CC BY
35
ХИМИЧЕСКАЯ ТЕХНОЛОГИЯ ПЕРЕРАБОТКИ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ
УДК 582.294:544.478.3:574.682
Хвойные бореалыюй зоны. 2020. Т. XXXVIII, № 3-4. С. 189-194
ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ СПОСОБА ИММОБИЛИЗАЦИИ МИЦЕЛИЯ БАЗИДИАЛБНОГО ГРИБА PLEUROTUS PULMONARIUS ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ БЕЛКОВОЙ БИОМАССЫ В УСЛОВИЯХ ЗАМКНУТЫХ СИСТЕМ
Б. Е. Мельников1, Е. А. Городнова1, Е. Б. Мельников2
Сибирский государственный университет науки и технологий имени академика М. Ф. Решетнева Российская Федерация, 660037, г. Красноярск, просп. им. газеты «Красноярский рабочий», 31 2Сибирский юридический институт МВД Российской Федерации Российская Федерация, 660131, г. Красноярск, ул. Рокоссовского, 20
Рассмотрены вопросы получения белковой биомассы в условиях замкнутых биологических систем, проведен анализ способов получения белковых пищевых продуктов в условиях обитаемых замкнутых биологических систем и предложен альтернативный путь ее решения. В качестве продуцента белка предлагается использовать базидиальный гриб Pleurotus pulmonarius.
Приведены данные о содержании витаминов, нуклеиновых кислот, а также сравнительные данные общего содержания белка в грибной биомассе. Изучен аминокислотный состав биомассы Pleurotus pulmonarius, выращенной в различных биотехнологических условиях. Показана перспектива использования глубинной биомассы Pleurotus pulmonarius в качестве белкового пищевого продукта.
Освещены результаты получения биомассы Pleurotus pulmonarius в синтетической питательной среде методом глубинного культивирования. Экспериментально показано, что при начальной концентрации мицелия после засева 5,2 г/л рост глубинной биомассы Pleurotus pulmonarius в течение 30 ч. культивирования достигает 17 г/л, что соответствует более чем двукратному накоплению белковой массы.
Показана возможность получения белковой биомассы базидиального гриба Pleurotus pulmonarius методом глубинного культивирования с использованием иммобилизации мицелия на сетчатом полимерном носителе, что существенно сокращает технологические объемы, упрощает процесс отделения биомассы от культу-ральной жидкости и открывает широкие возможности создания технологий получения белковой пищевой биомассы в условиях обитаемых замкнутых биологических систем.
Ключевые слова: базидиомицеты, Pleurotus pulmonarius, глубинное культивирование, иммобилизация, биологические замкнутые системы, биомасса, белок.
Conifers of the boreal area. 2020, Vol. XXXVIII, No. 3-4, P. 189-194
PROSPECTS OF USING THE METHOD OF IMMOBILIZING THE MICELIUM OF THE BASIDIAL PLEUMOTUS PULMONARIUS MUSCLE FOR THE OBTAINING OF PROTEIN BIOMASS
IN CONDITIONS OF CLOSED SYSTEM
В. E. Melnikov1, E. A. Gorodnova1, E. B. Melnikov2
1 Rcshctncv Siberian State University of Science and Technology 31, Krasnoyarsk^ rabochii prospekt, Krasnoyarsk, 660037, Russian Federation 2Siberian Law Institute of the Ministry of Internal Affairs of the Russia 20, Rokossovskia Str., Krasnoyarsk, 660131, Russian Federation
The paper proposes one of the ways to obtain a protein product for the crew ration, a long-lived habitable spacecraft. A strain of basidiomycete fungus Pleurotus pulmonarius was used as a protein producer.
Presents data on the content in the fungal biomass: protein, vitamins and nucleic acids. The amino acid composition of biomass grown by the method of both solid phase and submerged cultivation of Pleurotus pulmonarius was studied. The obtained results open up the prospect of using the biomass Pleurotus pulmonarius as a food protein product.
It was experimentally shown that the Pleurotus pulmonarius basidial fungus is capable of relatively rapid growth in deep conditions. When the mycelium concentration after seeding is 5.2 g/l, the increase in the Pleurotus pulmonarius deep biomass during 30 hours of cultivation is 17 g/l, and the biomass accumulation is 11.8 g/l.
