CC BY
90
биохимия
© Р. А. КАЛЁКИН, 2013 УДК 615.214.21.074:543.544
Р. А. Калёкин
ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕЙРОЛЕПТИКОВ - ПРОИЗВОДНЫХ БЕНЗАМИДА МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
ФГБУ Российский центр судебно-медицинской экспертизы Минздравсоцразвития РФ, Москва
Приведены данные по использованию метода тонкослойной хроматографии в условиях лабораторной диагностики для идентификации нейролептиков - производных бензамида (амисульприда, сульпирида, тиаприда) в извлечениях из биологических жидкостей и тканей человека с возможностью отделения исследуемых веществ от соэкстрактивных.
Ключевые слова: нейролептики, амисульприд, сульпирид, тиаприд, тонкослойная хроматография
R.A. Kaliyokin
THE TEST OF BENZAMIDE DERIVATIVE NEUROLEPTICS USING THE TECHNIQUE OF THIN-LAYER
CHROMATOGRAPHY
The article presents the data concerning the application of technique of thin-layer chromatography in the conditions of laboratory diagnostics to identify benzamide derivative neuroleptics (amisupride, sulpiride, tiapride) in derivate from human biologic fluids and tissues with the possibility to separate the analyzed tissues from soextractive tissues.
Key words: neuroleptics, amisupride, sulpiride, tiapride, thin-layer chromatography
На фармацевтическом рынке России широко распространены психотропные лекарственные средства - нейролептики, к которым также относится группа производных бензамида. К представителям этой группы относят амисульприд, сульпирид, тиаприд, которые применяют для лечения различных форм шизофрении; при психомоторном возбуждении и агрессивных состояниях, особенно при хроническом алкоголизме или в пожилом возрасте; при депрессиях различной этиологии; при острых маниакальных и маниакально-бредовых состояниях. Достаточно часто встречаются случаи острого и хронического отравления, передозировки этими лекарственными препаратами, а также их немедикаментозное и бесконтрольное применение [1, 2]. Широкое использование в медицине нейролептиков - производных бензамида диктует требования к быстрым и точным методам лабораторной диагностики, особенно для химико-токсикологических лабораторий.
В лабораториях при определениях наиболее часто применяют метод тонкослойной хроматографии (ТСХ). Он является базовым благодаря доступности, простоте выполнения, достаточной чувствительности и избирательности [4].
Для разработки методики использованы оптимальные подвижные фазы (системы растворителей).
В качестве хроматографических пластин использованы пластины отечественного производства с закрепленным слоем силикагеля «Сорбфил» ПТСХ-11-А-УФ (ЗАО «Сорбполи-мер», Краснодар).
Поиск оптимальных условий идентификации исследуемых веществ предварительно проводили с оценкой их хро-матографической подвижности в растворителях с разной полярностью (величиной диэлектрической проницаемости е). На линию старта наносили 1 мкл 1% раствора производных бензамида (амисульприд, сульпирид, тиаприд) в хлороформе (10 мкг). Хроматографию проводили в стеклянных камерах внутренним объемом около 255 см3 (Ь 13 см, d 5 см).
Для корреспонденции:
Калёкин Роман Анатольевич, канд. фарм. наук, ст. науч. сотр. лаб. судебно-хим. и хим.-токсикол. исследований Адрес: 125239, Москва, ул. Коптевская, 8/58 E-mail: [email protected]
Таблица 1
Результаты хроматографирования производных бензамида
Соотноше- Значение hRf (n = 6)
Система растворителей ние раство- амисуль- сульпи- тип-
рителей прид рид прид
Толуол-ацетон- 50:10:10 63,8 35,4 55,0
диэтиламин (St)
Изопропанол- 90:10 74,3 54,2 63,5
диэтиламин (S2)
Толуол-диэтиловый 30:20:10 44,4 21,7 35,2
эфир-диэтиламин (S3)
Таблица 2
Коэффициенты разделения пятен амисульприда, сульпирида и тиаприда внутри своей химической группы
Система Значение коэффициента разделения производных бензамида
растворителей амисульприд: тиаприд: суль- амисульприд:
тиаприд пирид сульпирид
S! 1,16 1,55 1,80
S2 1,17 1,17 1,37
S3 1,26 1,62 2,05
Таблица 3
Предел обнаружения амисульприда, сульпирида и тиаприда
Проявитель Предел обнаружения, мкг (в пробе, наносимой на пластину)
амисуль- сульпи- тиа-
прид рид прид
УФ-излучение при длине волны 254 нм 0,5 0,7 0,3
Реактив Драгендорфа в модификации Мунье 0,1 0,1 0,1
Реактив Драгендорфа в модификации Мунье после обработки 10% 0,1 0,1 0,1
раствором серной кислоты
Пары йода 15,0 10,0 15,0
клиническая лабораторная диагностика, № 2, 2013
Таблица 4
Результаты хроматографирования извлечений из биологических объектов
Значение hRf соэкстрактивных веществ
