CC BY
25УДК 616-002.828:615.33
образование
штаммом
trichöderma citrinöviride tyvi 4/11 антибиотиков-пептаиболов
1 Садыкова B.C. (с.н.с.)*, 2 Кураков А.В. (зав. кафедрой), 1,2 Куварина А.Е. (аспирант), 1Тюрин А.П. (н.с.), 1,3 Рогожин Е.А. (н.с.), 1,3Коршун В.А. (зав. лаб.)
1 Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе; 2 Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова; 3 Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН, Москва, Россия
©Коллектив авторов, 2015
В статье рассмотрены фунгицидные и антибактериальные свойства штамма Trichoderma citrinoviride TYVI4/11 - продуцента новых мембраноактивных пептидных антибиотиков. Изучены условия его культивирования и подобраны среды, обеспечивающие высокий выход антибиотических веществ. При выделении активных индивидуальных соединений из экстракта культу-ральной жидкости выявили, что они представляют комплекс из нескольких биологически активных соединений (предположительно пептаибольной природы), обладающий антибактериальным и антимикотическим действиями в отношении патогенных грибов и некоторых б
Ключевые слова: активность антибактериальная, активность антимикотическая, антибиотики, пептаиболы, T. citrinoviride
production of
antibiotics-peptaibols
by trichoderma citrinoviride tyvi 4/11
strain
1 Sadykova V.S. (senior scientific collaborator), 2 Kurakov A.V. (head of the chair), 1,2 Kuvarina A.E. (postgraduate student), 1 Tyurin A.P. (scientific collaborator), 1,3 Rogozhin E.A. (scientific collaborator), 1,3 Korshun V.A. (head of the laboratory)
1 G.F. Gauze Scientific-Research Institute of new antibiotics; 2 M.V. Lomonosov Moscow State University; institute of Bioorganic Chemistry named after
Контактное лицо: Садыкова Вера Сергеевна, e-mail: [email protected]
academicians M.M. Shemyakin and Yu.A. Ovchinnikov of RAS, Moscow, Russia
©Collective of authors, 2015
Fungicidal and antibacterial properties of a strain Trichoderma citrinoviride TYVI 4/11-producer of new active membrane peptide antibiotics have been described in the article. Conditions of its cultivation and matched environments, providing a high yield of antibiotic substances have been studied. At the selection is active individual compounds from an extract of the culture fluid revealed that they represent a complex of several biologically active compounds (presumably of peptaibols nature), which has antibacterial and antifungal activities against pathogenic fungi and methicillin-resistant bacteria.
Key words: antibacterial activity, antibiotics, antimycotic activity, peptaibol, T. citrinoviride
введение
Актуальной проблемой здравоохранения остаются инфекционные заболевания. Ухудшение экологической обстановки, широкое и часто необоснованное использование антибиотиков приводит к появлению заболеваний, с трудом поддающихся лечению существующими лекарственными препаратами. На фоне общего снижения иммунной защиты организма имеет место рост заболеваемости глубокими (инва-зивными) микозами, характеризующимися высокой смертностью и тяжестью течения, а также инфекциями, вызываемыми резистентными формами патогенных и условно-патогенных бактерий. Для изменения сложившейся ситуации необходимо введение в клиническую практику представителей принципиально новых классов антимикробных агентов, кардинально отличающихся по способу своего действия. Одним из перспективных путей преодоления антибиотико-резистентности является поиск новых продуцентов среди ранее не исследованных видов грибов и синтезируемых ими антимикробных соединений.
