CC BY
53
УДК 591.443:615.37
ОСОБЕННОСТИ СТРОЕНИЯ ТИМУСА НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ БЕЛЫХ КРЫС ПОСЛЕ
ПРИМЕНЕНИЯ ИМУНОФАНА
у//А
Многообразие и широкая распространенность факторов, которые потенциально могут привести к развитию иммунологической недостаточности, позволяют предположить, что каждый человек в течение своей жизни подвергается их длительному воздействию и, таким образом, реальному риску развития иммунодефицита [6, 7]. В связи с этим, особенно в последние годы, возникла настоятельная необходимость в рациональном иммунотропном воздействии с целью предотвращения развития и коррекции уже возникших иммунодефицитных состояний [3, 4]. Особенно актуальна данная проблема для детского возраста в связи с несовершенством строения и функционирования регуляторных систем организма ребёнка, в том числе и иммунной. Исследования, проведенные в последние годы во многих странах мира, позволили разработать и внедрить в широкую клиническую практику иммунотропные препараты направленного действия [5]. Имунофан является пептидным препаратом нового поколения, созданным с использованием нанотехнологий. В связи с тем, что в настоящее время данный препарат широко используется в клинической практике, возникает интерес для изучения особенностей строения органов иммунной системы после его применения.
Целью работы было изучение морфологических особенностей тимуса, как центрального органа иммунной системы, после введения имунофана в эксперименте в неполовозрелом возрасте у животных.
Материал и методы исследования. Исследование проведено на 36 неполовозрелых белых беспородных крысах-самцах, полученных из вивария лабораторных животных Луганского государственного медицинского университета. При работе с животными руководствовались Законом Украины «Про захист тварин вщ жорстокого поводження» от 21.02.2006 р., № 3447, положениями брифинга Европейского научного сообщества «Использование животных в исследованиях» (2000) [2, 8]. Иммуноактивное состояние моделировали путём введения имунофана внутримышечно по схеме в дозировке
0,7 мкг/кг массы тела. Контролем служили крысы, которым вводили эквивалентные объёмы
0,9% раствора натрия хлорида. Животных выводили из эксперимента через 15, 30 и 90 суток после прекращения введения препарата путём декапитации под эфирным наркозом. Тимус взвешивали, фиксировали в 10% растворе формалина, подвергали стандартной гистологической проводке. Срезы органа толщиной 3-5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином и изучали с помощью автоматизированного морфометрического комплекса, включавшего световой микроскоп 01утриэ СХ41, цифровую фотокамеру, персональный компьютер с набором прикладных программ. Для получения объективных результатов изучали показатели абсолютной и относительной массы тимуса, ширину коркового вещества долек, площадь коркового и мозгового вещества, рассчитывали корково-мозговой индекс. Полученные данные обрабатывались с использованием лицензионной программы «^аНэНка 5.5», достоверность различий между показателями экспериментальных и контрольных групп определялась с помощью критерия Стьюдента (р<0,05).
Результаты исследования и их обсуждение. Строение тимуса неполовозрелых крыс контрольной группы подробно описано ранее [1, 3]. Тимус животных экспериментальной группы на протяжении всего срока наблюдения сохранял типичные морфологические черты строения: дольчатость, хорошо различимое корковое и мозговое вещество, спектр основных клеточных популяций (рис. 1).
Абсолютная масса тимуса животных в группе крыс, получавших имунофан, в начале наблюдения (15 сут.) составляла 299,67±6,88 мг. В дальнейшем этот показатель увеличивался: через 30 дней он достигал 382,17±8,70 мг, максимальная абсолютная масса тимуса отмечалась на 90 сутки и составляла 393,00±3,91 мг.
Рис. 1. Участок паренхимы тимуса неполовозрелых крыс: а-через 15 суток после введения
имунофана; б-через 15 суток после введения физиологического раствора: 1-корковое вещество, 2-мозговое вещество. Г.-э.
Приближение: Zoom
132. Объектив: Plan C N 10x0.25 ~/-/FN22.
Рис. 2. Динамика изменения ширины коркового вещества тимуса (мкм)
неполовозрелых белых крыс после введения имунофана и в контроле (M±m, п=6).
Рис. 3. Участок паренхимы тимуса неполовозрелых крыс: а-через 90 суток после введения
имунофана; б-через 90 суток после введения физиологического раствора: 1-корковое вещество, 2-мозговое вещество. Г.-э. Приближение: Zoom 132. Объектив: PlanC N 10x0.25 «/-/FN22.
