CC BY
15
Медицинская Иммунология Medical Immunology (Russia)/Meditsinskaya Immunologiya
«Дни иммунологии в СПб 2017» Immunology Days in St. Petersburg 2017
организма-хозяина: после предварительного контакта с факторами плазмы крови внутриклеточные микобакте-рии размножаются хуже. После обработки микобактерий сывороткой, полученной от зараженных ранее мышей, рост микобактерий в макрофагах снижался в 3,5 раза по сравнению с микобактериями, обработанными не иммунной сывороткой, скорее всего, из-за присутствия в иммунной сыворотке специфичных к микобактериям антител.
В последующих экспериментах мы сравнили активность сывороток, полученных от мышей В6 и от выведенных в нашей лаборатории рекомбинантных конгенных линий мышей B6.I-9.3, B6.I-139 и B6.I-100, отличающихся по коротким фрагментам комплекса Н2, которые были перенесены от чувствительной к ТБ линии I/St на генетическую резистентных мышей В6, в результате чего эти линии приобрели разную чувствительностью к ТБ (Logunova et al., 2015). Результаты показали, что при опсо-низации микобактерий сывороткой более высокий фагоцитарный индекс давали сыворотки резистентных линий B6.I-139 (1, 68) и B6.I-9.3 (1,31) по сравнению с сывороткой чувствительной линией B6.I-100 (0,55). По фагоцитарному числу достоверных различий не наблюдалось.
Возможно, еще один из механизмов, определяющих восприимчивость мышей к туберкулезу — это эффективность опсонизации микобактерий, которая влияет на эффективность фагоцитоза.
Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 15-1530020 (клеточные культуры) и гранта РФФИ 15-04-02002 (выведение и поддержание конгенных линий мышей).
ОСОБЕННОСТИ ВЛИЯНИЯ ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ МОБИЛЬНОГО ТЕЛЕФОНА НА АКТИВАЦИЮ ЛИМФОЦИТОВ ДОНОРОВ, НАХОДЯЩИХСЯ В ПОСТВАКЦИНАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ
Капустин И.В.1, Тульская Е.АЛ 2, Бляхер М.С.1, Лопатина Т.К.1, Котелева С.И., Нестеренко В.Г.3, Суслов А.П.3, Коноплёва М.В.3
1ФБУН«Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Т.Н. Габричевского» Роспотребнадзора, Москва, Россия
2 ФГБУ«Научно-исследовательский институт экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
3 ФГБУ ««Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения РФ, Москва, Россия
Введение. Вопрос о влиянии электромагнитного излучения (ЭМИ) мобильных телефонов на разные функции организма привлекает внимание исследователей, работающих в разных областях науки — генетиков, онкологов, гериатров, иммунологов. Изучение этих вопросов проводится с использованием разных методических подходов в опытах in vitro или in vivo, с использованием в качестве источника ЭМИ либо разных моделей мобильных телефонов, либо имитирующих их искусственно созданных систем.
Цель. Сравнение чувствительности клеток периферической крови людей до и после вакцинации к воздействию ЭМИ мобильного телефона.
Материалы и методы. Объектом исследования служили цельная венозная кровь и выделенные из нее лимфоциты 21 взрослого донора (от 20 до 55 лет): 10 — это здоровые доноры и 11 человек, через 7 дней после вакцинации их менингококковой, полисахаридной (серогрупп А, С, Y и W-135), коньюгированной с дифтерийным анатоксином вакциной. Исследование влияния ЭМИ телефона на функциональную активность лимфоцитов периферической крови проводили следующим образом — лимфоциты или клетки цельной крови помещали в лунки культураль-ных планшетов, на планшеты воздействовали мобильным телефоном, принимавшем звонки на протяжении 5 часов, далее среди лимфоцитов определяли % CD69+ лимфоцитов, а в надосадках — концентрацию №N7, TNFa, Ш-6 и ГЬ-8. По разнице этих величин в культуре клеток до и после воздействия ЭМИ телефона судили о наличии или отсутствии его воздействия на эти показатели.