В последние годы во всем мире активно изучают новую группу природных пептидных антибиотиков
- пептаиболов. Это мембрано-активные линейные пептиды без дисульфидных связей, имеющие преимущественно альфа-спиральную конформацию (при интеграции в мембрану) и содержащие диалки-ламинокислоты и аминоспирты [1, 2]. Они обладают антимикробным действием в отношении условно-патогенных и патогенных бактерий, фитопатогенных и патогенных грибов, опухолевых клеток, характеризуются низкой токсичностью, к ним практически не возникает резистентность у клеток-мишеней [3-5]. Пептаиболы с различной биологической активностью синтезируют грибы рода Trichoderma [4, 6]. Так, пептаиболы - трихоконины, образуемые штаммом Trichoderma pseudokoningii SMF2, индуцируют обширный апоптоз у Fusarium oxysporum. Трихоспорины B-VIIa и B-VIIb, продуцируемые T. polysporum, проявляют антитрипаносомазную активность в отношении Trypanosoma brucei brucei. Активно изучают применение в фармации трихозе-анина (продуцент T. artroviride) [1, 2] и сузуказилина
- А (T. viride штамм 63 C-I), подавляющих метицил-линрезистентные бактерии [7]. Поэтому поиск про-
■
дуцентов пептаиболов среди представителей рода Trichoderma и исследование их свойств является одним из перспективных направлений в создании новых антимикробных средств.
Цель работы - определение условий культивирования штамма TYVI 4/11 Trichoderma citrinoviride ВКПМ F-1228 для проявления им максимальной антибиотической активности, изучение природы синтезируемых антибиотиков и определение спектра их действия на микроорганизмы-патогены, токсиген-ных видов - пенициллов и избранных опухолевых клеток линии Cola.
материалы и методы
Исследовали моноспоровый клон TYVI 4/11 T. citrinoviride ВКПМ F-1228, полученный путем селекции исходного штамма на антимикробную и противоопухолевую активности. Его идентификацию проводили на основе культурально-морфологических признаков и сиквенирования участков ITS1 и 2 ядерной рДНК (сходство с коллекционными штаммами T. citrinoviride составляет 98,0%). Исходный штамм был выделен ранее из почвы лесопитомника Каа-Хемского лесхоза республики Тыва и отобран на основе максимальной антигрибной активности путем скрининга 150 изолятов, относящихся к роду Trichoderma [9].
Тест-объектами для оценки антифунгальной активности были штаммы условно-патогенных мице-лиальных и дрожжевых микроскопических грибов: Aspergillus niger INA 00760, Candida albicans АТСС 2091, C. tropicalis INA 00763; условно-патогенных аспергиллов - A. oryzae 1К, A. niger 2К, A. fumigatus 4К, A. terreus 4К, A. fischeri 3К, A. flavus 7К; токси-генных микромицетов - возбудителей порчи продуктов питания - Penicillium brevicompactum (VKM F-4481), P. nalgiovense (VKM F-4492), P. roqueforti (VKM F-4484), P. commune (VKM F-4486), P. chrysoge-num (VKM F-4499).
Спектр антибактериального действия изучали на тест-культурах грамположительных бактерий: штаммах Bacillus subtilis АТСС 6633, B. coagulans 429, B. mycoides 537, Micrococcus luteus NCTC 8340, мети-циллин-резистентном штамме Staphylococcus aureus FDA 209P и грамотрицательных бактериях - Esch-erichia coli ATCC 25922, Comamonas terrigena ATCC 8461.
методы исследований
Культивирование штамма проводили на жидких средах - Чапека, Сабуро и среде с 3% неохмеленным суслом. Культуры выращивали глубинным способом (на качалке 10 и 14 суток, 200 об./мин), комбинированным (5 и 7 сут. на качалке, затем - стационарно 5 и 7 сут.) и поверхностным способом в течение 10 и 14 суток при 25 оС.
Экстракцию антибиотиков и фракционирование культуральной жидкости штамма проводили последовательно в несколько стадий. Культуральную жид-
кость экстрагировали этилацетатом в соотношении 1:2. Полученный экстракт упаривали в вакууме досуха, затем растворяли в водном растворе этилового спирта (70%).
