CC BY
64
и гистиогенного происхождения (фибро-бластов и макрофагов), что соответствует нормальному строению пульпы;
д) мы отмечали увеличение слоев одо-нобластов обычного строения в данной группе и появление сосудов капиллярного типа вблизи нижнего слоя одонобластов.
4. Выраженное позитивное действие клеточной терапии у животных с паро-
донтозом на клинические и морфологические проявления заболевания зубов и околозубного пространства связано с длительными сроками сохранения жизнеспособности и функциональной активности донорских клеток костного мозга в организме реципиента после трансплантации.
Genetic model of periodontosis and correction of the main symptoms of a disease by stem and progenitorny cells of a marrow
O.I. Stepanova, O.V. Baranova, H.H. Semenov, N.V. Kasinskaya,
L.Kh. Kazakova, V.N. Karkishchenko
The positive therapeutic effect of the cultivated cells of a marrow on correction of pathogenetic violations of periodontosis at genetic mice of the BRSUNT line is studied.
Key words: periodontosis, mice of BRSUNT, stem and progenitorny cells of a marrow.
Биомедицина • № 3,2012, С. 121-124
Идентификация нейролептиков - производных бензамида в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Р.А. Калёкин
ФГБУ Российский центр судебно-медицинской экспертизы Минздравсоцразвития РФ, Москва
Контактная информация: к.ф.н. Калёкин Роман Анатольевич [email protected]
В настоящей публикации предложен метод идентификации нейролептиков - производных бензамида (амисульприда, сульпирида и тиаприда) в извлечениях из крови. Предложенная методика позволяет с высокой воспроизводимостью и достоверностью проводить идентификацию исследуемых веществ с со-экстрактивными веществами.
Ключевые слова: нейролептики, амисульприд, сульпирид, тиаприд, кровь, ВЭЖХ.
Введение
В настоящее время в медицинской практике широко используются психотропные лекарственные средства - нейролептики, к которым также относится группа замещенных бензамида. К представителям данной группы относятся: амисульприд, сульпирид, тиаприд, которые применяются для лечения различных форм шизофрении; при психомоторном возбуждении и агрессивных состояниях, особенно при хроническом алкоголизме или в пожилом возрасте; депрессиях различной этиологии; острых маниакальных и маниакально-бредовых состояниях. Достаточно часто встречаются случаи острого и хронического отравления, передозировки этими лекарственными препаратами, а также их немедикаментозное и бесконтрольное применение [1,2].
Целью нашего исследования явилась разработка методики идентификации в извлечениях из крови наиболее современным и достоверным методом - вы-
сокоэффективной жидкостной хроматографии, поскольку в доступной научной литературе отсутствует информация по исследованию крови и идентификации в извлечениях нейролептиков - производных бензамида и их дифференциальное разделение от сопутствующих веществ. Принципиальным преимуществом пробы крови является возможность более надежно обеспечить ее сохранность, поскольку эта процедура проводится, как правило, опытным врачом [3]. Кроме того, концентрации тех или иных лекарственных веществ в крови легче поддаются интерпретации, чем в моче.
Материалы и методы
Использованный вариант модельной смеси для проведения исследования позволяет максимально приблизить условия эксперимента к реальным и получить биологическую жидкость со связанным лекарственным веществом с форменными элементами крови. Изолирование
нейролептиков - производных бенз амида сводилось к следующему: в пробу объёмом 5 мл вводили водный раствор производного бензамида (не более 1 мл) и оставляли для связывания исследуемого вещества с белками крови на сутки при температуре не более 10°С. Далее к модельной смеси крови прибавляли 8 мл 40% раствора натрия бисульфита и 24 мл 15% раствора кислоты хлористоводородной. Солянокислый гидролиз проводили на кипящей водяной бане в течение 30 мин с воздушным холодильником. Раствор после гидролиза оставляли для охлаждения до комнатной температуры, затем прибавляли 8 мл 50% раствора кислоты трихлоруксусной до 7% концентрации для осаждения белковых веществ. Центрифугирование проводили в течение 5 мин при 5000 об./мин, так как фильтрование может привести к ненужным потерям исследуемого вещества. Экстрагирование амисульприда, сульпи-рида и тиаприда из полученной водной фазы проводили при значении pH среды 12 путём доведения аммиаком водным и добавляли в качестве электролита аммония сульфат до насыщения. Значение pH среды контролировали с помощью универсальной индикаторной бумаги. Экстрагирование проводили трёхкратно, по 20 мл хлороформа в течение 5 мин. Полученные хлороформные извлечения объединяли в фарфоровой чашке и выпаривали в токе теплого воздуха. Полученный сухой остаток растворяли в воде и переносили в мерную колбу на 10 мл либо 25 мл, и доводили объём водой до метки. При проведении предложенной методики изолирования не происходит разрушения исследуемых лекарственных веществ. Нейролептики - производные бензамида проявляют стойкость структуры молекулы, и предложенные усло-
вия изолирования не разрушают ами-сульприд, сульпирид и тиаприд.
