CC BY
101
УДК 543.545.2:663.95:546.562
ПРИМЕНЕНИЕ КАПИЛЛЯРНОГО ЗОННОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ МЕДИ В ЧАЕ
© Л.К. Неудачина , Е.Л. Лебедева, А.О. Кузнецов
Уральский государственный университет им. А.М. Горького, ул. Ленина, 51, Екатеринбург, 620000 (Россия), e-mail: [email protected]
Предложена методика электрофоретического определения меди в чае, основанная на комплексообразовании ионов меди (II) с этилендиаминтетрауксусной кислотой (ЭДТА) и прямом фотометрическом детектировании комплекса, На примере зеленого чая с добавлением женьшеня и плодов сливы оптимизирована процедура подготовки пробы к анализу, Показана возможность определения концентрации ионов меди (II) в готовом напитке, а также общего содержания меди в чае,
Ключевые слова: капиллярный зонный электрофорез, медь, ЭДТА, зелёный чай, женьшень, микроволновое разложение, НИР выполнена при поддержке Министерства образования и науки ерамках ФЦП «Научные и научнопедагогические кадры инновационной России» на 2009-2013 гг (ГКот 23 июля 2009 г. № П278).
Введение
Чай производят из листьев вечнозеленого растения Camellia sinensis (L.) Kuntze. Он является самым распространённым в мире напитком после воды [1, 2]. Чай обладает антиканцерогенным, антивирусным, антибактериальным действием [3-6], снижает уровень глюкозы и холестерина в крови [7], помогает бороться с остеопорозом, укрепляет стенки сосудов и лечит некоторые виды аллергии [8].
В чайных листьях обнаружены многие микроэлементы [9]. В небольших количествах они необходимы для организма человека, но избыток их может оказаться токсичным. Так, например, ионы меди (II) участвуют в окислительно-восстановительных процессах, и нехватка их затрудняет лечение и профилактику воспалений [10]. Избыток же меди приводит к поражению желудочно-кишечного тракта, анемии, гепатиту и другим заболеваниям [11, 12]. Кроме того, присутствие больших количеств меди в напиткахухудшает их вкус [12].
Для определения содержания тяжелых металлов в чае используют атомно-абсорбционную спектроскопию (ААС) [12-14], атомно-эмиссионную спектроскопию с индуктивно связанной плазмой (АЭС-ИСП) [15] или высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) [13]. Каждый из указанных методов имеет свои недостатки. Так, метод ААС не позволяет проводить одновременное определение нескольких элементов, АЭС характеризуется достаточно высокой стоимостью оборудования и единичного анализа, а ВЭЖХ требует проведения экстракции токсичными органическими растворителями.
Капиллярный электрофорез является экономичным и чувствительным методом разделения и определения ионов в растворах благодаря высокой эффективности, быстроте анализа и небольшому расходу реагентов. Однако примеров практического его применения для определения ионов тяжёлых металлов в чае поканемного [16, 17].
Цель настоящей работы - изучение возможности электрофоретического определения ионов тяжёлых металлов, в частности меди (II), в чае в виде комплекса с ЭДТА.
Экспериментальная часть
Объект исследования. Для анализа был выбран зелёный пакетированный чай фирмы «MILFORD» с добавлением корня женьшеня и плодов сливы. Зелёный чай производится при коротком процессе ферментации и сохраняет много полифенольных соединений, белков, крахмала и хлорофилла. Корень женьшеня, из-
* Автор, с которым следует вести переписку,
давна применяющийся в качестве адаптогенного и общетонизирующего средства, содержит гликозиды, пептиды, эфирные масла, витамины. Среди прочих микроэлементов корень женьшеня накапливает и медь [18].
Растворы и реактивы. Растворы хлорида меди (II), тетрабората натрия и ЭДТА готовили растворением навесок соответствующих кристаллогидратов квалификации не ниже «ч.д.а.» в деионизованной воде. Точную концентрацию растворов меди(П) устанавливали методом комплексонометрического титрования [19]. Рабочие растворы готовили разбавлением стандартных.
Методики пробоподготовки чая. Представляет интерес определение как общего содержания меди в чае, так и количества меди, поступающей в организм человека при употреблении напитка. В связи с этим при подготовке пробы к электрофоретическому анализу использовали кислотное разложение и заваривание чая.
1. Заваривание чая проводили в соответствии с инструкцией на упаковке: навеску чая заливали 200 см3 вскипевшей, но немного охлажденной воды и выдерживали в течение 4 мин. После заваривания к полученному настою добавляли навеску ЭДТА и доводили объем раствора до 250,0 см3.