Тест-культуры B. subtilis АТСС 6633 и B. mycoides 537 выращивали на среде, приготовленной на бульоне Хоттингера в разведении 1:2 следующего состава (г/л): глюкоза - 10,0; NaCl - 2,0; агар - 20,0. E. coli ATCC 25922, M. luteus NCTC 8340, 5. aureus FDA 209P, C. terrigena ATCC 8461 - на МПА («ЗАО НИЦФ», Россия), грибные тест-культуры - на среде Чапека. Использовали суточные культуры бактерий и пятисуточные культуры грибов. Бациллы, стафилококки и микрококки культивировали при 37 °С, E. coli - при 42 °С, B. coagulans - при 55 °С, патогенные микроскопические грибы и дрожжи выращивали при 37 °С, условно-патогенные и токсигенные микроми-цеты - при 28 °С.
Антибиотическое действие в отношении патогенных грибов и бактерий у штаммов оценивали с помощью стерильных бумажных дисков (бумага фильтровальная Ф ГОСТ 12026-76), смоченных в экстрактах и высушенных в стерильных условиях. Контролем чувствительности тест-организма служили стандартные диски с амфотерицином В («НИИ Пастера», 40 мкг/мл) и ампициллином («НИИ Пастера», 10 мкг/мл). Выбор антибиотиков в качестве контроля в наших тестах обусловлен их активностью к родам Aspergillus, Candida.
Постановку и оценку результатов проводили в соответствии с МУК 4.2.1890- 04 и по Н.С. Егорову [10]. Полученные результаты интерпретировали следующим образом: 0 мм - активности нет; до 12 мм - слабая чувствительность; от 13 до 29 мм - средняя чувствительность; 30 мм и более - высокая чувствительность.
Коэффициент антибиотической активности рассчитывали по формуле: Ка = А/К, где Ка - коэффициент антибиотической активности гриба, мм; А -сумма диаметров зон подавления тест-объектов, мм; К - количество тест-объектов.
Для анализа цитотоксического действия активной фракции использовали тест с метил-триазол-те-тразолием (МТТ) (Sigma). Клетки вносили в количестве по 30 тыс. на лунку в плоскодонный 96-луночный планшет, в котором заранее титровали культураль-ные фильтраты штаммов Trichoderma. Линии клеток инкубировали в СО2-инкубаторе 72 ч и в последние 4 ч добавляли 250 мкг/мл МТТ-реагента. По окончании инкубирования надосадочную жидкость убирали, а в лунки добавляли по 100 мкл диметилсульфок-сида (Реахим, Москва) для растворения формазана. Окрашивание клеток анализировали на планшетном спектрофотометре (Titertek, UK) при длине волны 540 нм. Цитотоксическую активность оценивали по индексу ингибирования и рассчитывали по формуле
(1инг = ОП эксперим/ОП контроль) 100%.
Для фракционирования этилацетатного экстракта культуральной жидкости использовали комбина-
цию методов жидкостной хроматографии - прямо-фазной и обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной (ОФ-ВЭЖХ). В качестве сорбента для прямофазной хроматографии применяли силика-гель, а в качестве элюента - хлороформ с последующим увеличением процентного содержания метанола в хлороформе. Полученный этилацетатный экстракт (Кб) перерастворяли в этаноле и очищали с помощью колоночной хроматографии на силика-геле Kieselgel 60 (40-63 мкм); элюцию осуществляли органическими растворителями в следующей последовательности: хлороформ, хлороформ - метанол (50:1^10:1), метанол. В полученных элюатах определяли антимикробную активность методом дисков на тест-культуры грибов и бактерий. Активные элюаты были упарены в вакууме досуха и растворены в 3 мл 60% этанола.
ОФ-ВЭЖХ анализ и разделение активных фракций после прямофазной хроматографии проводили на полупрепаративной колонке Luna C18 100A размерами 250x10 мм (Phenomenex, США) в линейном градиенте увеличения концентрации подвижной фазы, создаваемым элюентом А (0,1% трифторук-сусная кислота (ТФУ) в воде MQ) и элюентом В (80% ацетонитрил c добавлением 0,1% водной ТФУ) при скорости потока 2,5 мл/мин. Для ВЭЖХ использовали ацетонитрил фирмы «Panreac» (Испания). Детектирование разделяемых веществ осуществляли при длине волны 247 нм в градиенте концентрации элюента В: 16-28% - за 12 мин; 28-55% - за 27 мин; 55-75% - за 20 мин и 75-85% - за 10 мин с последующим изократическим элюированием (состав подвижной фазы не изменяется в течение всего процесса элюирования) в течение 25 мин. Полученные в ходе ОФ-ВЭЖХ-анализа фракции, соответствующие отдельным пикам, были собраны вручную. Антибиотически активные фракции были проанализированы с помощью физико-химических и биологических методов. Спектр антимикробного действия веществ, содержащихся во фракциях, определяли дисковым методом, описанным выше.
