CC BY
46
лей тонкой кишки, однако не влияло на индукцию аденокарцином желудка как у интактных, так и у ва-готомированных крыс. Результаты наших исследований, данные других авторов показывают, что защитная роль каротиноидов наиболее вероятна в отношении плоскоклеточной малигнизации и свидетельствуют, что последние, подобно другим антиоксидантам [18], могут оказывать различное действие (промотирующее и ингибирующее) на химический канцерогенез. Все вышеизложенное позволяет нам поддержать точку зрения [26], согласно которой, решение вопроса о практическом использовании того или иного каротинсодержащего препарата для профилактики рака среди населения возможно только после проведения тщательных исследований и получения данных о его эффективности в отношении опухолей различной локализации, а также гистогенеза и безопасности.
© Коллектив авторов,1994 УДК 616.006:615.277.3
ЕМ. Трещалина, А.Дж. Чарлсон, В. А. Шорланд,
Л.А. Седакова, ГА. Фирсова
ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСНОГО СОЕДИНЕНИЯ ПАЛЛАДИЯ (И)
С Ь-СЕРИНОМ
НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, Школа химии, Мекьюревский университет, Сидней, Австралия
В последнее время внимание онкологов привлекают малотоксичные соединения с противоопухолевыми свойствами, которые можно использовать в онкологии в качестве адаптогенов, для адъювантной и иммунотерапии, для химио- и радиомодификации. Это так называемые модификаторы биологических реакций (МБР) онкологического профиля. Среди комплексных соединений металлов с природными Ь-ами-нокислотами также есть соединения, которые проявляют свойства МБР с противоопухолевым эффектом. Известны относительно малотоксичные смешанные аминокислотные комплексы меди (II), способные модифицировать противоопухолевое и токсическое действие ксенобиотиков, механизм действия которых связан с прямым ингибированием синтеза ДНК [2, 4—7]. Эти свойства наиболее выражены у
16. Domellof L, Sweden U., Eriksson S. et al. // Amer. J. Surg. — 1981. - Vol. 142. - P. 551—554.
17. Epstein J.H. // Photochem. Photobiol. — 1977. — Vol. 25. — P. 211—213.
18. Ito N., Hirose М., Fukushima S. et al. / / Toxicol. Path. — 1986. - Vol. 14, N 3. - P. 315-323.
19. James E. Gastric carcinogenesis: Proc. 6th Ann. Symp. in Europ. Organiz. Coop. Cancer Prevent. Stud. — London, 7—8 March, 1988 - P. 3-17.
20. Junghanns K., Seufert R., Gerstenbergk L., Ivancovic S. // Wld. J. Surg. - 1979. - Vol. 3, N 4. - P. 497-500.
21. Kowalewski K. // Canad. J. Surg. — 1973. — N 16. — P. 210.
22. McKay A.F., Wright G.F. / / J. Amer. chem. Soc. — 1947. — Vol. 6, N 2. - P. 3028-3030.
23. Mathews-Roth M.M. // Oncology. - 1982. - Vol. 39, N 1. -P. 33-37.
24. Morgenstern L. / / Arch. Surg. — 1968. — N 96. — P. 920.
25. Nagayo T. / / Pathology of tumors in laboratory animals. 1. Tumours of the rat. — Lyon, 1973. — Pt 1. — P. 101—118.
26. Normal I., Krinsky Ph. D. / / Preventive med. — 1989. — N 18. — P. 592-602.
27. Rumpf P., Schacht U., Palomba P., Kremerk K.Z. / / Gastroenterology. — 1978. — Vol. 16, N 2. — P. 89—94.
28. Santamaria L., Bianchi A., Arnaboldi A., Andreoni L. / / Med. biol. Environm. - 1981. - Vol. 9. - P. 113-120.
29. Santamaria L., Bianchi A., Andreoni L. et al. / / Med. biol. Environm. - 1984. - Vol. 12, N 1. - P. 533-537.
30. Tatsuta М., Jishi H., Yamamura H. // Arch. Geschwiilst-forsch. - 1988. - Vol. 58, N 5. - P. 305-311.
31. Taylor P.R., Hanley D.C., Filipe М., Mason R.C. Gastric Carcinogenesis: Proc. 6th Ann. Symp. in Europ. Organiz. Coop. Cancer Prevent. Stud. (E.C.P.). — London, 7—8 March, 1988. - P. 29.