2. Открытое кислотное разложение проводили, нагревая навеску чая с царской водкой на электрической плитке в течение 2 ч. После разложения раствор нейтрализовали гидроксидом натрия до изменения окраски раствора из желтой в светло-коричневую (pH~8), фильтровали через фильтр «красная лента» в мерную колбу вместимостью 250,0 см3, добавляли навеску ЭДТА и доводили деионизованной водой до метки.
3. Закрытое кислотное разложение с использованием микроволнового излучения проводили следующим образом. Навеску чая, взятую на аналитических весах, массой около 0,5 г помещали в тефлоновый сосуд и добавляли 5,0 см3 концентрированной азотной кислоты, 1,0 см3 концентрированной фтороводородной кислоты и 2,0 см3 деионизованной воды. Разложение проводили с использованием системы «MARS 5» (CEM Corporation) в следующих условиях: мощность микроволнового излучения 800 Вт, контроль давления 150 psi, контроль температуры 210 °С, время выхода на режим 20 минут, время выдерживания при заданных условиях 15 мин. Полученный раствор нейтрализовали концентрированным раствором аммиака до рН~8, добавляли навеску ЭДТА массой 0,018б г и доводили объем раствора до 50,0 см3.
Для понижения предела обнаружения использовали концентрирование растворов, полученных после разложения, путем упаривания на электрической плитке до объема 20-25 см3 (при заваривании) или досуха (при кислотном разложении) с последующим растворением в мерной колбе вместимостью 50,0 см3.
Перед анализом все растворы фильтровали через целлюлозно-ацетатный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и центрифугировали на скорости 13000 оборотов в минуту в течение 5 мин.
Методика определения ионов меди (II) методом капиллярного зонного электрофореза. Определение содержания меди (II) проводили методом стандартных добавок. Растворы анализировали на системе капиллярного электрофореза «Капель 105М» (Люмэкс) с немодифицированным кварцевым капилляром общей длиной б0 см, эффективной длиной 50 см и внутренним диаметром 75 мкм. Процедура подготовки капилляра к работе описана в [20]. В качестве ведущего электролита использовали боратный буферный раствор (CNa в O = 0,04 моль/дм3, pH 9,18). Пробу вводили в капилляр гидродинамически при давлении 30 мбар в
течение 5 с. Анализ проводили при следующих параметрах: температура 25 °С, напряжение +20 кВ, длина волны детектирования 190 нм. Концентрацию ионов меди (II) в растворе определяли по графику зависимости площади пика Cu-ЭДТА на электрофореграмме (ЭФГ) от величины стандартной добавки меди. Затем рассчитывали содержание меди в сухом веществе, используя массу навески чая, взятой для анализа.
Методика определения ионов меди (II) методом атомной абсорбции. Измерение аналитического сигнала проводили на атомно-абсорбционном спектрометре Solaar M6 (ThermoElectron) с атомизацией в пламени ацетилен-воздух. Настройки спектрометра: расход ацетилена - 1,0 дм3/мин; число параллельных измерений - 3; время каждого измерения - 4 с; ток лампы - 50%; без фоновой компенсации; длина волны - 324,8 нм.
Обсуждениерезультатов
Непосредственное УФ-детектирование ионов металлов при их электрофоретическом определении затруднено, поскольку они обладают небольшими молярными коэффициентами поглощения в данной области спектра. Для повышения чувствительности и селективности определение ионов металлов обычно осуществляют после связывания их в комплекс с тем или иным реагентом. Нами была разработана методика определения содержания ионов меди (II) в растворах методом капиллярного зонного электрофореза в виде комплекса Cu-ЭДТА [21]. Использование тетраборатного ведущего электролита (pH 9,18) и проведение анализа при положительной полярности источника напряжения позволило селективно определять ио-
ны меди (II) в присутствии ионов других переходных, а также щелочных и щелочноземельных металлов с высокой чувствительностью. Разработанная методика была успешно применена для анализа природной, питьевой и водопроводной воды [21], показана возможность ее использования для определения содержания ионов меди (II) в соках и других напитках [22].
В чае ионы меди (II) могут накапливаться как в период роста куста (аккумуляция из почвы, использование пестицидов), так и в процессе изготовления чая (например, при использовании медных роллеров для скручивания чайных листьев). Максимально допустимое содержание меди в чае нормируется в некоторых странах. Так, в Китае эта величина составляет 60 мкг/г, в Японии - 100 мкг/г, в США - 150 мкг/г [12]. Соответствующих нормативных документов, действующих в России, нами не было найдено.
