Оценка влияния экзогенной супероксиддисмутазы на процессы свободно-радикального окисления у больных с острым гепатитом в Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

Статья

прооксидантно-антиоксидантного статуса и гомеостаза, ведущее место в нем имеет развитие клеточного апоптоза и усиление дыхательного взрыва нейтрофилов, которое при воспалительной реакции наблюдается при гнойно-некротических осложнениях ОП, приводит к угнетению диффузно-эндокринной системы.

В общие механизмы развития гнойно-некротических осложнений ОП включаются изменения диффузно-эндокринной системы (APUD-системы) через влияние клеточных механизмом прооксидантно-антиоксидантной системы и стимулирующее влияние ацетилхонина, АТФ, инсулина, тималина и кальция, который блокирует калиевые каналы, при ингибирующем влиянии адреналина, гистамина и других пептидных комплексов, с блокированием хлорных и кальциевых каналов. Это говорит о наличии специфических рецепторов на нейтрофилах, функционирующих через кальциевую и аденилатциклазную мессенджер-ные системы, что имеет важное патогенетическое значение.

При осложнениях ОП из-за внутриклеточных изменений (усиление процессов ПОЛ) идет угнетение диффузноэндокринной системы: снижение функций островков Лангенгар-са, эндокринных клеток кишечника, аденогипофиза, паращито-видных желёз, мозгового вещества надпочечников и др.

Знание роли диффузно-эндокринной системы в гистогене-тическом механизме возникновения гнойно-некротических осложнений при различных формах ОП необходимо практическому врачу любой специальности.

DIFFUSIVE ENDOCRINE SYSTEM AND ITS ROLE IN DEVELOPMENT OF COMPLICATIONS OF ACUTE PANCREATITIS

S.V. MAL’

Summary

In the case of acute pancreatitis oppression of diffusive endocrine system occurs, because of lipid intensification of the peroxide oxidation process what results in the development of complications of acute pancreatitis.

Key words: pancreatitis oppression, endocrine system

УДК 616-001; 616.36

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ЭКЗОГЕННОЙ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗЫ НА ПРОЦЕССЫ СВОБОДНО-РАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ У БОЛЬНЫХ С ОСТРЫМ ГЕПАТИТОМ В

С.Г. АНДРЕЕВА**, Н.Н.ЗЫБИНА*, М.В.КОРОБОВА*, М.Ю.ФРОЛОВА*, И.В.ЧУРИЛОВА***

Введение. Создание препаратов широкого спектра действия является одним из путей решения проблемы обеспечения населения эффективными лекарственными препаратами. К ним относятся соединения, действующие на ключевые этапы патологических процессов, что позволяет использовать их при терапии различных заболеваний. Особое внимание привлекают антиоксиданты, способные контролировать и модулировать окислительные процессы в организме [7, 18]. Любой воспалительный процесс в гепатоцитах характеризуется изменением структуры и функции клеток [8]. Степень вовлечения органелл клетки различна - в одних случаях чаще поражаются митохондрии и лизосомы, в других - рибосомы и эндоплазматический ретикулум. Однако общим в патогенезе воспаления гепатоцитов является то, что первичный процесс поражения происходит в биомембранах и связан он с процессами перекисного окисления липидов (ПОЛ) [1, 4]. Основным элементом, приводящим к инициации ПОЛ, является рост уровня активных форм кислорода (АФК), в частности за счет активации ксантиноксидазы, поставляющей суперок-сидный радикал [13]. При этом активность естественных антиок-сидантных компонентов гомеостаза организма снижается. Ведущую роль в процессах токсичности АФК играет супероксидный радикал [6, 10]. Он действует на все компоненты клетки (белки,

** Городская инфекционная больница № 30

Всероссийский центр экстренной и радиационной медицины МЧС России ГосНИИ ОЧБ, Санкт-Петербург

липиды, нуклеиновые кислоты), на компоненты соединительных тканей (гиалуроновая кислота) и является предшественником более токсичного гидроксильного радикала. Поэтому использование экзогенной супероксиддисмутазы (СОД), являющейся ключевым ферментом антиокислительной системы клеток [11], действие которой основано на детоксикации организма от супер-оксидных радикалов, может нормализовать процессы ПОЛ на биомембранах гепатоцитов и оказать терапевтическое влияние.