Молекулярные массы активных соединений в выделенной фракции устанавливали на масс-спектрометре Ultraflex II MALDI TOF/TOF «^^e^altantes» (Германия), оснащенном УФ лазером 355 нм (Nd:YAG) в режиме положительных ионов с использованием рефлектрона. На мишени смешивали по 1 мкл раствора образца и 0,3 мкл раствора 2,5-дигидроксибензойной кислоты (DHB) с концентрацией 10 мг/мл в 20% ацетонитриле с 0,5% трифторуксусной кислотой и полученную смесь высушивали на воздухе.
результаты исследований
Штамм TYVI 4/11 T. citrinoviride характеризуется широким спектром антимикробного действия и высокой активностью в отношении большой группы грибов-микромицетов и грамположительных бактерий, при этом антибиотические вещества на-
капливаются преимущественно в культуральной жидкости (КЖ). Экстракты, полученные из мицелия, оказались неактивны или слабо активны (зона подавления менее 2-3 мм) в отношении всех исследуемых тест-организмов. Практически полное извлечение из водного раствора маточного концентрата куль-туральной жидкости активных компонентов достигали экстракцией такими гидрофобными органическими растворителями как этилацетат и н-бутанол, что указывает на их преимущественно гидрофобную природу.
При росте на всех исследуемых средах наблюдали проявление антимикробной активности, что свидетельствует о том, что продукция антибиотиков у изучаемого штамма поддерживается как при росте на бедных синтетических, так и на богатых натуральных средах. Экстракты культуральной жидкости штамма активны в отношении условно-патогенных штаммов C. tropicalis INA 00763 и A. niger INA 00760. Величины зоны подавления роста тест-культур достигали 25±2 мм и 22±2 мм соответственно. Кроме того, штамм ингибировал рост условно-патогенных микромице-тов A. oryzae 1K, A. niger 2K, A. fumigatus 4K, A. terreus 4K и токсигенных штаммов рода Penicillium (табл. 1).
Таблица 1
фунгицидная активность (в мм зоны подавления тест-организмов) экстрактов культуральной жидкости штамма T. citrinovirideTWI 4/11 при поверхностном
культивировании на различных средах
Среда Тест-организмы Среда Чапека Сусло Сабуро Амфо-те-ри-цин В
бута-нол этил-ацетат бута-нол этил-ацетат бута-нол этил-ацетат
A. fumigatus 7*/6* 9/10 7/7 11/18 6/9 6/17 8
A. oryzae 6/6 6/6 6/6 6/6 6/7 6/6 9
A. ustus 8/6 8/6 9/10 9/7 7/9 7/15 9
A. terreus 10/9 8/8 9/10 6/7 8/12 6/11 9
A. fischeri 8/8 7/8 10/7 8/17 7/9 7/6 11
A. niger 6/6 9/6 6/6 14/6 11/8 16/18 21
A. flavus 6/6 6/7 6/6 11/6 6/7 9/14 7
F. solani 6/6 7/6 6/6 13/6 6/6 6/16 0
C albicans 10/16 8/13 7/16 18/33 10/32 15/24 11
A. niger INA 00760 15/8 10/0 13/10 10/12 10/20 20/25 14
С. tropicalis INA 00763 0/10 10/13 10/10 10/15 10/11 14/20 10
P. nalgiovense 0/0 9/13 0/7 10/15 0/11 12/22 11
P. roqueforti 0/0 10/14 0/10 10/15 0/11 14/25 14
P.commune 0/10 7/11 10/10 10/15 10/11 16/27 12
P. chrysogenum 0/8 10/13 7/11 10/15 10/14 14/20 17
* - на 10/14 сутки культивирования штамма
Антибактериальную активность экстрактов КЖ наблюдали только в отношении грамположительных бактерий, а против грамотрицательных бактерий они были неактивны. Высокую активность штамм проявил в отношении MRSA S. aureus FDA 209P и M. luteus NCTC 8340 (табл. 2).