The possibility of obtaining, proteinaceous biomass of the basidial fungus Pleurotus pulmonarius by the method of deep cultivation using immobilization of mycelium on a net carrier has been shown, while significantly simplifying the stage of biomass separation from the culture fluid. The prospects for the use of this method are shown when creating technology for obtaining protein biomass under conditions of closed biotechnological systems.
Keywords: basidiomycetes, Pleurotus pulmonarius, deep cultivation, immobilization, biological closed systems, biomass, protein.
ВВЕДЕНИЕ
Развитие космических технологий является одним из главных направлений современной науки. В настоящее время системы жизнеобеспечения пилотируемых космических кораблей могут обеспечить членов экипажа необходимыми продуктами питания лишь в течение 3-4 месяцев [1], что недостаточно при организации длительных космических экспедиций. Одним из вариантов решения этой проблемы может стать создание в длительно функционирующих обитаемых космических кораблях замкнутых биотехнологических систем жизнеобеспечения. Известно, что замкнутой является система, способная работать изолированно от внешнего мира, за исключением энергообмена. Полная замкнутость систем жизнеобеспечения на современном этапе развития науки возможна лишь при использовании живых организмов [2].
Исследования биотехнологических систем жизнеобеспечения проводятся учеными всех стран, участвующих в создании обитаемых космических аппаратов. В 1972 году на базе красноярского Института биофизики был создан экспериментальный комплекс «БИОС-3», моделирующий замкнутую экологическую систему жизнеобеспечения человека. «БИОС-3» позволил в автономном режиме обеспечить жизнь экипажа в течение 6 месяцев за счёт замыкания цикла по воде и газу почти на 100 % и по пище - на 50 % [3]. Другой подобный проект «Биосфера-2» по созданию замкнутой экологической системы не дал положительного результата. Эксперимент был остановлен, поскольку не была полностью решена проблема питания членов экипажа и сохранения неизменного состава воздуха [4]. Успешным продолжением исследований в данном направлении стала разработанная Пекинским университетом аэронавтики и астронавтики наземная экспериментальная установка закрытой экологической системы «Юэгун-1». Три члена экипажа провели в закрытом пространстве 105 дней. Все реализованные в данной сфере проекты имеют большое значение для создания условий безопасной и качественной жизни экипажа в длительных пилотируемых полетах.
Несмотря на явные преимущества экологических, биологических замкнутых систем жизнеобеспечения, они до настоящего времени не нашли практического
Таблица 1
Содержание белка в продуктах питания
применения в пилотируемой космонавтике. В реализованных проектах для пополнения пищевых запасов использовалась система «космических огородов», в которых выращивались растения, содержащие практически все необходимые для питания человека компоненты (белки, клетчатку, комплекс витаминов, биологически активные вещества), однако получение таких продуктов питания, в условиях длительно пилотируемых станциях является сложной задачей [5]. Например, использование системы «космических огородов», основанной на выращивании злаковых культур, имеет некоторые ограничения. В соответствии с принятыми нормами калорийность растительной части рациона должна составлять 65 % от его общей калорийности рациона, что предполагает наличие оранжереи с расчетной площадью более 30 м2 на одного человека [1], к тому же фиксация молекулярного азота растениями возможна при наличии в системе клубеньковых почвенных бактерий, что усложняет технологию выращивания злаковых культур в условиях замкнутых систем [1]. Нерешенным остается и вопрос утилизации растительных отходов при использовании оранжерейных устройств.
При проектировании замкнутых биологических систем жизнеобеспечения одной из актуальных задач, может стать создание технологии получения пищевого белка. В табл. 1 представлены данные по содержанию белка в различных продуктах питания.
Из табл. 1 видно, что наиболее богаты белком мясо говядины, и курицы. С учетом массовой доли воды, содержание белка в них составляет до 70 % соответственно. Содержание белка в сухих грибах в два раза меньше и составляет 34,8 %, вместе с тем этот показатель в 1,5 раза выше, чем в бобовых и в 2,4 раза выше, чем в пшенице. Несмотря на высокое содержание белка в продуктах животного происхождения, производить их биологическим путем в условиях замкнутой системы является трудновыполнимой задачей. Обеспечение белковыми продуктами животного происхождения возможно лишь при регулярной их доставке, что является вполне выполнимой задачей в условиях нахождения аппаратов на околоземной орбите и невозможной в условиях длительного космического перелета.