Предложенная методика идентификации нейролептиков - производных бензамида проводились на микроколоночном жидкостном хроматографе «Милихром А-02» с УФ-детектором производства ЗАО «ЭкоНова» (Россия). Полностью автоматическое устройство позволяло в соответствии с заданной программой обеспечивать выполнение всех циклов: промывки колонки, набор и ввод пробы. Исследование осуществляли на хроматографической колонке размером 2x75 мм, заполненной обращенно-фазовым сорбентом «Силасорб С18». В качестве элюента применяли 0,1% раствор триф-торуксусной кислоты (А), ацетонитрил (Б) в градиентном режиме от 10% элюента Б до 80% за 30 мин. Скорость подачи подвижной фазы составляла 100 мкл/мин. Время измерения - 0,18 сек, а температура термостата колонки была равна 35°С. Исследованию подвергали вышеописанные лекарственные вещества (ами-сульприд, сульпирид и тиаприд) в водном растворе. Идентификация проводится по нативному соединению, поскольку исследуемые лекарственные средства в организме незначительно подвергаются метаболизму основным продуктом присутствия в крови и выводятся в виде определяемых веществ.
Результаты и их обсуждение
Прецизионность (воспроизводимость) характеризует случайное рассеяние результатов относительно среднего значения. Для этого проводилась оценка метрологических характеристик. Результаты хроматографирования представлены в табл.
Особой проблемой при идентификации из биологических жидкостей явля-
Идентификация нейролептиков - производных бензамида в крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Таблица
Результаты хроматографирования амисульприда, сулышрида, тиаприда методом ВЭЖХ
Исследуемый лекарственный препарат Время удерживания, мин (п=6)
Амисульприд 10,40±0,28
Сульпирид 7,59±0,21
Тиаприд 8,40±0,26
ется ложная положительная реакция, которую могут дать соэкстрактивные вещества. Особой ценностью разработанной методики идентификации ВЭЖХ является четкое разделение соэкстрак-
тивных веществ с исследуемыми веществами, причем выход соэкстрактивных веществ происходит вначале (рис.), а затем определяются нейролептики - производные бензамида.
04 ли
Рис. Хроматограмма извлечения из крови при ВЭЖХ анализе (1-4 - неидентифицированные пики соэкстрактивных веществ).
Выводы
По результатам проведенных исследований предложена методика идентификации нейролептиков - производных
бензамида (амисульприда, сульпирида и тиаприда) в извлечениях из крови, с высокой воспроизводимостью и достоверностью полученных данных.
Список литературы
1. Калёкин РА. Изучение особенностей использования в практической медицине нейролептиков производных бензамида для целей судебной медицины / Р.А. Калёкин // Экспертъ. 2012. № 2. С. 49-51.
2. Калёкин Р.А. Токсикологическая характеристика нейролептиков -
замещенных бензамидов / Р.А. Калёкин, Е.М. Саломатин, В.А. Калёкина // Судеб.-мед. экспертиза. 2007. № 6. С. 31-34.
3. Суворов А.В. Справочник по клинической токсикологии / А.В. Суворов - Нижний Новгород: Изд-во НГМА. 1996. 180 с.
Identification of neuroleptics - derivatives benzamide in blood a method of a highly effective liquid chromatography
R.A. Kalyokin
In the present publication the method of identification neuroleptics - derivatives benzamide (amisulprid, sulpirid and tiaprid) in extraction from blood is offered. The offered technique allows with high reproducibility and reliability to carry out identification of studied substances with so-extractive substances.
Key words: neuroleptics, amisulprid, sulpirid, tiaprid, blood, HELC.
Биомедицина № 3, 2G12
124