32. Tsunemi S., Fujita Y., Nomiyama S. et al. // Jap. J. Cancer Clin. - 1985. - Vol. 31, N 1. - P. 1393-1397.
Поступила 11.05.93 / Submitted 11.05.93
H.M. Treshalina, A.J. Charlson, W.A. Shorland,
L.A. Sedakova, G.A. Firsova
ANTITUMOR ACTIVITY OF A PALLADIUM (II) COMPLEX WITH L-SERINE
Research Institute of Experimental Diagnostics and Therapy of Tumors, Moscow, Russian Federation, School of Chemistry, Macquarte University, Sydney, Australia
A group of low toxic compounds with antitumor activity that can be used in oncology as adaptogens, for adjuvant and immunotherapy, for chemotherapy and radiomodification have recently drawn the attention of the researchers. They are so called modifiers of biological reactions (MBR) for oncological application. Among them there are complexes of metals and natural L-amino acids that exert MBR and antitumor actions. The compounds include rather low toxic mixed amino acid complexes of copper (II) able to modify antitumor and toxic activity of xenobiotics whose mechanism of action is associated with direct inhibition of DNA synthesis [2, 4—7]. These properties are the most pronounced in a mixed amino acid complex of divalent copper (Cu2+) that is ready for clinical trial. This drug
смешанного аминокислотного комплекса двухвалентной меди (Си2), который подготовлен для клинической апробации. В эксперименте этот препарат отобран на плоскоклеточном раке шейки матки мышей, штамм РШМ-5 [1, 4].
Занимаясь поиском и изучением новых МБР для онкологии, мы учитывали, что противоопухолевая активность комплексов металлов с аминокислотами коррелирует с их растворимостью в воде, устойчивостью в растворе и оптической активностью аминокислоты. Наиболее перспективны хорошо растворимые устойчивые комплексы, содержащие Ь-аминокислоты. Субстратная специфичность таких комплексов и способ взаимодействия с биоструктурами в значительной степени определяются металлом-комп-лексообразователем, для которого лиганды выполняют транспортную функцию.
Мы получили новый оригинальный комплекс це-зий-цис-Ь-серинатопалладий, соединение 1, обладающее указанными характеристиками. Это устойчивый анионно-катионный комплекс с природной Ь-аминокислотой, который хорошо растворим в воде и других растворителях. Предварительные испытания показали, что соединение 1 проявляет биологическую активность, индуцируя филаментацию Е. соИ [8], и неактивен в отношении лимфолейкоза Р-388 мышей. Структура и свойства соединения 1 таковы, что предполагают наличие у него свойств МБР онкологического профиля. Поскольку значение палладия для организма неясно, мы провели скрининг нового комплекса как потенциального МБР на противоопухолевую активность, используя два штамма опухолей, чувствительных к МБР различной направленности. Одна опухоль — аденокарцинома молочной железы мышей Са-755 — эффективно выявляет МБР с иммуномодулирующим и радиомодифицирующим действием среди большого числа соединений, содержащих природные компоненты [6]. Другая — плоскоклеточный рак шейки матки, штамм РШМ-5 — выявляет полифункциональные МБР среди аминокислотных комплексов меди. Такая постановка эксперимента преследовала цель не только определить принадлежность нового комплекса к МБР онкологического профиля, но и предположить характер его модифицирующего действия. Результаты этого скрининга представлены в настоящей работе. *
Материалы и методы. Препарат. Цезий-цис-дихлоро-Ь-се-ринатопалладий (1) — субстанция, мелкокристаллический порошок зеленовато-желтого цвета. Получен путем смешивания Ь-се-рина (2,1 г) и тетрахлорпалладата калия (3,2 г) в воде (60 см3), смесь выдерживали 3 ч в кипящей водяной бане. Затем к профильтрованной реакционной смеси был добавлен абсолютный спирт (450 см3) с получением осадка светло-оранжевого цвета в количестве 1,7 г. Продукт был повторно осажден из воды (10 см3) спиртом (40 см3). Кирпично-красную цезиевую соль (1,2 г) осаждали, добавляя избыток цезия хлорида к раствору калиевой соли (1,45 г) в воде (10 см3). Цезиевый комплекс был очищен путем двойной кристаллизации из водного раствора (выход 0,2 г). Аналитическим путем найдено (в %) соответственно: С 8,83; Н 1,55; С1 17,2; N 3,43. Рассчитано для С3Н6С12М03Рс1С5 (в %): С 8,70; Н 1,46; С1 17,1; N 3,38.
has experimentally been screened on murine squamous cell uterine cervix carcinoma strain RShM-5 [1, 4].
