385681
I 5-4-1
1Streptomyces beijiangensis EU 196526
0,002
23
II
100
100 100
15
21
100
36
- Streptomyces luridiscabiei S63
- Streptomyces griseus operon rmD gene
- Streptomyces baarnensis NRRL B-1902 -Streptomyces sindenensis NBRC 3399 -Streptomyces fiavogriseus CBS 101.34T
- Streptomyces griseus 52-1 -Streptomyces badius NRRL B-2567 ■ Streptomyces fimicarius ISP 5322
- Streptomyces fiavofuscus NRRL B-2594
- мох 18
- Streptomyces parvus 3151
- Streptomyces setonii
- Streptomyces caviscabies ATCC51928 -Streptomyces sp. ME02-6979 -Streptomyces sp. ID01-15b -Streptomyces sp. ME02-6979.5a
0,002
Рис. 2. Филогенетическое положение штаммов актиномицетов, выделенных из тундровых почв: I — Streptomyces beijiangensis шт. 5-4-1; II — S. parvus шт. мох 18
Рис. 3. Зависимость радиальной скорости роста (Кг) колоний психротолерантных актиномицетов, выделенных из почв тундры и северной тайги, от температуры: 1 — Streptomyces beijiangensis, 2 — S. aburaviensis, 3 — S. wedmorensis, 4 — S. xantochromogenes, 5 — S. parvus, 6 — S. helvaticus, 7 — S. caeruleus, 8 — S. helva-ticus, 9 — S. tenebrarius
зофильной популяции стрептомицетов, выделенных из почв тундры и тайги, проведенного методом мультиреспирометрического тестирования (МРТ), все объекты были разделены на две условные температурные группы: «группа 1» — психротолеранты (объекты № 1, 2, 3, 4, 5, 6); «группа 2» — мезофи-лы (объекты № 10, 11, 12). В качестве независимых переменных были выбраны показатели потребления актиномицетами гистидина, маннита и сахарозы (аргументы обозначены соответственно hyst, man и sucrose).
Были выявлены две дискриминантные функции, которые в нестандартизованном виде (для натуральных значений признаков) имеют следующий вид:
F1 = — 0,0429827 • hyst + + 4,50919 • man + 2,31626 • sucrose,
F2 = 1,35578 • hyst + + 4,75545 • man - 3,64394 • sucrose.
Рис. 4. Диаграмма рассеивания объектов на плоскости двух дискриминантных функций
На диаграмме рассеивания объектов на плоскости первыгх двух дискриминантныгх функций представлено расположение объектов и центроидов вы-деленны1х групп (рис. 4). Центроид представляет собой центр области нахождения группы.
Судя по диаграмме рассеивания и координатам центроидов, можно утверждать, что исследуемые объекты имеют частичные пересечения в пространстве дискриминантныгх функций. Центроиды групп псих-ротолерантов и мезофилов находятся близко друг к другу, области их частично перекрываются. Объект № 3 из группы психротолерантов располагается отдельно от членов своей группы. Это культура Ье-у1ащет1з шт. 5-4-1, которую считаем умеренным психрофилом. Диапазон ее роста 0°—28° с оптимумом 5°. Данный объект образует самостоятельную, четко выраженную группировку, не пересекающуюся с объектами № 1 и № 2.
Температура проведения опыта (инкубация планшет) — 28°, что приблизительно соответствует оптимуму роста группы мезофилов. Оптимальные температуры роста психротолерантов расположены соответственно ниже 28°. Поскольку в данном случае тестирование объектов проводилось только при температуре 28°, т.е. при температуре, близкой к оптимальной именно для мезофилов, можно бышо ожидать относительно высокие показатели активности именно у мезофильных актиномицетов. Действительно, эти популяции проявляли достаточно выраженную активность. Вместе с тем оказалось, что еще более высокие уровни активности зарегистрированы в случае с психротолерантыми популяциями, причем гиперактивностью, особенно в потреблении
маннитола, отличается объект № 3 — психротоле-рант, имеющий зону оптимального роста, лежащую в области более низких температур по сравнению с другими объектами группы психротолерантов. Этот результат представляется весьма неожиданным и (в случае его подтверждения в дополнительных исследованиях) может представлять интерес для прогнозирования активности микроорганизмов при изменении значений температурного диапазона в моделях и сценариях глобального потепления.
Таким образом, мультиреспирометрическое тестирование почвенные актиномицетов (9 популяций) с отличными друг от друга предпочтениями по фактору температуры позволило вышвить некоторые функциональные особенности. Дискриминант-ный анализ исследуемого множества популяций позволил решить диагностическую задачу определения психротолерантных и мезофильных актиномицетов в 83% случаев с помощью двух дискриминантных функций. Условно психрофильный акти-номицет (объект № 3) в рассматриваемом пространстве экониши представляется самостоятельным объектом на фоне популяций других групп. Можно предположить, что экониши почвенных психротолерантных и мезофильных актиномицетов расходятся не только по фактору температуры, но и по другим измерениям, отражающим спектры потребляемых ресурсов.