Наименование Массовая доля белка, % Массовая доля воды, % Содержание белка
продукта [6] [6] в а.с.м, %
Мясо говядины 18,6-20,0 64,5-69,2 52,45-64,9
Мясо курицы 18,2-21,2 62,6-69,7 48,7-69,9
Пшеница 11,8-13,0 14,0 14,4
Бобовые культуры (горох) 20,5 14,0 23,8
Грибы (белые сушенные) 30,3 13,0 34,8
В настоящее время перспективным направлением по созданию технологий получения белковой биомассы в условиях замкнутых систем могут стать исследования, проводимые с использованием в качестве продуцента белка базидиальных грибов [7].
В связи с этим целью данной работы является оценка перспектив использования биомассы базидиальных грибов в качестве белкового пищевого продукта и возможности получения данной белковой биомассы в замкнутых биологических системах.
ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектом исследования являлись процессы выращивания базидиального гриба в глубинных условиях с иммобилизацией мицелия на полимерном носителе, закрепленном в глубине питательной среды. В качестве продуцента белка был использован штамма P.P. 3.2 ксилотрофного базидиомицета Pleurotus pulmonarius (P. pulmonarius) - вешенка легочная.
Выращивание биомассы P. pulmonarius проводили на крахмал-аммонийной среде, рН питательной среды составляла 5,7. Содержание крахмала в питательной среде составляло 30 г/л среды. В процессе приготовления раствора крахмала проводили его клейстериза-цию с дальнейшей ферментацией раствором термостабильной а-амилазы (термоамил 120 L, Германия) при температуре 60-62 °С в течение 30 мин при постоянном перемешивании, что значительно снижало вязкости раствора. Культивирование проводили в колбе с объемом питательной среды 1,3 л при постоянном перемешивании за счет барботирования воздухом в количестве 1,6 л на литр среды в минуту. Засев проводили глубинной культурой, выращенной на аналогичной среде. Температура культивирования составляла 23-25 °С.
Содержание белков в мицелии определяли с использованием амидо-черного 10В по методу, описанному Г. А. Бузуном [8]. Количественно белок определяли с помощью фотоэлектрокалориметра КФК-3 при X = 590 нм, используя калибровочную кривую, которая была построена по смеси сывороточного альбумина человека, сывороточного альбумина быка и их димеров.
Аминокислотный состав белков анализировали методом ионообменной хроматографии с использованием автоматического анализатора аминокислот ААА-339 М (Mikrotechna, Чехия). Для проведения
измерений предварительно был проведен гидролиз белков исследуемой пробы при температуре 104±1 °С. После окончания гидролиза ампулы охлаждали до комнатной температуры и их содержимое упаривали в фарфоровых чашках при температуре 50 °С. Сухой остаток чашек растворяли в 2 мл свежеприготовленного 0,2 М цитратного буфера (рН 2,2). Полученный раствор количественно переносили в центрифужные пробирки и центрифугировали в течение 15 мин при 9 000 об/мин до полного осаждения нерастворимого остатка гуминовых веществ. Полученную надосадоч-ную жидкость анализировали в аминокислотном анализаторе. По соотношению площади пиков аминокислот, содержащихся в образцах, к площади пиков стандартных растворов аминокислот [9].
Содержание нуклеиновых кислот определяли спектрофотометрически в ультрафиолетовой области по методике А. С. Спирина [10]. Из анализируемой пробы удаляли кислоторастворимые нуклеотиды путем экстракции 0,2 Н НСЮ4 и проводили гидролиз послеэкстракционного остатка 0,5 Н НСЮф Количественное содержание нуклеиновых кислот определяли на спектрофотометре СФ-26 на длинах волн 270 нм и 290 нм, раствором сравнения служила 0,5 Н НСЮ4.