When developing and studying new MBR for oncology we took into consideration the antitumor activity of the complexes of metals and amino acids correlated with their solubility in water, stability in solution and optical activity. Well soluble stable complexes containing L-amino acids are the most promising.
Substrate specificity of these complexes and the manner of their interaction with biological structures is to a large degree determined by the complex forming metals with the ligands acting as transport agents.
We have developed an original complex, caesium-cis-L-serinatopalladium, compound 1, that possesses the above mentioned properties. It is a stable anion-cationic complex with a natural L-amino acid, well soluble in water and other solvents. In preliminary studies compound 1 exhibited biological activity by inducing E.coli filamentation [8] and showed no activity against murine lympholeukemia P-388. The structure and properties of compound 1 suggest that the drug may act as an oncological MBR. As the role of palladium in the body is unknown we have conducted screening of the new complex for antitumor activity as a potential MBR using two tumor strains responsive to MBR of various actions. One of the tumors, murine mammary adenocarcinoma Ca-755, is effective in screening of MBR with immunomodifying activity from a large number of compounds containing natural components [6]. The other tumor, murine squamous cell uterine cervix carcinoma strain RShM-5, distinguishes multifunctional MBR among copper amino acid complexes. The experimental set-up was aimed both to confirm the new complex belonging to oncological MBR and to predict the character of its modifying activity. This paper analyses results of the screening.
Material and Methods. Drug. The caesium-cis-dichloro-L-serinatopalladium (1) substance is a fine crystalline greenish yellow powder. The preparation procedure was as follows. A mixture of L-serine (2.1 g) and potassium tetrachloropaladate (II) (3.2 g) in water (60 cm ) was heated 3 h on a boiling water bath. Absolute ethanol (450 cm3) was added to the filtered reaction mixture, and the light orange precipitate (1.7 g) was filltered off. The product was reprecipitated from water (10 cm3) with ethanol (40 cm3). A brick-red caesium salt (1.2 g) precipitated on adding excess caesium chloride to a solution of the potassium salt (1.45 g) in water (10 cm3). The caesium complex was purified by two recrystallizations from water (yield 0.2 g). Anal. Found: C, 8.83; H, 1.55; Cl, 17.2; N, 3.43; Calcd. for C3H6Cl2N03PdCs: C, 8.70;
H, 146; Cl, 17.1; N, 3.38%.
Tumor models. Solid tumors Ca-755 (generation 9) and RShM-5 (generation 5) supplied by the Tumor Strain Laboratory of the CRC RAMS were implanted subcutaneously as suspension of minced tumor cells in 0.5 ml of medium 199 at 50 mg per mouse. C57BL/6 female mice were used for Ca-755 and CBA female mice for RShM-5. The mice (n = 360) were supplied by the Stolbovaya vivarium.
Conditions of therapy and evaluation of response. Compound 1 was dissolved ex temporae in saline solution and administered to test mice at 48 h following implantation of RShM-5 and at 72 h after Ca-755 implantation by intraabdominal route at various doses once or daily for 5 days. The Ca-755-bearing mice were under surveillance till death, the mice
Опухолевые модели. Солидные опухоли Са-755 (9-я генерация) и РШМ-5 (5-я генерация) получали из лаборатории опухолевых штаммов ОНЦ РАМН и прививали подкожно взвесью клеток из размельченной опухоли по 50 мг на мышь в 0,5 мл среды 199. Для Са-755 использовали мышей-самок линии С57ВЬ/ 6, для РШМ-5 — мышей-самок линии СВА. Мышей получали из питомника РАМН "Столбовая" (всего — 360 животных). Условия проведения терапии и оценка эффекта. Соединение 1 растворяли ех гетрогае в изотоническом растворе натрия хлорида и вводили подопытным мышам через 48 ч после прививки РШМ-5 и через 72 ч после прививки Са-755 внутри-брюшинно в различных дозах однократно или ежедневно в течение 5 дней. Наблюдение за мышами с Са-755 продолжали до их гибели, мышей с РШМ-5 забивали эфирным наркозом на 22-е сутки после окончания лечения. Затем мышей вскрывали и визуально оценивали наличие патологических изменений внутренних органов. О токсичности соединения судили по числу мышей без признаков основного заболевания, погибших раньше животных из контрольных групп (без лечения).