Итак, исследование актиномицетов, адаптированные к условиям низкой температуры, доминирующей в холодных почвах тундры и северной тайги, показало, что они присутствуют в почвах в количествах, сопоставимых с мезофильными формами, и часто в почвенном актиномицетном комплексе составляют более значительную долю, чем мезофилы. Выделенные из холодных почв культуры актиномицетов являются представителями рода Streptomyces. По температурам, предпочтительным для роста актиномицетов, выделенным из почв тундры и тайги, большинство культур относится к психротоле-рантным формам. Две культуры являются умеренно психрофильными. Метод мультиреспирометрического тестирования почвенных актиномицетов с разными темпратурными предпочтениями позволил выявить некоторые специфические особенности исследуемых популяций в отношении спектра потребляемые субстратов. Очевидно, популяции психротолерантных и мезофильных актиномицетов отличаются не только по температурным предпочтениям, но и по физиологическим показателям.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Зенова Г.М, Дуброва М.С., Звягинцев Д.Г. Структурно-функциональные особенности комплексов почвенных психротолерантных актиномицетов // Почвоведение. 2010. Т. 43, № 4.
2. Манучарова Н.А. Молекулярно-биологические аспекты исследований в экологии и микробиологии. М., 2010.
3. Марченко С.А., Панкратов Т.А.,Горленко М.В., Ко-жевин П.А. Мулытисубстратное тестирование природных микробных сообществ в почве // Вестн. Моск. ун-та. Сер. 17. Почвоведение. 2005. № 2.
4. Bredhold H., Galatenko O.A., Tngelhardt K. et al. Rare actinomycete bacteria from the shallow water sedi-
ments of the Trondhaim fjord, Norway isolation, diversity and biological activity // Environ. Microbiol. 2007. Vol. 9. S. 2756—22764.
5. Campbell C.D., Chapman S.J., Cameron C.M. et al. A rapid microtiter plate method to measure carbon dioxide evolved from carbon substrate amendments so as to determine the physiological profiles of soil microbial communities by using whole soil // Appl. Environ. Microbiol. 2003. Vol. 69, N 6. P. 3593—3599.
6. Edwards U., Rogall T., Bloeker H. et al. Isolated and direct complete nucleotide determination of entire genes, characterization of gene coding for 16 S ribosomal RNA // Nucl. Acids Res. 1989. Vol. 17. P. 7843—7853.
7. Jiang C., Xu L. Actinomycete diversity in unusual habitats // Actinomycetes. 1993. Vol. 4. N 2.
8. Lane D.J. 16S/23S rRNA sequencing // Nucleic Acid Techniques in Bacterial systematic / E. Stackebrandt, M. Good-fellow (Eds.). Chichester. 1991.
9. Li W-J., Zhang L-P., Xu P. et al. Streptomyces bei-jiangensis sp. nov., a psychrotolerant actinomycete isolated from soil in China // Inter. J. System. Evolution. Microbiol. 2002. Vol. 52. P. 1695—1699.
10. Prada P. de, Loveland-Curtze J., Brenchley J.E. Production of two extracellular alkaline phosphataces by a psychrophilic Arthrobacter strain. // Appl. Environ. Microbiol. Vol. 62. P. 3732—3738.
nociynHna b pe^aKUHM 21.12.2010
PSYCHROTOLERANT ACTINOMYCETES IN SOILS
OF TUNDRA AND NORTH TAIGA
M.S. Dubrova, D.A. Lubsanova, E.P. Makarova,
P.A. Kozhevin, N.A. Manucharova, G.M. Zenova
The actinomycetes adapted to conditions under low temperatures in cold soils of tundra and north taiga are presented in quantities comparable with mesophylic form and composed the largest part of actinomycetes complex. Among psychrotolerant actinomycetes are psychrophylic forms. All actinomycetes isolated from cold soils are identificated as Streptomyces. Specific properties of investigates populations are discovered by multirespirometrical testing.
Key words: psychrotolerant actinomycetes, soil.
Сведения об авторах. Дуброва Мария Сергеевна, аспирант 1-го года обучения каф. биологии почв. Лубсанова Дарья Алексеевна, студентка каф. биологии почв. Макарова Екатерина Павловна, аспирант 1-го года обучения каф. физики и мелиорации почв. Кожевин Петр Александрович, докт. биол. наук, вед. науч. сотр. каф. биологии почв; тел.: (495)939-35-98, e-mail: [email protected]. Манучарова Наталия Александровна, канд. биол. наук, доцент каф. биологии почв; тел.: (495)939-34-05. Зенова Галина Михайловна, докт. биол. наук, проф. каф. биологии почв; e-mail: [email protected]