РЕЗУЛЬТАТЫ
И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
В зависимости от метода культивирования биомасса Р. ри\топагш5 может быть получена как в виде плодовых тел (метод твердофазного культивирования), так и в виде мицелиальной глубинной биомассы (метод глубинного культивирования). Изучение состава биомассы Р. ри/топапия, выращенной различными методами, показало, что в биомассе, выращенной методом глубинного культивирования, содержится около 32 % а.с.м белка, что сопоставимо с содержанием белка в плодовых телах данного гриба [11]. В работе был исследован аминокислотный состав белков, выделенных из биомассы Р. риЪпопагшз в сравнении с составом незаменимых аминокислот в эталонном белке. Результаты исследования представлены в табл. 2.
Установлено, что в глубинной биомассе, как и в плодовых телах Р. риЬпопагшз, содержатся 7 незаменимых аминокислот (отсутствие данных по содержанию триптофана объясняется его разложением в процессе кислотного гидролиза на стадии подготовки проб для аминокислотного анализатора).
Таблица 2
Содержание незаменимых аминокислот в составе белков биомассы Pleurotus puhtwnariiis
Наименование незаменимой аминокислоты Содержание аминокислоты, % а.с.м.
глубинная биомасса плодовое тело эталонный белок сравнения [12]
Треонин 6,2 5,9 4,0
Валин 5,5 6,3 5,0
Лейцин 7,4 7,7 7,0
Изолейцин 4,1 3,6 4,0
Лизин 5,0 5,0 5,5
Метионин с цистином 0,7 0,6 3,5 с цистином
Фенилаланин с тирозином 14,1 13,2 6,0 с тирозином
Из табл. 2 видно, что содержание незаменимых аминокислот в белках, выделенных из глубинной биомассы и из биомассы плодовых тел Р. ри1топапш\ близко их содержанию в эталонном белке сравнения, что может свидетельствовать о сбалансированности белков глубинной биомассы и белков плодового тела Р. ри/топапиь' по аминокислотному составу.
Кроме содержания белка важной характеристикой белкового продукта является содержание нуклеиновых кислот, высокая концентрация которых неблагоприятно сказывается на здоровье человека. В результате проведенных исследований было установлено, что содержание нуклеиновых кислот в глубинной биомассе Р. ри/топапиь' составляет 1,1 % а.с.м., что почти в 3 раза ниже, чем в плодовых телах данного гриба [11], что положительно характеризует глубинную биомассу Р. ри/топапиь' и делает ее перспективной для использования в качестве белкового пищевого продукта.
Еще одним важным компонентом сбалансированного питания человека являются витамины. Преимуществом белкового пищевого продукта на основе биомассы базидиального гриба Р. риЫюпагшй является способность данного гриба проявлять прототроф-ные свойства и синтезировать витамины в процессе роста [13; 14]. Известно, что витамины биологического происхождения в сравнении с полученными методами тонкого органического синтеза имеют преимущества, так как сочетаются с целым рядом биологически активных веществ и при употреблении в пищу оказывают более эффективное действие на обмен веществ в организме. Например, наиболее эффективным источником витаминизированных продуктов могут стать проращенные семена ряда растений [15]. Однако для непрерывного обеспечения сбалансированности рационов питания витаминами необходимо создание оранжерей с определенным видовым составом посева, что также не является оптимальным решением в условиях длительных пилотируемых космических полетов.
В результате проведенных исследований было определено, что в глубинной биомассе Р. риЪпопагшв содержатся витамины группы В (содержание витамина В1 составило 12,6 мг % а.с.м., витамина В2 - 3,50 мг % а.с.м.), а также витамин С в количестве 0,06 мг % а.с.м. и витамина РР - 3,27 мг % а.с.м.). Кроме того.
в глубинной биомассе P. pulmonarius были обнаружены биофлавоноиды, совокупное содержание которых составило 2,35 мг % а.с.м.
Результаты исследований, проведенных специалистами КГБУ «Краевая ветеринарная лаборатория», показали, что биомасса P. pulmonarius непатогенная для теплокровных организмов. Принимая во внимание достаточно высокое содержание белка, сбалансированного по аминокислотному составу, невысокое содержания нуклеиновых кислот и наличие комплекса витаминов, считаем, что глубинная биомасса P. pulmonarius может быть весьма перспективна для использования её в качестве белкового продукта.