Определение содержания металлов в напитках представляет собой сложную задачу из-за того, что они могут присутствовать в различных концентрациях, и всегда необходимо учитывать форму их существования в растворе, возможность комплексообразования с компонентами матрицы [16]. В чае наиболее сильным комплексообразующим агентом для тяжелых металлов являются полифенолы. Также могут образовываться комплексы с тиолами, но они обычно присутствуют в меньшем количестве. До 30% меди, находящейся в чайных листьях, прочно связывается с аминокислотами и аминогруппами белков [13]. Таким образом, перед анализом чая на содержание тяжелых металлов обычно требуется проводить разрушение матрицы [16].
Пробоподготовка чая обычно включает в себя либо заваривание чайных листьев в кипящей воде [7,
14, 16, 23], либо кислотное разложение [7, 12, 14, 17, 24], в том числе с использованием микроволнового излучения [15, 23]. В задачи настоящего исследования входило определение как общего количества меди, содержащейся в чайных листьях, так и ее концентрации в приготовленном напитке. Были исследованы три способа подготовки пробы к электрофоретическому анализу: заваривание, открытое кислотное разложение и закрытое кислотное разложение с использованием микроволнового излучения.
Определение содержания ионов меди (II) в заваренном чае позволяет оценить то количество металла, которое попадает в организм человека непосредственно при употреблении напитка. При заваривании одного пакетика чая (массой около 2 г) в объеме воды, соответствующем одной чашке (200 мл), концентрация ионов меди (II) в настое, определенная методом ААС, составила 1-10-6 моль/дм3, что оказалось ниже предела обнаружения электрофоретического метода. На ЭФГ при этом не наблюдаются пики, соответствующие комплексу Си-ЭДТА.
Количественный электрофоретический анализ становится возможным после концентрирования на -стоя упариванием (рис. 1). Результаты параллельных электрофоретических анализов трех проб, подготовленных таким способом, характеризуются хорошей сходимостью (табл. 1). Для проверки правильности предлагаемой методики определение содержания ионов меди (II) проведено методом ААС. Сравнение средних результатов двух серий с использованием /-критерия [25, с. 121] показывает, что методика электрофоретического анализа не несет в себе систематической погрешности (табл. 1). В то же время содержание меди в настое чая даже после концентрирования невелико и сравнимо с пределом определения электрофоретического метода.
Можно предположить, что ионы меди (II) не полностью переходят в раствор из-за образования прочных комплексов с органическими веществами матрицы, и, кроме того, они могут задерживаться бумажным пакетиком. При заваривании чая без бумажного пакетика в небольшом объеме воды (примерно 30 см3) в присутствии комплексона (Сэдта = 10-3 моль/дм3) извлечение меди несколько увеличивается и становится возможным электрофоретическое определение комплекса Си-ЭДТА без концентрирования (рис. 2, табл. 2). Однако полнота извлечения меди при данном способе пробоподготовки также невелика, и в целом он не имеет преимуществ перед обычным завариванием.
Таблица 1. Определение содержания меди в настое чая после упаривания методами КЭФ и ААС
Метод Сер, мкг/г п Я2 1 расч ртабл, а=0,95 /расч /табл, а=0,95
КЭФ ААС 12,2±5,8 11,6±3,1 3 3 5,43 1,25 4,3 19 0,40 2,78
Таблица 2. Определение содержания меди в чае, заваренном в присутствии ЭДТА, методами КЭФ и ААС
Масса навески чая, г КЭФ ААС
ССц-106, моль/дм3 Ссп, мкг/г ССц-106, моль/дм3 Ссп, мкг/г
2,0013 10,5 18,6 9,2 16,3
Рис. 1. ЭФГ заваренного чая после упаривания. Концентрация добавок меди (II): 1) 0; 2) 110-5;
3) 210-5 моль/дм3. СЭдта = 10-3 моль/дм3. Ведущий электролит: Ск в 0? = 0,04 моль/дм3, pH 9,18.
и = +20 кВ, X = 190 нм, /° = 25 °С, ввод пробы гидродинамический, 150 мбарс. «Капель 105М», d = 75 мкм, £общ = 60 см, £эфф = 50 см
Рис. 2. ЭФГ чая, заваренного в присутствии ЭДТА. Концентрация добавок меди (II): 1) 0; 2) 110-5;
3) 210-5 моль/дм3. СЭдта = 10-3 моль/дм3. Ведущий электролит: Ск в 0? = 0,04 моль/дм3, pH 9,18.
