CC BY
48
yEQP + PQP + EQP + IQP пролиферативная активность клеток достоверно превышала пролиферативную активность в соответствующих культурах в контроле, и клеточный прирост составил, соответственно, 5,21 (2,5—12,73) и 4,17 [1,6-5,45), р<0,05).
Выводы. Культивирование ММСК в присутствии комбинации ростовых факторов, включающей как минимум VEGF и FGF, для индукции эндотелиальной диф-френцировки, приводит к статистически значимому увеличению экспрессии культурами эндотелиальных маркеров CD31 и CD34 и уменьшению экспрессии маркера ММСК CD90 по сравнению с другими способами культивирования. Культивирование в дифферен-цировочной среде, содержащей комбинацию четырех факторов роста VEGF, FGF, IGF и EGF, позволяет добиться оптимальных результатов с точки зрения клеточного прироста и индукции экспрессии эндотелиальных маркеров.
Г.С. Лобынцева 1, В.А. Шаблий а, М.Д. Кучма 1,
Д.В. Лобынцев 1
Программа криоконсервирования и морфофункциональная характеристика популяции клеток, выделенных из эмбриональной печени
1ООО «Институт клеточной терапии», Киев, Украина 2 Институт молекулярной биологии и генетики НАН Украины, Киев, Украина
G.S. Lobyntseva, V.A. Shabliy, M.D. Kuchma, D.V. Lobyntsev A programme of cryoconservation and morphofunctional characterization of a cell population derived from an embryonic liver
Для разработки программы криоконсервирования гемопоэтических клеток эмбриональной печени использован метод многофакторных экспериментов 23, при выполнении которого варьировали следующие факторы: концентрацию криопротектора, скорость замораживания до температуры кристаллизации и длительность выдержки (адаптации) на этапе кристаллизации образца. Это позволило выявить закономерности взаимодействия параметров криоконсервирования и сформулировать гипотезу об устранении основных механизмов криоповреждения путем варьирования скоростями снижения температуры, концентрацией криопротектора, инициацией процесса кристаллизации и температурными остановками для изменения характера кристаллообразования в замораживаемом объекте. Функцией отклика служила сохранность клеток-предшественниц грануломоноцитопоэза (КОЕ-ГМ).
Как показали результаты экспериментов, область исследованных режимов является оптимальной и позволяет получить сохранность КОЕ-ГМ от 50 до 90%. При устранении влияния неконтролируемых параметров максимальное количество колоний и кластеров (95—98%) после криоконсервирования образуют ге-мопоэтические клетки, замороженные с криопротектором ДМСО (0,4—0,7 моль/л), со скоростью охлаждения 0,5—1,5°С/мин., инициацией кристаллообразования и 10—минутной выдержкой при температуре адаптации — 5—10°С. Этот режим был проверен многократными экспериментами при замораживании кроветворных клеток эмбриональной печени.
В эмбриональной (плодной) печени 6—12-ти недельной гестации кроме кроветворных клеток-предшествен-ниц содержатся мезенхимальные и эндотелиальные клетки, гепатобласты. При длительном культивировании
на различных подложках и средах росли колонии стро-мальных клеток печени (гепатобластов, мезенхимальных и эндотелиальных клеток). Путем иммунофеноти-пирования было установлено, что при культивировании в бессывороточной среде вырастали колонии, состоящие из компактно собранных сферических клеток и гепатобластов. Также наблюдался рост компактных колоний, состоящих только из властных сферических клеток. При культивировании размороженной суспензии печеночных клеток в среде ДМЕМ с 15% фетальной бычьей сыворотки были получены монослой МСК и колонии звездчатых клеток печени. Также было исследовано наличие жизнеспособных эндотелиальных клеток в препарате криоконсервированной фетальной печени человека. При посеве клеток в среду с ростовыми факторами EGF, VEGF на коллагене вырастали колонии эндотелиальных клеток с последующим образованием монослоя.
Таким образом установлено, что разработанная программа позволяет сохранить все клетки-предшественницы, содержащиеся в эмбриональной и плодной печени ранних сроков гестации.
М.О. Мавликеев, А.В. Табанакова, А.А. Трондин,
Г.О. Певнев, Г.Р. Бурганова, И.М. Газизов,
М.С. Калигин, А.А. Гумерова, А.П. Киясов Иммуногистохимическое исследование мышечной ткани в норме и у пациентов с хроническими облитерирующими заболеваниями артерий нижних конечностей после аутотрансплантации стволовых клеток периферической крови
ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет», Казань, Россия [email protected]
М.О. Mavlikeev, A.V.Tabanakova, A.A.Trondin, G.O. Pevnev,
G.R. Burganova, I.M. Gazizov, M.S. Kaligin, A.A. Gumerova,
A.P. Kiasov
Immunohistochemical analysis of normal skeletal muscles and after peripheral blood stem cells transplantation in patients with peripheral arterial disease
Хронические облитерирующие заболевания артерий нижних конечностей (ХОЗАНК) характеризуются прогрессирующей ишемией тканей, устойчивой к традиционному хирургическому и консервативному лечению и ведущей к инвалидизации пациентов с высоким риском ампутации конечностей. Доклиническими исследованиями доказана высокая эффективность клеточной терапии ХОЗАНК. Целью нашего исследования было выявление морфологических изменений в мышечной ткани пациентов с ХОЗАНК до и после аутотрансплантации стволовых клеток периферической крови (СКПК) по сравнению с мышечной тканью здоровых людей. Исследование проведено в 2009—2010 гг. на базе Республиканской Клинической Больницы Минздрава Республики Татарстан и кафедры нормальной анатомии Казанского государственного медицинского университета в рамках Республиканской программы «Внедрение клеточной медицины в Республике Татарстан в 2008 году».
Материал и методы. В исследовании были использованы биопсии пациентов с ХОЗАНК и аутопсийный материал от лиц без хронической артериальной недостаточности нижних конечностей в качестве контроля. Тридцати пациентам с ХОЗАНК была произведена
Клеточная трансплантология и тканевая инженерия Том V, № 3, 2010