Таблица 2.
Антибактериальная активность (в мм зоны подавления тест-организмов) экстрактов культуральной жидкости штамма Т. citrinoviride TYVI 4/11 при поверхностном культивировании на различных средах
Среда Экстракт КЖ при культивировании штамма T. citrinoviride на среде
Чапека Сусло Саб уро Ампи-
Тест -организмы этил-ацетат бута-нол этил-ацетат бута-нол этил-ацетат бута-нол циллин
B.subtilis АТСС 6633 42*/32* 29/28 31/24 27/12 45/45 25/20 25
B.coagulans 429 24/30 10/15 15/24 15/24 25/28 20/20 35
B. mycoides 537 14/20 10/25 24/25 17/25 25/28 22/27 20
S. aureus FDA 209P 12/25 15/20 11/16 12/20 22/26 15/25 15
M.luteus NCTC 8340 12/17 10/15 7/12 13/15 15/13 10/16 12
C.rigena ATCC 8461 24/30 10/15 24/15 24/15 25/28 20/20 14
P.aeruginosa АТСС 27853 14/20 10/15 0/10 10/15 8/13 10/12 10
E.coli ATCC 25922 4/10 7/14 0/0 0/4 9/10 13/17 12
S.epidermidis №533 10/11 0/0 10/15 12/14 16/20 11/20 17
* - на 10/14 сутки культивирования штамма
Оптимальным был поверхностный способ культивирования штамма на среде Сабуро, при котором штамм формировал плотную мицелиальную пленку на поверхности жидкой среды и секретировал максимальное количество антибиотиков в культу-ральную жидкость (Рис.1), а сроки культивирования штамма - 14 суток. Активность антибиотиков в экстракте культуральной жидкости достигала 40 ед. по стрептомицину и 80 ед. - по амфотерицину В.
13,00 12,00 11,00 10,00 9,00 8,00 7,00 6,00 5,00 4,00 3,00 2,00 1,00 0,00 (мм)
IJ ^ , ^ L
Среда Среда Сус/Ю Среда
Сабуро
Комбинированный способ
была отобрана одна фракция (№ 2), обладающая наиболее выраженными антибиотическими свойствами по отношению к следующим тест-организмам: B. sub-tilis, B. coagulans, S. aureus, A. niger.
При оценке цитотоксического действия фракции № 2 выявили, что она обладает выраженной цито-токсической активностью в отношении опухолевых клеток при добавлении в 10% концентрации на линии опухолевых клеток Colo 357 и Т3М4, степень их ингибирования составила 88,6% и 92,5% соответственно. При этом в той же концентрации фракция не оказывает токсического действия на нормальные клетки млекопитающих (сперматозоиды быка).
При проведении последующей ОФ-ВЭЖХ наиболее активной фракции № 2 после прямофазной хроматографии смогли получить профиль, состоящий из 32 основных фракций, которые были собраны вручную. Отметим, что преимущественное разделение компонентов данной фракции в используемых условиях достигали при длительном изократическом элюировании буфером с высоким объемным содержанием органического растворителя, что указывает на выраженные гидрофобные свойства поверхностей разделяемых соединений (время удерживания составило 80-92 мин) (Рис.2).