«Рексод» - новый отечественный ферментный лекарственный препарат с антиоксидантным, антицитолитическим и противовоспалительным действием. Основным действующим веществом препарата «Рексод» является рекомбинантная СОД человека, получаемая по генно-инженерной технологии с использованием в качестве продуцента культуры дрожжей Saccharomyces cerevisiae, штамм Y2134. Рексод нетоксичен при однократном (остром) пероральном, внутривенном и внутримышечном введении и имеет широкое терапевтическое действием, стимулируя процессы лимфо- и тромбоцитопоэза, улучшая детоксикационную функцию печени и обладая адаптогенным эффектом.

Цель - оценка свободно-радикального и антиоксидантного статуса лиц с острым гепатитом В до и после лечения рексодом.

Материалы и методы. Было обследовано 2 группы пациентов c острым гепатитом В. Диагноз был подтвержден наличием HBsAg. Исследования шли в разгар заболевания. У больных имелись желтушность, интоксикация, увеличение размеров печени, выраженный цитолитический синдром. Контрольую группу (КГ) составили 15 больных в возрасте 17-68 лет (8 женщин и 7 мужчин), получавшая базисную терапию - инфузии 5% раствора глюкозы, физраствора, солевых растворов, спазмолитиков, витаминов. В основную группу (ОГ) вошли 15 лиц в возрасте 17-60 лет (12 мужчин и 3 женщины). ОГ кроме базисной терапии прошла курс антиоксидантной терапии препаратом «Рексод» (производство ООО «Рэсбио» и НПП «Трис»). Препарат вводился внутривенно капельно в 100 мл 0,9% NaCl в течение 30 мин. ежедневно в течение 10 дней. Разовая доза препарата равна 32 мг.

Исследование проведено путем двойного слепого плацебо контролируемого рандомизированного метода. Проведена оценка биохимических параметров и показателей процессов свободнорадикального окисления (СРО) и антиоксидантной системы до и после лечения препаратом экзогенной СОД. Статистическую обработку результатов вели по Т-критерию Вилкоксона.

Проводили биохимические исследования общего билирубина, АлАТ, ЩФ, ГГТП и холинэстеразы, на анализаторе «Kone Specific». Оценивались параметры СРО и антиоксидантной системы: определялись конечные продукты ПОЛ (ТБК-АП - тиобар-битуровая кислота - ТБК-активные продукты)); уровень окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах, активности СОД в эритроцитах, нейтрофилах и мононуклеарах; активности каталазы. Исследования велись в день забора материала. Сыворотку крови получали обычным способом. Эритроцитарную массу использовали для получения гемолизата по методу определения параметров антиоксидантного статуса. Нейтрофилы и мононуклеары выделяли из периферической крови с применением фиколл-верографинового градиента [5]. Число клеток в суспензии подсчитывали в камере Гаряева. Разводили суспензию таким образом, чтобы в 1 мл было 4 млн. клеток.

Анализ конечных продуктов ПОЛ (ТБК-АП) проводили по тесту с ТБК [15, 2], уровень окисленного и восстановленного глутатиона в эритроцитах [17] - по цветной реакции с хлорпро-мазином в присутствии ионов палладия, определение активности СОД в эритроцитах - по методике с НСТ - нитротетразолиевым синим [14]; определение активности СОД в нейтрофилах и моно-нуклеарах - набором «Randox» и рассчитывали единицу активности на 1 миллион клеток; уровень активности каталазы - по методу [12]; определение карбонильных групп - по методу, предложенному Оливером и соавт. (метод основан на взаимодействии карбонильных групп с 2,4-динитрофенилгидразином).

