CC BY
26
собности печени: автореф. дис. ... канд. мед. наук: 14.00.10 / С.Н. Комиссаров; СПбГМА им. И.И. Мечникова. СПб. 2008. 21 с.
4. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации: Пособие для врачей. СПб. 1995. 23 с.
5. Рейзис. А.А. Гепатит С у детей и подростков // Лечащий врач. 2003. №3. С. 12-14.
D.K. Vasilyeva, L.A. Alekseeva, L.G. Goryacheva, T.V. Bessonova.
SIGNIFICANCE IDENTIFYING LOW AND MEDIUM MOLECULAR MASS BLOOD IN CHILDREN AS A LABORATORY CRITERIA FOR THE GRADE OF ENDOGENOUS INTOXICATION CHRONIC VIRAL HEPA-TITIS B AND C.
FGU "SRI childhood infections", St. Petersburg
To study the biochemical criteria of endogenous intoxication and to establish its role in the pathogenesis of chronic hepatitis B viral etiology in children, a laboratory examination of 23 children aged 3 to 18 years with chronic hepatitis B and C (CHB and CHC). Duration of disease ranged from 1 to 18 years. The results showed the high importance of endogenous intoxication in the pathogenesis of chronic hepatitis. Shown that changes in blood content of substances of low and medium molecular mass detected even in the absence of clinical symptoms of intoxication, which allows them to recommend the inclusion of a study in patients with chronic hepatitis algorithm for the survey to assess the degree of endogenous intoxication and correction of pathogenetic therapy.
Key words: chronic viral hepatitis, children, substances of low and medium molecular mass.
НАУКА И ПРАКТИКА
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2009
УДК 612.015.3:612.398:612.273.2]-053.1-092.9
О.Е. Гусева, О.А. Лебедько, С.С. Тимошин
ОЛИГОПЕПТИД H-ARG-TYR-D-ALA-PHE-GLY-OH КОРРИГИРУЕТ ПОСТГИПОК-СИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ СИНТЕЗА ДНК В ЭПИТЕЛИОЦИТАХ ТРАХЕИ И БИОГЕНЕЗА СВОБОДНЫХ РАДИКАЛОВ В ЛЕГКИХ НОВОРОЖДЕННЫХ БЕЛЫХ КРЫС
Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН - НИИ охраны материнства и детства;
Дальневосточный государственный медицинский университет, Хабаровск
Патология респираторной системы занимает ведущее место в структуре заболеваемости детей и представляет собой одну из основных причин летальных исходов у новорожденных. Пренатальная гипоксия является ведущим фактором риска формирования пневмопатий новорожденных, осуществляющим дезинтеграцию структурно-функционального становления органов дыхания [1, 2]. Ранее нами было показано, что пренатальная гипоксия вызывает активизацию перекисного окисления липидов и угнетение синтеза ДНК в эпителиоцитах трахеи новорожденных крыс [3].
Одной из актуальных проблем современной медицины является поиск и создание нового поколения лекарственных средств, реализующих принципы "молекулярной лингвистики". В связи с ключевым значением оксидантов в повреждении клеточных структур бронхов и легких [4, 5] особый интерес представляет изучение свойств олигопептидов, как возможных регуляторов антиоксидантной защиты органов дыхания . В исследованиях [6] показано, что опиоидный Дм - агонист Н-А^-Туг^-А1а-РЬе-Gly-OH (условное название "седатин"), являю-
щийся синтетическим аналогом эндогенного пептида дерморфина, обладает выраженной антиоксидантной антирадикальной активностью. Поскольку повышение активности антиок-сидантной защиты является одним из ключевых механизмов цитопротективного эффекта, уместно предположить наличие последнего у олигопептида.
В связи с вышеизложенным, цель работы состояла в исследовании влияния олигопептида на ДНК-синтетическую активность эпителиоцитов трахеи и биогенез свободных радикалов в системе органов дыхания новорожденных белых крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии.
Материалы и методы. Эксперименты проводили на 182 новорожденных белых крысах. Крысы группы "гипоксия" - перенесшие пренатальную гипоксию. Состояние гипоксии моделировали ежедневным 4-часовым пребыванием самок-крыс в барокамере СБК-49 (высота 9000 м.), с 14-й по 19-й день беременности. Крысы группы "гипоксия + олигопептид" - перенесшие пренатальную гипоксию и получившие олигопептид с 2 по 6 сутки постнатального развития, в режиме ежедневного в/брюшинного
введения, в дозе 100 мкг/кг. Животным группы "контроль" - с нормальным кислородным обеспечением пренатального периода, в аналогичном режиме инъецировали изотонический раствор NaCl. Крыс декапитировали через 24 часа после заключительного воздействия.
