CC BY
1
| ГЕМАТОЛОГИЯ ИТРАНСФУЗИОЛОГИЯ | RUSSIAN JOURNAL OF HEMATOLOGY AND TRANSFUSIOLOGY (GEMATOLOGIYA I TRANSFUSIOLOGIYA) | 2024; TOM69; №2 |
рыхлых кластеров/скоплений. При этом ни в одном случае не выявлены нарушений и инфильтрации гематоплацентарного барьера с инфильтрацией клетками с бластной морфологией ворсин и сосудов плодной части плаценты (рис. 1). По данным иммуногистохими-ческого исследования иммунофенотип бластных клеток в препарате плаценты соответствует иммунофенотипу опухолевых клеток матери в дебюте острого лейкоза, подтверждено отсутствие бластной инфильтрации ворсин и сосудов плода (рис. 2).
Заключение. Таким образом, при выявлении в интервиллезных пространствах, заполненных материнской кровью, опухолевых клеток у 24,1% пациенток с острыми лейкозами вне ремиссии, данных за опухолевую инфильтрацию тканей плаценты ни в одном случае получено не было.
К
Рис. 2. Ткань плаценты 33 недели беременности пациентки с ОМЛ. Клетки с незрелой морфологией в интервиллезных пространствах. Иммунофер-ментный метод. А — реакция с антителами к миелопероксидазе, цито-плазматический гранулярный характер экспрессии в клетках с бластной морфологией; В — реакция с антителами к СЭЗЗ, мембранный характер экспрессии в клетках с бластной морфологией. Ув. х400.
Результаты и обсуждение. Патоморфологическое исследование производилось на тканях плаценты и последа 39 женщин на момент завершения беременности, 29 из которых не достигли ремиссии острого лейкоза. При исследовании гистологических препаратов плаценты от 7 (24,1%) пациенток вне ремиссии острого лейкоза (ОЛЛ — п=Ъ, ОМЛ — п=4) были выявлены в интервиллезных пространствах, заполненных материнской кровью, рыхло расположенные клетки с бластной морфологией в различном количестве, с формированием
Рис. 1. Ткань плаценты 34 недели беременности, клетки с бластной морфологией в интервиллезных пространствах пациентки с Т-ОЛЛ (вне ремиссии). Окраска Н&Е. Ув. *400.
Глущенко Д. Ю., Дудина Г. А., Оганнисян А. А., Мабудзаде Ч. К.
ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ЛИМФОЦИТОВ С ХИМЕРНЫМ АНТИГЕННЫМ РЕЦЕПТОРОМ (САЯ-Т) В УСЛОВИЯХ
ПРАКТИЧЕСКОГО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
МКНЦимА.С. Логинова
Введение. В настоящее время единственным решением в терапии пациентов с лимфопролиферативных заболеваний, резистентных к противоопухолевой терапии, является использование лимфоцитов с химерным антигенным рецептором. Данный подход представляет собой вариант ex vivo генной терапии, когда Т-лимфоциты пациента, полученные в ходе процедур афереза культивируются в условиях лаборатории или биофармацевтического производства, генетически модифицируются с целью экспрессии искусственного антигенного рецептора (CAR) и вводятся пациенту для достижения терапевтического эффекта (In vivo киллинга опухолевых клеток).
Цель работы. Сформировать научно-техническую и лабораторную базу для локализации внутристационарного изготовления персонализированных высокотехнологических лекарственных препаратов на основе аутологичных генетически модифицированных лимфоцитов. Выполнить локализация протокола получения CD19 специфичных CAR-T лимфоцитов вусловиях гематологического стационара.
Материалы и методы. Использованы базовые биохимические методы для анализа получаемых клеточных продуктов и контроля качества. А также метод лентивирусной трансдукции мононуклеар-ной фракции клеток периферической крови человека и экспансии анти-С019 CAR Т-клеток ex vivo в питательной среде, содержащей коктейль интерлейкинов.
Результаты и обсуждение. Было проведено пилотное получение опытных образцов CAR-T 18 пациентов (16 пациентов с диффузной В-крупноклеточной лимфомой, 2 пациента с острым лимфобласт-ным лейкозом) и 6 здоровых доноров. Проведены предварительные
работы, подтверждающие возможность создания лимфоцитов с химерным антигенным рецептором для терапии онкогематологических заболеваний, таких как острый лимфобластный лейкоз В-клеточной природы и CD19 позитивные неходжкинские лимфомы. Разработаны и апробированы в экспериментах In vitro генно-инженерные конструкции, кодирующие CD19 специфичные химерные рецепторы второго, третьего и четвертого поколений. На различных клеточных моделях подтверждена экспрессия рекомбинантных белков, кодируемых данными конструкциями методом western blotting. Оптимизированы условия получения генетических векторов, позволяющих проводить трансдукцию первичных иммунных Т-клеток с высокой эффективностью и сохранением жизнеспособности при длительном культивировании и экспансии лимфоцитов. Подобраны условия и среды культивирования, обеспечивающие высокийуровень пролиферации. Эффективность трансдукции в рутинных экспериментах подтверждена экспрессией трансгена и мембранной локализацией белка в 60—90% популяции первичных Т-клеток, согласно анализу методом проточной цитофлуориметрии. Получены стабильные флуоресцентно меченные мишени, обладающие экспрессией CD19. Функциональная активность получаемых CAR-T клеток подтверждена при сокультивировании с CD19 позитивными клеточными мишенями. Разработаны среды и протоколы для криоконсервации Т-лимфоцитов.
Заключение. Учитывая полученные результаты, необходимо продолжить изучение функциональных возможностей аутологичных генетически модифицированных лимфоцитов на лабораторных животных в следующем доклиническом этапе проводимого исследования.