Результаты. Были рассмотрены клинико-лабораторные показатели состояния пациентов с острым гепатитом B до и после лечения. КГ - группа плацебо - пациенты, получавшие только базисную терапию (n=15). ОГ - пациенты, получавшие, кроме базисной, антиоксидантную терапию препаратом «Рексод». Анализ данных показал отсутствие достоверных различий исходных параметров между этими двумя группами, что позволило в дальнейшем оценить влияние препарата «Рексод».

С.Г. Андреева, Н.Н. Зыбина, М.В. Коробова и др.

Таблица 1

Таблица 3

Биохимические показатели периферической крови пациентов с острым гепатитом В до лечения, Х(80)

Биохимические показатели периферической крови пациентов с острым гепатитом В до и после лечения, Х(80)

Показатель Норма КГ (п=15) ОГ (п=15) Р

Билирубин общий, мкмоль/л 10,04 (8,56) 200,07* (94,12) 141,50* (108,32) >0,05

ЩФ, Е/л 97,87 (85,98) 378,13* (97,88) 439,62* (180,97) >0,05

ГГТП, Е/л 23,78 (13,89) 165,73* (125,56) 142,50* (77,43) >0,05

АлАТ, Е/л 22,08 (11,84) *) 34 СО 16 1383,38* (439,16) >0,05

Холинэстераза, Е/л 3360,93 (1167,87) 2630,40 (663,24) 2276,90 (772,32) >0,05

Примечание: р - различия между показателями в группах до лечения, * — различия по сравнению с нормой (р<0,05)

Таблица 2

Показатели процессов СРО и антиоксидантной системы у лиц с острым гепатитом В до лечения, Х(80)

Норма ОГ КГ

до лечения п=15 после лечения п=15 до лечения п=15 после лечения п=15

ЩФ, Е/л 10,04 (8,56) 378,13* (94,12) 236,93* (74,00) 439,62* (108,32) 276,37* (150,04)

ГГТП, Е/л 97,87 (85,98) 165,73* (97,88) 122,67* (53,13) 142,52* (180,97) 91,50 (90,35)

Общий билиру- бин, мкмоль/л 23,78 (13,89) 200,06* (125,56) 99,60* (115,14) 142,50* (77,43) 58,50* (92,14)

АлАТ, Е/л 22,08 (11,84) 1519,13* (663,24) 536,53* (648,71) 1383,38* (439,16) 314,13* (225,97)

Холинэ- стераза, Е/л 3360,93 (1167,87) 2630,40 (663,24) 2977,53 (652,09) 2276,90 (772,32) 2618,00 (912,55)

Примечание: р - различия между показателями в группах до лечения, *-различия по сравнению с нормой (р<0,05)

Нормальные КГ ОГ

значения (п=15) (п=15)

СОД эритроцитов, 130,4 128,4 123,3

Отн.ед./мл (11,5) (14,2) (10,1)

СОД нейтр. , 32,95 27,00* 26,95*

Отн.ед./млн. кл. (1,95) (3,7) (4,92)

СОД мон. , 32,39 21,23* 22,7*

Отн.ед./млн. кл. (1,67) (8,10) (4,41)

Каталаза эритр. 7,57 5,24 5,39

Ед./мл (2,78) (1,14) (0,87)

Глутатион восстанов- 2,8 1,76* 1,65*

ленный эритроцитов мкмоль/л (0,23) (0,39) (0,49)

Глутатион окислен- 0,27 0,32 0,28

ный эритроцитов мкмоль/л (0,25) (0,29) (0,18)

Карбонильные груп- 0,93 1,77* 1,97*

пы белков сыворотки нмоль/мг белка (0,12) (0,31) (0,32)

ТБК-АП нейтрофилов 0,15 0,25 0,54 *

мкмоль/млн. кл. (0,05) (0,14) (0,11)

ТБК-АП моноцитов 0,08 0,22* 0,37*

мкмоль/млн.кл. (0,03) (0,13) (0,08)

Примечание: р>0,05 - различия между показателями в группах до лечения. * - различия по сравнению с нормой (р<0,05)

Как видно из табл. 1, у пациентов в обеих группах до лечения наблюдалось повышение активности ЩФ, ГГТП и АлАТ. Активность холинэстеразы у обследованных пациентов в среднем по группам укладывалась в диапазон нормальных значений.