Результаты. Состояние иммунной системы людей из группы здоровых доноров и доноров, которые в дальнейшем подверглись вакцинации, практически не отличалось и все показатели находились в пределах возрастной нормы. Через неделю после вакцинации наблюдались значимые отличия практически по всем основным субпопуляциям, которые выражались в повышении абсолютного количества лейкоцитов и лимфоцитов. Кроме того, процент активированных цитолитических Т-клеток (CD3+CD8+), несущих разные активационные маркеры, через неделю после прививки имел тенденцию к снижению: % CD69 с 4,9±2,9 до 2,2±1,0; % HLADR с 4,1±1,5 до 2,5±0,8. Таким образом, в эксперименте были использованы клетки крови практически здоровых доноров и доноров, иммунная система которых была изменена под влиянием вакцины, т.е. в большей степени синхронизирована.
В результате исследования воздействия ЭМИ мобильного телефона на клетки крови выявлено, что изменение процента лимфоцитов, несущих ранний маркер активации CD69, наблюдали существенно чаще и с большей интенсивностью в группе доноров, находившимися в поствакцинальном периоде по сравнению со здоровыми донорами. Под воздействием ЭМИ телефона средние значения продукции изученных цитокинов не изменялись в образцах супернатантов в обеих группах, но у здоровых доноров были в 1,5 — 2 раза выше, чем у людей в поствакцинальном периоде. Продукция всех цитокинов клетками крови существенно чаще и с большей интенсивностью изменялась под влиянием ЭМИ телефона в группе здоровых доноров по сравнению с донорами, находящимися в поствакцинальном периоде. Продукция №N7 клетками крови изменилась у 3 здоровых доноров (в среднем в 3,5 раза, а у одного человека — в 6,5 раз) и у 2 вакцинированных (в среднем в 1,4 раза, такого сильного изменения, как у здоровых доноров не было), т.е. интенсивность этих изменений была принципиально разная; продукция TNFa клетками крови изменилась у 5 здоровых доноров (в среднем в 1,9 раз, а у отдельных людей до 3,5 раз) и у 2 вакцинированных (в 1,4 раза), т.е. и в данном случае интенсивность этих изменений была №N7 разная; продукция ГЬ-6 клетками крови изменилась у 5 здоровых доноров (в среднем в 2 раза, а у отдельных индивидуумов — в 4 раза) то время, как этот показатель изменился под влиянием ЭМИ телефона только у одного вакцинированного (в 2,5 раза); продукция Ш-8 клетками крови изменилась
2017, Т. 19, Специальный выпуск 2017, Vol. 19, Special Issue
Экспериментальные модели Experimental models
у 7 здоровых доноров (в среднем в 3 раза, а у отдельных индивидуумов — в 5 раз) и у 4 вакцинированных (в среднем в 2,5 раза, но не более, чем в три раза).
Заключение. Основной вывод по результатам данного исследования заключается в том, что изменение продукции цитокинов клетками крови под воздействием ЭМИ телефона происходит индивидуально; это следует учитывать при решении вопроса о наличии или отсутствии влияния ЭМИ телефона на состояние лимфоцитов.
ОЦЕНКА ЛАБОРАТОРНЫХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КЛИНИЧЕСКИ ЗДОРОВЫХ ОБЕЗЬЯН ВИДА МАКАК-РЕЗУС (MACACA MULATTA) АДЛЕРСКОГО ПИТОМНИКА
Карал-оглы Д.Д., Игнатова И.Е., Мухаметзянова Е.И., Гварамия И.А., Агрба В.З.
ФГБНУ «Научно-исследовательский институт медицинской приматологии», Сочи, Россия
Введение. Широко известно, что филогенетическое родство представителей отряда приматов делает обезьян адекватной моделью для воспроизведения на них различных патологических состояний человека. Данные, полученные на обезьянах, с минимальной коррекцией можно экстраполировать на людей, для чего необходимы точные сведения о функционировании их физиологических систем в норме.
Цель. Изучение в комплексе кроветворной и иммунной систем макаков-резусов Адлерского питомника,животных, наиболее востребованных в экспериментальной медицине. Все исследования на животных проводили в соответствии с требованиями комитета по биоэтике и федеральным законом РФ о защите животных от жестокого обращения (ст.4 Закона РФ о защите животных от жестокого обращения от 01 декабря 1999 г.).