Противоопухолевый эффект оценивали по торможению роста опухолей (ТРО) в динамике на 1, 7, 14 и 21-е сутки после окончания терапии в сравнении с контрольными группами (без лечения). В группах было по 6—8 мышей. ТРО рассчитывали как разницу (в %) между средними объемами опухолей в сравниваемых группах. Значимыми считали: ТРО Са-755 более 70% в течение 2 нед (критерий отбора новых МБР с противоопухолевым эффектом) и ТРО РШМ-5 более 90% в течение 2 нед (максимальный эффект Сиг). У мышей с Са-755 прослеживали изменение продолжительности жизни (увеличение или уменьшение, УПЖ) в сравнении с нелечеными животными из групп контроля. УПЖ вычисляли как разницу (в %) между сравниваемыми группами, уменьшение продолжительности жизни обозначали знаком минус. Значимым считали УПЖ не менее 25%. Статистическую обработку результатов проводили с использованием доверительных интервалов средних сравниваемых величин, которые рассчитывали по таблице Р.Б. Стрелкова [3].
Результаты и их обсуждение. Как видно из таблицы, при однократном введении соединение 1 вызывало ТРО Са-755 на 71—72% при дозах 50 и 250 мг/кг, причем в обоих случаях эффект был отсроченный, нарастал во времени и достигал максимума через 2 нед после введения. Наиболее длительный эффект получен при дозе 250 мг/кг, ТРО более 50% сохранялось в течение 3 нед. Увеличение дозы более 250 мг/кг или уменьшение дозы менее 50 мг/кг сопровождалось снижением противоопухолевого эффекта. Продолжительность жизни мышей после однократного введения соединения 1 существенно не изменялась. Однако при дозах 250 мг/кг и более во всех случаях продолжительность жизни мышей была меньше, чем в контроле, хотя гибель, вызванная токсичностью, отсутствовала.
При 5-дневном введении в разовых дозах 25 и 50 мг/кг (курсовые дозы 125 и 250 мг/кг соответственно) соединение 1 было более эффективно, чем при однократном введении. Максимальное ТРО на 83 и 95% при указанных дозах наблюдалось сразу после окончания курса лечения, сохранялось в течение
2 нед на уровне 58 и 79% и сопровождалось УПЖ мышей на 28 и 18% соответственно. При уменьшении или увеличении разовой дозы противоопухолевый эффект снижался, а продолжительность жизни мышей практически не отличалась от таковой в контроле. Гибели мышей с Са-755 от токсичности после
with RShM-5 were sacrificed by ether narcosis on day 22 following treatment. The mouse post mortem examination consisted of visual evaluation of pathological changes of viscerals. Criterion of drug toxicity was death without evidence of the main disease at shorter terms as compared to the controls (untreated mice).
The antitumor effect was assessed by tumor growth inhibition (TGI) on days 1, 7, 14 and 21 following treatment in comparison with untreated controls. Each group consisted of 6—8 mice. TGI was calculated as the difference (%) between the main tumor volumes in groups compared. A Ca-755 TGI of 70% for 2 weeks (screening criterion of new antitumor MBR) and an RShM-5 TGI of 90% for 2 weeks (Cu2 + maximal effect) were considered statistically significant. In the Ca-755-bearing mice we studied changes in life time (increase (LTI) or decrease) as compared to the controls. LTI was calculated as the difference (%) between groups compared, life time decrease was presented in negative values. An LTI of 25% or more was considered statistically significant. The statistical analysis of the results was performed using confidence intervals of mean values as calculated according to R.B. Strelkov’s tables [3].