Результаты и обсуждение. Для интегральной оценки процессов биогенеза свободных радикалов в гомогенатах легких использовали метод хемилюминесценции (ХЛ). Регистрацию ХЛ осуществляли на люминесцентном спектрометре LS 50B "PERKIN ELMER". Спонтанную и индуцированную ХЛ исследовали по методу [7, 8]. Определяли: светосумму за 1 мин. спонтанной ХЛ (Ssp), величина которой коррелирует с интенсивностью генерации свободных радикалов; светосумму (Sind-1) за 2 мин. после "быстрой" вспышки, отражающую скорость накопления перекисных радикалов липидной природы; S-lum - светосумму за 1 минуту лю-минол-зависимой ХЛ, величина которой находится в прямой зависимости от интенсивности продукции гидроксил-радикала; S-luc - светосумму за 1 минуту люцигенин-зависимой ХЛ, величина которой находится в прямой зависимости от интенсивности продукции суперок-сиданион-радикала. Определяли светосумму за 2 мин. ХЛ (Sind-2), величина которой свидетельствует об активности антиоксидантной анти-радикальной защиты (АОРЗ). Интенсивность ХЛ, измеренную в милливольтах, рассчитывали на 1 мг влажной ткани и выражали в относительных единицах.
Процессы синтеза ДНК в эпителиоцитах трахеи исследовали методом радиоавтографии. За 1 час до эвтаназии животным вводили ЗН-тимидин в дозе 1 мкКюри/г (уд. активность 84 Кюри/моль). Радиоавтографы готовили по стандартной методике: определяли количество клеток, находящихся в S-периоде (индекс меченых ядер - ИМЯ, %) и скорость прохождения клетками синтетического периода клеточного цикла (интенсивность метки - ИМ, число треков). Полученные данные обработаны статистически с использованием t-критерия Стьюдента-Фишера.
Выводы. Анализ ХЛ показателей продемонстрировал (табл. 1), что в легких новорожденных крыс, перенесших пренатальную гипоксию, наблюдалось декомпенсированное накопление свободных радикалов: величина Ssp возросла на 98,6%, генерация супероксиданион- (Sluc) и гидроксил-радикалов (Slum) - на 129% и на 108%, соответственно. Значительный вклад в этот процесс вносит ускорение образования пе-
рекисных радикалов липидной природы (значение Б^-1 возросло на 117,7%). Выявленные нарушения свободнорадикального статуса обусловлены ослаблением антиоксидантной анти-радикальной защиты (Sind-2 возросла на 107%), что свидетельствует о развитии оксидативного стресса на органном уровне.
С помощью авторадиографического анализа установлено, что в эпителии трахеи 7-суточных белых крыс, перенесших пренатальную гипоксию, имели место нарушения ДНК-синте-тической активности эпителиоцитов (табл. 2). В сравнении с контрольным уровнем величина ИМЯ эпителиоцитов достоверно снизилась на 69,1%. При этом наблюдалось статистически значимое замедление прохождения эпителио-цитами S-периода клеточного цикла - ИМ понизился на 23,5%.
Таблица 1
Влияние олигопептида на показатели ХЛ гомогенатов легких новорожденных белых крыс, подвергнутых пренатальной гипоксии, ^± m)
Показатель (отн.ед.) Контроль Гипоксия Гипоксия ± олигопептид
Ssp 1,44 0,08 2,86 0,15* 1,57 0,09**
Sluc 0,93 0,05 2,13 0,10* 1,00 0,06**
Slum 1,48 0,09 3,08 0,14* 1,61 0,08**
Sind-1 3,27 0,21 7,12 0,43* 5,12 0,34*,**
Sind-2 8,27+0,65 17,14 1,15* 9,44 0,70**
Примечание: * - р<0.05 по отношению к группе "контроль".
** - р<0.05 по отношению к группе "гипоксия"
Следует отметить, что изменения свободнорадикального и пролиферативного статусов были выявлены у 7-суточных крыс, то есть через 10 суток после заключительного гипобарического воздействия, что свидетельствует о сохранении по-стгипоксического структурно-метаболического следа в системе органов дыхания как минимум до конца периода новорожденности.
Таблица 2
Влияние олигопептида на показатели синтеза ДНК эпителиоцитов трахеи новорожденных белых крыс, перенесших пренатальную гипоксию ^± m)
Показатель Контроль Гипоксия Олигопептид
ИМЯ, % 1,85 0,11 0,57 0,03* 2,50 0,14**
ИМ, число треков 21,10 1,15 16,15 1,10* 20,72 1,28**
Примечание: * - р<0.05 по отношению к группе "контроль" ** - р<0.05 по отношению к группе "гипоксия"
Исследуемый олигопептид нивелировал по-стгипоксические нарушения биогенеза свободных радикалов - величины исследуемых ХЛ-показателей гомогенатов тканей легких, за исключением процесса образования перекисных радикалов (величины Sind-1 хотя и снизились на 28%, но сохраняли статистически значимое увеличение в сравнении с аналогичными показате-
лями в группе "контроль") - не имели достоверных отличий от контрольных значений.