Динамика относительной массы тимуса имела противоположную направленность с изменением абсолютной массы органа (табл. 1).
Общепризнанным является тот факт, что корковое вещество тимуса служит местом дифференцировки незрелых тимоцитов. Следовательно, морфометрические показатели данной зоны могут отражать степень функциональной активности органа. Были изучены ширина и площадь коркового вещества тимуса после введения иммуностимулятора. Ширина коркового вещества тимуса экспериментальных животных была минимальной через 15 суток после введения препарата и составляла 241,38±1,05 мкм, к 30 суткам данный показатель увеличивался до уровня 278,67±2,12 мкм, а на 90 сутки наблюдения достигал 289,36±2,86 мкм (рис. 2).
Таблица 1
Показатели абсолютной и относительной масс тимуса неполовозрелых белых крыс _______________после введения имунофана и в контроле (M±m, п=72)_______________
Г руппа Сроки в сутках Масса тимуса, мг Относительная масса тимуса, мг/г
Контроль 15 262,50±7,32 2,25±0,11
30 340,00±12,26 2,00±0,16
90 338,33±8,30 1,41±0,05
После применения имунофана 15 299,67±6,88* 2,72±0,26*
30 382,17±8,70* 2,45±0,08*
90 393,00±3,91* 1,80±0,06*
* - достоверные отличия от контрольных данных при p<0,05
По сравнению с контрольными данными в вышеуказанные сроки наблюдения отмечалось достоверное отличие полученных результатов от контрольных на 7,15%, 20,57% и 23,71% соответственно.
Изменения площадей сечения коркового и мозгового вещества тимуса животных, получавших имунофан, представляющие собой доли в процентах от общей площади дольки, имели также выраженный характер. Так, на 15 сутки наблюдения площадь сечения коркового вещества составляла 85,19±1,20%, через 30 суток после окончания введения препарата увеличивалась до уровня 87,25±1,55% и принимала значение 84,27±2,60% на 90 сутки эксперимента. Достоверное увеличение показателя коркового вещества тимуса животных экспериментальной группы относительно данных интактной групп составляло 9,30%, 11,68% и 12,58% соответственно 15, 30 и 90 суткам наблюдения. Площадь сечения мозгового вещества уменьшалась соответственно степени изменения площади коркового вещества.
Динамика изменений корково-мозгового индекса имела аналогичную площади сечения коркового вещества тенденцию. Минимальное значение данный показатель приобретал на 15 сутки наблюдения, составляя 5,75±0,24, затем, к 30 суткам он увеличивался до 6,84±0,26, а через 90 суток после окончания введения препарата достигал уровня 7,35±0,31 (рис. 3). Достоверные различия между показателями экспериментальной и контрольной групп составляли 40,87%, 50,88% и 54,58% соответственно срокам наблюдения.
' S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S S J
1. Введение имунофана в дозировке 0,7 мкг/кг массы тела неполовозрелого экспериментального животного по схеме вызывает активную реакцию со стороны тимуса, что проявляется интенсивным изменением органометрических и морфометрических параметров органа.
2. Максимальные позитивные изменения в строении тимуса после применения имунофана наблюдались на поздних сроках эксперимента (30, 90 сутки).
3. Динамика изменений изученных морфометрических параметров свидетельствовала о замедлении естественных инволютивных процессов в органе.
4. Полученные данные вызывают интерес к изучению особенностей клеточного состава тимуса половозрелых крыс после иммуносупресии и иммуностимуляции, результаты которого будут освещены в наших следующих публикациях.
1. Волошин Н.А. Клеточная динамика тимуса крыс первых суток жизни / Н.А. Волошин, Е.А. Григорьева // Вісник морфології. - 2000. - № 2. - С. 289-292. 2. Закон Украины «Про захист тварин від жорстокого поводження» от 21.02.2006 р., № 3447.
3. Кащенко С.А. Морфологическая реактивность тимуса белых крыс при иммуностимуляции / С.А. Кащенко // Український медичний альманах. - 2004. - Т. 2, № 1. - С. 15-19.
4. Ковешніков В.Г. Ультрабудова органів імунної та ендокринної систем в умовах імуностимуляції /
B.Г. Ковешніков, С.А. Кащенко, О.С. Болгова // Biomedical and Biosocial Anthropology. - 2004. - № 2. -
C.165-168.