Активность эритроцитарной СОД была нормальной (табл. 2). Шло снижение средних значений СОД в нейтрофилах и мононуклеарах. Уровень каталазы у обследованных в среднем находился на нижней границе нормы. Среднее значение уровня восстановленного глутатиона было снижено относительно нормы в два раза в обеих группах. Средние значения окисленного глута-тиона соответствовали норме. При анализе процессов ПОЛ значения ТБК-АП в нейтрофилах и мононуклеарах периферической крови значительно превышали норму, но был достоверно значимый рост уровня карбонильных групп в белках сыворотки крови.

Следующим этапом была оценка влияния рекомбинантной СОД на клинико-лабораторные показатели при остром гепатите

В. Был проведен сравнительный анализ изменений биохимических показателей и показателей оксидативного стресса и антиоксидантного статуса КГ и ОГ. При сравнении биохимических параметров в обеих группах отмечалась тенденция к их нормализации. Но в ОГобщий билирубин, АлАТ и ГГТП снизились в среднем на 15% больше, чем в КГ (табл. 3).

В обеих группах активность СОД в эритроцитах оставалась на постоянном уровне. СОД в мононуклеарах и нейтрофилах в ходе терапии возросла в обеих группах, причем в ОГ на 30% больше, чем в КГ (табл. 4).

□ % ИЗМЕНЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ В ГРУППЕ С БАЗИСНОЙ ТЕРАПИЕЙ

□ % ИЗМЕНЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ В ГРУППЕ ПОЛУЧАВШЕЙ ПРЕПАРАТРЕКСОД

1 2 3 4 5

Рис. 1. Изменения параметров табл. 3 в КГ и ОГ. Примечание: «0» уровень - исходные значения показателя; по оси Х: 1-ЩФ,2 - ГГТП, 3 - общий

билирубин,4 - АлАТ, 5 - ХЭСТЭР

Таблица 4

Показатели процессов СРО и антиоксидантной системы у лиц с острым гепатитом В до и после лечения, Х(80)

КГ ОГ

Нор- ма до лече- ния п=15 после лече- ния п=15 до лече- ния п=15 после лече- ния п=15

Карбонильные группы белков сыворотки, нмоль/мг белка 0,93 (0,12) 1,77* (0,31) 1,65* (0,17) 1,97* (0,32) 1,15 (0,27)

СОД эритр., отн.ед./мл 130,4 (11,5) 128,4 (14,2) 124,5 (7,99) 123,3 (10,1) 123,4 (8,88)

СОД нейтр., отн.ед./млн. кл. 32,95 (1,95) 27,00* (3,7) 30,16 (3,73) 26,95* (4,92) 38,58 (5,01)

СОД мон., отн.ед./млн. кл. 32,39 (1,67) 21,23* (8,10) 26.05* (8,17) 22,7* (4,41) 33,53 (5,51)

Каталаза эритр., Ед/мл 7,57 (2,78) 5,24 (1,14) 5,20 (1,48) 5,39 (0,87) 5,44 (1,13)

Глутатион восстановленный эритроцитов, 2,8 (0,23) 1,76* (0,39) 1,64* (0,53) 1,65* (0,49) 1,81* (0,44)

Гмлкумтоалтьи/олн окисленный эритроцитов, мкмоль/л 0,27 (0,25) 0,32 (0,29) 0,28 (0,22) 0,28 (0,18) 0,41* (0,25)

ТБК-АП нейтрофи-лов, мкмоль/л 0,15 (0,05) 0,25* (0,14) 0,14 (0,06) 0,54 * (0,11) 0,21 (0,09)

ТБК-АП моноцитов, мкмоль/л 0,08 (0,03) 0,22* (0,13) 0,13 (0,06) 0,37* (0,08) 0,16 (0,08)

Примечание: * - различия по сравнению с нормой (р<0,05)

Статья

□ % ИЗМЕНЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ В ГРУППЕ С БАЗИСНОЙ ТЕРАПИЕЙ