Оценивая возможность практического получения глубинной биомассы и перспективы создания технологии ее выращивания в условиях замкнутых систем, следует упомянуть о некоторых преимуществах, которые непременно должны быть учтены. К ним следует отнести относительно быстрый прирост белковой биомассы, минимизацию объемов используемого пространства для проведения процесса, простоту технологических операций и обслуживания оборудования, минимизацию отходов и возможность их дальнейшего использования. На рис. 1 представлены кривые роста глубинной биомассы P. pulmonarius при концентрациях мицелия после засева от 0,9 г/л до 5,2 г/л.
Проведенные исследования показали, что базиди-альный гриб P. pulmonarius способен к относительно быстрому росту в глубинных условиях. Рис. 1 наглядно показывает, что при концентрации мицелия после засева 5,2 г/л прирост глубинной биомассы P. pulmonarius в течение 30 ч. культивирования составляет 17 г/л, а накопление биомассы составляет 11,8 г/л.
Pleurotus pulmonarius отличается неприхотливостью в отношении источников питания. Ими могут являются синтетические и полусинтетические среды, что во многом снимает проблему утилизации отработанного растительного субстрата, по сравнению с «космическими огородами». Кроме того, P. pulmonarius в отношении других биологических агентов [16], температура культивирования составляет 23-25 °С, что близко к значениям температуры в обитаемом модуле космического аппарата, получение глубинного мицелия не требует освещения.
О -.-1-1-.-1-1-.-1-1-.-1-1-г
О б 11 18 24 '/' М) 42 4» 54 6U П /В
Прсдоляитеяыюсгь культивирования, ч
Рис. 1. Динамика накопления глубинной биомассы Р1еиг(Лш риЫюпапш при различных концентрациях мицелия после засева
а б
Рис. 2. Глубинная мицелиальная биомасса Ркигойи риЬнопагшя:
а - фрагмент сетчатого носителя с иммобилизованным мицелием; б - порошок биомассы после сушки и отделения от сетчатого носителя)
Классическая схема выращивания глубинной биомассы предполагает использование технически сложного, крупногабаритного оборудования, учитывая, что в условиях глубинного культивирования Р. риЫюпапий склонен к иммобилизации на твердых поверхностях, был разработан способ получения биомассы на сетчатом полимерном носителе [17; 18], что позволило исключить из технологического цикла стадию фильтрования выращенной биомассы. Стоит отметить, что данная стадия является достаточно трудоемкой, энергоемкой, продолжительной по времени и требует специального оборудования. В данном способе выращенная грибная биомасса извлекается из культуральной жидкости вместе с полимерным носителем, далее - процесс сушки. После этого биомасса легко отделяется в виде порошка и не требует дополнительного измельчения. На рис. 2 представлены фотографии внешнего вида глубинной биомасса Р. риЫюпапий, зафиксированной в ячейках полимерной сетки после извлечения её из культуральной жидкости (рис. 2, а) и высушенной биомассы отделенной от сетчатого носителя (рис. 2, б).
Разработанный нами способ выращивания биомассы Р. риЫюпагшй на сетчатом носителе представляет техническую возможность проектирования процессов получения белковой биомассы, которые в дальнейшем могут использоваться при создании закрытых биологических систем.
В процессе получения белковой биомассы методом глубинного культивирования остается культу-ральная жидкость. Поскольку экономический коэффициент по углеродсодержащему компоненту не превышает 50 % и в культуральной жидкости после отделения мицелиальной биомассы присутствуют остаточные количества углеродсодержащего компонента и минеральных веществ питательной среды. В связи с этим после специальной обработки и дополнительного внесения необходимых компонентов культу-ральная жидкость может быть использована для выращивания биологических агентов или утилизироваться с минимумом сухого остатка.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Таким образом, использование метода глубинного культивирования базидиального гриба Р. ри/топапия
с иммобилизацией мицелия на сетчатом носителе дает возможность получения белковой биомассы, при этом существенно упростив стадию отделения биомассы от культуральной жидкости. Тем самым открываются широкие технические возможности для создания технологии получения белкового продукта, перспективных для использования в условиях замкнутых систем.