Results and Discussion. As is seen in the table single administration of compound 1 at 50 and 250 mg/kg induces a 71—72% TGI in Ca-755, the effect being preserved and reaching maximum at 2 weeks following administration in both dosages. The effect was the longest at 250 mg/kg, a TGI of 50% was preserved for
3 weeks. Administration of the drug at doses higher than 250 mg/kg or lower than 50 mg/kg resulted in reduction of the antitumor effect. Single administration of compound 1 induced no considerable changes in mouse life time. However at dosage of 250 mg/kg or more mouse life time was shorter than in the control in all the cases though there was no evidence of death due to toxicity.
The 5 day course at single doses of 25 mg/kg and 50 mg/kg (course doses 125 and 250 mg/kg, respectively) was more effective than single administration of compound 1. Maximum TGI of 83 and 95% were achieved immediately after treatment and preserved for 2 weeks at 58 and 79%, the corresponding LTI being 28 and 18%, respectively. Escalation or reduction of the single doses resulted in decrease in antitumor effect, the mouse life time being about the same as in the control groups. There were no deaths from toxicity of Ca-755-bearing mice after administration of compound 1 at single dosage ranging from 10 to 1000 mg/kg and course dosage 125—1250 mg/kg.
Compound 1 appeared less effective against RShM-5 than against Ca-755. The above-mentioned doses in regimens of 1 and 5 administrations induced maximum TGI of 66—76% depending upon dosage. The effect was stable for 1 week. A TGI of 50% was observed at 2 weeks following treatment in a 5-day course at a single dose of 25 mg/kg only. Deaths of RShM-5-bearing mice from toxicity were detected after 5 administrations of compound 1 at a single dose of 250 mg/kg (course dose 1250 mg/kg). All the mice died on day 1—2 following treatment free from visual pathological changes as discovered post mortem.
Our study shows that the new complex of caesium cis-L-serinatopalladium inhibits growth of two murine solid tumors used in screening of MBR for oncological purposes. It is more effective against adenocarcinoma
Результаты скрининга цезий-цис-Ь-серинатопалладия на солидных опухолях мышей Results of screening of caesium-cis-L-serinatopalladium on solid murine tumors
Штамм Разовая доза, мг/кг Курсовая Схема лече- ТРО на день после лечения, % УПЖ, % Гибель от
опухоли доза, мг/кг ния, дни 1-й 7-й 14-й 21-й токсичности
Са-755 10 50 2—6 57 51 34 — 10 0/16
25 25 2 +82 9 30 +6 -10 0/12
25 125 2—6 83* 78* 58 — 28 0/16
50 50 2 58 58 72 29 7 0/12
50 250 2—6 95 89* 79* — 18 0/16
100 100 2 58 60 66 32 2 0/12
100 500 2—6 +7 36 30 — -11 0/16
250 250 2 56 67 71 51 -10 0/12
250 1250 2—6 +9 5 +32 — -5 0/16
500 500 2 26 42 30 28 -6 0/12
500 1000 2 53 40 34 10 -4 0/12
РШМ-5 RShM-5 25 50 125 250 2—6 2—6 76* 66 62 66 50 49 — — 0/16 0/16
100 500 2—6 72 39 12 — — 0/16
250 250 2 66 +9 0 — — 0/12
250 1250 2—4 — — — — — 16/16
Tumor strain Single dose, mg/kg Course dose, mg/kg Days of treatment 1 7 14 21 Percentage of LTI Deaths from toxicity
Percentage ot tumor growth on day following treatment
Примечание. (+) — стимуляция роста опухоли, (—) — уменьшение продолжительности жизни по сравнению с контролем. Звездочкой обозначены результаты, достоверно отличающиеся от контроля (р<0,05). Гибель от токсичности отмечалась на 1-е и 2-е сутки после третьей инъекции, подопытные и контрольные группы состояли из 6—8 мышей. В таблице представлены средние данные по противоопухолевой активности и суммированные данные по токсичности из двух серий опытов.
N о t е. +, tumor growth stimulation; —, decrease in life time as compared to the control; *, significant difference as compared to the control (p<0.05). Death from toxicity was detected on days 1 and 2 following the 3rd injection, the test and control groups consisted of 6—8 mice. The table presents mean data on antitumor activity and summed-up data on toxicity in two experiment series.
введения соединения 1 в диапазоне разовых доз от 10 до 1000 мг/кг и курсовых доз от 125 до 1250 мг/кг не наблюдалось.