Олигопептид проявил корригирующее влияние и в отношении процессов синтеза ДНК в эпи-телиоцитах, показатели ИМ эпителиоцитов в группе "гипоксия + олигопептид" нормализовались, а значения ИМЯ компенсаторно увеличились в сравнении с показателями в группе "контроль".
Таким образом, результаты нашего исследования показали, что олигопептид Н-А^-Туг^-А1а-РЬе^1у-ОН способен корригировать пост-гипоксические нарушения биогенеза свободных радикалов и синтеза ДНК в эпителии трахеи новорожденных крыс, перенесших пренатальную гипоксию.
ЛИТЕРАТУРА
1. Арутюнян А.В. Методы оценки свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма: методические рекомендации / А.В. Арутюнян. СПб. : Наука, 2000. 198 с.
2. Влияние аналогов дерморфина и лей-энкефали-на на биогенез активных кислородных метаболитов в кардиореспираторной системе новорожденных белых крыс / С.Ю. Крыжановская, О.Е. Гусева, О.А. Лебедько [и др.] // Дальневосточный медицинский журнал. -
2006. №3. С. 86-88.
3. ВладимировЮА. Свободные радикалы в живых системах / Ю.А. Владимиров // ВИНИТИ АН СССР: Итоги науки и техники, сер. Биофизика. 1991. Т. 29. 147 с.
4. Лебедько О.А. Применение неопиатного аналога лей-энкефалина и пептидного морфогена гидры для коррекции нарушений пролиферации в эпителии трахеи и процессов ПОЛ в легких новорожденных крысят, подвергнутых пренатальной гипоксии / О.А. Лебедько, С.С. Тимошин // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1994. Т. 117. №5. С. 535-537.
5. Association of progressive structural changes in the
bronchial epithelium with subepithelial fibrous remodeling: a potential role for hypoxia / V.V. Polosukhin, W.E. Lawson, A.P. Milstone [et al.] // Virchows Arch. -
2007. Vol. 451. № 4. P. 793-803.
6. SteinkeJ.W. Role of hypoxia in inflammatory upper airway disease / J.W. Steinke, C.R. Woodard, L. Borish / / Curr Opin Allergy Clin Immunol. 2008. Vol. 8. №1. P. 16-20.
7. FahyJ.V. Airway inflammation and remodeling in asthma / J.V. Fahy, D.B. Corry, H.A. Boushey // Curr. Opinion Pulm. Med. 2000. Vol. 6. P. 15-20.
8. Roles of oxidants and redox signaling in the pathogenesis of acute respiratory distress syndrome / S. Tasaka, F. Amaya, S. Hashimoto, A. Ishizaka // Antioxid Redox Signal. 2008. Vol. 10. №4. P. 739-53.
O.E. Guseva, O.A. Lebedko, S.S. Timoshin THE OLIGOPEPTIDE H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH INFLUENCED ON CORRECTION POST-HYPOXIC ALTERATIONS OF SYNTHESIS DNA IN EPITHELIAL CELLS OF TRACHEA AND BIOGENESIS FREE RADICALS IN LUNG OF NEWBORN WHITE RATS (AFTER PRENATAL HYPOXIA)
Khabarovsk Facility of State Founding Far-Eastern Scientific Center of Respiratory Pathology and Physiology SB RAMS - Scientific research institute of Mother and Child Care.
Far Eastern State Medical University, Khabarovsk
The DNA-synthetic activity of epithelial cells of trachea and a biogenesis of free radicals in the lung of newborn white rats subjected to a prenatal hypoxia after injection the oligopeptide H-Arg-Tyr-D-Ala-Phe-Gly-OH were examined. Oligopeptide conducting levelled post-hypoxic disturbances of synthesis of DNA in an epithelium of a trachea and a biogenesis of free radicals in lung newborn white rats.
Key words: prenatal hypoxia, oligopeptide, synthesis DNA. free radicals, lung.
© КОЛЛЕКТИВ АВТОРОВ, 2009
УДК 612.015.11:616.61-06]-053.2.001.8
E.Ю.Приезжева, О.А.Лебедько, В.К.Козлов
ОСОБЕННОСТИ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ МОЧИ У ДЕТЕЙ С ХРОНИЧЕСКИМ ПИЕЛОНЕФРИТОМ В СТАДИИ РЕМИССИИ НА ФОНЕ ВРОЖДЕННЫХ ПОРОКОВ РАЗВИТИЯ ОРГАНОВ МОЧЕВОЙ СИСТЕМЫ
Хабаровский филиал Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания СО РАМН -НИИ охраны материнства и детства;
Дальневосточный государственный медицинский университет, Хабаровск
Хронические пиелонефриты на фоне врожденных пороков развития органов мочевой системы (ВПРМС) у детей остается серьезной проблемой в педиатрии и имеет большую социальную значимость [1,2]. Имеются немногочис-
ленные экспериментальные и клинические исследования, свидетельствующие о том, что на ранних этапах онтогенеза в основе формировании гломерулопатий, тубулоинтерстициальных нефритов лежит активация процессов свобод-
