CC BY
19
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Broekhuijsen M., Larsson P., Johansson A. et al. // J. Clin. Microbiol. - 2003. - Vol. 41, N 7. - P. 2924-2931. -2. Johansson A., Ibrahim A., Goransson I. et al. // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38. - P. 4180-4185. - 3. Puente-Re-dondo de la V.A., Blanco del N.G., Gutierrez-Martin C.B. et al. // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38. - P. 10161022. - 4. Sjostedt A.B. // D.J.Brenner (ed.), Bergey’s manual of systematic bacteriology. - N.Y.: Springer-Verlag, 2003. -P. 200-210.
N.A.Ossina, M.S.Moshkova, D.V.Utkin, O.Yu.Lyashova, A.N.Kulichenko
Identification of Francisella tularensis Subspecies Using the Multiplex Polymerase Chain Reaction
Russian Anti-Plague Research Institute "Microbe ", Saratov
A procedure was elaborated to identify Francisella tularensis subspecies using the two-step multiplex PCR method. The RD1 differentiation domain was chosen as the DNA target with three primer pairs based on it. The formation of definite sizes of DNA fragments was characteristic of each tularemia pathogen subspecies.
Key words: Francisella tularensis, identification of microorganisms, multiplex PCR.
Поступила 05.02.07.
УДК 616.982.27-039
К.А.Ротов, В.В.Алексеев, Е.А.Снатенков, Н.П.Храпова, С.Н.Тихонов, В.И.Каплиев,
Ю.Ю.Целентис, Н.А.Чупрына
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ ЛЕГОЧНОЙ ФОРМЫ ОСТРОГО МЕЛИОИДОЗА ЛИПОСОМАЛЬНЫМ ЦЕФАЗОЛИНОМ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ
Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт
Представлены данные по получению липосомального цефазолина, оценены его физико-химические свойства. При сравнительном изучении эффективности лечения легочной формы мелиоидоза цефазолином в свободной и липосомальной формах установлено, что иммобилизация антибиотика в липосомы позволила снизить ЕДз0 препарата в 2,7 раза.
Ключевые слова: мелиоидоз, цефазолин, липосомальная форма, лечение.
Мелиоидоз относится к бактериальным особо опасным инфекциям, протекающим в различных клинических формах (от молниеносной до латентной). Возбудитель мелиоидоза назван в числе вероятных агентов, которые могут быть применены в качестве биологического оружия [1]. Летальность от молниеносной формы мелиоидоза, даже при проведении интенсивного лечения, достигает 50-75 %, а антимикробная терапия нередко дает временный эффект, заболевание часто принимает рецидивирующий характер [4].
По тяжести клинического течения и летальности мелиоидоз занимает одно из первых мест среди особо опасных инфекций. Вместе с тем проблема экстренной профилактики и лечения мелиоидоза разработана недостаточно. Учитывая то, что в настоящее время практически нет средств специфической профилактики мелиоидоза, а набор эффективных препаратов, используемых для лечения ограничен, актуальность терапии данного заболевания не вызывает сомнений.
Одним из перспективных путей решения данной проблемы является использование липосом -носителей антибиотиков. Включение антимикробных препаратов в липосомы позволяет в ряде случаев пролонгировать их действие, обеспечить нетрадиционные пути доставки этих веществ в различные органы и ткани макроорганизма, повысить селективность их действия и снизить токсичность [5, 6].
Цель работы - изучение эффективности лечения легочной формы мелиоидоза липосомальным цефазолином в эксперименте.