Белковая биомасса P. pulmonarius, полученная предлагаемым способом, содержит в своём составе до 32 % белка сбалансированного по аминокислотному составу, комплекс витаминов, а также характеризуется невысоким содержанием нуклеиновых кислот.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Гришин Ю. И. Искусственные космические экосистемы. М. : Знание, № 7. 1989. 64 с.
2. Хлебопрос Р. Г., Охонин В. А., Фет А. И. Катастрофы в природе и обществе : математическое моделирование сложных систем. Новосибирск : Сова, 2008. 360 с.
3. Дегерменджи А. Г., Тихомирова А. А. Создание искусственных замкнутых экосистем земного и космического назначения // Вестник Российской академии наук. 2014. Т. 84, № 3. С. 233-240.
4. Using a Closed Ecological System to Study Earth's Biosphere Author(s): Mark Nelson, Tony L. Burgess, Abigail Ailing, Norberto Alvarez-Romo, William F. Dempster, Roy L. Walford, lohn P. Allen Source: Bioscience, 1993. Vol. 43, No. 4. P. 225-236.
5. Яздовский В. И. Искусственная биосфера. M. : Наука, 1976. 224 с.
6. Химический состав российских пищевых продуктов: справочник / под ред. И. М. Скурихина и
B. А. Тутельяна. М. : Дели принт, 2002. 236 с.
7. Горленко М. В. Грибы как источник пищевых белков // Микология и фитопатология. 1983. Т. 17, вып. 3. С. 177-181.
8. Бузун Г. А., Джемухадзе К. Н., Милешко Л. Д. Определение белка в растениях с помощью амидо-черного // Физиология растений. 1982. Т. 29, вып. 1.
C. 198-204.
9. Плешков, Б. П. Практикум по биохимии растений. М. : Колос, 1976. 310 с.
10. Северина С. Е., Соловьева Г. А. Практикум по биохимии. М. : МГУ, 1989. 509 с.
П.Мельникова Е. А. Технология переработки растительной биомассы с получением белковых кормовых продуктов: микробиологическая конверсия Pleurotus pulmonarius : автореф. дис. ... канд. техн. наук. Красноярск, 2016. 23 с.
12. Joint FAO/WHO Ad hoc expert committee on energy and protein requirements. Rome, 1973.
13. Лекарственные грибы в традиционной китайской медицине и современных биотехнологиях / Ли Юй [и др.] ; под общ. ред. В. А. Сысуева. Киров : О-Краткое, 2009. 320 с.
14. Биологические особенности лекарственных макромицетов в культуре : сб. науч. тр. / под ред. С. П. Вассер. Киев : Альтерпресс, 2011. Т. 1. 212 с.
15. Сравнение эффективности различных методов получения витаминной зелени в условиях замкнутых обитаемых гермооъектов / М. А.. Левинских, В. Н. Сычев, Т. А., Дерендяева [и др.] // Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения. 2001. № 5.
16. Мельникова Е. А., Мельников Е. Б., Миронов П. В. Исследование состава биологически активных соединений, выделяемых при совместном культивировании Pleurotus pulmonarius и Lentinus edodes // Хвойные бореальные зоны. 2013. Т XXXI, № 5-6. С. 88-92.
17. Пат. 2588474 Российская Федерация С1 Способ получения биомассы базидиального гриба Pleurotus pulmonarius / Мельникова Е. А., Мельников Е. Б., Рязанова Т. В., Миронов П.В. ; заявл. 11.03.2015 ; опубл. 27.06.2016, Бюл. № 18.
18. Мельникова Е. А., Мельников Е. Б. Иммобилизация базидиального гриба на твердых носителях // Хвойные бореальной зоны. 2018. Т. XXXVI. № 3. С. 102-107.
REFERENCES
1. Grishin Yu. I. Iskusstvennyye kosmicheskiye eko-sistemy. Moscow, Znaniye, № 7, 1989, 64 s.
2. Khlebopros R. G., Okhonin V. A., Fet A. I. Katast-rofy v prirode i obshchestve : matematicheskoye modeli-rovaniye slozhnykh sistem. Novosibirsk, Sova, 2008, 360 s.