В лечении мышей с РШМ-5 соединение 1 оказалось менее эффективно, чем при Са-755. Вышеуказанные дозы при 1- и 5-кратном введении вызывали максимальное ТРО от 66 до 76% в зависимости от дозы. Эффект сохранялся в течение 1 нед. Через 2 нед слабое ТРО на 50% оставалось лишь после 5-дневного введения разовой дозы 25 мг/кг. Гибель мышей с РШМ-5 от токсичности наступала после 5-кратного введения соединения 1 в разовой дозе 250 мг/кг (курсовая доза 1250 мг/кг). Все мыши погибли на 1—2-е сутки после окончания курса лечения при отсутствии визуальных патологических изменений на вскрытии.
Проведенное исследование показало, что новый комплекс цезий-цис-Ь-серинатопалладий ингибирует рост двух солидных опухолей мышей, отбирающих различные МБР для онкологии. Он более эффективен при аденокарциноме и значительно менее при плоскоклеточном раке мышей, проявляя свое действие в определенном интервале доз (относительно большие по величине дозы и длительное введение). Особенность спектра противоопухолевого действия комплекса предполагает у него скорее иммуномодулирующее или радиомодифицирующее дейст-
and induces much lower response of murine squamous cell carcinoma. The drug produces the antitumor effect as administered in a certain dosage range at rather high doses and in long-term courses. The complex antitumor effect is immunomodulation or radiomodification rather than polifunctional modification. The on-therapy increase in the antitumor effect with time, as well as the relationship of single and course therapeutic and maximal tolerable doses suggests the possibility of cumulation of antitumor effect. We have failed to determine mechanism of death from toxicity due to the absence of visible changes in mouse viscerals resulting from drug administration.
So, caesium-cis-L-serinatopalladium exhibits properties of a low toxic MBR with antitumor activity. It is reasonable to continue the study of the new complex in order to establish its modifying properties in treatment for maligant tumors.
Acknowledgement. The authors thank Mr A.W. Wip-perman, Director of Johnson Matthey Ltd., Kogarah, N.S.W., Australia, for providing palladium metal for the synthesis of the new complex.
ЛИТЕРА ТУРА/REFERENCES
1. Аманджолов Б.С., Ирд EA., Софьина З.П. // Вопр. онкол. — 1972. — Т. 18, № 6. - С. 96-98.
вне, чем полифункциональный тип модификации. Нарастание противоопухолевого эффекта во времени в процессе лечения, а также соотношение величин разовых и курсовых терапевтических и максимально переносимых доз свидетельствуют о возможной кумуляции противоопухолевого эффекта. Отсутствие видимых изменений внутренних органов мышей после применения комплекса не дает возможности предположить механизм гибели вследствие токсичности препарата.
Таким образом, цезий-цис-Ь-серинатопалладий проявляет свойства малотоксичного МБР с противоопухолевым действием. Целесообразно дальнейшее изучение нового комплекса с целью выявления модифицирующих свойств при лечении злокачественных опухолей.
Авторы выражают признательность директору фирмы "1оЬп5оп МаКЬеу ЬкГ', Кх^агаЬ, N.5Ж (Австралия) мистеру А.В. Випперману за предоставление металлического палладия для синтеза нового комплекса.
© А.Ю. Барышников, Т.Н. Заботина, 1994 УДК 616.155.02-007.12-07:616.155.96-097-078.73
А.Ю. Барышников, Т.Н. Заботина
МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА ICO-86 К АНТИГЕНУ CD4 ХЕЛПЕРНЫХ/ИНДУКТОРНЫХ Т-ЛИМФОЦИТОВ
НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей, НИИ клинической онкологии
Циркулирующий пул Т-лимфоцитов крови состоит из нескольких функционально различных субпопуляций. С помощью моноклональных антител (МКА) удалось идентифицировать некоторые из них [4]. Антигены CD4 и CD8 делят Т-лимфоциты на 2 большие группы — CD4 ’ хелперные/индукторные Т-клетки и CD8+ супрессорные/цитотоксические Т-клетки. Антиген CD4 — одноцепочный трансмембранный гликопротеид с мол. массой 59 000 Д; другое название антигена — Т4. МКА анти-С04 специфически реагируют с хелперной/индукторной субпопуляцией Т-клеток. Антиген также присутствует на поверхностной мембране моноцитов. Описана реакция МКА с трансформированными вирусом Эпштейна-Барра лимфобластоидными В-клеточными линиями, миелоидными клеточными линиями, гистиоцитами и микроглиальными клетками. В периферической крови МКА 3hth-CD4 выявляют около 60% Т-клеток [1, 3]. Функция молекулы: рецептор для молекул II класса гистосовместимости и HIV, вызывающего СПИД. Цитоплазматическая часть молекулы CD4 ассоциирована с р56-1ск тирозинкиназой. Предполагают, что молекула участвует в регуляции функции комплекса CD3/TcR. МКА ингибируют антигенную стимуляцию С1)4-положительных Т-клеток.