и = +20 кВ, X = 190 нм, /° = 25 °С, ввод пробы гидродинамический, 150 мбарс. «Капель 105М», d = 75 мкм, £общ = 60 см, £эфф = 50 см
Для определения общего содержания меди в чае была предложена методика открытого кислотного разложения пробы в царской водке при нагревании. Проведение электрофоретического анализа в щелочной среде диктует необходимость нейтрализации раствора после разложения. Использование данной методики позволяет практически полностью растворить матрицу; при этом ЭФГ полученных растворов (рис. 3, ЭФГ 3) характеризуются более ровной базовой линией, чем ЭФГ настоев чая (рис. 3, ЭФГ 1 и 2), и на них появляются новые невысокие пики, что свидетельствует о разложении сложных органических веществ до более простых. Следует заметить, что время миграции комплекса Си(П)-ЭДТА при использовании различных способов пробоподготовки чая хорошо воспроизводится. Становится возможным определение кон -центрации ионов меди (II) без предварительного концентрирования пробы (рис. 4).
В то же время содержание меди в чае, рассчитанное из электрофоретических данных, оказалось значительно ниже, чем величины, полученные из данных атомно-абсорбционного анализа (табл. 3). Можно предположить, что комплексообразование понов меди (II) с ЭДТА осложняется конкурирующими реакциями с органическими компонентами матрицы, что уменьшает площадь пика, соответствующего комплексу Си-ЭДТА. Влияние матрицы на результаты ААС-определений противоположно: образование прочных комплексов повышает чувствительность определения [26].
Для повышения чувствительности электрофоретического определения можно использовать увели -чение анализируемой навески чая. Концентрирование раствора упариванием в данном случае нежелатель-но, так как приводит к высоким значениям тока в капилляре и искажению вида ЭФГ, при котором все пики оказываются размыты и наложены один на другой (рис. 3, ЭФГ 4). Этот эффект можно объяснить влиянием большой ионной силы раствора из-за применяемого способа нейтрализации кислот. Высокий солевой фон также неблагоприятно влияет на результаты атомно-абсорбционного анализа.
Таблица 3. Определение содержания меди в чае после открытого кислотного разложения методами КЭФ и ААС
Масса навески чая, г КЭФ ААС
ССи-106, моль/дм3 ССи, мкг/г ССи-106, моль/дм3 ССи, мкг/г
2,0024 0,59 5,2 2,1 18,6
6,0018 2,1 18,6 5,0 15,1
Рис. 3. ЭФГ растворов чая с концентрацией ионов меди (II) 1 * 10-3 моль/дм3. Растворы проб приготовлены: 1) завариванием с последующим упариванием, 2) завариванием в присутствии ЭДТА; 3) открытым кислотным разложением,
4) открытым кислотным разложением с последующим упариванием, 5) микроволновым разложением. СЭдта = 10-3 моль/дм3. Ведущий электролит: Сы в 0 = 0,04 моль/дм3, pH 9,18.
и = +20 кВ, Я = 190 нм, 1° = 25 °С, ввод пробы гидродинамический, 150 мбарс. «Капель 105М», С = 75 мкм, Ьобщ = 60 см, 1эфф = 50 см
Рис. 4. ЭФГ раствора чая после открытого кислотного разложения. Концентрация добавок меди (II): 1) 0, 2) 6,4* 10-5 моль/дм3.
Сэдта = 10 3 моль/дм3. Ведущий электролит:
См и 0 = 0,04 моль/дм3, pH 9,18. и = +20 кВ,
1^&2 -^407
Я = 190 нм, г° = 25 °С, ввод пробы гидродинамический, 150 мбарс. «Капель 105М», С = 75 мкм, £общ = 60 см, 1эфф = 50 см
Пробоподготовка чая методом открытого кислотного разложения имеет свои недостатки: длительность процедуры, неполное растворение матрицы, возможность потери определяемого компонента при выпаривании и разбрызгивании раствора. Кислотное разложение в закрытых сосудах с использованием микроволнового излучения позволило преодолеть эти недостатки, а, кроме того, упростить процедуру про-боподготовки, уменьшить расход реактивов и улучшить вид получаемых ЭФГ (рис. 3, ЭФГ 5). Использование для нейтрализации концентрированного раствора аммиака вместо гидроксида натрия уменьшает неблагоприятное влияние высокой ионной силы. В выбранных условиях удалось достичь практически полного переведения пробы в раствор и чувствительного определения без предварительного концентрирования раствора (рис. 5).