3. Degermendzhi A. G., Tikhomirova A. A. Sozdaniye iskusstvennykh zamknutykh ekosistem zemnogo i kosmicheskogo naznacheniya // Vestnik Rossiyskoy akademii nauk. 2014, T. 84, № 3. S. 233-240.
4. Using a Closed Ecological System to Study Earth's Biosphere Author(s): Mark Nelson, Tony L. Burgess, Abigail Ailing, Norberto Alvarez-Romo, William F. Dempster, Roy L. Walford, John P. Allen Source: Bioscience, 1993, Vol. 43, No. 4, P. 225-236.
5. Yazdovskiy V. I. Iskusstvennaya biosfera. Moscow, Nauka, 1976, 224 s.
6. Khimicheskiy sostav rossiyskikh pishchevykh produktov: spravochnik / pod red. I. M. Skurikhina i V. A. Tutel'yana. Moscow, Deli print, 2002, 236 s.
7. Gorlenko M. V Griby kak istochnik pishchevykh belkov // Mikologiya i fitopatologiya. 1983, T. 17, vyp. 3. S. 177-181.
8. Buzun G. A., Dzhemukhadze K. N., Mileshko L. D. Opredeleniye belka v rasteniyakh s pomoshch'yu amido-chernogo // Fiziologiya rasteniy. 1982, T. 29, vyp. 1, S. 198-204.
9. Pleshkov B. P. Praktikum po biokhimii rasteniy. Moscow, Kolos, 1976, 310 s.
10. Severina S. E., Solov'yeva G. A. Praktikum po biokhimii. Moscow, MGU, 1989, 509 s.
11. Mel'nikova E. A. Tekhnologiya pererabotki rasti-tel'noy bio massy s polucheniyem belkovykh kormovykh produktov: mikrobiologicheskaya konversiya Pleurotus pulmonarius : avtoref. dis. ... kand. tekhn. nauk. Krasnoyarsk, 2016, 23 s.
12. Joint FAO/WHO Ad hoc expert committee on energy and protein requirements. Rome, 1973.
13. Lekarstvennyye griby v traditsionnoy kitayskoy meditsine i sovremennykh biotekhnologiyakh / Li Yuy [i dr.] ; pod obshch. red. V. A. Sysuyeva. Kirov, O-Krat-koye, 2009, 320 s.
14. Biologicheskiye osobennosti lekarstvennykh makro-mitsetov v kul'ture : sb. nauch. tr. / pod red. S. P. Vasser. Kiyev, Al'terpress, 2011, T. 1, 212 s.
15. Sravneniye effektivnosti razlichnykh metodov polucheniya vitaminnoy zeleni v usloviyakh zamknutykh obitayemykh germoo"yektov / M. A. Levinskikh, V. N. Sychev, T. A., Derendyayeva [i dr.] // Khimiya i komp'yuternoye modelirovaniye. Butlerovskiye soob-shcheniya. 2001, № 5.
16. Mel'nikova E. A., Mel'nikov E. B., Mironov P. V. Issledovaniye sostava biologicheski aktivnykh soyedine-niy, vydelyayemykh pri sovmestnom kul'tivirovanii Pleurotus pulmonarius i Lentinus edodes // Khvoynyye boreal'nyye zony. 2013, T XXXI, № 5-6, S. 88-92.
17. Pat. 2588474 Rossiyskaya Federatsiya CI Sposob polucheniya biomassy bazidial'nogo griba Pleurotus pulmonarius / Mel'nikova E. A., Mel'nikov E. B., Ryaza-nova T. V., Mironov P. V. ; zayavl. 11.03.2015 ; opubl. 27.06.2016, Byul. № 18.
18. Mel'nikova E. A., Mel'nikov E. B. Immobili-zatsiya bazidial'nogo griba na tverdykh nositelyakh / // Khvoynyye boreal'noy zony. 2018, T. XXXVI, № 3, S. 102-107.
© Мельников Б. E., Городнова E. А., Мельников Е. Б., 2020
Поступила в редакцию 26.12.2019 Принята к печати 05.10.2020