Цель настоящей работы — получение и характеристика МКА к антигену CD4.
Материалы и методы. В качестве источника МКА использовали асцитическую жидкость мышей-носителей гибридом в разведениях 1:100. В качестве вторых антител при постановке непрямой
2. Богуш ТЛ., Ситдикова С.М., Локшин А. // Бюл. экспер. би-ол. - 1989. - № 1. — С. 43-45.
3. Методы вычисления стандартной ошибки средних арифметических величин с помощью таблиц/Стрелков Р.Б. — Сухуми, 1966.
4. Трещалина Е.М., Коновалова А.Л., Пресное МЛ. и др. // Докл. АН СССР. - 1979. - Т. 248, № 5. -С. 1273-1276.
5. Трещалина Е.М., Коновалова А.Л., Пресное МЛ. и др. // Вестн. АН СССР. - 1986. - № 5. - С. 51-56.
6. Трещалина Е.М., Седакова ЛЛ., Фирсова ГЛ. / / Антибиотики и химиотерапия. — 1990. — Т. 35, № 2. — С. 26—27.
7. Членова Е.Л., Трещалина Е.М., Сыркин А.Б., Переверзева Э.Р. // Новости медицины. — 1985. — № 9—10. — С. 71—88.
8. Charlson A.J., McArdle N.T., Watton Е.С. // Inorganica Chimica Acta. - 1981. - N 56. - P. L35-L36.
Поступила 22.06.92 / Submitted 22.06.92
A. Yu. Baryshnikov, T.N. Zabotina
MONOCLONAL ANTIBODY ICO-86 TO ANTIGEN CD4 OF HELPER/INDUCER T-LYMPHOCYTES
Research Institute of Experimental Diagnostics and Therapy of Tumors, Research Institute of Clinical Oncology
The blood T-lymphocyte circulating pool consists of several subpopulations different in function. Monoclonal antibodies (Mab’s) help to identify some of them [4]. Antigens CD4 and CD8 divide T-lymphocytes into 2 big groups, i.e. CD4+ helper/inducer T-cells and CD8+ suppressor/cytotoxic T-cells. The CD4 antigen is a single-chain transmembrane glycoproteid with molecular weight 59 kDa, otherwise called T4. The Mab anti-CD4 reacts specifically with a helper/inducer subpopulation of T-cells. The antigen is also present on monocyte surface membranes. There are descriptions of the Mab reactions with Epstein-Barr-virus-transformed lymphoblastoid B-cell lines, myeloid cell lines, histiocytes and microglial cells. Peripheral blood anti-CD4 Mab’s detect about 60% of T-cells [1, 3]. Molecule function: a class II histocompatibility and AIDS-inducing HIV molecule receptor. The CD4 molecule cytoplasmic component is associated with p56-lck tyrosinekinase. The molecule is supposed to contribute to regulation of CD3/TcR complex functioning. The Mab inhibits stimulation of CD4-positive T-cells.
The purpose of this investigation was to produce and characterize a Mab to CD4 antigen.
Materials and Methods. Ascitic fluid in 1:100 dilution of hybridoma-bearing mice was used as a source of the Mab. Adsorbed F(ab’)2 fragments derived from FITC-labeled commercial rabbit serum against white mouse immunoglobulins (N.F. Gamaleya Institute of Epidemiology and Microbiology) were used as a second antibody in indirect immunofluorescence (IF) assay. Streptovidin-phycoerythrin conjugates (Beckton Dickinson, Immunotech S.A.)