Рис. 1. Коэффициент антибиотической активности штамма TYVI 4/11 Т. с№по¥1гИв в отношении патогенных и условно-патогенных грибов при разных способах культивирования
Поскольку антибиотический комплекс, продуцируемый штаммом, обладает гидрофобными свойствами, то для его первичной очистки использовали силикагель в ступенчатом градиенте увеличения процентного содержания метанола в хлороформе. В результате тестирования на наличие антимикробной активности полученных 5 фракций в 100 мл объема
Рис. 2. ОФ-ВЭЖХ фракции 2 после прямофазной хроматографии на колонке с силикагелем Kieselgel 60 в системе хлороформ : метанол 4:1. Представлен частичный профиль разделения в изократическом градиенте 85 и 90% ACN c добавлением 0,1% ТФУ. Черными стрелками отмечены пики, показавшие антимикробную активность против тест-объектов; н/а - не активно
Именно для этих фракций (№№ 28-32) была установлена выраженная фунгицидная и/или антибактериальная активность (табл. 3).
Таблица 3.
физико-химические и биологические свойства индивидуальных антибиотиков, продуцируемых Т. citrinoviride штаммом 4/11
Физико-химические свойства Компонент 28 Компонент 29 Компонент 30 Компонент 31 Компонент 32
Антимикробный спектр действия Грибы: A. niger A. repens C. tropicalis P. chryso-genum Бактерии: B. subtilis B. coagulans M. luteus S. aureus Бактерии: B. subtilis B. coagulans Грибы: A. niger A. repens C. tropicalis P. chrysoge- num Бактерии: B. subtilis B. coagulans S. aureus M. luteus Бактерии: B. subtilis Грибы: A. niger A. repens C. tropicalis A. fumigatus
Растворимость растворим в хлороформе, этилацета-те; этаноле, ацетони-триле, не растворим в воде растворим в хлороформе, этилацетате; этаноле, ацетони-триле, не растворим в воде растворим в хлороформе, этилацетате; этаноле, аце-тонитриле, не растворим в воде растворим в хлороформе, этилацета-те; этаноле, ацетони-триле, не растворим в воде растворим в хлороформе, этилацета-те; этаноле, ацетони-триле, не растворим в воде
Близкий аналог, согласно базе пеп-таиболов отсутствует отсутствует отсутствует трихорзин отсутствует
Причем для индивидуальных соединений №№ 29 и 31 отмечали только антибактериальную активность в отношении грамположительных бактерий, для № 28 - только антимикотическое действие, тогда как фракции №№ 30 и 32 ингибировали рост как грибов, так и бактерий.
При сравнении их молекулярных масс (16002000 Да) с данными базы пептаиболов (https:// peptaibioticsdatabase.boku.ac.at/www/index.html) и базы природных соединений Берди [J. Berdy // Interlaken Suisse, 1994] выявили сходство этих веществ с пептаиболами. Вещество № 31 близко к пеп-таиболу - трихорзину [2], четыре других соединения не удалось отнести к известным пептаиболам, но они также могут быть из данной группы биологически активных соединений.
Отметим, что ранее был установлен факт биосинтеза и секреции в культуральную среду группы антибиотиков - пептаиболов другим штаммом данного вида триходермы - T. citrinoviride, изолированным
из пробкового дуба (Оцетст зыЬвг Ь) [11]. Выделение пептаиболов [11] осуществляли последовательно, путем экстракции этилацетатом с последующей комбинацией прямофазной и ОФ-ВЭЖХ. Профиль финальной стадии хроматографического разделения активной фракции имел 14 преобладающих пиков, которые впоследствии были проанализированы МЛЬБ1 ТОБ MS. Установили, что данные пики содержат 28 различных высокогомологичных компонентов с молекулярными массами в диапазоне 1900-1980 Да. Последующая их фрагментация путем nano-ESI-Q-TOF MS позволила идентифицировать их полные первичные структуры, представляющие собой 20-член-ные полипептиды с единичными аминокислотными заменами, богатые остатками а-аминоизомасляной кислоты, содержащие КТ-концевой ацетилирован-ный аминокислотный остаток и восстановленный до спирта С-терминальный фенилаланин. Согласно полученным данным, обнаруженную группу отнесли к семейству пептаиболов [11, 12].
