CC BY
43
литации больных после травмы. Исследования проведено на средства Покровского банка стволовых клеток.
Смирнова С.А., Хрупина А.С., Айзенштадт А.А.,
Иволгин Д.А., Смолянинов А.Б.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АБСОЛЮТНОГО КОЛИЧЕСТВА ЖИЗНЕСПОСОБНЫХ CD34+ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПУПОВИННОЙ КРОВИ МЕТОДОМ
ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ
НИЛ клеточных технологий Северо-Западного Государственного медицинского университета имени И.И. Мечникова, OOO « Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург, Россия, [email protected]
Пуповинная кровь (ПК) является альтернативным костному мозгу источником гемопоэтических стволовых клеток (ГСК) для осуществления трансплантаций при лечении ряда гематологических и наследственных заболеваний. Возможность и успешность проведения трансплантации во многом зависит от количества жизнеспособных стволовых клеток и клеток-предшественников ПК из расчета на килограмм массы тела реципиента. Количественная оценка ГСК основана на выявлении CD34+ клеток методом проточной цитометрии.
Исследование образцов пуповинной крови (n=870), полученных после выделения ядерных клеток (ЯК), проводилось методом проточной цитофлуо-риметрии с использованием реагентов Stem Kit (Beckman Coulter, USA). Подготовка проб для выявления CD34+ ГСК осуществлялась согласно протоколу производителя. Анализ образцов выполнялся на проточном цитометре FC 500 (Beckman Coulter, США) с программным обеспечением CXP с длиной волны лазерного излучения 488 нм. Стратегия гейтирования соответствовала всем требованиям протокола ISHAGE (International Society of Hematotherapy and Graft Engineering). В качестве контроля, образцы ПК были исследованы с помощью гемоанализатора («ACT diff 2», Beckman Coulter, США), для определения общего количества ЯК.
Оценка образца ПК проходила по нескольким критериям, предъявляемых к трансплантату ПК в международной практике - общее количество ядерных клеток (Total Nuclear Cell - TNC) в образце, количество CD34+ клеток и процент жизнеспособных CD34+ клеток. TNC в образцах ПК составило 156,32±8,49 х 10 . Количество CD34+ клеток и процент жизнеспособных клеток составил 3,65±0,41 х 106 и 97,2±1,59 % соответственно. TNC в образцах ПК, исследованных на гемоанализаторе, составило 162,21±2,28 х 107. Разница в показаниях гемоанализатора и проточного цитометра подтверждает присутствие в образцах ПК ядерных предшественников эритроцитов, процент которых составил не более 5% от общего количества TNC.
Количественное определение CD34+ ГСК методом проточной цитофлуо-
риметрии является обязательным тестом при помещении образцов пуповинной крови для длительного хранения в банках ПК, необходимым для оценки гемо-поэтического потенциала ГСК ПК, а также является прогностическим тестом при оценке способности образца ПК к приживлению.
Смолянинов А.Б., Юркевич Ю.В., Новицкий А.В., Распутин С.Б., Адылов Ш.Ф, Иволгин Д.А.
КЛЕТОЧНАЯ ТЕРАПИЯ АЛЛОГЕННЫМИ СТВОЛОВЫМИ КЛЕТКАМИ ПУПОВИННОЙ КРОВИ РЕГИСТРА ДОНОРОВ ПРИ НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫХ
ЗАБОЛЕВАНИЯХ
Санкт-Петербургский государственный университет, Медицинский факультет, Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова,
НИЛ клеточных технологий Северо-Западного государственного медицинского университета имени И.И. Мечникова, ООО « Покровский банк стволовых клеток», Санкт-Петербург, Россия, [email protected]
Нейродегенеративные заболевания - это заболевания, возникающие в результате прогрессирующей дегенерации и гибели нейронов, входящих в определенные структуры ЦНС (центральная нервная система), приводящие к разрыву связей между отделами ЦНС и дисбалансу в синтезе и выделении соответствующих нейромедиаторов и, как следствие, вызывающие нарушение памяти, координации движений и мыслительных способностей человека.
Проблема регенерации нейронов остается одной из важнейших проблем в нейробиологии. На сегодняшний день эффективных методов лечения нейроде-генеративных заболеваний не существует, все сводится к применению различных групп фармакологических препаратов способных улучшить качество жизни, но не влияющих на выживаемость и прогноз для пациентов.
Перспективным методами лечения больных, страдающих нейродегенера-тивными заболеваниями, считаются коррекция экспрессии гена, ответственного за развитие заболевания, трансплантация аллогенных стволовых клеток пуповинной крови, а также сочетание генной инженерии с клеточной терапией.
Подготовленные для трансплантации клетки должны иметь предсказуемые и воспроизводимые характеристики, а именно: сохранять жизнеспособность, активно размножаться с образованием достаточного для восстановления утраченной ткани количества клеток, интегрироваться с клетками органа-реципиента, дифференцироваться в требуемые клеточные типы, участвовать в процессе миелинизации, оказывать трофичекое и нейропротекторное действие, стимулировать рост аксонов.
К настоящему времени охарактеризованы выделенные из пуповинной крови мезенхимальные и гематопоэтические стволовые клетки, а также клетки, экспрессирующие специфические СБ-маркеры и дающие начало разным кле-