Иммобилизацию цефазолина в липосомы производили методом выпаривания и обращения фаз [8]. Липосомальная мембрана состояла из хроматографически чистых лецитина (Харьковский завод бактерийных препаратов) и холестерина («Serva», Германия) в молярном соотношении 7:3. Для оценки включения в липосомы антибиотика холестерин растворяли в забуференном физиологическом растворе (рН 7,2) в конечной концентрации 150 ед/мл. Отделение невключившихся антибиотиков проводили после центрифугирования при 20000 об/мин в течение 1 ч на центрифуге Ja-21 «Beckman» (США). Количество невключившегося внутрь липосом препарата определяли микробиологическим методом [3]. Степень окисления липидов устанавливали по перекисному индексу Клейна [7]. Заражающая ас-пирационная доза Burkcholderia pseudomallei 100 -34 LD50 (101 м.к.). Лекарственный препарат в дозах 16, 8, 4, 2 мг для свободного цефазолина и 12, 6, 3, 1,5 мг для липосомального антибиотика вводили внутрибрюшинно 32 аутбредным белым мышам обоих полов массой 18-20 г (по 4 животных в группе) на следующие сутки от момента заражения 3 сут подряд, а затем - с интервалом 48 ч в течение 15 сут. Об эффективности лечения судили по проценту выживших и средней продолжительности жизни опытных животных, ED50 препарата (оценивали по методу Кербера) [2], по патоморфологической картине при аутопсии, результатам бактериологического исследования органов. Результат лечения липосомальным антибиотиком сравнивали с эффективностью лечения животных, получавших
Результаты лечения легочной формы острого мелиоидоза цефазолином в свободной и липосомальной формах у экспериментальных животных
Препарат Доза, мг Кол-во животных Средняя продолжительность жизни животных, сут % защиты препарата, мг (I95)
Цефазолин 16 2/4* 23 5Q 9,77
8 2/4 2Q 5Q (9,2-12,1)
4 Q/4 13 Q
2 Q/4 9 Q
Цефазолин 12 3/4 33 75 3,59
в липосомах 6 3/4 1Q 75 (2,Q 1-4,1)
3 2/4 9 5Q
1,5 1/4 7 25
Контроль - Q/4 8 - -
* В числителе - выжившие, в знаменателе - всего в группе.
препарат в свободной форме.
В настоящей работе использовали препараты липосом с высоким содержанием в них цефазолина- (75 + 1,2)%. Размеры липосом при этом составляли 620 нм (430-1200 нм). Степень окисления липидов мембраны везикул соответствовала (1,2 ± 0,15) ед. Полученные данные об эффективности лечения экспериментального мелиоидоза представлены в таблице.
Таким образом, иммобилизация цефазолина в липосомы позволила повысить процент защиты от 50 для свободного антибиотика и до 75 в иммобилизованной форме. При этом ED50 препарата составляла в липосомальной форме 3,59 мг, а свободного антибиотика - 9,77 мг (р < 0,05). Полученные результаты свидетельствуют о высокой эффективности липосомальной формы цефазолина при лечении легочной формы острого мелиоидоза. Учитывая высокую эффективность данного лекарственного пре-
парата у животных в эксперименте, целесообразно расширить исследования в этом направлении.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Алексеев В.В., Тихонов Н.Г., Липницкий А.В., Пучков В.С. и др. // Пробл. особо опасных инф. -2QQ3. - Вып. 85. - С. 2Q-27. - 2. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Рига, 1956. - 3. Дмитриева В.С. Микробиологический контроль активности антибиотических препаратов. - М.: Медицина, 1965. - 112 с. - 4. Онищенко Г.Г., Федоров Ю.М., Тихонов Н.Г., Липницкий А.В. и др. // Эпидемиол. и инф. бол. - 2QQ3. - № 2. - С. 4-6. - 5. Ротов К. А., Тихонов Н.Г., Васильев В.П., Масленникова В.Н. // Генет. и биохим. вирулентности возбудит. особо опасных инф.: Матер. Российск. науч. конф. - Волгоград, і992. - С. 2Q4. - б. Ротов К.А., Васильев В.П., Ревенко Л.Г. // Особо опасные инф. забол.: диагн., профилакт. и биол. свойства возбудителей. - 199Q. - Вып. 4. - С. 74-79. - 7. Klein R. A. // Biochim. et biophys. acta. - 197Q. - N 21Q. - P. 486-489. - S. Szoka F., Pa-pahadjopoulos D. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1978. -Vol. 75, N 9. - P. 4194-4198.
K.A.Rotov, V.V.Alekseyev, E.A.Snatenkov, N.P.Khrapova, S.N.Tikhonov, V.I.Kapliev, Yu.Yu.Tselentis, N.A.Chupryna
Assessment of Treating Efficacy of Liposomal Cephazolin Against Experimental Acute Pulmonary Melioidosis
Volgograd Anti-Plague Research Institute
Liposomal cephazolin was obtained and its physical and chemical properties were analyzed by the authors. The free and liposomal forms of cephazolin were used in a comparative study to assess their treatment efficacy against pulmonary melioidosis. The experiments demonstrated that immobilization of the antibiotic in the liposomes permitted a 2.7 fold decrease of its ED50 dose.
Key words: melioidosis, cephasolin, liposomal form, treatment.
Поступила 14.02.06.