5. Лебедев В.В. Опыт применения препарата имунофан в практике инфекционных заболеваний / В.В. Лебедев, В.И. Покровский. - Киев: ООО «БІІ Граф», 2005. - С. 3-14.
6. Манько В.М. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и перспективы / В.М. Манько, Р.В. Петров, Р.М. Хаитов // Иммунология. - 2002. - № 3. - С. 132-138.
7. Пинегин Б.В. Современные представления о стимуляции антиинфекционного иммунитета с помощью
иммуномодулирующих препаратов / Б.В.Пинегин // Антибиотики и химиотерапия.- 2000.- № 12.- С. 3-8.
8. Use of animals in research: [secretary general E. Banda]. - European Science Foundation Policy briefing. - 2000. - № 9. - P. 1-6.
ОСОБЛИВОСТІ БУДОВИ ТИМУСА СТАТЕВОНЕЗРІЛИХ БІЛИХ ЩУРІВ ПІСЛЯ
ЗАСТОСУВАННЯ ІМУНОФАНУ Захаров О.О.
Вивчалися зміни в будові тимуса статевонезрілих щурів після введення імуно-фану в дозуванні 0,7 мкг/кг маси тіла. Вимірювалися абсолютна та відносна маси органу, ширина та площа кіркової та мозкової речовин долек, корково-мозковий індекс. Було встановлено достовірні зміни морфометричних показників, що вказує на активну реакцію тимуса на екзогенний вплив.
Ключові слова: тимус, статевонезрілі щури, імунофан.
FEATURES OF THYMUS STRUCTURE OF IMMATURE WHITE RATS AFTER APPLICATION OF IMUNOFAN Zakharov A.A.
Changes in the thymus structure of immature white rats after imunofan (0.7 ^g/kg intramuscular) administration were studied. The absolute and relative the masses of organ, width and area of lobules cortex and medulla, cortex-medulla index were measured. The reliable differences of morphometric indexes were set, that specifies on the active reaction of thymus on exogenous influence.
Key words: thymus, immature rats,
imunofan.
УДК 611.61-092.6
АНГИО-ПАРЕНХИМАТОЗНЫЕ ОТНОШЕНИЯ В ПОЧКАХ ПЛОДА ЧЕЛОВЕКА
В литературе отмечается, что к концу 5-ого месяца внутриутробной жизни почка человека, сохраняя фетальные черты своего строения, заключающиеся в форме неполной консолидации однодольных частей, становится сходной со зрелой почкой [1,4]. Однако, в литературе практически отсутствуют данные об особенностях включения в данной процесс консолидации кровеносных сосудов и об их отношениях с долевыми совокупностями паренхимы, а также с мочевыводящими образованиями.
Учитывая, что в этом возрасте почки плода имеют малые размеры, представ-ляется возможность, используя их тотальные препараты, получить полномасштабные визуальные данные о топографии в них основных звеньев кровеносного русла, что призвано облегчить понимание закономерностей дислокации в зрелой почке главных артериальных и венозных сосудов.
Целью работы было определение ангио-паренхиматозных отношений в почках плода человека.
Материал и методы исследования. В этих целях использовано пять препаратов 5месячных плодов, полученных в Полтавском патологоанатомическом бюро после искусственного прерывания беременности по социальным и медицинским показаниям.
После фиксации в 10% растворе нейтрального формалина почки фотографировали с двух сторон, а затем рассекали лезвием безопасной бритвы на две половины - переднюю и заднюю. Следующая процедура состояла в заключении их в эпоксидную смолу, согласно разработанному нами методу [3]. После полимеризации с полученных блоков изготовлены шлифы толщиной 1 мм, которые окрашивали метиленовым синим. Препараты изучали и документировали с помощью бинокулярной лупы и светового микроскопа, оснащенных цифровой фотокамерой.
Результаты исследования и их обсуждение. Несмотря на свои малые размеры /длина их равна примерно 17-18 мм, ширина - 14-15 мм/ почка человека в конце 5-го месяца внутриутробного развития по своей общей форме вполне сопоставима со зрелой почкой (рис. 1). В ней отчетливо выделяется округлый латеральный край; вогнутый, с наличием ворот, медиальный край; широкий верхний полюс и узкий - нижний. Но характерным