□ % ИЗМЕНЕНИЯ ПАРАМЕТРОВ В ГРУППЕ ПОЛУЧАВШЕЙ ПРЕПАРАТ РЕКСОД

Рис. 2. Изменения параметров табл. 4 в КГ и ОГ. Примечание: 0 - исходные значения показателя; по оси Х: 1 - карбонильные группы, 2 - СОД эритроцитов, 3 - СОД нейтрофилов, 4 - СОД мононуклеаров, 5 - каталаза эритроцитов, 6 - глутатион восстановленный, 7 - глутатион окисленный, 8 - ТБК-АП нейтрофилов, 9 - ТБК-АП мононуклеаров

Уровень каталазы в обеих группах и до и после лечения, оставался баз изменения на нижней границе нормы и оказался неинформативным в описании динамики оксидативного стресса. По-разному менялось количество восстановленного и окисленного глутатиона. В ОГ уровень окисленного глутатиона повысился, приблизившись к нормальным значениям, а уровень восстановленного глутатиона остался без изменения, в то время как в КГ уровень восстановленного и окисленного глутатиона снижался к моменту повторного исследования. В процессе лечения уровень продуктов ПОЛ (кол-во ТБК-АП в нейтрофилах и мононуклеарах), имел тенденцию к снижению и нормализации у всех пациентов. В ОГ снижение количества ТБК-АП нейтрофилов и мононуклеаров было в среднем на 15% больше, чем в КГ. Рексод позволил снизить уровень карбонильных групп и приблизить его к норме. Применение рекомбинантного препарата «Рексод» в терапии острого вирусного гепатита В усиливало (рис. 1, 2) рост активности ключевого фермента антиоксидантной защиты организма - СОД - в нейтрофилах и мононуклеарах, снижало уровень продуктов ПОЛ (кол-во ТБК-АП в нейтрофилах и мононуклеа-рах) и уровень продуктов окислительной деструкции белков, что позволило уменьшить эффекты окислительного стресса и повысить устойчивость гепатоцитов к действию свободных радикалов.

Литература

1. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биосистемах // Биология, Соросов. образоват. ж.- 2000.

2. Гаврилов В.Б. и др. // Вопр. мед. химии.- 1987.- Т.33, № 1.- С. 118-122.

3. Дроздова Ю.И. Выделение и изучение свойств суперок-сиддисмутазы человека из рекомбинантного штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae: Дис. канд. биол. наук.- СПб.,1997.

4. Дубинина Е.Е. // Вопр. мед.химии.- 2001.- Т.47, №6.-

С.561-558

5. Зыбина Н.Н., Лавинская Н.Н. // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медиколабораторных исследованиях и клинической практике.- СПб.: ВМедА, 1994.- С. 40.

6. Клебанов Г. И. и др. // Вест. РАМН.- 1999.- № 2.- С. 15.

7. Нагоев Б. С., Иванова М. Р. // Тер. архив.- №11.- 2003.

8. Никитин Е.В. и др. // Вюник морсько1 медицини.- 1998.-№1.- С. 15-17.

9. Патент № 2186848 РФ. Способ выделения супероксид-дисмутазы. / Соловьева Л.Я., Чурилова И.В., Княжев В.А., Калошин В.Г., Антипова Т.О., Федорова Н.М.- 2002.

10. Скальный А. В., Кудрин А. В. Радиация, микроэлементы, антиоксиданты и иммунитет.- М., 2000.- С. 427.

11. Чурилова И.В. и др. // Бюлл. экспер. биол. и мед-ны.-2002.- Т.134, № 11.- C..528-531.

12. Aebi H. // Meth. Enzymol.- 1984.- Vol. 2, №9.- P. 673-.

13. Davis JM. et al. // J Perinatol.- 2000.- № 4.- C.213-216

14. FriedR. // Biochemie.- 1975.- Vol. 57.- P. 657-660.

15. Gutteridge J.M.C. et al. // Anal. Biochem.- 1978.-Vol. 91.- P. 250-257.

16. Internotional conference on «Superoxide dismutases: Recent Advanses and Clinical Applications» Мау 14-15, 1998.- Institut Pasteur - Paris.- 125 p.