Результаты параллельных определений содержания ионов меди (II) в четырех пробах чая из разных пакетиков одной партии приведены в таблице 4. При использовании данной методики пробоподготовки определяемая концентрация меди максимальна, и, следовательно, кислотное разложение в системе микроволновой пробоподготовки лучше всего подходит для определения общего содержания меди в чайных ли -стьях. Невысокая воспроизводимость полученных результатов, по-видимому, объясняется неоднородностью анализируемых проб чая, поэтому требуется тщательное измельчение и усреднение пробы.
Таблица 4. Определение содержания меди в чае после закрытого кислотного разложения с использованием микроволнового излучения методами КЭФ и ААС
Масса навески чая, г КЭФ ААС
ССи-106, моль/дм3 ССи, мкг/г ССи-106, моль/дм3 ССи, мкг/г
0,5005 7,6 48,3 5,0 31,7
0,4999 3,5 22,3 3,3 20,8
0,5002 3,6 22,9 2,9 18,3
0,5000 6,8 43,2 1,5 9,5
з Рис. 5. ЭФГ раствора чая после закрытого
кислотного разложения с использованием микроволнового излучения. Концентрация 2 добавок меди (II): 1) 0; 2) 1 * 10-5;
3) 2* 10-5 моль/дм3. Сэдта = 10-3 моль/дм3. j Ведущий электролит: CN ^O = 0,04 моль/дм3,
^ pH 9,18. U = +20 кВ, Я = 190 нм, t° = 25 °C, ввод
10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 пробы гидродинамический, 150 мбар с. «Капель
*'мпн 105М», d = 75 мкм, Ьобщ = 60 см, £эфф = 50 см
Полученные величины содержаний меди согласуются с результатами других исследований, согласно которым медь в чайных листьях содержится обычно на уровне 10-20 мкг/г [2, 7, 12, 21, 23, 27]. Можно заметить, что найденное содержание меди в чае невелико и не превышает норм по содержанию меди, принятых в других странах [12].
Выводы
Показана возможность определения меди в чае методом капиллярного зонного электрофореза в виде комплекса с этилендиаминтетрауксусной кислотой. В зависимости от способа пробоподготовки возможно определение как общего содержания меди, так и того ее количества, которое поступает в организм человека при употреблении напитка. Разработаны методики анализа с использованием заваривания, открытого кислотного и закрытого микроволнового разложения. На примере зеленого чая установлено, что при заваривании в раствор переходит не больше половины содержащейся в чае меди, и ее концентрация в напитке не превышает ПДК для питьевых вод [28].
Список литературы
1. Marcos A., Fisher A., Rea G., Hill S.J. Preliminary study using trace element concentrations and a chemometrics approach to determine the geographical origin of tea // Journal of Analytical Atomic Spectrometry. 1998. V. 13, N6. Pp. 521-525.
2. Fernandez-Cacere P.L., Martin M.J., Pablos F., Gonzalez A.G. Differentiation of tea (Camellia sinensis) varieties and their geographical origin according to their metal content // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2001. V.49, N10. Pp. 4775-4779.
3. Chen Z. Current situation of pharmaceutical research on tea // Foreign agriculture of tea. 1984. V. 1, N1. Pp. 1-7.
4. Katiyar S.K., Agarwal R., Wood G.S., Mukhtar H. Inhibition of 12-O-tetradecanoylphorbol-acetate caused tumor promotion in 7,12-dimethylbenz[a]anthracene-initiated SEN-CAR mouse skin by apolyphenolic fraction isolated from green tea // Cancer Research. 1992. V. 52, N24. Pp. 6890-6897.
5. Yen G.C., Chen H.Y. Comparison of antimutagenic effect of various tea extracts (green, oolong, pouchong, and black tea) // Journal of Food Protection. 1994. V. 57, N1. Pp. 54-58.
6. Yen G.C., Chen H.Y. Antioxidant activity of various tea extracts in relation to their antimutagenity // Journal of Agricultural and Food Chemistry. 1995. V. 43, N1. Pp. 27-32.
7. Zeyuan D., Bingying T., Xiaolin L., Jinming H., Yifeng C. Effect of green tea and black tea on the metabolisms of mineral elements in old rats // Biological Trace Element Research. 1998. V. 65, N1. Pp. 75-86.