Система растворителей мочи крови слюны желчи печени (через 90 сут)
предложенный метод изолирования метод Стаса-Отто
Толуол-ацетон-диэтиламин (50:10:10) 0,06 0,19; 0,81 0,36 0,08; 0,31 0,31; 0,40 0,33; 0,43
Изопропанол-диэтиламин (90:10) 0,12; 0,38; 0,50 0,35; 0,78 0,02 0,36 0,41; 0,71 0,46; 0,73
Толуол-диэтиловый эфир-диэтиламин (30:20:10) 0,04; 0,25; 0,88 0,19; 0,82 0,04; 0,25 0,06; 0,11 0,14; 0,23 0,15; 0,25
Таблица 5
Системы растворителей для исследования извлечений из биологических объектов на производные бензамида
Изучаемое вещество Биологический объект Система растворителей
S! S2 S3
Амисульприд Моча + + +
Кровь + - +
Слюна + + +
Желчь + + +
Печень*1 + - +
Печень*2 + - +
Сульпирид Моча + - -
Кровь + + -
Слюна - + -
Желчь - + -
Печень*1 - + -
Печень*2 - + -
Тиаприд Моча + + +
Кровь + + +
Слюна + + +
Желчь + + +
Печень*1 + + +
Печень*2 + + +
Примечание. Печень*1 - изолирование по разработанному методу для нейролептиков - производных бензамида, печень*2 - изолирование по методу Стаса-Отто.
Г = Путь перемещения вещества с линии старта, см/Путь перемещения фронта растворителя с линии старта, см.
Величину Г оценивали от 0 до 1, однако чаще использовали величины Г 100, чтобы исключить дроби, и обозначали как К^.
Результаты хроматографии веществ в оптимальных подвижных фазах представлены в табл. 1.
В оптимальных условиях хроматографии в используемых трех системах растворителей значения у производных бензамида находятся в интервале от 21,7 до 74,3.
Для оценки пригодности хроматографической системы нами предложен коэффициент разделения пятен для установления критерия разделяющей способности хроматографиче-ской системы: Кш = ^
где 1г - расстояние, пройденное веществом, мм.
Оптимальным значением коэффициента разделения нами предложено считать 1,2 и более; при этом визуально
возможно разделить пятна и получить достоверные значения hRf.
Из табл. 2 видно, что все три системы растворителей пригодны для идентификации и внутригрупповой дифференциации производных бензамида, поскольку коэффициент разделения составляет 1,16 (по правилам округления и сокращения до статистически значимой цифры - от 1,2) и более (до 2,05).
В оптимальных условиях определяли предел обнаружения амисульприда, сульпирида и тиаприда методом ТСХ. Критерием оценки количественного показателя предела обнаружения считали достоверное визуальное обнаружение пятна в 6 повторностях и четкую окружность пятна.
Результаты определения предела обнаружения исследуемого вещества при хроматографировании в найденных оптимальных условиях представлены в табл. 3.
Наиболее чувствительными проявителями амисульприда, сульпирида и тиаприда являются реактив Драгендорфа в модификации Мунье, а также УФ-излучение при длине волны 254 нм, наименее чувствительным - пары йода.
Из табл. 4 видно, что в разработанных хроматографиче-ских системах для обнаружения амисульприда, сульпирида и тиаприда происходит достаточно четкое разделение исследуемого вещества с эндогенными соединениями, переходящими из биологического объекта в извлечение при изолировании с применением методик для нейролептиков производных бензамида [3].
Выявлены наиболее подходящие системы растворителей (табл. 5). Из табл. 5 видно, что при анализе амисульприда из биологических тканей и крови невозможно использовать систему растворителей S2; для сульпирида система S1 подходит только для мочи и крови, система S2 не подходит для анализа мочи, а систему S3 нельзя использовать для данного соединения; для тиаприда подходят все три системы растворителей при анализе из любых биологических объектов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Калёкин Р. А., Саломатин Е. М., Калёкина В. А. Токсикологическая характеристика нейролептиков - замещенных бензамидов. Судебно-медицинская экспертиза. 2007; 6: 31-4.
2. Калёкин Р. А. Изучение особенностей использования в практической медицине нейролептиков производных бензамида для целей судебной медицины. Экспертъ. 2012; 2: 49-51.
3. Калёкин P.A., Саломатин Е. М. Определение нейролептиков производных бензамида (амисульприда, сульпирида и тиаприда) при проведении судебно-химического и химико-токсикологического исследований: Метод. рекомендации. М.: ФГБУ РЦСМЭ Минз-дравсоцразвития России; 2012.
4. Раменская Г. В., Родионова Г. М., Кузнецова Н. И., Петухов А. Е. ТСХ-скрининг токсикологически значимых соединении, изолируемых экстракцией и сорбцией: Учебное пособие. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.
Поступила 25.04.12