17. Lee Kum-Tatt, Tan It-Koon. // Clinic a Chimica Acta.-1974.- Vol. 53.- P. 153-161.

18. Loguercio C., Federico A. // Free Radic Biol Med.- 2GG3. Vol. 34 (1).- P.1-1G.

ESTIMATION OF AN EFFECT OF EXOGENOUSE SUPEROXIDE DISMUTASE ON PROCESSES OF FREE-RADICAL OXIDATION IN PATIENTS WITH ACUTE HEPATITIS B

S.G. ANDREEVA, N.N. ZYBINA, M.V. KOROBOVA, M.YU.FROLOVA, I.V. CHURILOVA

Summary

Making use of the recombinant preparation Recsod in therapy of acute viral hepatitis B promoted augmentation of activity of superoxide dismutase being the key enzyme of an organism’s antioxidant protection, what resulted in reduction of effects of oxidative stress and in increasing of hepatocytes resistance to a free-radical attack.

Key words: exogenouse superoxide dismutase

УДК616.37-002-08:615.015

НОВЫЕ ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СПАЙКООБРАЗОВАНИЯ В БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ ПРИ ПЕРИТОНИТЕ

А.П. ВЛАСОВ, О.Ю. РУБЦОВ*

Введение. Спаечная болезнь органов брюшной полости относится к ряду актуальных проблем современной медицины [1, 2]. Возрастающее количество операций на органах брюшной полости ведет к увеличению числа больных со спаечной болезнью [2], в т.ч. осложненной ранней или поздней непроходимостью кишечника с летальностью до 13-55% [1-3]. Классический патогенез развития спаек известен [4]. Воспалительная реакция брюшины обуславливает выпотевание экссудата, содержащего факторы свертывания и фибриноген. Это ведет к образованию фибринозных наложений между органами брюшной полости. Если фибринолитическая активность брюшины сохранена, то в течение 24-72 ч. после операции идет лизис фибрина. При спаде фибринолитической активности фибринозные сращения между органами переходят в фиброзные соединительно-тканные спайки.

Цель - изучение причин гиперкоагуляции и торможения фибринолитической активности брюшины при перитоните.

Материалы и методы исследования. Поставлены опыты на взрослых беспородных собаках. В качестве модели спайкооб-разования выбран перитонит. Через 20-24 ч. делали лапаротомию и санировали брюшную полость. На 1, 3, 5 сутки выполняли релапаротомию, изучали активность адгезиообразования по Р. А. Женчевскому [3], вели забор крови, лимфы из грудного лимфатического протока, биопсию ткани тонкой кишки. Выполняли макро- и микроскопические исследования ткани кишечника. Оценивали анти-, коагуляционный, фибринолитический компоненты гемостаза, состав липидов, состояние перекисного окисления липидов (ПОЛ) и активности фосфолипазы А2.

Результаты исследований. У всех особей имелся процесс спайкообразования в брюшной полости. Тонкие бессосудистые, прозрачные, легко разрушаемые спайки наблюдались в первые трое суток после санации брюшной полости. Выраженный адгезивный процесс выявлялся на 3-5 сутки послеоперационного наблюдения. В итоге наибольшая степень активности спайкооб-разования в брюшной полости была в 33,33% наблюдений, умеренно выраженная - в 37,04%, единичные спайки - в 29,63%.

При исследовании свертывающей системы крови и лимфы выявлялись гиперкоагуляция и торможение фибринолиза, сохраняющиеся на всем протяжении раннего послеоперационного периода. Активность спайкообразования достоверно зависела от состояния системы свертывания крови и лимфы. Это подтверждал характер достоверной и сильной корреляционной связи между этими процессами. После операции количество первичных

ГОУ ВПО «Мордовский университет им. Н.П. Огарева», кафедра факультетской хирургии, 430000 РМ, г. Саранск, ул. Большевистская, 68