заключение
Подводя итог наших предварительных исследований, можно заключить, что Т. citrinoviride штамм ТУУ1 4/11 проявляет максимальную антибиотическую активность при поверхностном культивировании на среде Сабуро, и антибиотики секретируются им в культуральную жидкость. Они представляют комплекс из нескольких биологически активных соединений, предположительно пептаибольной природы, который обладает антибактериальным и анти-микотическим действиями в отношении патогенных грибов и метициллин резистентного стафилококка. Все это позволяет рассматривать T.citrinoviride штамм ТУУ1 4/11 и синтезируемые им метаболиты перспективными для дальнейшего изучения с целью разработки новых лекарственных средств медицинского назначения.
Исследование выполнено при частичной поддержке РНФ (проект № 14-50-00029), РФФИ (проект № 14-04-01423-а); Коршун В.А. благодарен за поддержку Программы «Молекулярная и клеточная биология» Президиума РАН.
1.
2.
3.
4.
5.
б.
цитированная литература
Hermosa R., Cardoza R., Rubio M., et al. Secondary metabolism and antimicrobial metabolites of Trichoderma / In: Biology and Biotechnology of Trichoderma. - Elsevier. - 2014. - Vol. 125. - P. 138.
Neuhof T., Dieckmann R., Druzhinina I.S., et al. Intact-cell MALDI-TOF mass spectrometry analysis of peptaibol formation by the genus Trichodermal Hypocrea: can molecular phylogeny of species predict peptaibol structures? // Microbiology. - 2007. - Vol. 153, №10. - Р. 3417-3437.
Degenkolb T., von Dohren H., Nielsen K.F., et al. Recent advances and future prospects in peptaibiotics, hydrophobin, and mycotoxin research, and their importance for chemotaxonomy of Trichoderma and Hypocrea. // Chem. Biodiv. - 2008. -Vol. 5, №5. - Р. 671-680.
Reino J.L., Guerrero R.F., Hernández-Galán R., Collado I.G. Secondary metabolites from species of the biocontrol agent Trichoderma. // Phytochem. Rev. - 2008. - Vol. 7,№1. - P. 89-123.
Schuster A., Schmoll M. Biology and biotechnology of Trichoderma. // Appl. Microbiol. Biotechnol. - 2010. - Vol. 87, №3.
- P. 787-799.
Stoppacher N., Neumann N.K.N., Burgstaller L., et al. The comprehensive peptaibiotics database. // Chem. Biodiv. - 2013.
- Vol. 10, №5. - Р. 734-743.
Daniel J.F. and Filho E.R. Peptaibols of Trichoderma //Natural Product Reports. - 2007. - Vol. 24. - P. 1128-1141.
8. Gal-Hemed I., Atanasova L., Komon-Zelazowska M., et al. Marine isolates of Trichoderma spp. as potential halotolerant agents of biological control for arid-zone agriculture. // Appl. Environ. Microbiol. - 2011. - Vol. 77, №15. - Р. 5100-5109.
9. Садыкова В.С., Кураков А.В., Лихачев А.Н., Якушев А.В. Видовой состав и распространение грибов рода Trichoderma в наземных экосистемах бассейна реки Енисей // Микология и фитопатология. - 2013. - Т. 47, Вып. 6. - С. 390-397.
10. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. - М.: Изд во МГУ, 2004. - 512 с.
11. Maddau L., Cabras A., Franceschini A., et al. Occurrence and characterization of peptaibols from Trichoderma citrino-viride, an endophytic fungus of cork oak, using electrospray ionization quadrupole time-of-flight mass spectrometry // Microbiology. - 2009. - Vol. 155, №10. - P. 3371-3381.
12. Thrane U., Poulsen S.B., NirenbergH.I., LieckfeldtE. Identification of Trichoderma strains by image analysis of HPLC chro-matograms. // FEMS Microbiol. Lett. - 2001. - Vol. 203, №2. - P. 249-255.
Поступила в редакцию журнала 12.01.2015
Рецензент: А.Н. Лихачев