8. Hirano R., Momiyama Y., Takahashi R., Taniguchi H., Kondo K., Nakamura H., Ohsuzu F. Comparison of green tea intake in Japanese patients with and without angiographic coronary artery disease // The American Journal of Cardiology. 2002. V. 90, N10. Pp. 64-70.
9. Kumar A., Nair A.G.C., Reddy A.V.R., Gary A.N. Availability of essential elements in Indian and US tea brands // Food Chemistry. 2005. V. 89, N3. Pp. 441-448.
10. Uauy R., Olivares M., Gonzalez M. Essentiality of copper in humans // The American Journal of Clinical Nutrition. 1998. V. 67, Suppl. 5. Pp. 952S-959S.
11. Bertrand M., Guary J.-C., Schoefs B. How plants adapt their physiology to an excess of metals // Handbook of Plant and Crop Physiology. New York, Basel. 2001. Pp. 751-757.
12. Qin F., Chen W. Lead and copper levels in tea samples marketed in Beijing, China // Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 2007. V. 79, N3. Pp. 247-250.
13. Weber G., Schwedt G. Untersuchungen zu den Bindungsformen von Eisen, Kupfer und Zink in verschiedenen Tee-sorten // Zeitschrift fur Lebensmittel-Untersuchung und -Forschung. 1984. V. 178, N2. Pp. 110-114.
14. Salahinejad M., Aflaki F. Toxic and essential mineral elements content of black tea leaves and their tea infusions consumed in Iran // Biological Trace Element Research. 2010. V. 134, N1. Pp. 109-117.
15. Han W.-Y., Shi Y.-Z., Ma L.-F., Ruan J.-Y. Arsenic, cadmium, chromium, cobalt, and copper in different types of Chinese tea // Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 2005. V. 75, N2. Pp. 272-277.
16. Fung Y.S., Lau K.M. Separation and determination of cations in beverage products by capillary zone electrophoresis // Journal of Chromatography A. 2006. V. 1118, N1. Pp. 144-150.
17. Feng H., Wang T., Yau S.F. Sensitive determination of trace-metal elements in tea with capillary electrophoresis by using chelating agent 4-(2-pyridylazo) resorcinol (PAR) // Food Chemistry. 2003. V. 81, N4. Pp. 607-611.
18. Khatun S., Ali M.B., Hahn E.-J., Paek K.-Y. Copper toxicity in Withania somnifera: Growth and antioxidant enzymes responses of in vitro grown plants // Environmental and Experimental Botany. 2008. V. 64, N3. Pp. 279-285.
19. Шварценбах Г., Флашка Г. Комплексонометрическое титрование. М., 1970. 360 с.
20. Motomizu S., Oshima M., Matsuda S., Obata Y., Tanaka H. Separation and determination of alkaline-earth metal ions as UV-absorbing chelates with EDTA by capillary electrophoresis. Determination of calcium and magnesium in water and serum samples // Analytical Sciences. 1992. V. 8, N5. Pp. 619-625.
21. Неудачина Л.К, Лакиза H.B., Лебедева Е.Л. Электрофоретическое определение содержания ионов меди (II) в водах после комплексообразования с этилендиаминтетрауксусной кислотой // Заводская лаборатория. 2011. Т. 77, №1. С. 8-13.
22. Лебедева Е.Л., Лакиза Н.В., Неудачина Л.К. Электрофоретическое определение ионов меди (II) в напитках // Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез : матер. I Всерос. науч. конф. Краснодар, 2010. С. 251.
23. Shen F.M., Chen H.W. Element composition of tea leaves and tea infusions and its impact on health // Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 2008. V. 80, N3. Pp. 300-304.
24. Ashraf W., Mian A.A. Levels of selected heavy metals in black tea varieties consumed in Saudi Arabia // Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 2008. V. 81, N1. Pp. 101-104.
25. Дерффель К. Статистика в аналитической химии. М., 1994. 268 с.
26. Алемасова А.С., Рафалюк В.В., Щепина Н.Д., Романов С.Н. Органические реагенты и металлокомплексные соединения как модификаторы в электротермическом атомно-абсорбционном анализе // Аналитика и контроль. 2001. Т. 5. №1. С. 4-13.
27. Narin I., Colak H., Turkoglu O., Soylak M., Dogan M. Heavy metals in black tea samples produced in Turkey // Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 2004. V. 72, N4. Pp. 844-849.
28. СанПиН 2.1.4.1116-02. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды, расфасованной в емкости. М., 2002. 28 с.
Поступило в редакцию 12 марта 2011 г.
После переработки 14 июня 2011 г.