Материалы и методы. Материалом для исследования служила цельная кровь, взятая в гепарин, а также сыворотка крови 30 макаков-резусов обоего пола в возрасте от 3 до 5 лет. В эксперименте были использованы следующие методы:
1. Метод проточной цитометрии на проточном цито-метре Beckman Coulter EpicsXL-MCL (ВесЙюп Сои^ег, США) с аргоновым лазером с длиной волны 488 нм. Для постановки реакции использовали моноклональные антитела (фирма «BectonDickmson»),специфичные для антигенов обезьян, в следующих комбинациях:CD3 — FITC/CD4-PE,CD3 - FITC/CD8-PE,CD3 - FITC/CD16-PE,CD3 - FITC/CD20-PE, CD3 - FITC/CD25-PE,CD3 -FITC/CD45RA,CD3 - FITC/HLA-DR. Цитограммы исследуемой клеточной взвеси выводили на основе регистрируемых параметров малоуглового (FSC) и бокового (SSC) светорассеяния.
2. Гематологический анализ крови обезьян проводили на гематологическом анализаторе фирмы «Beckman 5 diff»,USA.
3. Исследование функциональной активности лимфоцитов обезьян (IFNa, IFNy, спонтанная продукция и циркулирующий в сыворотке IFN) изучали биологическим методом в нашей модификации путем определения способности лимфоцитов обезьян отвечать интерферо-новой реакцией на адекватное воздействие.
4. Определение провоспалительных цитокинов (ГЬ-1р, ГЬ-6, TNFa) и С-реактивного белка проводили методом ИФА на приборе «УНИПЛАН» с использованием наборов ЗАО «Вектор-Бест».
Результаты. Показатели клеточного звена иммунитета клинически здоровых обезьян варьировали в широких пределах, отмечалось, что экспрессия CD3, CD4 и CD45RA у самцов незначительно выше, а экспрессия CD8 ниже, чем у самок. Данные, полученные на макаках-резусах как для самцов, так и для самок, максимально приближены к границам нормы таковых у людей, за исключением CD20, показатели которого колеблются от 12,75±8,25% у самцов и 13,45±9,55% у самок.
Поскольку результаты гематологического исследования позволяют выявить различные патологии и заболевания, представляло интерес оценить гематологические показатели клинически здоровых макаков-резусов Адлерского питомника. Исследование показало, что результаты гематологического анализа существенно не отличаются от таковых, установленных для людей и соответствуют данным, описанным раннее, за исключением повышенного содержания лейкоцитов — 14,6±6,5 х 109/л и низкой СОЭ-1-3 мм/ч по сравнению с человеком, что является характерным для приматов и объясняется лабильностью их физиологических показателей.
Исследование показателей интерферонового статуса выявило вариабельность в продукции некоторых ин-терферонов между самцами и самками обезьян, однако эти значения не выходили за рамки нормативных величин, установленных для людей (IFNa — 160±32Ед/мл, №N7 - 48±16 Ед/мл, Ш^сп - 4±2Ед/мл, IFN-S -4±2Ед/мл) и соответствует ранее установленным для ма-каков-резусов.
В настоящее время определение цитокинов достаточно широко используется в клинической практике, поскольку их количественное определение и соотношения между собой, как правило, отражают динамику патологического процесса, коррелируют с активностью заболевания и позволяют судить об эффективности проводимого лечения. Однако при этом необходимо четко знать «референтные» уровни цитокинов, свойственные здоровым животным. Полученные результаты показали, что содержание провоспалительных цитокинов в сыворотке крови клинически здоровых половозрелых макаков-резусов обоего пола максимально приближено к нормам, установленным для людей. Колебания значений С-реактивного белка от 0,4 до 9,6 мг/мл объясняется вариабельностью многих показателей у обезьян.
Таким образом, в результате проведенных исследований были установлены гематологические показатели, изучены клеточное звено иммунитета, интерфероно-вый статус, определены провоспалительные цитокины и С-реактивный белок у клинически здоровых макаков-резусов Адлерского питомника. Показано, что исследованные показатели макаков-резусов максимально приближены к аналогичным у людей, что еще раз подтверждает возможность использования обезьян этого вида как адекватной модели для воспроизведения и изучения различных патологических состояний человека, а также доклинических испытаний новых фармакологических препаратов.
